专利名称：新颖的天冬氨酰二肽酰胺衍生物和增甜剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及新颖的天冬氨酰二肽酰胺衍生物，其盐类和将其作为活性成分的增甜剂。
近年来，随着饮食的发展，要消耗比所需量多得多的糖，肥胖症以及随后发生的疾病已经成为一个社会问题，由此需求一种低热值增甜剂代替食糖。就安全性和甜味质量而言，天冬氨酰苯丙氨酸甲酯是一种优良的常用的增甜剂，但存在稳定性的问题。为改进稳定性和增加甜度，研究了一种不含酯键的天冬氨酰-D-氨基酸的酰胺衍生物，并发现了如美国专利US4411925或5286509中所描述的化合物。
本发明的一个目的是提供新颖的天冬氨酰二肽衍生物和其盐类。
本发明的另一个目的是使用氨基酸组份和胺组份提供新颖的天冬氨酰二肽衍生物及其盐。
本发明的另一个目的是提供高稳定性，安全性的，并且以容易获得的原料制备的新颖的天冬氨酰二肽衍生物和其盐。
本发明的另一目的是提供含有该新颖的天冬氨酰二肽衍生物和/或其生理上可接受盐的增甜剂。
通过参考下文的描述更好地理解本发明，由此本发明的其它目的也是显而易见的。
通过下文中通式(I)的天冬氨酰二肽酰胺衍生物达到上述目的，该类衍生物在稳定性和甜味质量两方面都很好。
L-Asp-X-NH-C*HR1R2(I)这里，X是D-α-氨基酸残基或DL-α-氨基酸残基，选自D-丙氨酸，D-α-氨基丁酸，D-正缬氨酸，D-缬氨酸，D-正亮氨酸，D-亮氨酸，D-异亮氨酸，D-别异亮氨酸，D-t-亮氨酸，D-丝氨酸，D-O-甲基丝氨酸，D-苏氨酸，D-O-甲基苏氨酸，D-别苏氨酸，D-O-甲基别苏氨酸，D-苯基甘氨酸和D-或DL-呋喃基甘氨酸，或X是含有3至6个碳原子的环或非环α，α-二烷基氨基酸残基；R1含有1至6个碳原子的直链或支链烷基或在烷氧基部分含2至7个碳原子的烷氧基甲基；R2是-苯基，在其2，3或4位上含有一取代基，取代基选自F，Cl，Br，I，羟基，含有1至6个碳原子的直或支链烷氧基，氰基，硝基，乙酰基，氨基或乙酰氨基，或R2是-苯基基团，在其2，3-或3，4-位上含有亚甲二氧基，1，3-亚丙基或四亚甲基，或R2是2，3-或4-吡啶基，2-或3-呋喃基或2-或3-噻嗯基；当R1是直链或支链烷基时通式(I)的C*的构型是(S)或(RS)；当R1是烷氧基甲基时构型为(R)，(S)或(RS)；在式(I)中，L-Asp和X是α-键连的。例如，当X是D-缬氨酸时，R是乙基而R2是4-羟基苯基，式(I)的化合物具有如下的结构H2NCH(CH2COOH)CONHCH(CH(CH3)2)2CONHC*H(乙基)(C6H4OH)，这里C*是(S)或(RS)。光学纯度(ee)优选的范围为大于50％，更优选的为大于70％，而最优选80，85，90，95或100％，包括所有其间的值。
通式(I)的化合物的盐也包括在本发明中，包括碱金属盐，例如钠和钾，碱土金属盐，如Ca和Mg，胺盐，例如单乙醇胺，无机酸盐，例如盐酸和硫酸和有机酸盐，例如柠檬酸和乙酸。优选生理上可接受的盐。
本发明的天冬氨酰二酞衍生物完全可以在本领域技术人员的技术范围内用常规的肽合成法获取。见Izumiya等人的Basics of Peptide Synthesis and ExperimentsMaruen，Jan.20，1985，在此作为参考文献。在氨基以相应的胺保护的α-氨基酸缩合后，脱除保护基α-L-天冬氨酰-α-氨基酸酰胺能通过一种α-氨基酸酰胺和L-天冬氨酸缩合制备二肽酰胺而获得，其中β-羧基和氨基被保护，然后除去保护基或用一种α-氨基酸与L-天冬氨酸的活性酯反应，后者的β-羧基和氨基被保护，然后使生成的被保护的二肽与胺反应并去掉保护基。但是，制备本发明化合物的方法不限于上述的方法，还包括(Attorney Docket No.)中所描述的那些方法，在此作为参考文献。
本发明的β-烷氧基胺作为一种光学活性物质用A.I.Meyere等人建议的方法很容易获得(Journal of Organic Chemistry43，892，1978)，在本文中作为参考文献，它还可以用其它方法合成。光学活性的苯甲基胺衍生物可以用C.K.Miao等人描述的方法(Tetrahedron Letters，34，2259，1993)获得，这里用作参考，参考文献也在其中。
由感觉评价表明通式(I)的化合物及其盐具有与食糖相似的甜味品质和很强的甜度。例如，α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲基酰胺具有的甜度为2000(蔗糖＝1)，α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲基酰胺具有甜度为1500(蔗糖＝1)，α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲基酰胺具有甜度为1250(蔗糖＝1)，α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲基酰胺(胺的光学纯度85％ee)具有的甜度为1500(蔗糖＝1)，α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲基酰胺(胺的光学纯度85％ee)具有甜度为1250(蔗糖＝1)。在磷酸盐缓冲液(PH＝3)中加热至70℃缬氨酸的衍生物的半衰期为8至9天(天冬酰苯丙氨酸甲酯约为1天)。
本发明的化合物具有很高的甜度和优良的甜味品质且没有诸如苦味和余味等不良的品质。
某些合成的本发明的天冬氨酰二肽衍生物的结构和感觉评价结果示于表1中。
表1.
