一种具有治疗心肌炎作用的中药提取物及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种具有治疗心肌炎作用的中药提取物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.心肌炎是指以心肌的局限性或弥漫性炎性病变为主要表现的疾病，心肌炎临床表现多样，可从无症状至出现严重心律失常、急性心功能不全、心源性休克甚至死亡。普通病毒感染或病毒感染后的免疫反应是导致心肌炎的常见方式之一，其中以引起肠道和上呼吸道感染的病毒最多见；如艾可病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒a组以及柯萨奇病毒b组；这些病毒中以柯萨奇b组病毒是最主要的致病病毒。因此，进一步开发一种治疗心肌炎的药物，尤其是开发一种治疗病毒性心肌炎的药物具有重要的意义。
3.从中药中开发具有治疗心肌炎作用的药物，是目前的研究方向之一。中药人参为五加科植物人参的根；主治大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神；用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴。藏茵陈是菊科蒿属的多年生草本药物，具有清热祛湿、护肝利胆之功效。目前，并没有以人参和藏茵陈为原料，从中制备具有治疗心肌炎作用的中药提取物的研究报道。


技术实现要素：

4.鉴于此，本发明首先提供一种具有治疗心肌炎作用的中药提取物的制备方法，研究表明，采用本发明所述的方法制备得到的中药提取物具有优异的治疗心肌炎活性。
5.一种具有治疗心肌炎作用的中药提取物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：
6.(1)取人参和藏茵陈混合，然后用乙醇进行加热回流提取，浓缩提取液至无醇味得提取液；
7.(2)向提取液中加入乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；
8.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱，用混合有机溶剂进行洗脱，即得所述的具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
9.优选地，步骤(1)中所述的乙醇是体积分数为10％～30％的乙醇水溶液；优选地，步骤(1)中所述的乙醇是体积分数为15％的乙醇水溶液。
10.优选地，乙醇水溶液与人参和藏茵陈总重量的用量比为8～15ml：1g；
11.研究表明，乙醇的体积分数对于能否从人参和藏茵陈中制备得到优异的治疗心肌炎作用的中药提取物起着重要的作用，采用体积分数为10％～30％的乙醇水溶液提取人参和藏茵陈，保证了本发明后续步骤能够制备得到优异的治疗心肌炎作用的中药提取物。
12.优选地，步骤(1)中人参和藏茵陈的重量比为1～3:1～3；优选地，人参和藏茵陈的重量比为2:1。
13.优选地，步骤(2)中乙酸乙酯的体积用量为提取液体积的0.5～2倍。
14.优选地，步骤(3)中用混合有机溶剂进行洗脱的具体方法为：
15.先用体积比为85～88:15～12的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂；然后再用体积比为80～83:20～27的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱，收集体积比为80～83:20～27的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥得具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
16.进一步优选地，步骤(3)中用混合有机溶剂进行洗脱的具体方法为：
17.先用体积比为86:14的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂；然后再用体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱，收集体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥得具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
18.更优选地，步骤(3)中用混合有机溶剂进行洗脱的具体方法为：
19.先用5～8倍柱体积的体积比为85～88:15～12的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂；然后再用2～5倍柱体积的体积比为80～83:20～17的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱，收集体积比为80～83:20～17的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥得具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
20.最优选地，步骤(3)中用混合有机溶剂进行洗脱的具体方法为：
21.先用6倍柱体积的体积比为86:14的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂；然后再用4倍柱体积的体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱，收集体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥得具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
22.混合有机溶剂进行洗脱的具体方法对于能否制备得到具有治疗心肌炎作用的中药提取物起着决定性作用。混合有机溶剂的组成以及洗脱条件不当，甚至制备不到具有治疗心肌炎作用的中药提取物。研究表明，选用由氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂，并且在本发明上述洗脱条件下制备得到的中药提取物具有优异的治疗心肌炎作用。
23.本发明还提供一种由上述制备方法制备得到的具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
24.本发明还提供一种上述中药提取物在制备具有治疗心肌炎作用的药物中的应用。
25.优选地，所述的心肌炎为病毒性心肌炎。
26.最优选地，所述的病毒性心肌炎为柯萨奇病毒所致的心肌炎。
27.有益效果：本发明提供了一种全新的中药提取物，所述的中药提取物具有优异的治疗心肌炎作用。研究表明采用本发明所述方法从人参和藏茵陈中制备得到的中药提取物比采用本发明所述方法单从人参或藏茵陈任一一种中药中制备得到的中药提取物，其治疗心肌炎的作用要更加优异。由于所述的中药提取物具有优异的治疗心肌炎作用；因此，可以将该中药提取物作为活性成分用于制备具有治疗心肌炎作用的药物。
具体实施方式
28.以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
29.实施例1具有治疗心肌炎作用的中药提取物的制备
