不含抗生素的抗微生物饲料添加剂和抗微生物组合物的制作方法

1.本发明涉及动物饲料添加剂以及这些饲料添加剂用于改善动物健康和减少动物产生温室气体的应用。
2.本发明还涉及(i)包含碘离子源和过氧化氢源的组合物用作抗微生物剂的用途，其中碘离子在使用时的浓度较低；(ii)包含与过氧化氢相比相对量低的碘离子的组合物，和其用作抗微生物剂的用途；以及(iii)(a)包含碘离子源和过氧化氢源的组合物与(b)抗生素的组合用作抗微生物剂的用途。这些组合物通篇分别称为“具有低浓度的组合物”、“具有低碘比的组合物”和“抗生素组合”。
3.背景和相关技术
4.高效且有效的兽医畜牧业依赖于健康且无疾病的动物。举例来说，饲养健康且无疾病的奶牛和肉牛有助于确保给公众消费提供足够的牛奶和牛肉。相较于不健康的奶牛，健康奶牛产生更多品质更佳的牛奶，并且它们的肌肉质量增加更快。
5.虽然抗生素是为了治疗感染性疾病的目的而开发，但二十世纪四十年代的发现表明，将低水平的抗生素施用于动物能让其充当生长促进剂和动物生产性能增强剂。这使得将抗生素添加到动物饲料中以刺激动物生长和改善动物生产性能(其中通常发现体重增幅加大和牛奶产量提高)成为全球广泛的做法。
6.虽然抗生素是一种有效工具，但如果其被误用，那么细菌会对其产生抗性。这不仅给动物福祉带来许多隐忧，而且从人健康视角看，存在抗生素抗性细菌传播给人和细菌交叉抗性增长的隐忧。实际上，欧盟(eu)早在2006年就禁止使用抗生素作为饲料添加剂，并且找到替代策略已成为一种需求。
7.欧盟外部习惯性地使用抗生素改善动物生产性能和增加牛奶产量。离子载体莫能菌素(monensin)(以商标出售)是使用最广泛的抗生素饲料添加剂；其已被批准用于提高产奶效率、降低乳脂百分比和使泌乳期间的体况评分降到最低。
8.尽管如此，仍有可能出现对这种抗生素具抗性的微生物。研究已测定从暴露于莫能菌素的不同动物分离出的以下细菌对莫能菌素产生抗性：嗜胺梭菌(clostridium aminophilum)、普氏菌属(prevotella)、丁酸弧菌属(bytyrivibrio)、丝状杆菌(fibrobacter)、韦荣氏球菌属(veilonnela)、肠球菌属(entercoccus spp)(vkm；2015年—在家禽饮食中使用抗球虫药而引起的产生抗微生物抗性的风险(2015
‑
therisk of development of antimicrobial resistance with the use of coccidiostats in poultry diets)，挪威食品安全科学委员会动物饲料专家组意见(opinion of the panel on animal feed of the norwegian scientific committee for food safety)，isbn：978
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82
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8259
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185
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0，挪威奥斯陆(oslo,norway))。备受关注的是抗药性屎肠球菌(enterococcus faecium)菌株的分离。
9.因此，需要一种解决方案来解决供农业使用的抗生素有效替代物的缺乏，以便减缓抗生素抗性相关问题和改善例如牛等动物的健康。
10.由于抗生素的所需剂量不切实际(即，过高)，因此在原本不适用的抗生素使用方
面还需要提供替代方式。此类情形可能会在微生物对抗生素产生抗性的情况下产生。
11.农业生产中的另一个大隐忧是饲养用于牛肉和乳制品行业的牛(更一般来说是反刍动物)会大量产生温室气体，尤其是甲烷。驻留于这些动物的瘤胃中的产甲烷菌(例如产甲烷微生物)通过分解所摄入的食物而产生甲烷。根据2006年的联合国粮农组织报告，奶牛比例大的家畜部门产生的温室气体排放比运输部门大18％(以co2当量衡量)。
12.因此，需要减少动物的碳排放。
13.本领域中已知使用氧活性种(reactive oxygen species)的抗微生物组合物，例如包含碘离子和过氧化氢的抗微生物组合物。举例来说，wo 2014/177590中公开了此类组合物。然而，这些组合物含有的碘离子比例高于过氧化氢，且/或使用浓度高。
14.通用定义
15.术语“包含”涵盖“包括”以及“由
……
组成”，例如“包含”x的组合物可仅由x组成，或可包括其它某物，例如x y。本文所用的术语“包含”还涵盖“基本上由
……
组成”，例如“包含”x的组合物可以由x和实质上不影响组合物基本特征的任何其它组分组成。
16.关于数值x的术语“约”是任选存在的，并且意思是例如x 10％。
17.本文中的术语“抗生素”与其常见的公认含义有关。抗生素是引起药理学反应(例如通过结合到活性部位而引起药理学反应)的某物。抗生素通常是以天然方式产生(或经合成以模拟天然产物)。抗生素的实施例包括青霉素(penicillin)和阿莫西林(amoxicillin)。
18.术语“抗微生物剂”意指杀死微生物且/或阻止或减缓其生长的某物。
19.不含抗生素的抗微生物剂是除抗生素之外的任何抗微生物剂。
20.除非另外说明，否则如本文所用，术语“抗微生物饲料添加剂”或“饲料添加剂”意指不涵盖抗生素的抗微生物饲料添加剂。
21.术语“甲烷生成(methanogenesis)”意指微生物(例如细菌或其它活生物体)生物生产甲烷(化学式＝ch4)。
22.术语“活性成分”不包括赋形剂、填充剂、食物等，即，其不包括对微生物不起作用的组分。
23.术语“碘化物(iodide)”意指“碘离子”，即i
‑
。
24.术语“mic”意指最小抑制浓度。
附图说明
25.现将仅借助于实施例并参考附图描述本发明。
26.图1显示本发明的饲料添加剂引起奶牛瘤胃中的ph提高。
27.图2显示本发明的饲料添加剂引起奶牛瘤胃的温度降低。
28.图3显示在本发明的饲料添加剂存在下，奶牛的累积甲烷产生减少。
29.图4显示在本发明的饲料添加剂存在下，奶牛的甲烷产生最终百分比降低。
30.图5显示在本发明的饲料添加剂存在下实现了奶牛的vfa产生增加。
31.图6显示在本发明的饲料添加剂存在下，青贮饲料饲喂的奶牛的累积甲烷产生减少。
32.图7显示饲喂本发明饲料添加剂的奶牛的瘤胃液中的产甲烷菌(尤其是原虫)数量
减少。
33.图8显示浓度较低的本发明组合物提供优良的释放分布。
34.图9和10显示本发明的低浓度和比率组合物的毒性较低。
35.图式进一步在“实施例”章节中解释。
36.本发明的公开内容
37.本技术已经草拟成多个章节以有助于阅读。然而，这并不意味着各章节应孤立地阅读。相反，除非另外说明，否则每个章节应交叉参考其它章节来阅读，即，将整篇申请视为一个整体。此意味着例如，希望“饲料添加剂
‑
成分和形式”章节中所述的所有饲料添加剂结合“饲料添加剂的用途”章节中所述的饲料添加剂的所有用途阅读。此外，除非另外明确陈述，否则希望“饲料添加剂”章节中所述的所有实施方式和优选实施方式能够加以组合；除非另外明确陈述，否则希望“低浓度和碘化物比率的组合物”章节中所述的所有实施方式和优选实施方式能够加以组合；并且除非另外明确陈述，否则希望“抗生素组合”章节中所述的所有实施方式和优选实施方式能够加以组合。除非明确陈述，否则不希望对实施方式进行人为的分开。
38.饲料添加剂


技术实现要素：

39.本发明涉及不含抗生素的抗微生物饲料添加剂在改善动物健康和/或减少动物产生甲烷的方法中的用途。这种抗微生物饲料添加剂能够用于增加牛奶产量、缩短育肥时间(finishing time)、增加繁殖力、增加挥发性脂肪酸(vfa)产生和减少甲烷产生。
40.本发明的不含抗生素的抗微生物饲料添加剂还可以用于动物治疗方法中，所述方法包含经口施用饲料添加剂，具体地说，其中所述方法用于治疗(i)乳腺炎、(ii)癣、(iii)跛行，和/或(iv)代谢疾病引起的消化紊乱，例如牛消化紊乱、酸中毒和/或胃气胀，优选酸中毒。
41.本发明还涉及一种包含碘离子或碘离子源和尿素或尿素源作为唯一活性成分的剂型，以及这些剂型在治疗(i)乳腺炎、(ii)癣、(iii)跛行和/或(iv)代谢疾病引起的消化紊乱(例如牛消化紊乱、酸中毒和/或胃气胀，优选酸中毒)的方法中的用途。
具体实施方式
42.饲料添加剂
‑
成分和形式
43.本发明涉及不含抗生素的抗微生物饲料添加剂在改善动物健康和/或减少动物产生甲烷的方法中的用途。饲料添加剂不含抗生素的事实意味着抗生素抗性和潜在有害残余物的扩散得以避免。本发明的不含抗生素的饲料添加剂还可以不含酵母。
44.在一个实施方式中，饲料添加剂是能够产生氧活性种(reactive oxygen species)(例如次碘酸盐(io
‑
)源和次硫氰酸盐([oscn]
‑
)源)的饲料添加剂。在一个实施方式中，饲料添加剂是能够产生次碘酸盐(io
‑
)的饲料添加剂。在另一个实施方式中，饲料添加剂是能够产生次硫氰酸盐([oscn]
‑
)的饲料添加剂。
[0045]
在一个优选实施方式中饲料添加剂包含碘离子源和尿素源。“尿素源”意指能够提供尿素的任何物质。尿素源可以是尿素或过氧化氢
‑
尿素加合物或其组合。“碘离子源”意指
能够提供碘离子的任何物质。碘离子源的实例是碘酸盐，例如碘酸钙、碘化盐、碘化钠(nai)、碘化钾(ki)、碘化锂(lii)、碘化铯(csi)、碘化氢(hi)、碘化铑(rhi3)，或其它碘离子释放化合物，或碘离子的缓慢释放形式，例如碘酸盐。还可使用此类示例性碘离子源的组合。碘化钾(ki)是优选的碘离子源。
[0046]
在一个优选实施方式中，尿素源是尿素，并且碘离子源是碘化钾。在一个更优选实施方式中，尿素源是过氧化氢
‑
尿素加合物，并且碘离子源是碘化钾。
[0047]
饲料添加剂中的尿素源的量可以是每克饲料添加剂含有1到999mg尿素源、优选每克饲料添加剂含有5到500mg尿素源、更优选每克饲料添加剂含有5到150mg尿素源。饲料添加剂中的碘离子源的量可以是每克饲料添加剂含有1到999mg碘离子源、优选每克饲料添加剂含有5到500mg碘离子源、更优选每克饲料添加剂含有5到150mg碘离子源。在一个实施方式中，饲料添加剂以球粒或粉末形式提供，并且尿素源以每克球粒或粉末5到150mg的量存在，且/或碘离子源以每克球粒或粉末5到150mg的量存在。
[0048]
饲料添加剂还可以包含药学上可接受的载剂和/或稀释剂，例如水、生理盐水、乳状液、凝胶、水凝胶，或球粒用的固体。
[0049]
在一个实施方式中，饲料添加剂含有碘离子源和尿素离子源作为唯一活性成分。在一个实施方式中，饲料添加剂包含碘离子源和尿素源。在另一个实施方式中，饲料添加剂由碘离子源、尿素源和口服可接受的载剂组成。
[0050]
在一个实施方式中，本发明的饲料添加剂不含除本文中明确提及之物之外的维生素。举例来说，在一个优选实施方式中，本发明的饲料添加剂不含维生素a、维生素d和/或维生素e。举例来说，饲料添加剂可以含有小于10％的维生素a、维生素d和/或维生素e。作为另一个实施例，饲料添加剂可以含有小于5％的维生素a、维生素d和/或维生素e。作为另一个实施例，饲料添加剂可以不含维生素a、维生素d和/或维生素e。
[0051]
在另一个实施方式中，本发明的饲料添加剂不含除本文中明确公开之物之外的元素。举例来说，在一个优选实施方式中，本发明的饲料添加剂不含铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。举例来说，饲料添加剂可以含有小于10％的铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。作为另一个实施例，饲料添加剂可以含有小于5％的铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。作为另一个实施例，饲料添加剂可以不含铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。
[0052]
本领域中已知此类维生素和元素可增加乳牛的牛奶产量。举例来说，乳牛的nrc营养要求建议以下微量元素对于增加牛奶产量/产生具有重要作用：铬、钴、铜、锰、硒和锌。然而，惊人的是，即使本发明的饲料添加剂中不存在这些元素中的一种或多种，本发明的饲料添加剂也使得牛奶产量/产生增加。
[0053]
相信当本发明的饲料添加剂施用于动物时，其与内源的过氧化氢源原位发生反应而产生氧活性种。举例来说，当动物是奶牛时，本发明的饲料添加剂与奶牛瘤胃中发现的内源过氧化氢源反应。奶牛瘤胃中发现的内源过氧化氢源可以是瘤胃微生物，例如分泌过氧化氢源的乳酸菌。瘤胃中的多种其它细菌(例如链球菌)可用于提供内源过氧化氢源。如上文所述，氧活性种的实例是次碘酸盐(io
‑
)源。
[0054]