天冬氨酰二肽衍生物的结构及其甜度X C*构型 光学纯度R1R2甜度％eeD-Abu2)(S)＞95 EtC6H5-p-OH 2000D-Val (S)＞95 EtC6H5-p-OH 1500D-Val (S)＞95 EtC6H5-p-Cl 1250D-Val (S)70MeC6H5-p-OH 1000D-Val (S)90Et4-pyridyl 300D-Abu (R)85OMe C6H5-p-OH 1500D-Val (R)＞90 OMe C6H5-p-OH 1250D-Val (R)＞95 OMe C6H5-p-OMe 250D-Val (RS) OMe 2-Furyl 2001)与4％蔗糖水溶液比较。
2)Abu＝α-氨基丁酸本发明的化合物及其盐，优选其生理上可接受的盐类，除非特别说明，能与其它增甜剂相混合，可以作为增甜剂单独使用或与一种或多种增甜剂结合使用，可以与在增甜剂技术中通用的载体、稀释剂等混合。含有本发明的一种或多种化合物的增甜剂优选含有一定量的上述一种或多种化合物以便足以赋于一定量的品尝甜度。特别优选的本发明的化合物具有在表1中测定出来的至少为100的甜度倍数，包括200，300，400，500，600，700，800，900，1000，2000和3000和其间的所有数值。
实施例1α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲基酰胺的合成取1.37克(3.1mmol)的N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸和0.74克(3.08毫摩尔；光学纯度＞95％ee)的(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基胺溶于30毫升的二氯甲烷中(溶液I)；0.65克(3.4毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.46克(3.4毫摩尔)HOBT在冷却下加入溶液I中，混合物在冷却条件下搅拌1小时，在室温下搅拌一夜。反应混合物在减压下浓缩，并向残留物中加入100毫升乙酸乙酯，然后用50毫升5％的柠檬酸水溶液洗两次该有机溶液，并用50毫升水洗一次，用50毫升5％碳酸氢钠水溶液洗两次和用50毫升的盐水洗。当有机层用无水硫酸镁干燥后，过滤硫酸镁，滤液在减压条件下浓缩从而获取了1.46克(2.2毫摩尔)的固体N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基酰胺。
将1.45克(2.18毫摩尔)的N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲酰胺溶解在35毫升的甲醇和10毫升水的混合液中，然后加入0.13毫升乙酸，随后加入450毫克5％Pd-碳(含水量50％)，还原反应在氢气流中50℃持续3小时。过滤去除催化剂；过滤后在减压下浓缩滤液获得的残留物从水中重结晶并干燥，得到0.44克(1.25毫摩尔)的α-L-天氨酰-D-α-氨基丁酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲酰胺。
1H NMR(D2O)δ0.73(t，3H)，0.79(t，3H)，1.50-1.70(m，4H)，2.53-2.70(m，2H)，4.05(t，1H)，4.07(t，1H)，4.46(t，1H)，6.72(d，2H)，7.07(d，2H)。
FAB-MS 352(MH )甜度为2000(蔗糖＝1)实施例2α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲酰胺的合成使用(R)-α-甲氧基甲基-对-苄氧基苯甲基胺(光学纯度85％ee)代替(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基胺并重复实施例1的方法。获得的固体α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲酰胺总产率为43.7％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.85(t，3H)，1.48-1.72(m，2H)，2.24(dd，1H)，2.43(dd，1H)，3.22(s，3H)，3.70(dd，1H)，4.20-4.32(m，1H)，4.91(q，1H)，6.70(d，2H)，7.11(d，2H)，8.37(d，1H)，8.38-8.47(m，1H)。
FAB-MS 368(MH )甜度1500(蔗糖＝1)实施例3α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲酰胺的合成将0.67克(3.08毫摩尔)的N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸和0.74克(3.08毫摩尔)的(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基胺溶于25毫升二氯甲烷中(溶液II)，0.59克(3.08毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.42克(3.08毫摩尔)HOBt在冷却的条件下加入到溶液II中并在冷却条件下搅拌1小时，然后在室温下搅拌一夜。反应混合物减压浓缩并向残留物中加入50毫升5％柠檬酸水溶液，用50毫升的乙酸乙酯提取两次，然后用20毫升水和25毫升5％碳酸氢钠水溶液及20毫升盐水冲洗有机层。在该有机层以无水硫酸镁干燥并过滤后，减压浓缩滤液而制得1.12克(2.54毫摩尔)固体N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲酰胺。
把13毫升的4N-HCl/二噁烷加入到1.11克(2.52毫摩尔)的N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲酰胺中，并在室温下搅拌溶液1小时。减压浓缩反应溶液，向残留物中加入30毫升乙醚并进一步浓缩。加入25毫升二氯甲烷和0.39毫升(2.77毫摩尔)三乙胺溶解之，溶解之后加入0.99克(2.77毫摩尔)N-苄氧羰基-L-天冬氨酸-β-苯甲酯(溶液III)。在冷却期间，加入0.53克(2.77毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.37克(2.77毫摩尔)的HOBt并冷却搅拌1小时，再继续搅拌一夜。减压浓缩反应混合物并向残留物中加入5％柠檬酸水溶液50毫升，用乙酸乙酯提取两次后，以20毫升水、25毫升5％碳酸氢钠水溶液和20毫升的盐水冲洗有机层。有机层用无水硫酸镁干燥并过滤后，减压浓缩过滤液，得到1.47克(2.16毫摩尔)的固体N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲酰胺。