30.(1)取干燥的人参和藏茵陈按重量比2:1混合，然后用体积分数为15％的乙醇水溶
液进行加热回流提取2h，浓缩提取液至无醇味得提取液；乙醇水溶液与人参和藏茵陈总重量的用量比为10ml：1g；
31.(2)向提取液中加入与提取液等体积的乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；
32.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶选用200
‑
300目的硅胶；硅胶的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍)，先用体积比为86:14的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为6倍柱体积)进行洗脱除杂，然后再用体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为4倍柱体积)进行洗脱；收集体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥得具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
33.实施例2具有治疗心肌炎作用的中药提取物的制备
34.(1)取干燥的人参和藏茵陈按重量比1:1混合，然后用体积分数为30％的乙醇水溶液进行加热回流提取2h，浓缩提取液至无醇味得提取液；乙醇水溶液与人参和藏茵陈总重量的用量比为10ml：1g；
35.(2)向提取液中加入与提取液等体积的乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；
36.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶选用200
‑
300目的硅胶；硅胶的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍)，先用体积比为85:15的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为5倍柱体积)进行洗脱除杂，然后再用体积比为80:20的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为2倍柱体积)进行洗脱；收集体积比为80:20的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥得具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
37.实施例3具有治疗心肌炎作用的中药提取物的制备
38.(1)取干燥的人参和藏茵陈按重量比1:2混合，然后用体积分数为10％的乙醇水溶液进行加热回流提取2h，浓缩提取液至无醇味得提取液；乙醇水溶液与人参和藏茵陈总重量的用量比为10ml：1g；
39.(2)向提取液中加入与提取液等体积的乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；
40.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶选用200
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300目的硅胶；硅胶的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍)，先用体积比为88:12的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为8倍柱体积)进行洗脱除杂，然后再用体积比为83:17的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为5倍柱体积)进行洗脱；收集体积比为83:17的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥得具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
41.对比例1具有治疗心肌炎作用的中药提取物的制备
42.(1)取干燥的人参，然后用体积分数为15％的乙醇水溶液进行加热回流提取2h，浓缩提取液至无醇味得提取液；乙醇水溶液与人参的用量比为10ml：1g；
43.(2)向提取液中加入与提取液等体积的乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；
44.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶选用200
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300目的硅胶；硅胶的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍)，先用体积比为86:14的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为6倍柱体积)进行洗脱除杂，然后再用体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混
合有机溶剂(用量为4倍柱体积)进行洗脱；收集体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥得具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
45.对比例1与实施例1的区别在于，对比例1仅仅以人参为原料，采用本发明所述的方法制备具有治疗心肌炎作用的中药提取物。而实施例1是以人参和藏茵陈为原料，采用本发明所述的方法制备具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
46.对比例2具有治疗心肌炎作用的中药提取物的制备
47.(1)取干燥的藏茵陈，然后用体积分数为15％的乙醇水溶液进行加热回流提取2h，浓缩提取液至无醇味得提取液；乙醇水溶液与藏茵陈的用量比为10ml：1g；
48.(2)向提取液中加入与提取液等体积的乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；
49.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶选用200
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300目的硅胶；硅胶的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍)，先用体积比为86:14的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为6倍柱体积)进行洗脱除杂，然后再用体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为4倍柱体积)进行洗脱；收集体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥得具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