已惊人地发现，本发明的抗微生物饲料添加剂不需要过氧化氢源(因为过氧化氢源可以是内源性来源)。然而，本发明的抗微生物饲料添加剂可以任选地进一步包含过氧化氢源。过氧化氢源可以选自过氧化氢、过氧化钠、过氧化锂、释放过氧化物的柠檬酸、释放过
氧化物的维生素c、过氧化物盐(例如氧化钡)、过硼酸钠、过氧化氢
‑
尿素加合物、释放氧的准过氧化物(例如超氧化物、双加氧物、臭氧和臭氧化物)、有机过氧化物(例如过氧酸、酰基卤和脂肪族过氧化物)，或释放过氧化物的过碳酸盐(例如过碳酸钠、过碳酸钾，或释放过氧化物的过碳酸盐的缓慢释放形式)，或呈钾盐形式的过锰酸盐，或其组合。过氧化氢源优选过氧化氢。
[0055]
如果饲料添加剂中存在过氧化氢源，那么饲料添加剂可以包含0.1:1至3:1重量比的碘离子与过氧化氢。比率可以是0.3:1到2.5:1、0.5:1到2:1，或0.5:1到1.5:1。碘离子与过氧化氢的重量比特别优选0.5:1到1.5:1。在另一个实施方式中，饲料添加剂中的过氧化氢与碘离子比率大于5:1，优选大于10:1。
[0056]
优选地，饲料添加剂不含过氧化物酶(例如乳过氧化物酶)和/或淀粉。
[0057]
在一个实施方式中，饲料添加剂还包含氰酸盐化合物，例如氰酸钾或硫氰。
[0058]
饲料添加剂可以水溶液、生理盐水溶液、乳状液、凝胶、水凝胶、糊状物、球粒或粉末形式提供。在一个优选实施方式中，饲料添加剂以球粒形式提供。在另一个优选实施方式中，饲料添加剂以粉末形式提供。
[0059]
在一个优选实施方式中，饲料添加剂是以球粒或粉末形式提供，并且尿素源的存在量是每克球粒或粉末1到999mg，优选每克球粒或粉末5到500mg，更优选每克球粒或粉末5到150mg，且/或碘离子源的存在量是每克球粒或粉末1到999mg，优选每克球粒或粉末5到500mg，更优选每克球粒或粉末5到150mg。
[0060]
饲料添加剂通常被配制成供经口施用。
[0061]
饲料添加剂经调适可以在喂料槽和/或喂料机中使用，所述喂料槽和/或喂料机自动地将饲料添加剂添加到动物饲料中。在一个优选实施方式中，饲料添加剂被配制成供经口施用，以球粒或粉末形式提供并且经调适可在喂料槽和/或喂料机中使用，所述喂料槽和/或喂料机自动地将饲料添加剂添加到动物饲料中。
[0062]
饲料添加剂还可以囊封，即胶囊形式。举例来说，饲料添加剂可以囊封于标准医药胶囊或食品技术所用的胶囊(例如硬胶囊，例如硬明胶胶囊或硬质hpmc胶囊，或软胶囊，例如软明胶胶囊，即“软凝胶”胶囊)中。囊封饲料添加剂的优势是活性成分与食物分开保存直至饲料添加剂到达原位。饲料添加剂还可以调适成在动物的胃或瘤胃的ph(例如在2到8的ph)下从囊封形式中释放。
[0063]
本发明的饲料添加剂可以配制成剂型，例如口服剂型。根据本发明的特定剂型是包含碘离子或碘离子源和尿素或尿素源作为唯一活性成分的剂型，所述剂型可以被配制成经口施用的不含抗生素的抗微生物饲料添加剂，其可以与食物组合施用。
[0064]
本发明的饲料添加剂还可以包含硫氰酸盐([scn]
‑
)源，其是能够提供硫氰酸根离子的任何物质。示例性硫氰酸盐源包括由以下组成的群组：硫氰酸钠、硫氰酸钾、硫氰酸锂、硫氰酸铯、硫氰酸氢盐、硫氰酸铑和异硫氰酸烯丙酯。也可以使用这些硫氰酸盐源的组合。作为尿素源的替代或除尿素源之外，饲料添加剂中可以存在硫氰酸盐源。因此，举例来说，在一个实施方式中，饲料添加剂可以包含过氧化氢源(如本文所定义)、硫氰酸盐源，和碘离子源(如本文所定义)。当饲料添加剂中存在硫氰酸盐源和过氧化氢源时，可以使用0.2
‑
5:1之间或优选0.8
‑
1.3:1之间的硫氰酸盐与过氧化氢的比率。
[0065]
在另一个实施方式中，饲料添加剂包含碘离子源(如上文所定义，上文所定义的任
一种量)和过氧化氢源(如上文所定义，上文所定义的任一种量)，以及药学上有效的载剂或稀释剂，优选地，其中饲料添加剂不包括过氧化物酶。过氧化氢的浓度可以小于1％(基于重量/体积或重量/重量)，且/或饲料添加剂可以包含5到5,000mg碘离子并且碘离子与过氧化氢的重量比为0.2:1至3:1。
[0066]
饲料添加剂也可以包含或是下述“具有低浓度的组合物”或“具有低碘比的组合物”中的任一种。因此，仅举例来说，饲料添加剂可以包含碘离子源和过氧化氢源，其中过氧化氢与碘离子的比率大于5:1。
[0067]
受试者(动物)
[0068]
饲料添加剂将用于动物。本发明尤其适用于反刍动物。反刍动物的实施例包括牛、绵羊、山羊、鹿、长颈鹿、羚羊和骆驼。动物优选奶牛。
[0069]
在一个实施方式中，动物是青贮饲料饲喂过的反刍动物，即，所述反刍动物在食用饲料添加剂之前已用青贮饲料饲喂。
[0070]
在一个实施方式中，动物基本上无乳腺炎，即，如果动物是奶牛，那么体细胞计数(scc)是每毫升(ml)牛奶100,000到200,000个体细胞。在另一个实施方式中，动物无乳腺炎，即，如果动物是奶牛，那么体细胞计数(scc)是每毫升(ml)牛奶小于100,000个细胞。
[0071]
饲料添加剂的用途
[0072]
本发明的不含抗生素的抗微生物饲料添加剂用于改善动物健康和/或减少动物产生甲烷的方法中。
[0073]
在一个实施方式中，本发明的饲料添加剂用于以下方法中：(i)增加牛奶产量，和/或(ii)缩短育肥时间，和/或(iii)增加繁殖力，和/或(iv)增加挥发性脂肪酸的产生，和/或(v)减少甲烷产生，和/或(vi)增加体重增幅；和/或(vii)提高饲料效率。
[0074]
饲料添加剂可以用于上述方法(i)
‑
(vii)中的任一种。饲料添加剂可以用于上述方法(i)
‑
(vii)中的任何两种。饲料添加剂可以用于上述方法(i)
‑
(vii)中的任何三种。饲料添加剂可以用于上述方法(i)
‑
(vii)中的任何四种。饲料添加剂可以用于上述方法(i)
‑
(vii)中的任何五种。饲料添加剂可以用于上述方法(i)
‑
(vii)中的任何六种。饲料添加剂可以用于上述方法(i)
‑
(vii)的全部。
[0075]
在一个实施方式中，本发明的饲料添加剂用于以下方法中的一种、两种、三种、四种或全部：(i)增加牛奶产量，和/或(ii)缩短育肥时间，和/或(iii)增加繁殖力，和/或(iv)增加挥发性脂肪酸的产生，和/或(v)减少甲烷产生。
[0076]
优选地，本发明的饲料添加剂用于以下方法中：(i)增加牛奶产量、(ii)缩短育肥时间、(iii)增加繁殖力、(iv)增加挥发性脂肪酸的产生，和(v)减少甲烷产生。
[0077]
术语“增加牛奶产量”可以包括增加牛奶体积产量；和/或增加乳固体产量。术语“牛奶体积产量增加”意指牛奶体积相较于不使用饲料添加剂的奶牛所产生的平均体积增加。术语“乳固体产量增加”意指乳固体质量相较于不使用饲料添加剂的奶牛所产生的平均质量增加。如实施例中所示，与不食用本发明的饲料添加剂的动物相比，食用本发明的饲料添加剂的动物的牛奶体积产量和固体产量增加。在一个实施方式中，饲料添加剂使基本上无乳腺炎或无乳腺炎的奶牛的牛奶产量增加。
[0078]
在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加至少1％。在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加至少2％。在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积
产量增加至少5％。在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加至少10％。在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加至少15％。在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加至少20％。在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加25％或至少增加25％。
[0079]
在另一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加约1％至约2％。在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加约1％至约5％。在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加约1％至约10％。在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加约1％至约15％。在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加1％或增加约1％至约20％。在一个实施方式中，饲料添加剂使牛奶体积产量增加约1％至约25％。
[0080]
在一个实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加至少1％。在一个实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加至少2％。在一个实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加至少5％。在一个实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加至少10％。在一个实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加至少15％。在一个实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加至少20％。在一个实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加至少25％。
[0081]
在实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加约1％至约2％。在实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加约1％至约5％。在实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加约1％至约10％。在实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加约1％至约15％。在实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加1％或增加约1％至约20％。在实施方式中，饲料添加剂使乳固体产量增加约1％至约25％。
[0082]
如实施例所示，食用本发明的饲料添加剂的动物的育肥时间相较于未食用本发明的饲料添加剂的动物缩短。“缩短育肥时间”意指相较于未食用饲料添加剂的动物的平均育肥时间，在屠宰之前达到最终预定体重所花费的时间缩短。本发明的饲料添加剂可以将育肥时间缩短至少1天、至少2天、至少5天、至少10天或至少20天。
[0083]
还发现本发明的饲料添加剂增加动物繁殖力且提高受孕成功率。具体地说，相较于不食用本发明的饲料添加剂的动物，发现食用本发明的饲料添加剂的动物的不成功受孕率减小约50％，并且对动物进行人工授精所需的吸管更少。
[0084]
实施例显示本发明的饲料添加剂使得甲烷产生减少，即，相较于尚未施用本发明的饲料添加剂的动物，使食用本发明的饲料添加剂的动物(包括青贮饲料饲喂的动物)的甲烷产生(甲烷生成)减少。在一个实施方式中，甲烷产生减少至少20％。
[0085]
本发明的饲料添加剂还使得挥发性脂肪酸(vfa)增加，如实施例所示。具体地说，已发现当饲料添加剂存在时，三种vfa(乙酸酯、丙酸酯和丁酸酯)的浓度相较于其不存在时增加。在一个实施方式中，本发明的饲料添加剂使得vfa浓度增加至少20％。在例如反刍动物等动物中通过微生物消化而产生的这些vfa是最重要的vfa产生指标，原因是其代谢速度最快。vfa增加是动物消化增强的指示，且因此是所期望的结果。
[0086]
本发明的不含抗生素的抗微生物饲料添加剂还可以用于动物治疗方法中，所述方法包含施用饲料添加剂。已经注意到，动物的乳腺炎、癣、跛行以及因代谢疾病引起的消化紊乱(例如牛消化紊乱、酸中毒和胃气胀)能够用本发明的饲料添加剂治疗。因此，动物治疗方法可以包括以下中的一种或多种的治疗方法：(i)乳腺炎、(ii)癣、(iii)跛行，以及(iv)代谢疾病引起的消化紊乱，例如牛消化紊乱、酸中毒和/或胃气胀，优选酸中毒。在实施方式
中，动物治疗方法包括上述(i)
‑
(iv)中的两种或更多种的治疗方法。在实施方式中，动物治疗方法包括上述(i)
‑
(iv)中的三种或更多种的治疗方法。在实施方式中，动物治疗方法包括上述(i)
‑
(iv)的全部的治疗方法。
[0087]
如上文所述，在一个优选实施方式中，饲料添加剂被配制成供经口施用。因此，饲料添加剂可以经口施用。在实施方式中，将饲料添加剂添加到食物中并且与食物组合经口施用于动物。在另一个实施方式中，饲料添加剂与食物在分开的时间经口施用。
