基于POCT模式的新型冠状病毒COVID-19快速检测试剂盒的制作方法

技术特征：
1.新型冠状病毒covid-19检测引物，其特征在于，包括covid-19 1ab基因检测引物和covid-19n基因检测引物；covid-19 1ab基因检测引物包括如seq id no:1所示的上游引物和序列如seq id no:2所示的下游引物，covid-19n基因检测引物包括如seq id no:4所示的上游引物和序列如seq id no:5所示的下游引物。2.与权利要求1所述引物配套使用的探针，其特征在于，与covid-19 1ab基因检测引物配套使用的探针序列如seq id no:3所示，与covid-19n基因检测引物配套使用的探针序列如seq id no:6所示，seq id no:3和seq id no:6所示探针的5
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端分别带有相同的荧光基团，3
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端具有淬灭基团。3.含有权利要求1所述引物和/或权利要求2所述探针的检测试剂或试剂盒。4.基于poct模式的新型冠状病毒covid-19快速检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述引物和权利要求2所述探针。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含内参基因gapdh检测引物和探针，其中，gapdh检测引物包括序列如seq id no:7所示的上游引物和序列如seq id no:8所示的下游引物；gapdh检测探针的序列如seq id no:9所示，探针的5
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端具有荧光基团，3
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端具有淬灭基团，且该荧光基团不同于权利要求2所述探针中使用的荧光基团。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，seq id no:3所示探针的5
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端荧光基团为fam，seq id no:3所示探针的3
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端淬灭基团为bhq1；和/或seq id no:6所示探针的5
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端荧光基团为fam，seq id no:6所示探针的3
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端淬灭基团为bhq1；和/或seq id no:9所示探针的5
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端荧光基团为texas red，seq id no:9所示探针的3
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端淬灭基团为bhq2。7.根据权利要求4-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括裂解液、tth酶体系、rna酶抑制剂、标准阳性模板中的至少一种；其中，裂解液的成分为：十二烷基硫酸钠0.005％w/v、聚乙二醇辛基苯基醚0.01％w/v和tris-hcl 30mm。8.用于检测新型冠状病毒covid-19的qpcr反应体系，其特征在于，包括用于检测covid-19 1ab基因的qpcr反应体系以及用于检测covid-19n基因的qpcr反应体系；用于检测covid-19 1ab基因的qpcr反应体系包含：1.2
×
tth酶体系，0.3u/μl rna酶抑制剂，seq id no:1所示的上游引物、seq id no:2所示的下游引物各0.7μm，seq id no:7所示的上游引物、seq id no:8所示的下游引物各0.3μm，seq id no:3所示的探针0.3μm，seq id no:9所示的探针0.2μm以及裂解液；所述裂解液在体系中加入的浓度为1
×
；用于检测covid-19n基因的qpcr反应体系包含：1.2
×
tth酶体系，0.3u/μl rna酶抑制剂，seq id no:4所示的上游引物、seq id no:5所示的下游引物各0.7μm，seq id no:7所示的上游引物、seq id no:8所示的下游引物各0.3μm，seq id no:6所示的探针0.3μm，seq id no:9所示的探针0.2μm以及裂解液；所述裂解液在体系中加入的浓度为1
×
；其中，所述裂解液使用权利要求7中所述的裂解液。9.非诊断目的基于poct模式的新型冠状病毒covid-19快速检测方法，其特征在于，所述方法包括：将采集的病毒样本分成两份，一份加入到用于检测covid-191ab基因的qpcr反应体系中，另一份加入到用于检测covid-19n基因的qpcr反应体系中，将配制好的反应液分
别置于pcr仪中运行以下程序进行裂解反应和rt-pcr扩增，扩增结束后，分析扩增产物；其中，用于检测covid-19 1ab基因的qpcr反应体系以及用于检测covid-19n基因的qpcr反应体系同权利要求8中所述；裂解反应和rt-pcr扩增的程序为：50℃2min；90℃3min；60℃15min；95℃1min；95℃15sec，55℃35sec，50个循环。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述病毒样本来自咽拭子、鼻腔拭子、肺泡灌洗液。

技术总结
本发明提供一种基于POCT模式的新型冠状病毒COVID-19快速检测试剂盒。该试剂盒至少含有COVID-19 1ab基因检测引物和探针(SEQ ID NO:1-3)、COVID-19N基因检测引物和探针(SEQ ID NO:4-6)。此外还可包括裂解液、Tth酶体系、RNA酶抑制剂、标准阳性模板等。本试剂盒可实现即时检测，无需RNA提纯，可将样本直接加入试剂中进行RT-PCR反应，大大降低了操作者感染病毒的风险；特别适合RNA含量较低样本的快速、准确检测，合成的带蛋白壳的RNA假病毒检测准确率达99.9％以上，检测灵敏度高，100分钟内可得检测结果，解决了传统RNA核酸病毒检测耗时长的问题。问题。


技术研发人员：孟霞 陈耀凯 张国军 王安心 谢雪微 熊伟
受保护的技术使用者：重庆市公共卫生医疗救治中心 重庆京因生物科技有限责任公司
技术研发日：2020.04.24
技术公布日：2021/10/26