50.对比例2与实施例1的区别在于，对比例2仅仅以藏茵陈为原料，采用本发明所述的方法制备具有治疗心肌炎作用的中药提取物。而实施例1是以人参和藏茵陈为原料，采用本发明所述的方法制备具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
51.对比例3具有治疗心肌炎作用的中药提取物的制备
52.(1)取干燥的人参和藏茵陈按重量比2:1混合，然后用体积分数为15％的乙醇水溶液进行加热回流提取2h，浓缩提取液至无醇味得提取液；乙醇水溶液与人参和藏茵陈总重量的用量比为10ml：1g；
53.(2)向提取液中加入与提取液等体积的乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩干燥后得乙酸乙酯萃取物；
54.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶选用200
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300目的硅胶；硅胶的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍)，先用体积比为95:5的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为6倍柱体积)进行洗脱除杂，然后再用体积比为90:10的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为4倍柱体积)进行洗脱；收集体积比为90:10的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥得具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
55.对比例3与实施例1的区别在于，硅胶柱的洗脱条件不同；对比例3先用体积比为95:5的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用体积比为90:10的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱；而实施例1则是先用体积比为86:14的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱。
56.对比例4具有治疗心肌炎作用的中药提取物的制备
57.(1)取干燥的人参和藏茵陈按重量比2:1混合，然后用体积分数为15％的乙醇水溶液进行加热回流提取2h，浓缩提取液至无醇味得提取液；乙醇水溶液与人参和藏茵陈总重量的用量比为10ml：1g；
58.(2)向提取液中加入与提取液等体积的乙酸乙酯进行萃取，将萃取液浓缩干燥后
得乙酸乙酯萃取物；
59.(3)将乙酸乙酯萃取物上硅胶柱(硅胶柱中的硅胶选用200
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300目的硅胶；硅胶的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍)，先用体积比为80:20的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为6倍柱体积)进行洗脱除杂，然后再用体积比为75:15的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂(用量为4倍柱体积)进行洗脱；收集体积比为75:15的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂洗脱下来的洗脱部位，浓缩干燥得具有治疗心肌炎作用的中药提取物。
60.对比例4与实施例1的区别在于，硅胶柱的洗脱条件不同；对比例3先用体积比为80:20的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用体积比为75:15的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱；而实施例1则是先用体积比为86:14的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用体积比为82:18的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱。
61.实验例1本发明中药提取物治疗病毒性心肌炎实验
62.取昆明种小白鼠腹腔注射0.2ml含有100tcid
50
柯萨奇病毒b3(cvb3)的eagle培养液，制备病毒性心肌炎小鼠模型；建模后选取血清心肌肌钙蛋白i(ctni)浓度相当的小鼠分成实验组1～7和对照组，每组20只；其中，实验组1～7分别按10mg/kg/d的剂量灌胃实施例1～3以及对比例1～4制备得到的具有治疗心肌炎作用的中药提取物；对照组每天灌胃等体积的生理盐水；同时设置正常组，正常组每天灌胃等体积的生理盐水；连续给药2周后，最后一次给药后2小时，取各组小鼠外周血提取血清，用于测定各组小鼠血清心肌肌钙蛋白i(ctni)的浓度，测试结果显示模型组与正常组相比具有显著性差异(p<0.05)，实验组1～3与模型组相比具有显著性差异(p<0.05)；实验组4～7与模型组相比无显著性差异(p＞0.05)；具体结果见表1。其中，血清心肌肌钙蛋白i(ctni)的浓度采用ctni检测试剂盒(elisa)测试得到。
63.表1.本发明中药提取物对血清心肌肌钙蛋白i(ctni)浓度的影响
64.[0065][0066]
血清心肌肌钙蛋白i(ctni)浓度是目前诊性心肌炎最敏感和最特异的检测指标。由表1数据可以看出，模型组的ctni浓度显著高于正常组的ctni浓度；这说明本发明小鼠心肌炎模型建模成功。
[0067]
由表1数据还可以看出，实验组1～3的ctni浓度显著低于模型组；这说明采用本发明所述方法从人参和藏茵陈中制备得到的中药提取物能够显著降低小鼠的血清心肌肌钙蛋白i(ctni)浓度；进一步说明采用本发明所述方法从人参和藏茵陈中制备得到的中药提取物对心肌炎具有很好的治疗作用。
[0068]
由表1数据还可以看出，实验组4和5的ctni浓度都显著高于实验组1；这说明以人参或藏茵陈任一一种中药为原料采用本发明所述的方法制备得到的中药提取物，其治疗心肌炎的作用远远小于同时以人参和藏茵陈为原料采用本发明所述的方法制备得到的中药提取物。这也说明，必须以人参和藏茵陈同时作为原料，采用本发明所述的方法才能制备得到具有优异治疗心肌炎的作用的中药提取物。
[0069]
由表1数据还可以看出，实验组6和7的ctni浓度都显著高于实验组1；这说明在本发明方法中，混合有机溶剂的洗脱条件对于能否制备得到具有治疗心肌炎作用的中药提取物起着决定性作用；只有在本发明所述的混合有机溶剂的洗脱条件下(即先用体积比为85～88:15～12的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱除杂，然后再用体积比为80～83:20～17的氯仿和甲醇组成的混合有机溶剂进行洗脱)才能制备得到具有优异治疗心肌炎的作用的中药提取物；在其它混合有机溶剂的洗脱条件下并不能制备得到具有优异治疗心肌炎的作用的中药提取物。