[0088]
如上文所述，饲料添加剂可以囊封，即胶囊形式。因此，在一个实施方式中，饲料添加剂可以在使用时从囊封形式中释放出来。优选地，饲料添加剂被调适成在动物的胃或瘤胃的ph下(例如在2到8的ph下)从囊封形式中释放出来。
[0089]
如上文所述，相信当本发明的饲料添加剂施用于动物时，其与内源的过氧化氢源原位发生反应而产生氧活性种。当动物是例如奶牛时，本发明的饲料添加剂可以与奶牛瘤胃中发现的内源过氧化氢源反应。奶牛瘤胃中发现的内源过氧化氢源可以是瘤胃微生物，例如分泌过氧化氢的乳酸菌。瘤胃中的多种其它细菌(例如链球菌)可用于提供内源过氧化氢源。氧活性种的实例包括次碘酸盐(io
‑
)源。
[0090]
使用时，饲料添加剂在动物的胃/瘤胃中可以实现约0.1:1至3:1的碘离子与过氧化氢重量比。比率可以是0.3:1到2.5:1、0.5:1到2.0:1，或0.5:1到1.5:1。碘离子与过氧化氢的重量比优选0.5:1至1.5:1。在另一个实施方式中，饲料添加剂可以在动物的胃/瘤胃中实现大于5:1、优选大于10:1的过氧化氢与碘离子重量比。
[0091]
本发明的饲料添加剂不包含过氧化氢源时，可以通过考虑动物的胃/瘤胃的体积来计算为了在动物的胃/瘤胃中实现这些比率而必需的存在于饲料添加剂中的碘离子的量。计算为了在动物的胃/瘤胃中实现一定比率而必需的饲料添加剂的量是所属领域的技术人员的常规实务。
[0092]
使用时，饲料添加剂可以在动物的胃/瘤胃中实现约0.01到500mg/l(例如0.01到37mg/l或0.03到37mg/l)的碘离子浓度。在一个实施方式中，饲料添加剂可以在动物的胃/瘤胃中实现约0.01到15mg/l(例如约0.03到15mg/l)的碘离子浓度。在一个实施方式中，饲料添加剂可以在动物的胃/瘤胃中实现0.01mg/l到小于5mg/l(例如0.03mg/l到小于5mg/l)的碘离子浓度。如上文所论述，计算为了在动物的胃/瘤胃中实现这种浓度而必需的存在于饲料添加剂中的碘离子的量是常规实务，例如其可使用动物的胃/瘤胃的已知体积计算。
[0093]
包含本文所述的饲料添加剂的剂型还可以用于采用任一种上述施用途径的任一种上述应用中。举例来说，包含碘离子或碘离子源和尿素或尿素源作为唯一活性成分的剂型可以用于治疗以下的方法中：(i)乳腺炎，和/或(ii)癣，和/或(iii)跛行，和/或(iv)代谢疾病引起的消化紊乱，例如牛消化紊乱、酸中毒和/或胃气胀，任选地通过经口施用所述剂型与食物的组合。
[0094]
本发明的饲料添加剂或包含本文所述的饲料添加剂的剂型可以任选地每天一次或两次施用于动物，任选地历时1到15天，优选1到5天。
[0095]
涉及本发明的饲料添加剂的编号实施方式
[0096]
1.一种不含抗生素的抗微生物饲料添加剂在改善动物健康和/或减少动物产生甲烷的方法中的用途。
[0097]
2.根据实施方式1的用途，其中改善健康是：
[0098]
(i)增加牛奶产量，和/或
[0099]
(ii)缩短育肥时间，和/或
[0100]
(iii)增加繁殖力，和/或
[0101]
(iv)增加挥发性脂肪酸的产生。
[0102]
3.根据任一前述实施方式的用途，其中所述动物是反刍动物。
[0103]
4.根据实施方式3的用途，其中所述反刍动物是青贮饲料饲喂的反刍动物。
[0104]
5.根据任一前述实施方式的用途，其中所述动物或反刍动物是奶牛。
[0105]
6.根据任一前述实施方式的用途，其中所述动物基本上无乳腺炎，或无乳腺炎。
[0106]
7.根据实施方式2到5中任一项的用途，其中增加牛奶产量是增加基本上无乳腺炎或无乳腺炎的奶牛的牛奶产量。
[0107]
8.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂经口施用。
[0108]
9.根据任一前述实施方式的用途，其中所述用途包括将所述饲料添加剂添加到食物中以及经口施用所述食物。
[0109]
10.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂是以水溶液、生理盐水溶液、乳状液、凝胶、水凝胶、糊状物、球粒或粉末形式提供。
[0110]
11.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂是以球粒或粉末形式提供。
[0111]
12.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂是以球粒或粉末形式提供，且/或经调适以在喂料槽和/或喂料机中使用，所述喂料槽和/或喂料机自动地将饲料添加剂添加到动物饲料中。
[0112]
13.根据实施方式1到9中任一例的用途，其中所述饲料添加剂是以胶囊形式提供。
[0113]
14.根据实施方式13的用途，其中所述饲料添加剂在使用时从所述胶囊释放出来，优选地，其中所述饲料添加剂被调适成在动物的胃/瘤胃的ph下从胶囊中释放出来。
[0114]
15.根据实施方式2到13中任一项的用途，其中增加牛奶产量是：
[0115]
(i)增加牛奶体积产量；和/或
[0116]
(ii)增加乳固体产量。
[0117]
16.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂使牛奶体积产量增加至少1％、至少2％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％或至少25％。
[0118]
17.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂使乳固体产量增加至少1％、至少2％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％或至少25％。
[0119]
18.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂使育肥时间缩短至少1天、至少2天、至少5天、至少10天，或至少20天。
[0120]
19.根据任一前述实施方式的用途，其中相较于未食用所述饲料添加剂的动物的繁殖速率，所述饲料添加剂通过提高繁殖速率来增强动物的繁殖力。
[0121]
20.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂是能够产生氧活性种的饲料添加剂。
[0122]
21.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂包含碘离子源和尿素源。
[0123]
22.根据实施方式21的用途，其中所述饲料添加剂是以球粒或粉末形式提供并且尿素源是以每克球粒或粉末5到150mg的量存在于球粒或粉末中。
[0124]
23.根据实施方式21或22的用途，其中所述饲料添加剂是以球粒或粉末形式提供且所述碘离子源是以每克球粒或粉末5到150mg的量存在于球粒或粉末中。
[0125]
24.根据实施方式21到23中任一例的用途，其中所述饲料添加剂进一步包含过氧化氢源。
[0126]
25.根据实施方式24的用途，其中所述过氧化氢源是过氧化氢、过氧化钠、过氧化锂、释放过氧化物的柠檬酸、释放过氧化物的维生素c、过氧化物盐(例如氧化钡)、过硼酸钠、过氧化氢
‑
尿素加合物、释放氧的准过氧化物(例如超氧化物、双加氧物、臭氧和臭氧化物)、有机过氧化物(例如过氧酸、酰基卤，和脂肪族过氧化物)，或释放过氧化物的过碳酸盐(例如过碳酸钠、过碳酸钾，或释放过氧化物的过碳酸盐的缓慢释放形式)，或呈钾盐形式的过锰酸盐，优选地，其中所述过氧化氢源是过氧化氢。
[0127]
26.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂与内源的过氧化氢源在原位反应。
[0128]
27.根据实施方式26的用途，其中所述动物是奶牛并且所述饲料添加剂在原位与瘤胃中的内源性过氧化氢反应。
[0129]
28.根据实施方式21到27中任一项的用途，其中所述尿素源是尿素。
[0130]
29.根据实施方式21到27中任一项的用途，其中所述尿素源是过氧化氢
‑
尿素加合物。
[0131]
30.根据实施方式21到29中任一项的用途，其中所述碘离子源是碘酸盐，例如碘酸钙、碘化盐、碘化钠(nai)、碘化钾(ki)、碘化锂(lii)、碘化铯(csi)、碘化氢(hi)、碘化铑(rhi3)，或其它碘离子释放化合物，或碘离子的缓慢释放形式，例如碘酸盐，优选地，其中所述碘离子源是碘化钾(ki)。
[0132]
31.根据实施方式21到30中任一项的用途，其中所述饲料添加剂在动物的胃/瘤胃中达成约0.01到500mg/l、优选约0.01到37mg/l、更优选约0.01到15mg/l的碘离子浓度，或其中所述饲料添加剂在动物的胃/瘤胃中达成约0.03到500mg/l、优选约0.03到37mg/l、更优选约0.03到15mg/l的碘离子浓度。
[0133]
32.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂包含药学上可接受的载剂和/或稀释剂。
[0134]
33.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂不含过氧化物酶。
[0135]
34.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂不含淀粉。
[0136]
35.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂是不含酵母的饲料添加剂。
[0137]
36.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂不含以下维生素中的一种或多种：维生素a、维生素d和维生素e。
[0138]
37.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂不含以下元素中的一种或多种：铬、钴、铜、锰、硒、镁和锌。
[0139]
38.根据任一前述实施方式的用途，其中所述饲料添加剂进一步包含氰酸盐化合物，例如氰酸钾或硫氰。
[0140]
39.根据实施方式1到23和26到37中任一项的用途，其中所述饲料添加剂主要由碘离子源和尿素源组成。
[0141]
40.根据实施方式21到39中任一项的用途，其中所述饲料添加剂在动物的胃/瘤胃中达成约0.1:1至3:1、优选0.5:1到2:1的碘离子与过氧化氢重量比。
[0142]
41.根据实施方式40的用途，其中所述饲料添加剂在动物的胃/瘤胃中达成约0.5:1到1.5:1的碘离子与过氧化氢重量比。
[0143]
42.根据实施方式24到41中任一项的用途，其中碘离子与过氧化氢的比率是约0.1:1到3:1，优选0.5:1到2:1，更优选0.5:1到1.5:1。
[0144]
43.根据实施方式21到39中任一项的用途，其中所述饲料添加剂中的过氧化氢(当存在时)与碘离子的比率大于5:1，且/或其中所述饲料添加剂在动物的胃/瘤胃中达到大于5:1的过氧化氢与碘离子重量比。
[0145]
44.一种不含抗生素的抗微生物饲料添加剂，其用于动物治疗方法中，所述方法包含将所述饲料添加剂经口施用于所述动物。
[0146]
45.根据实施方式44使用的饲料添加剂，其中所述饲料添加剂与食物组合经口施用。
[0147]
46.根据实施方式44或45使用的饲料添加剂，其中所述饲料添加剂用于治疗以下的方法：
[0148]
(i)乳腺炎，和/或
[0149]
(ii)癣，和/或
[0150]
(iii)跛行，和/或
[0151]
(iv)代谢疾病引起的消化紊乱，优选地，其中代谢疾病引起的所述消化紊乱选自牛消化紊乱、酸中毒和/或胃气胀，更优选地，其中代谢疾病引起的所述消化紊乱是酸中毒。
[0152]
47.一种包含碘离子或碘离子源和尿素或尿素源作为唯一活性成分的剂型。
[0153]
48.根据实施方式47的剂型，其中所述剂型被配制成经口施用的不含抗生素的抗微生物饲料添加剂。
[0154]
49.根据实施方式47或48的剂型，其用于治疗以下的方法中：
[0155]
(i)乳腺炎，和/或
[0156]
(ii)癣，和/或
[0157]
(iii)跛行，和/或
[0158]
(iv)代谢疾病引起的消化紊乱，优选地，其中代谢疾病引起的所述消化紊乱选自牛消化紊乱、酸中毒和/或胃气胀，更优选地，其中代谢疾病引起的所述消化紊乱是酸中毒。
[0159]
50.根据实施方式47到49中任一例使用的剂型，其中所述剂型与食物组合经口施用。
[0160]
具有低浓度和碘化物比率的组合物
[0161]
本发明涉及组合物，所述组合物在以惊人的低浓度使用时提供抗微生物作用且/或含有相对量惊人得低的碘离子与过氧化氢。为了清楚起见，这些组合物分别称为“具有低浓度的组合物”和“具有低碘比的组合物”。
[0162]