1.46克(2.16毫摩尔)的N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲酰胺溶于30毫升甲醇和5毫升水的混合物中，然后加入0.45克5％Pd-碳(水含量50％)和乙酸，50℃在氢气流中还原4小时。在加入40毫升水后，过滤掉催化剂，滤液减压浓缩至约25％并过滤以分离出结晶并干燥，得到0.42克(1.15毫摩尔)的α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲酰胺。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.76(m，9H)，1.59-1.68(m，2H)，1.90-2.01(m，1H)，2.21(dd，1H)，2.42(dd，1H)，3.75(dd，1H)，4.20-4.26(m，1H)，4.58(q，1H)，6.69(d，2H)，7.08(d，2H)，8.30(d，1H)，8.38(d，1H)。
FAB-MS 366(MH )甜度1500(蔗糖＝1)实施例4α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲酰胺的合成使用(R)-α-甲氧甲基-对-苄氧基苯甲基胺(光学纯度约85％ee)代替(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基胺，并重复实施例3的方法。所获得的固体α-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲酰胺的总产率为33.7％。
1H MNR(D2O)δ0.79(t，6H)，1.87-1.98(m，1H)，2.55-2.71(m，2H)，3.20(s，3H)，3.45-3.55(m，2H)，3.95-4.15(m，2H)，4.86(t，1H)，6.73(d，2H)，7.09(d，2H)。
FAB-MS 382(MH )甜度为1250(蔗糖＝1)实施例5α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲基-对-羟基苯甲酰胺的合成使用(S)-α-甲基-对-苄氧基苯甲基胺(光学纯度约70％ee)代替(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基胺，并重复实施例3的方法。获取固体α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-甲基-对-羟基苯甲酰胺的总产率为69.6％。
1H NMR(D2O)δ0.79(t，6H)，1.29(d，3H)，1.80-1.98(m，1H)，2.64-2.70(m，2H)，3.92-3.95(m，1H)，4.09-4.15(m，1H)，4.70-4.80(m，1H)，6.73(d，2H)，7.10(d，2H)，8.53(d，1H)。
FAB-MS 352(MH )甜度为1000(蔗糖＝1)
实施例6α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺取0.82克(3.77毫摩尔)N-叔-丁氧羰基-D-缬氨酸和0.53克(3.77毫摩尔；光学纯度＞95％ee)的(S)-α-乙基-对-氯苯甲基胺溶于25毫升二氯甲烷中(溶液IV)，在冷却条件下，把0.72克(3.77毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.51克(3.77毫摩尔)HOBt加入溶液IV中，并在冷却条件下搅拌1小时，然后在室温下搅拌一夜。反应混合物经减压浓缩并向残留物中加入50毫升5％的柠檬酸水溶液，以乙酸乙酯提取两次，然后用20毫升的水、25毫升的5％碳酸氢钠水溶液以及20毫升盐水冲洗有机层。有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，减压浓缩滤液获得1.04克(2.83毫摩尔)固体N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺。
14毫升的4N-HCl/二噁烷溶液加入到1.03克(2.80毫摩尔)的N-叔-丁氧偌羰基-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺中，并在室温下搅拌该溶液1小时。减压浓缩该反应溶液后加入30毫升乙醚，两次浓缩。加入25毫升的二氯甲烷和1.41克(3.08毫摩尔)N-叔-丁氧基羰基-L-天冬氨酸-β-叔-丁酯DCHA盐。在冷却期间，加入0.59克(3.08毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.42克(3.08毫摩尔)HOBt并冷却搅拌1小时，然后室温搅拌一夜。减压浓缩反应混合物，向残留物中加入50毫升5％柠檬酸水溶液，用乙酸乙酯提取两次，然后用20毫升水、25毫升5％NaHCO3溶液和20毫升盐水洗涤有机层。有机层用无水MgSO44]干燥并过滤，滤液减压浓缩而得到1.30克(2.41毫摩尔)固体N-叔-丁氧基羰基-β-O-叔-丁基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺。
10毫升4N-HCl/二噁烷溶液加入到1.30克(2.41毫摩尔)N-叔-丁氧基羰基-β-O-叔-丁基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺残留物上，并在室温搅拌该溶液1小时。减压浓缩该反应溶液，并用20毫升水和少量的28％氨水再次浓缩。
残留物溶入50毫升水和30毫升甲醇的混合物中，减压浓缩，过滤生成的晶体，干燥后得到0.84克(2.18毫摩尔)α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.85(d，3H)，0.86(d，3H)，1.60-1.66(m，2H)，1.87-2.02(m，1H)，2.24(dd，1H)，2.44(dd，1H)，4.20-4.27(m，1H)，4.63-4.72(m，1H)，7.30-7.39(m，4H)，8.44(brs，1H)，8.49(d，1H)FAB-MS 384(MH )甜度为1250(蔗糖＝1)实施例7α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺的合成1.38克(6.35毫摩尔)N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸和0.79克(5.77毫摩尔；光学纯度90％ee)的(S)α-4-吡啶基丙基胺溶入40毫升二氯甲烷中(溶液V)。1.22克(6.35毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.86克(6.35毫摩尔)HOBt在冷却条件下加入溶液V中，冷却条件搅拌1小时，在室温下搅拌一夜。减压浓缩反应混合物并向残留物中加入50毫升5％柠檬酸水溶液，用50毫升的乙酸乙酯提取两次，然后用20毫升水，25毫升5％NaHCO3水溶液和20毫升盐水冲洗有机层。在用无水MgSO4干燥有机层和过滤之后，减压浓缩滤液而获得0.85克(2.52毫摩尔)的固体N-叔-丁氧基羰基-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺。
