使用结合叶酸受体α的免疫治疗剂的方法与流程

本发明涉及结合叶酸受体α（frα）的蛋白质，这些frα结合蛋白源自抗frα fab，包括抗frα单克隆抗体以及源自该fab的互补决定区（cdr）的frα结合偶联物和融合蛋白。本发明特别涉及在诊断和治疗包括癌症在内的各种健康状况中使用frα结合蛋白。

背景技术：

1、包括卵巢癌、乳腺癌、肾癌、肺癌、结直肠癌和脑癌在内的很多不同癌症过表达frα。因此，已经开发了多种不同的单克隆抗体，以通过靶向frα来治疗癌症。最初的单克隆抗体法妥珠单抗在上皮性卵巢癌受试者的iii期临床试验中未达到主要终点，并且在肺癌受试者中也未取得成功。尽管如此，百时美施贵宝于2021年向卫材支付了6.5亿美元，用于开发和商业化法妥珠单抗抗体药物偶联物：法妥珠单抗依替立布林（farletuzumabecteribulin）；若满足未来开发、监管和商业里程碑条件，卫材还有权获得24.5亿美元。2022年11月，美国食品药品监督管理局（fda）加速批准了首创抗frα抗体药物偶联物：索米妥昔单抗索拉夫坦星（elahere®），用于治疗frα阳性、铂耐药的上皮性卵巢癌、输卵管癌和原发性腹膜癌；这支持了艾伯维于次年以超过100亿美元的估值收购其开发者immunogen。其他正在开发的frα抗体药物偶联物包括鲁维妥单抗他泽维布林（luveltamabtazevibulin），其于2021年获得fda快速通道资格。总而言之，抗frα治疗剂用于治疗多种常见癌症的巨大前景奠定了其巨大价值。

技术实现思路

1、本公开的各个方面涉及发现一种新型抗frα fab，其包含对frα具有纳摩尔亲和力的cdr。所述cdr在igg形式中保持其亲和力。包含这些cdr的人源抗体正在进行临床前开发，用作癌症免疫治疗剂。值得注意的是，这些cdr与食蟹猴frα发生交叉反应，从而使得在灵长类动物中进行临床前试验成为可能。这些cdr还与全方位的免疫治疗策略兼容，包括抗体偶联物、双特异性蛋白（例如，作为t细胞衔接器）和过继细胞疗法（例如，作为car-t）。这些cdr也可以克隆到用于实验室研究和诊断的抗体中。以下公开描述了例如一种完全人源igg1，其目前正在进行临床前开发，用作癌症免疫治疗剂。

2、前述背景技术和 技术实现要素： 部分旨在对所述主题提供简要介绍，并概述其所带来的部分技术改进和优势。背景技术和发明内容不应被解释为识别所述主题的基本特征，亦不应被解释为限制本说明书的解释，或限制基于本说明书并最终获得授权的任何专利权利要求的解释。

3、附图简要说明

4、可以参考以下附图进一步理解本说明书。附图是示例性的，本说明书或基于本说明书并最终获得授权的任何专利权利要求均不应被解释为受附图限制。

5、图1是考马斯亮蓝染色的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sds-page）凝胶的图像，其中加载了非还原条件下的五种抗frα igg抗体（泳道1-5）、非还原条件下的igg标准品（泳道7）、分子量标准品（泳道8）、还原条件下的五种抗frα igg抗体（泳道9-13）以及还原条件下的igg标准品（泳道15）。

6、图2是显示通过酶联免疫吸附测定（elisa）评估的各种抗frα igg抗体与人源frα胞外结构域结合的图。虚线表示对照抗frα igg索米妥昔单抗与人源frα胞外结构域的结合情况。

7、图3是显示通过elisa评估的各种抗frα igg抗体与食蟹猴frα胞外结构域结合的图。虚线表示对照抗frα igg索米妥昔单抗与食蟹猴frα胞外结构域的结合情况。

8、图4是显示通过流式细胞术评估的各种抗frα igg抗体与表达人源frα的hek293细胞结合的图。虚线表示对照抗frα igg索米妥昔单抗与表达人源frα的hek293细胞的结合情况。

9、图5a是显示通过流式细胞术评估的本公开的抗frα igg（）、参考抗frα igg（）和对照igg（）与表达人源frα的人卵巢癌skov3细胞结合的图。

10、图5b包含流式细胞术迹线，所述迹线显示检测二抗的藻红蛋白相关荧光的通道中监测所得的细胞计数；所述二抗用于检测选自本公开的抗frα igg、参考抗frα igg和对照igg的一抗；实验还包括仅细胞对照。所述细胞为表达人源frα的人卵巢癌细胞，即skov3细胞。

1.一种调节人类受试者中表达叶酸受体α的细胞的方法，其包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中：

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫治疗剂为igg抗体。

4.根据权利要求1所述的方法，其中：

5.根据权利要求1所述的方法，其中：

6.一种在人类受试者中治疗或预防癌症的方法，包括实施权利要求1所述的方法，其中：

7.根据权利要求1所述的方法，包括鉴定所述人类受试者包含过表达叶酸受体α的细胞。

8.根据权利要求6所述的方法，包括鉴定所述人类受试者包含过表达叶酸受体α的细胞，其中所述过表达叶酸受体α的细胞包含上皮细胞，并且所述癌症为上皮性卵巢癌。

9.根据权利要求6所述的方法，包括鉴定所述人类受试者包含过表达叶酸受体α的细胞，其中所述过表达叶酸受体α的细胞包含输卵管细胞，并且所述癌症为输卵管癌。

10.根据权利要求6所述的方法，包括鉴定所述人类受试者包含过表达叶酸受体α的细胞，其中所述癌症为原发性腹膜癌。

11.根据权利要求6所述的方法，包括鉴定所述人类受试者包含过表达叶酸受体α的细胞，其中所述过表达叶酸受体α的细胞包含白血病细胞，并且所述癌症为急性髓系白血病。

12.根据权利要求6所述的方法，包括鉴定所述人类受试者包含过表达叶酸受体α的细胞，其中所述过表达叶酸受体α的细胞包含上皮细胞，并且所述癌症为非小细胞肺癌。

13.根据权利要求6所述的方法，包括鉴定所述人类受试者包含过表达叶酸受体α的细胞，其中所述过表达叶酸受体α的细胞包含上皮细胞，并且所述癌症为间皮瘤。

14.根据权利要求6所述的方法，包括鉴定所述人类受试者包含过表达叶酸受体α的细胞，其中所述癌症为结直肠癌。

15.根据权利要求6所述的方法，包括鉴定所述人类受试者包含过表达叶酸受体α的细胞，其中所述癌症为脑癌。

16.根据权利要求6所述的方法，包括鉴定所述人类受试者包含过表达叶酸受体α的细胞，其中所述过表达叶酸受体α的细胞包含上皮细胞，并且所述癌症为腺癌。

17.根据权利要求1所述的方法，包括在所述施用之前，鉴定所述人类受试者的组织样品包含编码叶酸受体α的rna或叶酸受体α蛋白。

18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述组织样品为血液样品。

19.根据权利要求17所述的方法，其中，所述组织样品为活检样品。

20.根据权利要求1所述的方法，其中，所述施用选自静脉内、肌肉内、皮下、皮内、眼内、胃肠外、腹膜内、鞘内、病灶内和瘤内施用。