具体地说，本发明涉及(i)包含碘离子源和过氧化氢源的组合物，其中碘离子在使用时的浓度小于37mg/l，即“具有低浓度的组合物”；(ii)包含碘离子源和过氧化氢源的组合物，其中过氧化氢与碘离子的重量比大于5:1，即“具有低碘比的组合物”；和(iii)兼具(i)与(ii)的组合物。本文还描述了这些组合物作为抗微生物剂的用途。
[0163]
出于多种原因，在较低浓度的情况达成抗微生物活性通常是有利的。举例来说，从环境角度来看，低浓度是有益的，原因在于其通过少量碘离子提供抑制作用；另外，其更经济。另外，这些组合物在低浓度下显示抗微生物活性，适合于安全无毒施用于人类或动物组织或皮肤或粘膜，并且能通过生理盐水溶液递送，这意味着其可以用于涉及人体/动物体的应用，例如用于治疗眼部微生物感染。
[0164]
(i)具有低浓度的组合物
[0165]
本发明涉及包含碘离子源和过氧化氢源作为抗微生物剂的组合物的用途，其中碘离子在使用时的浓度小于37mg/l。如从实施例(例如实施例6)可见，当这些组合物的使用使得碘离子在使用时的浓度较低(即，小于37mg/l)时，仍惊人地发现针对一系列病原体的抗微生物活性。从实施例(例如实施例7)还可以看出，这些组合物提供极佳释放分布，即，组合物针对接种于样品中的细菌发挥作用所花费的时长较短。
[0166]
在一个实施方式中，碘离子在使用时的浓度小于26mg/l。在一个实施方式中，碘离子在使用时的浓度小于15mg/l。在一个实施方式中，碘离子在使用时的浓度小于7mg/l。在一个实施方式中，碘离子在使用时的浓度小于5mg/l。在一个实施方式中，碘离子在使用时的浓度小于3mg/l或小于2mg/l。碘离子在使用时的最小浓度可以是0.01mg/l(即，至少0.01mg/l)，优选0.02mg/l(即，至少0.02mg/l)并且更优选0.03mg/l(即，至少0.03mg/l)。碘离子在使用时的优选浓度是0.01mg/l到26mg/l，更优选0.01mg/l到15mg/l，并且甚至更优选0.03mg/l到15mg/l。
[0167]
本领域技术人员能够相应地调适组合物直至达成期望的碘离子浓度，例如小于37mg/l。举例来说，如果组合物将施用于动物的胃/瘤胃，那么考虑动物的胃/瘤胃的容积。举例来说，为了在具有200l容积的动物的胃中达成小于15mg/l的碘离子浓度，应该消费约小于3g的碘离子。
[0168]
在一个实施方式中，过氧化氢在使用时的浓度小于1000mg/l，或小于250mg/l，或小于100mg/l，或小于65mg/l，或小于60mg/l，或小于50mg/l，或小于40mg/l。过氧化氢在使用时的最小浓度可以是0.01mg/l(即，至少0.01mg/l)，优选0.02mg/l(即，至少0.02mg/l)，过氧化氢在使用时的浓度优选0.02mg/l到50mg/l，更优选50mg/l到250mg/l。本领域技术人员能够相应地调适组合物直至达成期望的过氧化氢浓度。
[0169]
所述组合物可以在溶液(例如水)中稀释，或以包含组合物的溶液形式使用，其中所述溶液是例如水。组合物可在使用之前添加到溶液中，且接着如本文所定义使用，即，用作抗微生物剂。
[0170]
组合物还可以配制成固体组合物(例如球粒或粉末)，或待添加到液体中的固体组合物(例如球粒或粉末)，其中提供特定量的固体(例如在容器中)并且指定使用时的浓度(例如在说明书中)。组合物可以在使用前用水稀释。
[0171]
组合物还可以配制成乳状液、凝胶、水凝胶、糊状物、球粒或粉末。组合物还可以用纳米颗粒提供，即配制成纳米颗粒，以提供组合物在使用的生物体内的定点递送。
[0172]
在一个实施方式中，组合物中的过氧化氢与碘离子重量比大于1.32:1(即，碘离子与过氧化氢的比率小于0.76:1)，例如大于1.5:1。在一个实施方式中，组合物中的过氧化氢与碘离子的重量比大于2.5:1，或大于5:1或大于10:1(例如大于30:1)。过氧化氢与碘离子的最大比率可以是700:1，优选650:1。在一个优选实施方式中，过氧化氢与碘离子的重量比
大于2.5:1到650:1，更优选大于5:1到650:1。
[0173]
在一个优选实施方式中，组合物不含过氧化物酶(例如乳过氧化物酶)且/或在另一个优选实施方式中，组合物不含淀粉。
[0174]
低浓度组合物中的过氧化氢源可以选自过氧化氢、过氧化钠、过氧化锂、释放过氧化物的柠檬酸、释放过氧化物的维生素c、过氧化物盐(例如氧化钡)、过硼酸钠、过氧化氢
‑
尿素加合物、释放氧的准过氧化物(例如超氧化物、双加氧物、臭氧和臭氧化物)、有机过氧化物(例如过氧酸、酰基卤和脂肪族过氧化物)，或释放过氧化物的过碳酸盐(例如过碳酸钠、过碳酸钾，或释放过氧化物的过碳酸盐的缓慢释放形式)，或呈钾盐形式的过锰酸盐，或其组合。过氧化氢源优选过氧化氢。
[0175]“碘离子源”意指能够提供碘离子的任何物质。低浓度组合物中的碘离子源可以选自碘酸盐，例如碘酸钙、碘化盐、碘化钠(nai)、碘化钾(ki)、碘化锂(lii)、碘化铯(csi)、碘化氢(hi)、碘化铑(rhi3)，或其它碘离子释放化合物，或碘离子的缓慢释放形式，例如碘酸盐。还可使用此类示例性碘离子源的组合。碘化钾(ki)是优选的碘离子源。
[0176]
组合物还可以包含药学上可接受的载剂和/或稀释剂，例如水、生理盐水、乳状液、凝胶和/或水凝胶，或球粒用的固体。
[0177]
在一个实施方式中，组合物含有碘离子源和过氧化氢源作为唯一活性成分。在一个实施方式中，组合物主要由碘离子源和过氧化氢源组成。在另一实施方式中，组合物由碘离子源、过氧化氢源和药学上可接受的载剂组成。
[0178]
在一个实施方式中，组合物不含除本文中明确提及之物之外的维生素。举例来说，在一个优选实施方式中，组合物不含维生素a、维生素d和/或维生素e。举例来说，组合物可以含有小于10％的维生素a、维生素d和/或维生素e。作为另一实施方式，组合物可以含有小于5％的维生素a、维生素d和/或维生素e。作为另一实施方式，组合物可以不含维生素a、维生素d和/或维生素e。
[0179]
在另一个实施方式中，组合物不含除本文中明确公开之物之外的元素。举例来说，在一个优选实施方式中，组合物不含铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。举例来说，组合物可以含有小于10％的铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。作为另一个实施例，组合物可以含有小于5％的铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。作为另一个实施例，组合物可以不含铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。
[0180]
组合物可以进一步包含尿素源，任选地，其中尿素源是尿素或尿素
‑
过氧化物加合物。
[0181]
在一个优选实施方式中，组合物不含抗生素和/或酵母。
[0182]
组合物是抗微生物组合物，即，其可以用作抗微生物剂。这些组合物已显示可适用于抵御微生物和生物膜。因此，在一个优选实施方式中，使用组合物抵御微生物和/或生物膜。
[0183]
组合物还可以用作灭菌组合物或消毒剂，例如对表面和/或溶液进行灭菌和/或消毒。
[0184]
组合物还可以用作表面清洁剂、鼻冲洗剂、创伤消毒剂、漱口水、抗真菌洗涤剂、洗脸剂、痤疮乳膏或用于处理被污染的饲料或食品。另外，这些组合物可以在低浓度下使用，适合于安全无毒施用于人类或动物组织或皮肤或粘膜(参见实施例8)，且能通过生理盐水
溶液递送，且因此，其还适用于治疗/预防微生物感染，例如眼部感染、皮肤感染、粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤。
[0185]
为避免疑问，本发明的“具有低浓度的组合物”还可以包含下文关于“具有低碘比的组合物”所述的特征。因此，举例来说，任一种上述“具有低浓度的组合物”还可以包含大于5:1重量比的过氧化氢与碘离子。
[0186]
(ii)具有低碘比的组合物
[0187]
本发明还涉及一种包含碘离子源和过氧化氢源的组合物，其中过氧化氢与碘离子的重量比大于5:1。如实施例(例如实施例6)所示，惊人地发现这些相对于过氧化氢包含低量的碘离子(即过氧化氢与碘离子的比率高)的组合物提供抗微生物作用，尽管包含的碘离子的量相对较低。考虑到即使当过氧化氢在使用时的量/浓度低时(即活性成分的总浓度低)也发现这种作用，因此这是特别惊人的。从实施例(例如实施例7)还可以看出，这些组合物提供极佳释放分布，即，组合物针对接种于样品中的细菌发挥作用所花费的时长较短。
[0188]
在一个实施方式中，过氧化氢与碘离子的比率大于10:1，例如大于30:1。过氧化氢与碘离子的最大比率可以是700:1，优选650:1。在一个优选实施方式中，过氧化氢与碘离子的重量比是5:1到650:1。
[0189]
过氧化氢源可以选自过氧化氢、过氧化钠、过氧化锂、释放过氧化物的柠檬酸、释放过氧化物的维生素c、过氧化物盐(例如氧化钡)、过硼酸钠、过氧化氢
‑
尿素加合物、释放氧的准过氧化物(例如超氧化物、双加氧物、臭氧和臭氧化物)、有机过氧化物(例如过氧酸、酰基卤和脂肪族过氧化物)，或释放过氧化物的过碳酸盐(例如过碳酸钠、过碳酸钾，或释放过氧化物的过碳酸盐的缓慢释放形式)，或呈钾盐形式的过锰酸盐，或其组合。过氧化氢源优选过氧化氢。
[0190]“碘离子源”意指能够提供碘离子的任何物质。碘离子源可以选自碘酸盐，例如碘酸钙、碘化盐、碘化钠(nai)、碘化钾(ki)、碘化锂(lii)、碘化铯(csi)、碘化氢(hi)、碘化铑(rhi3)，或其它碘离子释放化合物，或碘离子的缓慢释放形式，例如碘酸盐。还可使用此类示例性碘离子源的组合。碘化钾(ki)是优选的碘离子源。
[0191]
所述组合物可以在溶液(例如水)中稀释，或以包含组合物的溶液形式使用，其中所述溶液是例如水。组合物可在使用之前添加到溶液中，且接着如本文所定义使用，即，用作抗微生物剂。
[0192]
组合物还可以配制成固体组合物(例如球粒或粉末)，或待添加到液体中的固体组合物(例如球粒或粉末)，其中提供特定量的固体(例如在容器中)并且指定使用时的浓度(例如在说明书中)。组合物可以在使用前用水稀释。
[0193]
组合物还可以配制成乳状液、凝胶、水凝胶、糊状物、球粒或粉末。组合物还可以用纳米颗粒提供，即配制成纳米颗粒，以提供组合物在使用的生物体内的定点递送。
[0194]
在一个优选实施方式中，组合物不含过氧化物酶(例如乳过氧化物酶)。在一个优选实施方式中，组合物不含淀粉。
[0195]
组合物还可以包含药学上可接受的载剂和/或稀释剂，例如水、生理盐水、乳状液、凝胶或水凝胶，或球粒用的固体。
[0196]
在一个实施方式中，组合物含有碘离子源和过氧化氢源作为唯一活性成分。在一个实施方式中，组合物主要由碘离子源和过氧化氢源组成。在另一实施方式中，组合物由碘
离子源、过氧化氢源和药学上可接受的载剂组成。
[0197]
在一个实施方式中，组合物不含除本文中明确提及之物之外的维生素。举例来说，在一个优选实施方式中，组合物不含维生素a、维生素d和/或维生素e。举例来说，组合物可以含有小于10％的维生素a、维生素d和/或维生素e。作为另一个实施例，组合物可以含有小于5％的维生素a、维生素d和/或维生素e。作为另一个实施例，组合物可以不含维生素a、维生素d和/或维生素e。
[0198]
在另一个实施方式中，组合物不含除本文中明确公开之物之外的元素。举例来说，在一个优选实施方式中，组合物不含铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。举例来说，组合物可以含有小于10％的铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。作为另一个实施例，组合物可以含有小于5％的铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。作为另一个实施例，组合物可以不含铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。
[0199]
组合物可以进一步包含尿素源，任选地，其中尿素源是尿素或过氧化物
‑
尿素加合物。
[0200]
在一个优选实施方式中，组合物不含抗生素和/或酵母。
[0201]
这些具有低碘比的组合物是抗微生物组合物，即其可用作抗微生物剂。这些组合物已显示可适用于抵御微生物和生物膜。因此，在一个优选实施方式中，使用组合物抵御微生物和/或生物膜。
[0202]
组合物可以用作灭菌组合物或消毒剂，例如对表面和/或溶液进行灭菌和/或消毒。
[0203]
组合物还可以用作表面清洁剂、鼻冲洗剂、创伤消毒剂、漱口水、抗真菌洗涤剂、洗脸剂、痤疮乳膏或用于处理被污染的饲料或食品。
[0204]