13毫升4N-HCl/二噁烷溶液加入到0.85克(2.52毫摩尔)的N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺中，溶液在室温下搅拌一小时。减压浓缩反应溶液，向残留物中加入30毫升乙醚以便进一步浓缩。25毫升二氯甲烷和0.77毫升(5.56毫摩尔)三乙胺加入到残留物中，使之溶解，然后加入0.99克(2.78毫摩尔)的N-苄基羰基-L-天冬氨酸-β-苯甲酯。在冷却条件下，加入0.53克(2.78毫摩尔)水溶液盐酸碳化二亚胺和0.38克(2.78毫摩尔)HOBt，并冷却搅拌一小时，在室温搅拌一夜。反应混合物被减压浓缩，并向残留物中加入50毫升5％柠檬酸，用乙酸乙酯提取二次，然后用20毫升水、25毫升5％NaHCO3水溶液和20毫升盐水冲洗有机层。在有机层用无水MgSO4干燥和过滤之后，减压浓缩滤液，获得1.12克(1.95毫摩尔)固体的N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺。
1.12克(1.95毫摩尔)N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺溶于40毫升甲醇和5毫升水的混合物中，加入0.40克5％Pd-碳(含水量50％)并在氢气流中还原。加入40毫升水，催化剂被过滤除去，滤液被减压浓缩至约25％，收集生成的结晶并干燥，得到0.60克(1.70毫摩尔)α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.83-0.90(m，9H)，1.63-1.74(m，2H)，1.95-2.06(m，1H)，2.66-2.78(m，2H)，4.01-4.05(m，1H)，4.25-4.33(m，1H)，4.70(q，1H)，7.31(d，2H)，8.47-8.52(m，3H)，8.63(brd，1H)。
FAB-MS 351(MH )甜度约为300(蔗糖＝1)实施例8α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲氧基甲基-对-甲氧基苯甲基酰胺的合成使用(R)-α-甲氧基甲基-对-甲氧基苯甲基胺(光学纯度大于95％ee)代替(S)-α-4-吡啶丙基胺，重复实施例7的方法。获得的固体α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲氧基甲基-对-甲氧基苯甲酰胺的总产率为21.4％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.84(d，3H)，0.87(d，1H)，1.90-2.03(m，1H)，2.20(ddm 1H)，2.43(dd，1H)，3.23(s，3H)，3.39-3.50(m，2H)，3.69-3.76(m，1H)，3.72(s，3H)，4.20-4.26(m，1H)，4.94-5.03(m，1H)，6.88(d，2H)，7.25(d，2H)，8.43(brs，1H)，8.44(d，1H)FAB-MS 396(MW)甜度约为250(蔗糖＝1)实施例9α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(RS)-α-呋喃基-β-甲氧基乙酰胺的合成使用(RS)-α-呋喃基-β-甲氧基乙胺代替(S)-α-4-吡啶基丙胺，并重复实施例7中的方法。获得的α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(RS)-α-呋喃基-β-甲氧基乙酰胺的总产率为55.4％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.77-0.87(m，6H)，1.90-2.00(m，1H)，2.17-2.30(m，1H)，2.40-2.50(m，1H)，3.22-3.27(m，3H)，3.53-3.58(m，2H)，3.75-3.80(m，1H)，4.20-4.30(m，1H)，5.05-5.17(m，1H)，6.27(dd，1H)，6.37-6.41(m，1H)，7.58(d，1H)，8.42-8.53(m，2H)。
FAB-MS 356(MH )
甜度约为200(蔗糖＝1)本申请以日本专利申请144844/1995(1995年6月12日受理)为基础，在此，将其作为参考文献。
权利要求
1.通式(I)的天冬氨酰二肽酰胺化合物L-Asp-X-NH-C*HR1R2(I)和其盐类，式中，X是D-α-氨基酸残基或DL-α-氨基酸残基，选自D-丙氨酸，D-α-氨基丁酸，D-正缬氨酸，D-缬氨酸，D-正亮氨酸，D-亮氨酸，D-异亮氨酸，D-别异亮氨酸，D-叔-亮氨酸，D-丝氨酸，D-O-甲基丝氨酸，D-苏氨酸D-O-甲基苏氨酸，D-别苏氨酸，D-O-甲基别苏氨酸，D-苯基甘氨酸和D-或DL呋喃基甘氨酸，或X是有3至6个碳原子的环的或非环的α，α-二烷基氨基酸残基、R1是直链或支链烷基，含有1至6个碳原子，或烷氧甲基，在烷氧基部分含2至7个碳原子；R2是苯基，在其2，3-或4-位含有一取代基，取代基选自F，Cl，Br，I，羟基，含1至6个碳原子的直或支链烷氧基，氰基，硝基，乙酰基，氨基或乙酰氨基，或R2是苯基，在其2，3-或3，4-位上含有亚甲二氧基，三亚甲基或四亚甲基，或R2是2，3-或4-吡啶基，2-或3-呋喃基或2-或3-噻嗯基；通式(I)的C*的构型当R1是直或支链烷基时是(S)或(RS)，当R1是烷氧基甲基时为(R)。(S)，或(RS)；在通式(I)中L-Asp和X是α-键连的。
2.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-α-氨基丁酸残基；R1是乙基；R2是对-羟苯基；且C*的构型是(S)。
3.根据权利要求1的化合物，基中，X是D-缬氨酸残基；R1是乙基；R2是对-羟苯基；且C*的构型为(S)。
4.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是乙基；R2是对-氯苯基；且C*的构型为(S)。
5.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是乙基；R2是4-吡啶基；且C*的构型为(S)。
6.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-α-氨基丁酸残基；R1是甲氧甲基；R2是对-羟苯基；且C*的构型是(R)。
7.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是甲氧甲基；R2是对-羟苯基；且C*的构型是(R)。
8.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是甲氧甲基；R2是对-甲氧基苯基；且C*的构型是(R)。
9.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是甲氧甲基；R2是2-呋喃基；且C*的构型是(S)或(RS)。
10.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是甲基；R2是对-羟苯基；且C*的构型是(S)。
11.一种增甜剂，含有至少一种通式(I)的天冬氨酰二肽酰胺衍生物和其盐类L-Asp-X-NH-C*HR1R2(I)式中，X是D-α氨基酸残基或DL-α-氨基酸残基，选自D-丙氨酸，D-α-氨基丁酸，D-正缬氨酸，D-缬氨酸，D-正亮氨酸，D-亮氨酸，D-异亮氨酸，D-别异亮氨酸，D-叔-亮氨酸，D-丝氨酸，D-O-甲基丝氨酸，D-苏氨酸，D-O-甲基苏氨酸，D-别苏氨酸，D-O-甲基别苏氨酸，D-苯基甘氨酸和D-或DL呋喃基甘氨酸，或X是有3至6个碳原子的环的或非环的α，α-二烷基氨基酸残基；R1是直链或支链烷基，含有1至6个碳原子，或烷氧基甲基基团，在烷氧基部分含2至7个碳原子；R2是苯基，在其2，3-或4-位含有一取代基，取代基选自F，Cl，Br，I，羟基，含1至6碳原子的直或支链烷氧基，氰基，硝基，乙酰基，氨基或乙酰氨基，或R2是一个苯基，在其2，3-或3，4-位上含有亚甲二氧基，三亚甲基或四亚甲基，或R2是2，3-或4-吡啶基，2-或3-呋喃基或2-或3-噻嗯基；在通式(I)中当R1是直或支链烷基时C*的构型，为(S)或(RS)；当R1是烷氧甲基时，为(R)，(S)，或(RS)；在通式(I)中L-Asp和X是α键连的的。
全文摘要
新的具有通式(I)的天冬氨酰二肽酰胺衍生物及其盐类L-Asp-X-NH-C
文档编号C07K5/00GK1143648SQ95113200
公开日1997年2月26日 申请日期1995年12月28日 优先权日1995年6月12日
发明者竹本正, 网野裕右, 中村良一郎 申请人:味之素株式会社
技术领域：
本发明涉及新颖的天冬氨酰二肽酰胺衍生物，其盐类和将其作为活性成分的增甜剂。
近年来，随着饮食的发展，要消耗比所需量多得多的糖，肥胖症以及随后发生的疾病已经成为一个社会问题，由此需求一种低热值增甜剂代替食糖。就安全性和甜味质量而言，天冬氨酰苯丙氨酸甲酯是一种优良的常用的增甜剂，但存在稳定性的问题。为改进稳定性和增加甜度，研究了一种不含酯键的天冬氨酰-D-氨基酸的酰胺衍生物，并发现了如美国专利US4411925或5286509中所描述的化合物。
本发明的一个目的是提供新颖的天冬氨酰二肽衍生物和其盐类。
本发明的另一个目的是使用氨基酸组份和胺组份提供新颖的天冬氨酰二肽衍生物及其盐。
本发明的另一个目的是提供高稳定性，安全性的，并且以容易获得的原料制备的新颖的天冬氨酰二肽衍生物和其盐。
本发明的另一目的是提供含有该新颖的天冬氨酰二肽衍生物和/或其生理上可接受盐的增甜剂。
通过参考下文的描述更好地理解本发明，由此本发明的其它目的也是显而易见的。
通过下文中通式(I)的天冬氨酰二肽酰胺衍生物达到上述目的，该类衍生物在稳定性和甜味质量两方面都很好。
L-Asp-X-NH-C*HR1R2(I)这里，X是D-α-氨基酸残基或DL-α-氨基酸残基，选自D-丙氨酸，D-α-氨基丁酸，D-正缬氨酸，D-缬氨酸，D-正亮氨酸，D-亮氨酸，D-异亮氨酸，D-别异亮氨酸，D-t-亮氨酸，D-丝氨酸，D-O-甲基丝氨酸，D-苏氨酸，D-O-甲基苏氨酸，D-别苏氨酸，D-O-甲基别苏氨酸，D-苯基甘氨酸和D-或DL-呋喃基甘氨酸，或X是含有3至6个碳原子的环或非环α，α-二烷基氨基酸残基；R1含有1至6个碳原子的直链或支链烷基或在烷氧基部分含2至7个碳原子的烷氧基甲基；R2是-苯基，在其2，3或4位上含有一取代基，取代基选自F，Cl，Br，I，羟基，含有1至6个碳原子的直或支链烷氧基，氰基，硝基，乙酰基，氨基或乙酰氨基，或R2是-苯基基团，在其2，3-或3，4-位上含有亚甲二氧基，1，3-亚丙基或四亚甲基，或R2是2，3-或4-吡啶基，2-或3-呋喃基或2-或3-噻嗯基；当R1是直链或支链烷基时通式(I)的C*的构型是(S)或(RS)；当R1是烷氧基甲基时构型为(R)，(S)或(RS)；在式(I)中，L-Asp和X是α-键连的。例如，当X是D-缬氨酸时，R是乙基而R2是4-羟基苯基，式(I)的化合物具有如下的结构H2NCH(CH2COOH)CONHCH(CH(CH3)2)2CONHC*H(乙基)(C6H4OH)，这里C*是(S)或(RS)。光学纯度(ee)优选的范围为大于50％，更优选的为大于70％，而最优选80，85，90，95或100％，包括所有其间的值。
通式(I)的化合物的盐也包括在本发明中，包括碱金属盐，例如钠和钾，碱土金属盐，如Ca和Mg，胺盐，例如单乙醇胺，无机酸盐，例如盐酸和硫酸和有机酸盐，例如柠檬酸和乙酸。优选生理上可接受的盐。
本发明的天冬氨酰二酞衍生物完全可以在本领域技术人员的技术范围内用常规的肽合成法获取。见Izumiya等人的Basics of Peptide Synthesis and ExperimentsMaruen，Jan.20，1985，在此作为参考文献。在氨基以相应的胺保护的α-氨基酸缩合后，脱除保护基α-L-天冬氨酰-α-氨基酸酰胺能通过一种α-氨基酸酰胺和L-天冬氨酸缩合制备二肽酰胺而获得，其中β-羧基和氨基被保护，然后除去保护基或用一种α-氨基酸与L-天冬氨酸的活性酯反应，后者的β-羧基和氨基被保护，然后使生成的被保护的二肽与胺反应并去掉保护基。但是，制备本发明化合物的方法不限于上述的方法，还包括(Attorney Docket No.)中所描述的那些方法，在此作为参考文献。
本发明的β-烷氧基胺作为一种光学活性物质用A.I.Meyere等人建议的方法很容易获得(Journal of Organic Chemistry43，892，1978)，在本文中作为参考文献，它还可以用其它方法合成。光学活性的苯甲基胺衍生物可以用C.K.Miao等人描述的方法(Tetrahedron Letters，34，2259，1993)获得，这里用作参考，参考文献也在其中。
由感觉评价表明通式(I)的化合物及其盐具有与食糖相似的甜味品质和很强的甜度。例如，α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲基酰胺具有的甜度为2000(蔗糖＝1)，α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲基酰胺具有甜度为1500(蔗糖＝1)，α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲基酰胺具有甜度为1250(蔗糖＝1)，α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲基酰胺(胺的光学纯度85％ee)具有的甜度为1500(蔗糖＝1)，α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲基酰胺(胺的光学纯度85％ee)具有甜度为1250(蔗糖＝1)。在磷酸盐缓冲液(PH＝3)中加热至70℃缬氨酸的衍生物的半衰期为8至9天(天冬酰苯丙氨酸甲酯约为1天)。
本发明的化合物具有很高的甜度和优良的甜味品质且没有诸如苦味和余味等不良的品质。
某些合成的本发明的天冬氨酰二肽衍生物的结构和感觉评价结果示于表1中。
表1.