另外，这些组合物含有低量的碘离子，可以在低浓度下使用，适合于安全无毒施用于人类或动物组织或皮肤或粘膜(参见实施例8)，且能通过生理盐水溶液递送，且因此，其还适用于治疗/预防微生物感染，例如眼部感染、皮肤感染、粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤。
[0205]
涉及本发明的具有低浓度和碘比的组合物的编号实施方式
[0206]
1.一种包含碘离子源和过氧化氢源作为抗微生物剂的组合物的用途，其中碘离子在使用时的浓度小于37mg/l。
[0207]
2.根据实施方式1所述的用途，其中碘离子在使用时的浓度小于15mg/l。
[0208]
3.根据实施方式2所述的用途，其中碘离子在使用时的浓度小于7mg/l。
[0209]
4.根据实施方式3所述的用途，其中碘离子在使用时的浓度小于5mg/l。
[0210]
5.根据实施方式4所述的用途，其中碘离子在使用时的浓度小于3mg/l，或小于2mg/l。
[0211]
6.根据任一前述实施方式所述的用途，其中碘离子在使用时的浓度是至少0.01mg/l，优选至少0.02mg/l，更优选至少0.03mg/l。
[0212]
7.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物中的过氧化氢与碘离子的重量比大于1.32:1，优选大于1.5:1，更优选大于2.5:1。
[0213]
8.根据实施方式7所述的用途，其中所述组合物中的过氧化氢与碘离子的重量比大于5:1。
[0214]
9.根据实施方式8所述的用途，其中所述组合物中的过氧化氢与碘离子的重量比是5:1到700:1，优选5:1到650:1。
[0215]
10.根据实施方式8所述的用途，其中所述组合物中的过氧化氢与碘离子的重量比大于10:1。
[0216]
11.根据实施方式10所述的用途，其中所述组合物中的过氧化氢与碘离子的重量比是10:1到700:1，优选10:1到650:1。
[0217]
12.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物不含过氧化物酶。
[0218]
13.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物不含淀粉。
[0219]
14.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物配制成溶液且/或以溶液形式使用，优选地，其中所述溶液是水。
[0220]
15.根据实施方式1到13中任一项所述的用途，其中所述组合物配制成固体组合物(例如球粒或粉末)且/或以固体组合物形式使用，任选地，其中所述固体组合物在使用之前添加到溶液中，优选地，其中所述溶液是水。
[0221]
16.根据实施方式1到13中任一项所述的用途，其中所述组合物配制成乳状液、凝胶、水凝胶、糊状物、球粒或粉末，且/或以纳米颗粒提供用于组合物在生物体内的定点递送。
[0222]
17.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述过氧化氢源是过氧化氢、过氧化钠、过氧化锂、释放过氧化物的柠檬酸、释放过氧化物的维生素c、过氧化物盐(例如氧化钡)、过硼酸钠、过氧化氢
‑
尿素加合物、释放氧的准过氧化物(例如超氧化物、双加氧物、臭氧和臭氧化物)、有机过氧化物(例如过氧酸、酰基卤和脂肪族过氧化物)，或释放过氧化物的过碳酸盐(例如过碳酸钠、过碳酸钾，或释放过氧化物的过碳酸盐的缓慢释放形式)，或呈钾盐形式的过锰酸盐，或其组合。
[0223]
18.根据实施方式17所述的用途，其中所述过氧化氢源是过氧化氢。
[0224]
19.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述碘离子源是碘酸盐，例如碘酸钙、碘化盐、碘化钠(nai)、碘化钾(ki)、碘化锂(lii)、碘化铯(csi)、碘化氢(hi)、碘化铑(rhi3)，或其它碘离子释放化合物，或碘离子的缓慢释放形式，例如碘酸盐。
[0225]
20.根据实施方式19所述的用途，其中所述碘离子源是碘化钾(ki)。
[0226]
21.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物包含药学上可接受的载剂和/或稀释剂。
[0227]
22.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物进一步包含尿素源，任选地，其中尿素源是尿素或过氧化物
‑
尿素加合物。
[0228]
23.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物不含抗生素和/或酵母。
[0229]
24.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物不含以下维生素中的一种或多种：维生素a、维生素d和维生素e。
[0230]
25.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物不含以下元素中的一种或多种：铬、钴、铜、锰、硒、镁和锌。
[0231]
26.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物用于抵御微生物。
[0232]
27.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物用于抵御生物膜。
[0233]
28.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物作为灭菌组合物或消毒
剂使用，例如对表面和/或溶液进行灭菌和/或消毒。
[0234]
29.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物用作表面清洁剂、鼻冲洗剂、创伤消毒剂、漱口水、抗真菌洗涤剂、洗脸剂、痤疮乳膏，和/或用于处理被污染的饲料或食品。
[0235]
30.如实施方式1到25中任一项所定义的组合物，其用于治疗。
[0236]
31.一种用于治疗和/或预防微生物感染的方法，所述方法包含施用如实施方式1到25中任一项所定义的组合物，优选地，其中所述微生物感染是眼部感染、皮肤感染、粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤，更优选地，其中所述微生物感染是眼部感染。
[0237]
32.如实施方式1到25中任一项所定义的组合物，其用于治疗和/或预防微生物感染，优选地，其中所述微生物感染是眼部感染、皮肤感染、粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤，更优选地，其中所述微生物感染是眼部感染。
[0238]
33.一种如实施方式1到25中任一项所定义的组合物用于制造供治疗和/或预防微生物感染的药剂的用途，优选地，其中所述微生物感染是眼部感染、皮肤感染、粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤，更优选地，其中所述微生物感染是眼部感染。
[0239]
34.一种包含碘离子源和过氧化氢源的组合物，其中过氧化氢与碘离子的重量比大于5:1。
[0240]
35.根据实施方式34所述的组合物，其中过氧化氢与碘离子的重量比是5:1到700:1，优选5:1到650:1。
[0241]
36.根据实施方式34所述的组合物，其中过氧化氢与碘离子的重量比大于10:1。
[0242]
37.根据实施方式36所述的组合物，其中过氧化氢与碘离子的重量比是10:1到700:1，优选10:1到650:1。
[0243]
38.根据实施方式34到37中任一项所述的组合物，其中所述组合物不含过氧化物酶。
[0244]
39.根据实施方式34到38中任一项所述的组合物，其中所述组合物不含以下维生素中的一种或多种：维生素a、维生素d和维生素e。
[0245]
40.根据实施方式34到39中任一项所述的组合物，其中所述组合物不含以下元素中的一种或多种：铬、钴、铜、锰、硒、镁和锌。
[0246]
41.根据实施方式34到40中任一项所述的组合物，其中所述组合物配制成溶液且/或以溶液形式使用，优选地，其中所述溶液是水。
[0247]
42.根据实施方式34到40中任一项所述的组合物，其中所述组合物配制成固体组合物(例如球粒或粉末)且/或以固体组合物形式使用，任选地，其中所述固体组合物在使用之前添加到溶液中，优选地，其中所述溶液是水。
[0248]
43.根据实施方式34到40中任一项所述的组合物，其中所述组合物配制成乳状液、凝胶、水凝胶、糊状物、球粒或粉末，且/或以纳米颗粒提供用于组合物在生物体内的定点递送。
[0249]
44.根据实施方式34到43中任一项所述的组合物，其中所述过氧化氢源是过氧化氢、过氧化钠、过氧化锂、释放过氧化物的柠檬酸、释放过氧化物的维生素c、过氧化物盐(例如氧化钡)、过硼酸钠、过氧化氢
‑
尿素加合物、释放氧的准过氧化物(例如超氧化物、双加氧物、臭氧和臭氧化物)、有机过氧化物(例如过氧酸、酰基卤和脂肪族过氧化物)，或释放过氧
化物的过碳酸盐(例如过碳酸钠、过碳酸钾，或释放过氧化物的过碳酸盐的缓慢释放形式)，或呈钾盐形式的过锰酸盐，或其组合。
[0250]
45.根据实施方式44所述的组合物，其中所述过氧化氢源是过氧化氢。
[0251]
46.根据实施方式34到45中任一项所述的组合物，其中所述碘离子源是碘酸盐，例如碘酸钙、碘化盐、碘化钠(nai)、碘化钾(ki)、碘化锂(lii)、碘化铯(csi)、碘化氢(hi)、碘化铑(rhi3)，或其它碘离子释放化合物，或碘离子的缓慢释放形式，例如碘酸盐。
[0252]
47.根据实施方式46所述的组合物，其中所述碘离子源是碘化钾(ki)。
[0253]
48.根据实施方式34到47中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含药学上可接受的载剂和/或稀释剂。
[0254]
49.根据实施方式34到48中任一项所述的组合物，其中所述组合物进一步包含尿素源，任选地，其中尿素源是尿素或过氧化物
‑
尿素加合物。
[0255]
50.根据实施方式34到49中任一项所述的组合物，其中所述组合物不含抗生素和/或酵母。
[0256]
51.一种如实施方式34到50中任一项所定义的组合物用作抗微生物剂的用途。
[0257]
52.根据实施方式51所述的用途，其中所述组合物用于抵御微生物。
[0258]
53.根据实施方式51或52所述的用途，其中所述组合物用于抵御生物膜。
[0259]
54.根据实施方式51到53中任一项所述的用途，其中所述组合物作为灭菌组合物或消毒剂使用，例如对表面和/或溶液进行灭菌和/或消毒。
[0260]
55.根据实施方式51到54中任一项所述的用途，其中所述组合物用作表面清洁剂、鼻冲洗剂、创伤消毒剂、漱口水、抗真菌洗涤剂、洗脸剂、痤疮乳膏，和/或用于处理被污染的饲料或食品。
[0261]
56.如实施方式34到50中任一项所定义的组合物，其用于治疗。
[0262]
57.一种用于治疗和/或预防微生物感染的方法，所述方法包含施用如实施方式34到50中任一项所定义的组合物，优选地，其中所述微生物感染是眼部感染、皮肤感染、粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤，更优选地，其中所述微生物感染是眼部感染。
[0263]
58.如实施方式34到50中任一项所定义的组合物，其用于治疗和/或预防微生物感染，优选地，其中所述微生物感染是眼部感染、皮肤感染、粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤，更优选地，其中所述微生物感染是眼部感染。
[0264]
59.一种如实施方式34到50中任一项所定义的组合物用于制造供治疗和/或预防微生物感染的药剂的用途，优选地，其中所述微生物感染是眼部感染、皮肤感染、粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤，更优选地，其中所述微生物感染是眼部感染。
[0265]
抗生素组合
[0266]
本发明涉及一种包含碘离子源和过氧化氢源的组合物与抗生素的组合用作抗微生物剂的用途。为了清楚起见，本发明在本文中被称为“抗生素组合”。
[0267]
具体地说，本发明涉及包含以下的药剂用作抗微生物剂的用途：(a)包含碘离子源和过氧化氢源的组合物与(b)抗生素的组合。本发明人已发现，当组合物与抗生素同时使用时，每种组分的抗微生物活性都增强，即，组合物的mic降低且抗生素的mic降低，且因此看到协同作用。因此，将组合物添加到抗生素中惊人地减少了为了达成既定抗微生物活性而施用的抗生素，且反之亦然。因此，本发明在治疗/预防微生物感染方面尤其重要，否则需要
的抗生素剂量不切实际的高(例如，其中微生物对抗生素具有抗性)，因为本发明允许施用的抗生素较少。
[0268]
组分(a)和(b)能够在一起以单一配制物提供，例如以单位剂型提供。或者，组分(a)和(b)能够同时、依序或分开提供。
[0269]
如从实施例(例如实施例9)可见，发现包含碘离子源和过氧化氢源的组合物在单独使用时(即，当不与抗生素一起使用时)具有40μgml
‑1的抗微生物mic(基于过氧化氢)，且发现抗生素在单独使用时(即，在组合物不存在的情况下)具有4μgml
‑1的抗微生物mic。然而，惊人地，当这两种组分组合使用时，两种组分的mic均减小。举例来说，本发明使用的组合物当单独使用时具有组合物mic的1到75％的使用浓度，并且本发明使用的抗生素当单独使用时具有抗生素mic的1
‑
75％的使用浓度。优选地，组合物当单独使用时具有组合物mic的25到75％的使用浓度，且抗生素当单独使用时具有抗生素mic的25到75％的使用浓度。更优选地，组合物当单独使用时具有组合物mic的50到75％的使用浓度，并且抗生素当单独使用时具有抗生素mic的50到75％的使用浓度，或组合物当单独使用时具有组合物mic的25到50％的使用浓度，并且抗生素当单独使用时具有抗生素mic的25到50％的使用浓度。
[0270]
本发明使用的组合物可以任何浓度使用。优选地，本发明的抗生素组合中所用的组合物是关于“具有低浓度的组合物”和“具有低碘比的组合物”所述的组合物之一，即，本发明的这个方面中所用的组合物可以是与“具有低浓度的组合物”和/或“具有低碘比的组合物”相同的组合物，且/或其使用浓度可以与“具有低浓度的组合物”和/或“具有低碘比的组合物”相同。举例来说，在一个实施方式中，本发明涉及(a)包含碘离子源和过氧化氢源的组合物与(b)抗生素的组合用作抗微生物剂的用途，其中碘离子的使用浓度小于37mg/l，优选小于15mg/l。
[0271]
本发明使用的组合物可以在溶液(例如水)中稀释，或以包含组合物的溶液形式使用，其中所述溶液是例如水。本发明使用的组合物可以在使用之前添加到溶液中且接着如本文所定义使用，即，用作抗微生物剂。
[0272]
本发明使用的组合物还可以配制成固体组合物(例如球粒或粉末)，或待添加到液体中的固体组合物(例如球粒或粉末)，其中提供特定量的固体(例如在容器中)并且指定使用时的浓度(例如在说明书中)。本发明使用的组合物还可以在使用前用水稀释。
[0273]
本发明使用的组合物可以配制成乳状液、凝胶、水凝胶、糊状物、球粒或粉末。本发明使用的组合物还可以用纳米颗粒提供，即配制成纳米颗粒，以提供组合物在使用的生物体内的定点递送。
[0274]
在一个优选实施方式中，本发明使用的组合物不含过氧化物酶(例如乳过氧化物酶)且/或在另一个优选实施方式中，组合物不含淀粉。
[0275]
过氧化氢源可以选自过氧化氢、过氧化钠、过氧化锂、释放过氧化物的柠檬酸、释放过氧化物的维生素c、过氧化物盐(例如氧化钡)、过硼酸钠、过氧化氢
‑
尿素加合物、释放氧的准过氧化物(例如超氧化物、双加氧物、臭氧和臭氧化物)、有机过氧化物(例如过氧酸、酰基卤和脂肪族过氧化物)，或释放过氧化物的过碳酸盐(例如过碳酸钠、过碳酸钾，或释放过氧化物的过碳酸盐的缓慢释放形式)，或呈钾盐形式的过锰酸盐，或其组合。过氧化氢源优选过氧化氢。
[0276]“碘离子源”意指能够提供碘离子的任何物质。碘离子源可以选自碘酸盐，例如碘
酸钙、碘化盐、碘化钠(nai)、碘化钾(ki)、碘化锂(lii)、碘化铯(csi)、碘化氢(hi)、碘化铑(rhi3)，或其它碘离子释放化合物，或碘离子的缓慢释放形式，例如碘酸盐。还可使用此类示例性碘离子源的组合。碘化钾(ki)是优选的碘离子源。
[0277]
本发明使用的组合物还可以包含药学上可接受的载剂和/或稀释剂，例如水、生理盐水、乳状液、凝胶和/或水凝胶，或球粒用的固体。
[0278]
在一个实施方式中，本发明使用的组合物含有碘离子源和过氧化氢源作为唯一活性成分。在一个实施方式中，本发明使用的组合物主要由碘离子源和过氧化氢源组成。在另一实施方式中，本发明使用的组合物由碘离子源、过氧化氢源和药学上可接受的载剂组成。
[0279]
在一个实施方式中，本发明使用的组合物不含除本文中明确提及之物之外的维生素。举例来说，在一个优选实施方式中，本发明使用的组合物不含维生素a、维生素d和/或维生素e。举例来说，本发明使用的组合物可以含有小于10％的维生素a、维生素d和/或维生素e。作为另一个实施方式，本发明使用的组合物可以含有小于5％的维生素a、维生素d和/或维生素e。作为另一个实施方式，本发明使用的组合物可以不含维生素a、维生素d和/或维生素e。
[0280]
在另一个实施方式中，本发明使用的组合物不含除本文中明确公开之物之外的元素。举例来说，在一个优选实施方式中，本发明使用的组合物不含铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。举例来说，本发明使用的组合物可以含有小于10％的铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。作为另一个实施例，本发明使用的组合物可以含有小于5％的铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。作为另一个实施例，本发明使用的组合物可以不含铬、钴、铜、锰、硒、镁和/或锌。
[0281]
本发明使用的组合物可以进一步包含尿素源，任选地，其中尿素源是尿素或尿素
‑
过氧化物加合物。
[0282]
在一个优选实施方式中，本发明使用的组合物不含酵母。
[0283]
本发明使用的抗生素可以是所属领域中已知的任何抗生素。在一个实施方式中，抗生素选自：青霉素(penicilins)，例如青霉素(penicilin)、安比西林(ampicillin)和阿莫西林(amoxicillin)；头孢菌素(cephalosporins)，例如头孢氨苄(cephalexin)；巨环内酯，例如红霉素(erythromycin)、克拉霉素(clarithromycin)和阿奇霉素(azithromycin)；氟喹诺酮(fluoroquinolones)，例如环丙沙星(ciprofolxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin)和氧氟沙星(ofloxacin)；磺酰胺，例如复方新诺明(co
‑
trimoxazole)和甲氧苄啶(trimethoprim)；四环素(tetracyclines)，例如四环素和多西环素(doxycycline)；氨基糖苷，例如庆大霉素(gentamicin)和托普霉素(tobramycin)；以及莫能菌素(monensin)。在一个优选实施方式中，抗生素是青霉素、氨基糖苷和/或巨环内酯。在一个更优选实施方式中，抗生素选自安比西林、庆大霉素、红霉素和克拉霉素。
[0284]
抗生素组合用作抗微生物剂。在一个实施方式中，抗生素组合用于抵御微生物和/或生物膜。在另一个实施方式中，抗生素组合用作灭菌组合物或消毒剂，例如对表面和/或溶液进行灭菌和/或消毒。在另一个实施方式中，抗生素组合用作表面清洁剂、鼻冲洗剂、创伤消毒剂、漱口水、抗真菌洗涤剂、洗脸剂、痤疮乳膏或用于处理被污染的饲料或食品。
[0285]
本发明使用的组合物可以在低浓度下使用，适合于安全无毒施用于人类或动物组织或皮肤或粘膜，且能够通过生理盐水溶液递送。因此，在一个优选实施方式中，抗生素组合适用于治疗和/或预防微生物感染，优选地，其中所述微生物感染是眼部感染、皮肤感染、
粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤，更优选地，其中所述微生物感染是眼部感染。优选地，受试者是人。
[0286]
涉及本发明的抗生素组合的编号实施方式
[0287]
1.一种药剂用作抗微生物剂的用途，所述药剂包含以下的组合：(a)包含碘离子源和过氧化氢源的组合物；(b)抗生素。
[0288]
2.根据实施方式1所述的用途，其中所述组合物当单独使用时具有组合物mic的1到75％的使用浓度，并且抗生素当单独使用时具有抗生素mic的1到75％的使用浓度，优选地，其中所述组合物当单独使用时具有组合物mic的25到75％的使用浓度，并且抗生素当单独使用时具有抗生素mic的25到75％的使用浓度。
[0289]
3.根据实施方式2所述的用途，其中所述组合物当单独使用时具有组合物mic的50到75％的使用浓度，且抗生素当单独使用时具有抗生素mic的50到75％的使用浓度。
[0290]
4.根据实施方式2所述的用途，其中所述组合物当单独使用时具有组合物mic的25到50％的使用浓度，且抗生素当单独使用时具有抗生素mic的25到50％的使用浓度。
[0291]
5.根据任一前述实施方式所述的用途，其中碘离子在使用时的浓度小于37mg/l。
[0292]
6.根据实施方式5所述的用途，其中碘离子在使用时的浓度小于15mg/l。
[0293]
7.根据实施方式6所述的用途，其中碘离子在使用时的浓度小于7mg/l。
[0294]
8.根据实施方式7所述的用途，其中碘离子在使用时的浓度小于5mg/l。
[0295]
9.根据实施方式8所述的用途，其中碘离子在使用时的浓度小于3mg/l，或小于2mg/l。
[0296]
10.根据任一前述实施方式所述的用途，其中碘离子在使用时的浓度是至少0.01mg/l，优选至少0.02mg/l，更优选至少0.03mg/l。
[0297]
11.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物中的过氧化氢与碘离子的重量比大于1.32:1，优选大于1.5:1，更优选大于2.5:1。
[0298]
12.根据实施方式11所述的用途，其中所述组合物中的过氧化氢与碘离子的重量比大于5:1。
[0299]
13.实施方式12所述的用途，其中所述组合物中的过氧化氢与碘离子的重量比是5:1到700:1，优选5:1到650:1。
[0300]
14.根据实施方式12所述的用途，其中所述组合物中的过氧化氢与碘离子的重量比大于10:1。
[0301]
15.根据实施方式14所述的用途，其中所述组合物中的过氧化氢与碘离子的重量比是10:1到700:1，优选10:1到650:1。
[0302]
16.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述抗生素选自青霉素、氨基糖苷和巨环内酯，优选地，其中所述抗生素选自安比西林、庆大霉素、红霉素和克拉霉素。
[0303]
17.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物不含过氧化物酶。
[0304]
18.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物不含淀粉。
[0305]
19.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物配制成溶液且/或以溶液形式使用，优选地，其中所述溶液是水。
[0306]
20.根据实施方式1到18中任一项所述的用途，其中所述组合物配制成固体组合物(例如球粒或粉末)且/或以固体组合物形式使用，任选地，其中所述固体组合物在使用之前
添加到溶液中，优选地，其中所述溶液是水。
[0307]
21.根据实施方式1到18中任一项所述的用途，其中所述组合物配制成乳状液、凝胶、水凝胶、糊状物、球粒或粉末，且/或以纳米颗粒提供用于组合物在生物体内的定点递送。
[0308]
22.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述过氧化氢源是过氧化氢、过氧化钠、过氧化锂、释放过氧化物的柠檬酸、释放过氧化物的维生素c、过氧化物盐(例如氧化钡)、过硼酸钠、过氧化氢
‑
尿素加合物、释放氧的准过氧化物(例如超氧化物、双加氧物、臭氧和臭氧化物)、有机过氧化物(例如过氧酸、酰基卤和脂肪族过氧化物)，或释放过氧化物的过碳酸盐(例如过碳酸钠、过碳酸钾，或释放过氧化物的过碳酸盐的缓慢释放形式)，或呈钾盐形式的过锰酸盐，或其组合。
[0309]
23.根据实施方式22所述的用途，其中所述过氧化氢源是过氧化氢。
[0310]
24.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述碘离子源是碘酸盐，例如碘酸钙、碘化盐、碘化钠(nai)、碘化钾(ki)、碘化锂(lii)、碘化铯(csi)、碘化氢(hi)、碘化铑(rhi3)，或其它碘离子释放化合物，或碘离子的缓慢释放形式，例如碘酸盐。
[0311]
25.根据实施方式24所述的用途，其中所述碘离子源是碘化钾(ki)。
[0312]
26.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物包含药学上可接受的载剂和/或稀释剂。
[0313]
27.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物进一步包含尿素源，任选地，其中尿素源是尿素或过氧化物