天冬氨酰二肽衍生物的结构及其甜度X C*构型 光学纯度R1R2甜度％eeD-Abu2)(S)＞95 EtC6H5-p-OH 2000D-Val (S)＞95 EtC6H5-p-OH 1500D-Val (S)＞95 EtC6H5-p-Cl 1250D-Val (S)70MeC6H5-p-OH 1000D-Val (S)90Et4-pyridyl 300D-Abu (R)85OMe C6H5-p-OH 1500D-Val (R)＞90 OMe C6H5-p-OH 1250D-Val (R)＞95 OMe C6H5-p-OMe 250D-Val (RS) OMe 2-Furyl 2001)与4％蔗糖水溶液比较。
2)Abu＝α-氨基丁酸本发明的化合物及其盐，优选其生理上可接受的盐类，除非特别说明，能与其它增甜剂相混合，可以作为增甜剂单独使用或与一种或多种增甜剂结合使用，可以与在增甜剂技术中通用的载体、稀释剂等混合。含有本发明的一种或多种化合物的增甜剂优选含有一定量的上述一种或多种化合物以便足以赋于一定量的品尝甜度。特别优选的本发明的化合物具有在表1中测定出来的至少为100的甜度倍数，包括200，300，400，500，600，700，800，900，1000，2000和3000和其间的所有数值。
实施例1α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲基酰胺的合成取1.37克(3.1mmol)的N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸和0.74克(3.08毫摩尔；光学纯度＞95％ee)的(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基胺溶于30毫升的二氯甲烷中(溶液I)；0.65克(3.4毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.46克(3.4毫摩尔)HOBT在冷却下加入溶液I中，混合物在冷却条件下搅拌1小时，在室温下搅拌一夜。反应混合物在减压下浓缩，并向残留物中加入100毫升乙酸乙酯，然后用50毫升5％的柠檬酸水溶液洗两次该有机溶液，并用50毫升水洗一次，用50毫升5％碳酸氢钠水溶液洗两次和用50毫升的盐水洗。当有机层用无水硫酸镁干燥后，过滤硫酸镁，滤液在减压条件下浓缩从而获取了1.46克(2.2毫摩尔)的固体N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基酰胺。
将1.45克(2.18毫摩尔)的N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲酰胺溶解在35毫升的甲醇和10毫升水的混合液中，然后加入0.13毫升乙酸，随后加入450毫克5％Pd-碳(含水量50％)，还原反应在氢气流中50℃持续3小时。过滤去除催化剂；过滤后在减压下浓缩滤液获得的残留物从水中重结晶并干燥，得到0.44克(1.25毫摩尔)的α-L-天氨酰-D-α-氨基丁酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲酰胺。
1H NMR(D2O)δ0.73(t，3H)，0.79(t，3H)，1.50-1.70(m，4H)，2.53-2.70(m，2H)，4.05(t，1H)，4.07(t，1H)，4.46(t，1H)，6.72(d，2H)，7.07(d，2H)。
FAB-MS 352(MH )甜度为2000(蔗糖＝1)实施例2α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲酰胺的合成使用(R)-α-甲氧基甲基-对-苄氧基苯甲基胺(光学纯度85％ee)代替(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基胺并重复实施例1的方法。获得的固体α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲酰胺总产率为43.7％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.85(t，3H)，1.48-1.72(m，2H)，2.24(dd，1H)，2.43(dd，1H)，3.22(s，3H)，3.70(dd，1H)，4.20-4.32(m，1H)，4.91(q，1H)，6.70(d，2H)，7.11(d，2H)，8.37(d，1H)，8.38-8.47(m，1H)。
FAB-MS 368(MH )甜度1500(蔗糖＝1)实施例3α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲酰胺的合成将0.67克(3.08毫摩尔)的N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸和0.74克(3.08毫摩尔)的(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基胺溶于25毫升二氯甲烷中(溶液II)，0.59克(3.08毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.42克(3.08毫摩尔)HOBt在冷却的条件下加入到溶液II中并在冷却条件下搅拌1小时，然后在室温下搅拌一夜。反应混合物减压浓缩并向残留物中加入50毫升5％柠檬酸水溶液，用50毫升的乙酸乙酯提取两次，然后用20毫升水和25毫升5％碳酸氢钠水溶液及20毫升盐水冲洗有机层。在该有机层以无水硫酸镁干燥并过滤后，减压浓缩滤液而制得1.12克(2.54毫摩尔)固体N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲酰胺。
把13毫升的4N-HCl/二噁烷加入到1.11克(2.52毫摩尔)的N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲酰胺中，并在室温下搅拌溶液1小时。减压浓缩反应溶液，向残留物中加入30毫升乙醚并进一步浓缩。加入25毫升二氯甲烷和0.39毫升(2.77毫摩尔)三乙胺溶解之，溶解之后加入0.99克(2.77毫摩尔)N-苄氧羰基-L-天冬氨酸-β-苯甲酯(溶液III)。在冷却期间，加入0.53克(2.77毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.37克(2.77毫摩尔)的HOBt并冷却搅拌1小时，再继续搅拌一夜。减压浓缩反应混合物并向残留物中加入5％柠檬酸水溶液50毫升，用乙酸乙酯提取两次后，以20毫升水、25毫升5％碳酸氢钠水溶液和20毫升的盐水冲洗有机层。有机层用无水硫酸镁干燥并过滤后，减压浓缩过滤液，得到1.47克(2.16毫摩尔)的固体N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲酰胺。
1.46克(2.16毫摩尔)的N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲酰胺溶于30毫升甲醇和5毫升水的混合物中，然后加入0.45克5％Pd-碳(水含量50％)和乙酸，50℃在氢气流中还原4小时。在加入40毫升水后，过滤掉催化剂，滤液减压浓缩至约25％并过滤以分离出结晶并干燥，得到0.42克(1.15毫摩尔)的α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-羟基苯甲酰胺。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.76(m，9H)，1.59-1.68(m，2H)，1.90-2.01(m，1H)，2.21(dd，1H)，2.42(dd，1H)，3.75(dd，1H)，4.20-4.26(m，1H)，4.58(q，1H)，6.69(d，2H)，7.08(d，2H)，8.30(d，1H)，8.38(d，1H)。