‑
尿素加合物。
[0314]
28.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物不含酵母。
[0315]
29.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物不含以下维生素中的一种或多种：维生素a、维生素d和维生素e。
[0316]
30.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述组合物不含以下元素中的一种或多种：铬、钴、铜、锰、硒、镁和锌。
[0317]
31.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述药剂用于抵御微生物。
[0318]
32.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述药剂用于抵御生物膜。
[0319]
33.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述药剂用作灭菌组合物或消毒剂，例如对表面和/或溶液进行灭菌和/或消毒。
[0320]
34.根据任一前述实施方式所述的用途，其中所述药剂用作表面清洁剂、鼻冲洗剂、创伤消毒剂、漱口水、抗真菌洗涤剂、洗脸剂、痤疮乳膏，和/或用于处理被污染的饲料或食品。
[0321]
35.如实施方式1到30中任一项所定义的药剂，其用于治疗。
[0322]
36.一种用于治疗和/或预防微生物感染的方法，所述方法包含施用如实施方式1到30中任一项所定义的药剂，优选地，其中所述微生物感染是眼部感染、皮肤感染、粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤，更优选地，其中所述微生物感染是眼部感染。
[0323]
37.如实施方式1到30中任一项所定义的药剂，其用于治疗和/或预防微生物感染，优选地，其中所述微生物感染是眼部感染、皮肤感染、粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤，更优选地，其中所述微生物感染是眼部感染。
[0324]
38.一种如实施方式1到30中任一项所定义的药剂用于制造供治疗和/或预防微生
物感染的药剂的用途，优选地，其中所述微生物感染是眼部感染、皮肤感染、粘膜感染、口腔感染、口腔卫生和/或创伤，更优选地，其中所述微生物感染是眼部感染。
[0325]
应理解，本发明仅举例描述，且可进行修改，同时保持在本发明的范围和精神内。
[0326]
实施例
[0327]
实施例1
‑
牛育肥期和体重增加
[0328]
背景
[0329]
饲养的肉牛通常在最后的强化育肥期圈养，其目标是在屠宰之前达成最终的预定体重。给牛饲喂高热量饲料以提升体重增加。将动物达到预定体重所需的饲料量、育肥期的持续时间和劳动力成本等因素降到最低是有益的。
[0330]
程序
[0331]
为了生产牛肉而饲养的一群180头牛在屠宰之前的最后的高能量喂饲强化期圈养。将牛分成两组：
[0332]
●
第1组使用不含任何饲料添加剂的高热量饲料饲喂，一天一次。
[0333]
●
第2组使用高热量饲料以及本发明的饲料添加剂(包含尿素和碘化钾)饲喂，一天一次。
[0334]
牛在其达到期望的体重时屠宰。记录达到这种体重所花费的天数、屠体的屠宰后净重和屠体的品质。屠宰后净重是屠体将产生的可售肉的估计重量。屠体的品质是根据其体形分级：整体形状和屠体的肉覆盖率。这使用肉牛屠体分类方案：联邦级(beef carcase classification scheme:union scale)度量，但是任何常规的手段也满足需要。屠宰后，屠体在视觉上分级为r(良好)或o(合格)。r
‑
屠体是优良的，且价格高于o
‑
屠体。
[0335]
将每组牛育肥的总天数是每一行的(达到育肥体重的天数
×
牛数量)的总和。
[0336]
每组牛的屠宰后总净重是每一行的(屠宰后净重
×
牛数量)的总和。
[0337]
结果
[0338]
第1组
‑
对照组
[0339]
表1：牛在育肥期期间、在不使用饲料添加剂的情况下达到育肥体重的时间、屠宰后总净重，和屠体品质
[0340][0341]
牛数量＝89
[0342]
第1组达到育肥体重的总天数＝10016
[0343]
第1组牛达到育肥体重的平均天数＝112.54
[0344]
第1组的屠宰后总净重＝28416kg
[0345]
第1组牛的屠宰后平均净重＝319.28kg
[0346]
总r
‑
屠体＝17
[0347]
％r
‑
屠体＝19.10％
[0348]
总o
‑
屠体＝72
[0349]
％o
‑
屠体＝80.90％
[0350]
第2组
‑
使用饲料添加剂
[0351]
表2：牛在育肥期期间、在使用饲料添加剂的情况下达到育肥体重的时间、屠宰后总净重，和屠体品质
[0352][0353]
牛数量＝91
[0354]
第2组达到育肥体重的总天数＝8408
[0355]
第2组牛达到育肥体重的平均天数＝92.35
[0356]
第2组的屠宰后总净重＝29335kg
[0357]
第2组牛的屠宰后平均净重＝322.36kg
[0358]
总r
‑
屠体＝30
[0359]
％r
‑
屠体＝32.97％
[0360]
总o
‑
屠体＝61
[0361]
％o
‑
屠体＝67.03％
[0362]
讨论
[0363]
表1和表2的数据显示，施用饲料添加剂的牛达到育肥体重的平均天数明显低于未施用饲料添加剂的牛达到育肥体重的平均天数。发现减小育肥体重的时间平均缩短约20天(等于缩短18％)。这对农民有多个好处，例如节约饲料、劳动力和圈养的成本。
[0364]
表1和表2的数据还显示，施用饲料添加剂的牛屠体的屠宰后净重的变化明显低于未施用饲料添加剂的牛屠体的屠宰后净重。第2组的所有屠体的屠宰后净重在315kg与330kg之间，而第1组的屠体体重在246kg与343kg之间的范围内。
[0365]
施用饲料添加剂的牛的屠体品质整体来说也是优良的。施用饲料添加剂的牛的r
‑
屠体数相较于未施用饲料添加剂的牛的r
‑
屠体数显示增加13.87％。
[0366]
实施例2
‑
牛奶体积产量和乳固体含量
[0367]
程序
[0368]
将一群180头牛分成两组。一些牛无乳腺炎，一些牛基本上无乳腺炎，而一些牛有乳腺炎。监测两组牛的牛奶体积产量和其牛奶的乳固体含量。
[0369]
研究a
[0370]
此研究从2月到9月进行8个月的时间段。各组如下饲喂：
[0371]
●
第1组饲喂不含任何饲料添加剂的常规普通饲料。
[0372]
●
第2组饲喂包括本发明的饲料添加剂(包含尿素和碘化钾)的常规普通饲料。
[0373]
表3：饲喂饲料添加剂和不饲喂饲料添加剂的牛的每日牛奶体积产量和每日乳固
体含量
[0374][0375]
表3数据显示，在研究期间，第2组的牛奶体积产量和乳固体含量始终高于第1组。对于所有牛来说，即，不论牛是否患有乳腺炎，饲料添加剂使得牛奶体积产量和乳固体含量均提高。
[0376]
研究b
[0377]
此研究从1月到10月进行10个月的时间段。各组如下饲喂：
[0378]
●
第1组饲喂不含任何饲料添加剂的常规普通饲料。
[0379]
●
第2组在1月到4月和9月到10月的月份期间饲喂包括饲料添加剂的常规普通饲料。在5月到8月的月份期间，第2组饲喂不含任何饲料添加剂的常规普通饲料。
[0380]
表4：在有间断的两个时间段期间饲喂饲料添加剂的牛的每日牛奶体积产量和每日乳固体含量，以及在不使用饲料添加剂的情况下持续饲喂的牛的每日牛奶体积产量和每日乳固体含量
[0381][0382]
表4数据证明，从预先饲喂饲料添加剂的牛去除饲料添加剂使动物大致恢复到正常牛奶体积产量和乳固体含量。当这些动物在不施用饲料添加剂的4个月之后重新施用饲料添加剂时，再次发现牛奶体积产量和乳固体含量明显增加。
[0383]
这证明饲料添加剂在短的时间尺度内是有效的，并且当定期施用(例如每天)时特别有效。这也是优势，原因在于其证明了所述饲料添加剂对动物不具有因较长期持续效应所致的潜在有害影响。
[0384]
这种数据还证明了如果动物预先已施用了所述饲料添加剂，那么所述饲料添加剂仍然有效，并且动物对饲料添加剂不会随时间产生抗性，而对含有抗生素的饲料添加剂则预期会产生抗性。
[0385]
实施例3
‑
其它总体健康益处
[0386]
跛行减轻
[0387]
跛行是例如乳牛的常见高成本疾病，每年影响高达35％的畜群。这给农民带来很多经济问题，包括每次泌乳时牛奶产量减少高达350kg、繁殖力降低、继发性疾病的风险增加、掉膘，和淘汰风险增加。
[0388]
所有跛行病例中约33％归类为白线病或蹄叶炎。用本发明的饲料添加剂治疗牛证实(i)畜群的跛行发生率出现25
‑
30％的明显降幅，以及(ii)因蹄叶炎或白线病导致的跛行情形减少。发现牛的蹄叶炎或白线病治愈率是90
‑
95％。
[0389]
繁殖速率增加
[0390]
由于代谢性能改善以及达到和维持能量正平衡，因此发现食用本发明的饲料添加剂的牛的繁殖速率提高。受孕不成功的数量少于50％，即，在试验畜群中，畜群中大致15％的比率不应受孕分娩出小牛；当本发明的饲料添加剂添加至饮食中时，这个数字下降到8％，从而产生经济收益。
[0391]
另外，接受本发明的饲料添加剂的牛受孕成功率增加。人工授精是控制牛生殖周期的常见手段，其将冷冻精液的吸管引入生殖道中。这种手段达不到100％成功率并且因此使用多个吸管直至发现成功受孕为止。在接受本发明的饲料添加剂的典型100头牛群中，需要的吸管数少于70
‑
80。这不仅由于吸管的购买减少而具有明显的经济成本，而且允许畜群的生育更加同步进行，这提高了出生的小牛数量，这些牛继而在第2年受孕，给农场提供了更大的生产力。
[0392]
对体细胞计数的影响以及乳腺炎发病率
[0393]
乳腺炎是牛乳房被细菌感染而引起的发炎疾病。乳腺炎可以亚临床(牛奶产量和品质较低，但临床征象不明显)或临床(牛奶结块、变色，乳房肿胀、触痛，动物不适)现象存在。典型地，通过定量牛奶中的体细胞来诊断乳腺炎。体细胞计数(scc)低表示牛奶健康，而水平上升表示亚临床和临床感染。乳腺炎对于奶农来说是主要经济成本，每个乳腺炎病例估计为€265/牛，且总体而言，每年给欧洲乳制品行业造成约€20亿的损失且给美国乳制品行业造成$20亿的损失。乳腺炎以多种方式影响牛奶产量：牛奶产量降低且这种牛奶的品质降低—总体而言，生产者是基于牛奶品质而得到报酬，这意味着产生的牛奶体积越少，则生产者收到的钱越少。额外成本包括治疗成本(医药和兽医时间)，且应该包括牛的治疗失败、淘汰和替换(典型的成本是每头牛约€1,500)。
[0394]
由于代谢性能改善以及达到和维持能量正平衡，因此发现食用本发明的饲料添加剂的牛的牛奶品质提高且乳腺炎发病率降低(>50％)。接受本发明的饲料添加剂的牛的体细胞计数也减少(减少33％)。
[0395]
对癣的作用
[0396]
癣是真菌感染。其本身表现为脱毛，随后数周形成干灰痂和环形病变。动物间的扩散非常快且能够快速感染大部分的畜群。
[0397]
已发现对感染的牛的癣的治疗和治愈存在显著的作用。食用本发明的饲料添加剂3周之后，发现治愈率达90％。
[0398]
对酸中毒的作用
[0399]
瘤胃酸中毒是牛的代谢疾病。当瘤胃的ph降低而低于约5.5时，其被认为是存在
的。这对牛来说存在两种结果：(i)瘤胃停止移动且变得弛缓，这遏制了食欲和生产；以及(ii)酸性变化改变了瘤胃菌群，使得瘤胃菌群被产酸细菌接管。产生的酸越多，则酸中毒越恶化。增加的酸通过瘤胃壁被吸收，导致代谢型酸中毒，在严重情况下能够导致休克和死亡。
[0400][0401]
哺乳期的牛得到升级的草料配给量并且每只动物在中转站个别地得到浓缩的饲料补充剂。将本发明的饲料添加剂(包含尿素和过氧化氢)混入浓缩饲料(粗谷粒)中占10％。这种混合物通过矿物质饲料分配器以每天100克的速率施用到群组“饲料添加剂组”。对照组不接受这种浓缩物。
[0402]
试验结束是根据ph传感器的数据传递持续时间来设定。在泌乳的最初60天中进行资料收集，因为在此时间段期间最可能发生瘤胃酸中毒。
[0403][0404]
●
乳蛋白：
[0405]
群组蛋白质％对照3.3饲料添加剂3.43
[0406]
上表显示，施用本发明的饲料添加剂的牛中的蛋白质百分比增加。从而改善这些牛的牛奶品质。
[0407]
●
瘤胃传感器的结果的统计数据评估
‑
材料、方法和结果
[0408]
使用smaxtec公司的传感器数据(ph、温度、活性)进行评估。获取14头牛的数据，所述牛分成2组：对照组和饲料添加剂组(对照组＝0，饲料添加剂组＝1)。由于试验持续时间是固定的，因此牛的泌乳阶段不同。在这个试验中，分析牛从产犊后两周直至泌乳18周的数据。考虑到个别参数的其它测量方面，对原始数据在整个材料内的任何偏差进行测试。根据
离群值评估规则，必须取得三种分析，这三种分析是(动物16)ph数据、(动物71)活性数据，和(动物16、34、46、56和71)温度分析。
[0409]