FAB-MS 366(MH )甜度1500(蔗糖＝1)实施例4α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲酰胺的合成使用(R)-α-甲氧甲基-对-苄氧基苯甲基胺(光学纯度约85％ee)代替(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基胺，并重复实施例3的方法。所获得的固体α-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲氧基甲基-对-羟基苯甲酰胺的总产率为33.7％。
1H MNR(D2O)δ0.79(t，6H)，1.87-1.98(m，1H)，2.55-2.71(m，2H)，3.20(s，3H)，3.45-3.55(m，2H)，3.95-4.15(m，2H)，4.86(t，1H)，6.73(d，2H)，7.09(d，2H)。
FAB-MS 382(MH )甜度为1250(蔗糖＝1)实施例5α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲基-对-羟基苯甲酰胺的合成使用(S)-α-甲基-对-苄氧基苯甲基胺(光学纯度约70％ee)代替(S)-α-乙基-对-苄氧基苯甲基胺，并重复实施例3的方法。获取固体α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-甲基-对-羟基苯甲酰胺的总产率为69.6％。
1H NMR(D2O)δ0.79(t，6H)，1.29(d，3H)，1.80-1.98(m，1H)，2.64-2.70(m，2H)，3.92-3.95(m，1H)，4.09-4.15(m，1H)，4.70-4.80(m，1H)，6.73(d，2H)，7.10(d，2H)，8.53(d，1H)。
FAB-MS 352(MH )甜度为1000(蔗糖＝1)
实施例6α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺取0.82克(3.77毫摩尔)N-叔-丁氧羰基-D-缬氨酸和0.53克(3.77毫摩尔；光学纯度＞95％ee)的(S)-α-乙基-对-氯苯甲基胺溶于25毫升二氯甲烷中(溶液IV)，在冷却条件下，把0.72克(3.77毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.51克(3.77毫摩尔)HOBt加入溶液IV中，并在冷却条件下搅拌1小时，然后在室温下搅拌一夜。反应混合物经减压浓缩并向残留物中加入50毫升5％的柠檬酸水溶液，以乙酸乙酯提取两次，然后用20毫升的水、25毫升的5％碳酸氢钠水溶液以及20毫升盐水冲洗有机层。有机层用无水硫酸镁干燥后过滤，减压浓缩滤液获得1.04克(2.83毫摩尔)固体N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺。
14毫升的4N-HCl/二噁烷溶液加入到1.03克(2.80毫摩尔)的N-叔-丁氧偌羰基-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺中，并在室温下搅拌该溶液1小时。减压浓缩该反应溶液后加入30毫升乙醚，两次浓缩。加入25毫升的二氯甲烷和1.41克(3.08毫摩尔)N-叔-丁氧基羰基-L-天冬氨酸-β-叔-丁酯DCHA盐。在冷却期间，加入0.59克(3.08毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.42克(3.08毫摩尔)HOBt并冷却搅拌1小时，然后室温搅拌一夜。减压浓缩反应混合物，向残留物中加入50毫升5％柠檬酸水溶液，用乙酸乙酯提取两次，然后用20毫升水、25毫升5％NaHCO3溶液和20毫升盐水洗涤有机层。有机层用无水MgSO44]干燥并过滤，滤液减压浓缩而得到1.30克(2.41毫摩尔)固体N-叔-丁氧基羰基-β-O-叔-丁基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺。
10毫升4N-HCl/二噁烷溶液加入到1.30克(2.41毫摩尔)N-叔-丁氧基羰基-β-O-叔-丁基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺残留物上，并在室温搅拌该溶液1小时。减压浓缩该反应溶液，并用20毫升水和少量的28％氨水再次浓缩。
残留物溶入50毫升水和30毫升甲醇的混合物中，减压浓缩，过滤生成的晶体，干燥后得到0.84克(2.18毫摩尔)α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-乙基-对-氯苯甲酰胺。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.85(d，3H)，0.86(d，3H)，1.60-1.66(m，2H)，1.87-2.02(m，1H)，2.24(dd，1H)，2.44(dd，1H)，4.20-4.27(m，1H)，4.63-4.72(m，1H)，7.30-7.39(m，4H)，8.44(brs，1H)，8.49(d，1H)FAB-MS 384(MH )甜度为1250(蔗糖＝1)实施例7α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺的合成1.38克(6.35毫摩尔)N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸和0.79克(5.77毫摩尔；光学纯度90％ee)的(S)α-4-吡啶基丙基胺溶入40毫升二氯甲烷中(溶液V)。1.22克(6.35毫摩尔)水溶性盐酸碳化二亚胺和0.86克(6.35毫摩尔)HOBt在冷却条件下加入溶液V中，冷却条件搅拌1小时，在室温下搅拌一夜。减压浓缩反应混合物并向残留物中加入50毫升5％柠檬酸水溶液，用50毫升的乙酸乙酯提取两次，然后用20毫升水，25毫升5％NaHCO3水溶液和20毫升盐水冲洗有机层。在用无水MgSO4干燥有机层和过滤之后，减压浓缩滤液而获得0.85克(2.52毫摩尔)的固体N-叔-丁氧基羰基-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺。
13毫升4N-HCl/二噁烷溶液加入到0.85克(2.52毫摩尔)的N-叔-丁氧基羰基-D-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺中，溶液在室温下搅拌一小时。减压浓缩反应溶液，向残留物中加入30毫升乙醚以便进一步浓缩。25毫升二氯甲烷和0.77毫升(5.56毫摩尔)三乙胺加入到残留物中，使之溶解，然后加入0.99克(2.78毫摩尔)的N-苄基羰基-L-天冬氨酸-β-苯甲酯。在冷却条件下，加入0.53克(2.78毫摩尔)水溶液盐酸碳化二亚胺和0.38克(2.78毫摩尔)HOBt，并冷却搅拌一小时，在室温搅拌一夜。反应混合物被减压浓缩，并向残留物中加入50毫升5％柠檬酸，用乙酸乙酯提取二次，然后用20毫升水、25毫升5％NaHCO3水溶液和20毫升盐水冲洗有机层。在有机层用无水MgSO4干燥和过滤之后，减压浓缩滤液，获得1.12克(1.95毫摩尔)固体的N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺。
1.12克(1.95毫摩尔)N-苄氧基羰基-β-O-苄基-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺溶于40毫升甲醇和5毫升水的混合物中，加入0.40克5％Pd-碳(含水量50％)并在氢气流中还原。加入40毫升水，催化剂被过滤除去，滤液被减压浓缩至约25％，收集生成的结晶并干燥，得到0.60克(1.70毫摩尔)α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(S)-α-4-吡啶丙基酰胺。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.83-0.90(m，9H)，1.63-1.74(m，2H)，1.95-2.06(m，1H)，2.66-2.78(m，2H)，4.01-4.05(m，1H)，4.25-4.33(m，1H)，4.70(q，1H)，7.31(d，2H)，8.47-8.52(m，3H)，8.63(brd，1H)。
FAB-MS 351(MH )甜度约为300(蔗糖＝1)实施例8α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲氧基甲基-对-甲氧基苯甲基酰胺的合成使用(R)-α-甲氧基甲基-对-甲氧基苯甲基胺(光学纯度大于95％ee)代替(S)-α-4-吡啶丙基胺，重复实施例7的方法。获得的固体α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(R)-α-甲氧基甲基-对-甲氧基苯甲酰胺的总产率为21.4％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.84(d，3H)，0.87(d，1H)，1.90-2.03(m，1H)，2.20(ddm 1H)，2.43(dd，1H)，3.23(s，3H)，3.39-3.50(m，2H)，3.69-3.76(m，1H)，3.72(s，3H)，4.20-4.26(m，1H)，4.94-5.03(m，1H)，6.88(d，2H)，7.25(d，2H)，8.43(brs，1H)，8.44(d，1H)FAB-MS 396(MW)甜度约为250(蔗糖＝1)实施例9α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(RS)-α-呋喃基-β-甲氧基乙酰胺的合成使用(RS)-α-呋喃基-β-甲氧基乙胺代替(S)-α-4-吡啶基丙胺，并重复实施例7中的方法。获得的α-L-天冬氨酰-D-缬氨酸(RS)-α-呋喃基-β-甲氧基乙酰胺的总产率为55.4％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.77-0.87(m，6H)，1.90-2.00(m，1H)，2.17-2.30(m，1H)，2.40-2.50(m，1H)，3.22-3.27(m，3H)，3.53-3.58(m，2H)，3.75-3.80(m，1H)，4.20-4.30(m，1H)，5.05-5.17(m，1H)，6.27(dd，1H)，6.37-6.41(m，1H)，7.58(d，1H)，8.42-8.53(m，2H)。
FAB-MS 356(MH )
甜度约为200(蔗糖＝1)本申请以日本专利申请144844/1995(1995年6月12日受理)为基础，在此，将其作为参考文献。
权利要求
1.通式(I)的天冬氨酰二肽酰胺化合物L-Asp-X-NH-C*HR1R2(I)和其盐类，式中，X是D-α-氨基酸残基或DL-α-氨基酸残基，选自D-丙氨酸，D-α-氨基丁酸，D-正缬氨酸，D-缬氨酸，D-正亮氨酸，D-亮氨酸，D-异亮氨酸，D-别异亮氨酸，D-叔-亮氨酸，D-丝氨酸，D-O-甲基丝氨酸，D-苏氨酸D-O-甲基苏氨酸，D-别苏氨酸，D-O-甲基别苏氨酸，D-苯基甘氨酸和D-或DL呋喃基甘氨酸，或X是有3至6个碳原子的环的或非环的α，α-二烷基氨基酸残基、R1是直链或支链烷基，含有1至6个碳原子，或烷氧甲基，在烷氧基部分含2至7个碳原子；R2是苯基，在其2，3-或4-位含有一取代基，取代基选自F，Cl，Br，I，羟基，含1至6个碳原子的直或支链烷氧基，氰基，硝基，乙酰基，氨基或乙酰氨基，或R2是苯基，在其2，3-或3，4-位上含有亚甲二氧基，三亚甲基或四亚甲基，或R2是2，3-或4-吡啶基，2-或3-呋喃基或2-或3-噻嗯基；通式(I)的C*的构型当R1是直或支链烷基时是(S)或(RS)，当R1是烷氧基甲基时为(R)。(S)，或(RS)；在通式(I)中L-Asp和X是α-键连的。
2.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-α-氨基丁酸残基；R1是乙基；R2是对-羟苯基；且C*的构型是(S)。
3.根据权利要求1的化合物，基中，X是D-缬氨酸残基；R1是乙基；R2是对-羟苯基；且C*的构型为(S)。
4.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是乙基；R2是对-氯苯基；且C*的构型为(S)。
5.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是乙基；R2是4-吡啶基；且C*的构型为(S)。
6.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-α-氨基丁酸残基；R1是甲氧甲基；R2是对-羟苯基；且C*的构型是(R)。
7.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是甲氧甲基；R2是对-羟苯基；且C*的构型是(R)。
8.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是甲氧甲基；R2是对-甲氧基苯基；且C*的构型是(R)。
9.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是甲氧甲基；R2是2-呋喃基；且C*的构型是(S)或(RS)。
10.根据权利要求1的化合物，其中，X是D-缬氨酸残基；R1是甲基；R2是对-羟苯基；且C*的构型是(S)。
11.一种增甜剂，含有至少一种通式(I)的天冬氨酰二肽酰胺衍生物和其盐类L-Asp-X-NH-C*HR1R2(I)式中，X是D-α氨基酸残基或DL-α-氨基酸残基，选自D-丙氨酸，D-α-氨基丁酸，D-正缬氨酸，D-缬氨酸，D-正亮氨酸，D-亮氨酸，D-异亮氨酸，D-别异亮氨酸，D-叔-亮氨酸，D-丝氨酸，D-O-甲基丝氨酸，D-苏氨酸，D-O-甲基苏氨酸，D-别苏氨酸，D-O-甲基别苏氨酸，D-苯基甘氨酸和D-或DL呋喃基甘氨酸，或X是有3至6个碳原子的环的或非环的α，α-二烷基氨基酸残基；R1是直链或支链烷基，含有1至6个碳原子，或烷氧基甲基基团，在烷氧基部分含2至7个碳原子；R2是苯基，在其2，3-或4-位含有一取代基，取代基选自F，Cl，Br，I，羟基，含1至6碳原子的直或支链烷氧基，氰基，硝基，乙酰基，氨基或乙酰氨基，或R2是一个苯基，在其2，3-或3，4-位上含有亚甲二氧基，三亚甲基或四亚甲基，或R2是2，3-或4-吡啶基，2-或3-呋喃基或2-或3-噻嗯基；在通式(I)中当R1是直或支链烷基时C*的构型，为(S)或(RS)；当R1是烷氧甲基时，为(R)，(S)，或(RS)；在通式(I)中L-Asp和X是α键连的的。
全文摘要
新的具有通式(I)的天冬氨酰二肽酰胺衍生物及其盐类L-Asp-X-NH-C
文档编号C07K5/00GK1143648SQ95113200
公开日1997年2月26日 申请日期1995年12月28日 优先权日1995年6月12日
发明者竹本正, 网野裕右, 中村良一郎 申请人:味之素株式会社
再多了解一些
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