对于统计学评估来说，使用简单的多线性模型(glm，statgrapics xvii)且对正态分布进行检验。这是结合分类(群组、泌乳周)对因变量(ph、温度、活性)和其间的可能相互作用进行测试。
[0410]
可以推导出以下结果：
[0411]
(i)ph：
[0412]
如图1所示，使用本发明的饲料添加剂时的ph明显高于对照组。关于泌乳阶段，结果显示第1周的泌乳明显不同于所有其它周。相互作用不显示任何显著性。
[0413]
(ii)温度(℃)
[0414]
如图2中所示出，在摄入水时获取温度的原始数据，且研究结果显示对照组与饲料添加剂组之间存在高度显著差异。未处理动物(即，对照组)的温度高于服用本发明的饲料添加剂的动物表明，极其快速或失衡的发酵将以可能促进酸中毒的方式引起酸性产物产生或积聚。泌乳周与相互作用皆不显示任何显著性。
[0415]
●
结果概述
[0416]
使用本发明的饲料添加剂引起瘤胃中的ph产生高度显著的变化(提高，即酸性更小)和温度降低。瘤胃中的较高ph对行为或乳固体不具有有害影响。在这个试验中，本发明的饲料添加剂因其调节瘤胃ph和温度而对瘤胃菌群产生作用，瘤胃ph和温度强烈受到微生物活性的影响。基于这些结果，预期本发明的饲料添加剂能够用于治疗动物(例如牛)的酸中毒。
[0417]
实施例4
‑
饲料添加剂对产甲烷活性和vfa的影响
[0418]
实施例4(下文和图3
‑
6中所示)是一个体外实施例，其说明了在本发明的饲料添加剂存在下达到的甲烷产生的减少和vfa产生的增加。这个实施例中使用的饲料添加剂含有过氧化氢源。然而，如上文所述，过氧化氢源不是饲料添加剂的必需部分。当本发明的饲料添加剂施用于动物时，其与内源的过氧化氢源在原位发生反应而产生氧活性种。因此，在这个实施例中，饲料添加剂中仅存在过氧化氢源以弥补这个实施例是体外实施例的事实。饲料添加剂不含过氧化氢源时，这个实施例中所示的甲烷产生的减少也能在活体内达成。
[0419]
方法(a)
[0420]
样品收集
[0421]
在屠宰场屠宰牛之后立即收集牛的瘤胃内容物，并且在真空瓶中、在室温下、在对生物气体频繁通风的情况下储存。在屠宰24小时内，使用200μm膜过滤瘤胃内容物以去除大有机物质且截留原虫。在分批分析中，使用滤液接种培养基。
[0422]
分批分析
[0423]
使用110ml厌氧瓶进行分批分析，重复三次。每个瓶含有营养缓冲液和6ml接种物，且添加饲料添加剂直至45ml的最终体积，所述饲料添加剂包含3:1比率的过氧化物
‑
尿素加合物和碘化钾(或用作对照的较多营养缓冲液)。
[0424]
将瓶中的顶部空间气体抽空且用h2和co2气体置换，作为产甲烷的底物。作为阴性对照，改用n2和co2气体装填一个小瓶且不接种。小瓶在39℃下、在100rpm的摇动下培育24到48小时。
[0425]
实测变量
[0426]
●
每隔一定时间因甲烷产生而引起的顶部空间压力变化(电子式变换器，以mv测量，换算成ml)。
[0427]
●
最后时间点的顶部空间中的甲烷％(根据甲烷气相色谱)。
[0428]
●
获取2ml液体样品用于挥发性脂肪酸(vfa)分析(通过gc分析)
[0429]
结果
[0430]
结果示于下表5以及图3到5中。
[0431]
表5：饲料添加剂浓度不同时的特定产甲烷活性
[0432][0433]
方法(b)
[0434]
以200μm过滤新鲜瘤胃液以去除粒状有机物质、同时保留原虫，并且与厌氧缓冲液混合。另外，每个小瓶中放置400mg干燥的青贮饲料。为了考虑任何背景甲烷产生，纳入非饲喂对照。
[0435]
添加饲料添加剂(包含3:1比率的过氧化氢
‑
尿素加合物和碘化钾)直至
‘
饲喂’瓶的一半，以测定对产甲烷速率的影响，且将小瓶在37℃下摇动放置。
[0436]
所有样品的小瓶顶部空间由n2:co2组成(即，没有供氢营养型产甲烷菌用的h2底物，意味着必需将青贮饲料分解以便提供底物用于产生甲烷)。
[0437]
因此，使用青贮饲料底物发生的产甲烷是经由增加的压力(使用压力变换器)测量，所述增加的压力等同于累积的ch4产生。
[0438]
实验结束时(当所有顶部空间气体耗尽时)，从每个小瓶去除气体样品且利用气相色谱测量甲烷实际百分比。
[0439]
结果示于图6中。
[0440]
实施例5
‑
原虫计数
[0441]
将实施例4所用的程序应用于从6头屠宰的牛抽取的瘤胃液。将抗微生物饲料添加剂(包含尿素和碘化钾)经口给予三头牛。三头牛作为对照并且不饲喂饲料添加剂。获取样品且获得原虫计数。
[0442]
将饲料添加剂给予牛rf2、rf3和rf5。rf1、rf4和rf6不饲喂饲料添加剂。
[0443]
原虫计数
[0444]
结果示于图7中。
[0445]
这些结果显示，饲喂饲料添加剂的牛的瘤胃液中的产甲烷菌(尤其是原虫)数量明显减少。
[0446]
实施例6
‑
最小抑制浓度
[0447]
背景
[0448]
在微生物学中，mic是整夜培育(通常在37℃下)之后抑制可见的微生物生长的抗
微生物的最低浓度。mic在诊断性实验室中的重要作用是证实微生物对抗微生物剂的抗性以及测定新抗微生物剂的效能。
[0449]
液体培养基微稀释法(mic)
[0450]
接种物制备：
[0451]
1.使细菌菌株在20ml lb培养基中、在37℃下、在摇动下生长整夜。
[0452]
2.使用lb培养基调节浊度以使浊度等效值增加到mcfarland 0.5标准。这通过分光光度法进行。在625nm下，使用1cm光程，期望的吸光度将是0.08
‑
0.1。调节后，细菌悬浮液将含有约1
×
108cfu ml
‑1。
[0453]
3.将100μl细菌悬浮液转移到含有9.9ml lb的管中。由此产生1
×
106cfu ml
‑1的接种物密度，当与等体积的抗微生物溶液混合于孔中时，将产生约5
×
105cfu ml
‑1的最终接种物。
[0454]
4.将150μl细菌悬浮液转移到96孔培养板的第1到10列的每个孔中。
[0455]
5.将150μl细菌悬浮液转移到96孔培养板的第11列中。这将充当阳性对照并且不接受任何抗微生物。
[0456]
6.将150μllb培养基转移到第12列中。其不接受任何细菌或抗微生物且将充当阴性对照。
[0457]
抗微生物储备溶液制备：
[0458]
基于h2o2:ki的期望比率(如下述表6和7中所说明)，制备碘化钾(ki)于pbs(磷酸盐缓冲生理盐水)中以及尿素
‑
过氧化氢于pbs中的储备溶液。举例来说，对于3.5:1比率，使用1.6mm ki溶液和25.2mm h2o2溶液。
[0459]
(3.5:1比率的)微量稀释实施例
[0460]
1.从ki开始，将75μl的各储备溶液添加到第一列中。
[0461]
2.通过上下吸移将孔中的经合并的300μl细菌悬浮液与抗微生物混合，得到350mg h2o2/1.5l:100mg ki/1.5l的浓度。抗微生物的浓度是基于ki的浓度。因此，第一孔含有66.67mgl
‑1(或μgml
‑1)抗微生物。
[0462]
3.将150μl悬浮液从第1列转移到第2列中且充分混合。第二列中的抗微生物浓度因此是33.33mgl
‑1。
[0463]
4.继续进行连续双倍稀释直到第10列(混合之后，从第10列的孔弃去150μl)。
[0464]
5.在此情况下，浓度如下：66.67、33.33、16.67、8.33、4.17、2.08、1.04、0.52、0.26、0.13mgl
‑1。
[0465]
微量稀释板的培育：
[0466]
在37℃下培育细菌且在微量滴定板读取器中监测细菌生长24小时。每隔15分钟记录595nm光学密度测量值。每次测量之后搅拌培养物1分钟，恢复测量之前允许静置10秒。
[0467]
或者，可以将96孔板在摇动器上、在37℃下培育24小时。
[0468]
测定mic
[0469]
根据抗微生物剂的最低浓度测定mic，其显示的光学密度单位相对于阴性对照的变化小于0.1。
[0470]
或者，可以基于对测试孔中的浊度进行视觉评估(通过与阴性对照比较)来记录结果。
[0471]
结果
[0472]
使用上述方案，计算不同的h2o2:ki比率(重量比，如上文所论述)针对四种常见病原体(大肠杆菌(e.coli)、铜绿假单胞菌(p.aeruginosa)、金黄色葡萄球菌(s.aureus)、乳房链球菌(s.uberis))的mic值。
[0473]
表6：基于ki的针对四种常见病原体的mic
[0474][0475]
表7：基于i
‑
的针对四种常见病原体的mic
[0476]
[0477][0478]
讨论
[0479]
表6和7显示相同的结果—表中的数值不同的原因在于，表6显示的结果是基于碘化钾(即，ki)的量，而表7显示的结果是基于碘离子(即，i
‑
)的量。
[0480]
惊人的是，组合物针对一系列病原体具有小于例如26mg/l或15mg/l(基于i
‑
)的极低mic，即，已发现仅需极低浓度的碘离子便可达成抗微生物活性。实际上，发现即使小于5mg/l的碘离子浓度也可提供抗微生物活性。此外，即使当过氧化氢的浓度低时，也获得这种高活性。这些组合物不仅在低浓度下使用时提供抗微生物活性，而且即使碘离子与过氧化氢的比率低，也提供抗微生物活性。
[0481]
结果还显示，即使过氧化氢与碘离子比率高(例如653.6:1或658:1)，组合物也提供极其良好的抗微生物活性。实际上，抗微生物活性随着过氧化氢与碘离子的比率增加而增强。特别惊人的是，当过氧化氢仅在低浓度下使用时，也发现这种效应。
[0482]
当组合物通过生理盐水溶液递送时，得到了给人印象深刻的这些结果。因此，本发明的具有低浓度的组合物和具有低碘比的组合物适合于治疗/预防微生物感染，例如眼部感染，原因在于其有效杀灭微生物的同时，对动物或人体组织无毒。
[0483]
实施例7
‑
释放分布
[0484]
如从图8中的数据可见，惊人地发现本发明的具有低浓度的组合物提供极佳的释放分布，即，组合物开始作用于样品中所接种的细菌(例如大肠杆菌)所花费的时间较短。通过磷酸盐缓冲盐水(pbs)测试释放分布。发现本发明的低浓度组合物和例如77mg/l浓度的组合物的最终结果(在第4小时)是相同的，这是惊人之处。
[0485]
实施例8
‑
低毒性
[0486]
概述
[0487]
当预期使用抗微生物组合物治疗微生物感染时，可以有效地考虑微生物毒性与细胞毒性之间的生物平衡。为了评估细胞毒性的可能性，通过测定马红血球悬浮液中的血红蛋白释放作为红血细胞溶解的量度来测试具有本发明的低浓度和比率的组合物的溶血活性。(evans等人,2013,j.vis.exp.(73),e50166.doi:10.3791/50166)。公认的抗微生物剂卢戈氏碘(lugol iodine)作为阳性对照被纳入。
[0488]
结果表明本发明的低浓度和比率的组合物在与4％马红血细胞一起培育1小时之后不产生溶血活性(图9和10)。对哺乳动物细胞的毒性低，同时具有优良的抗微生物作用，以及能够通过适合稀释剂或载剂(例如生理盐水缓冲液)递送低浓度/比率组合物，表明其
适用于治疗和控制微生物感染，例如眼部感染。
[0489]
方法和结果
[0490]
图9和10显示在37℃下培育1小时之后，本发明的低浓度和低比率组合物对马红血细胞(最终浓度4％)的溶血作用与抗微生物浓度(组合物中存在0
‑
1000μg/ml过氧化氢，其中过氧化氢与ki的比率是5:1，即，对应于0
‑
200μg/mlki)的函数关系。
[0491]
卢戈氏碘作为阳性抗微生物对照被纳入。
[0492]
图9和10中的每个点表示来自两个实验的双重复样品的平均溶血％
±
sd。统计分析使用单向anova，随后使用杜凯氏检验(tukey'stest)。*表示p值<0.05，**表示p值<0.01(相较于未处理的对照)。插图是代表性分析板孔，其含有多种浓度的不同处理的稀释上清液。
[0493]
实施例9
‑
抗生素组合：协同抗微生物活性
[0494]
方法
[0495]
进行棋盘分析以确定抗生素添加到包含碘离子源和过氧化氢源的组合物中是否存在协同拮抗作用。
[0496]
●
使用大肠杆菌(1103 dsmz)进行测试
[0497]
●
这些测试是在lb培养基(lb)中进行
[0498]
●
所测试的抗生素是安比西林和庆大霉素
[0499]
●
程序：
[0500]
●
50μl抗生素
[0501]
●
100μl组合物
[0502]
●
150μl含有105个细胞的lb
[0503]
结果
[0504][0505]
细胞加深灰色阴影表示其中生长占优势时的亚抑制浓度。其余细胞被阻止细菌生长。这些结果显示在不存在组合物的情况下，杀死细菌所必需的抗生素浓度是4μgml
‑1且杀死细菌所必需的组合物最低浓度是40μgml
‑1。然而，在组合物与抗生素均存在下，实现杀灭所必需的浓度较低，换句话说，组合的mic较低。这些可以根据标记有星形(*)的输入项看到。所测试的两种抗生素均见到上述结果。
[0506]
当使用红霉素和克拉霉素作为抗生素时，也见到等效于如上所示的协同作用。由于在来自若干类别的多种抗生素中均观察到所述作用，因此可以预期其它抗生素也有所述作用。