可靶向炎性滑膜成纤维细胞的纳米囊泡、其制备方法及应用与流程

本发明属于类风湿关节炎治疗领域，具体涉及一种可靶向炎性滑膜成纤维细胞的纳米囊泡，其制备方法及应用。

背景技术：

1、类风湿关节炎(ra)是一种以关节滑膜炎症和骨破坏为特征的自身免疫性疾病。炎性细胞因子（如tnf、il-6、il-12、il-23和干扰素）的异常增多和过度激活是ra发生和发展的重要原因之一。这些炎性细胞因子需要通过激活下游的janus激酶/信号转导和转录激活因子（jak/stat）通路才能发挥促炎作用，因此，靶向抑制jak/stat通路是治疗ra的重要手段之一。

2、jak抑制剂托法替尼（tofacitinib, tof）被批准用以治疗类风湿关节炎，无论是与甲氨蝶呤联合还是作为单药治疗，tof都具有较好的治疗效果，甚至在疗效上要优于甲氨蝶呤、阿达木单抗和阿巴西普。然而，tof治疗ra可能带来严重的副作用。出现如此广泛副作用的可能原因是tof主要抑制jak1和jak3，而jak1几乎在所有细胞中表达，jak3主要在造血、内皮和血管平滑肌细胞中表达，如果进入到正常细胞，tof可能会抑制正常细胞的生理功能从而引发一系列副作用。

3、因此，需要一种可将tof靶向递送至病灶的方法和制剂。

技术实现思路

1、为解决以上问题，本发明提供了一种可靶向炎性滑膜成纤维细胞的纳米囊泡，表面展示了骨凝集素。

2、在一个具体实施方案中，所述纳米囊泡通过以下方法制备：

3、s1：构建过表达骨凝集素的巨噬细胞；

4、s2：使用所述过表达骨凝集素的巨噬细胞制备所述纳米囊泡。

5、在一个具体实施方案中，s1中，通过将骨凝集素过表达盒引入巨噬细胞中，来得到所述过表达骨凝集素的巨噬细胞；

6、所述骨凝集素过表达盒编码的蛋白为骨凝集素与膜蛋白的融合蛋白。

7、在一个具体实施方案中，所述骨凝集素过表达盒编码的蛋白的结构域从n端到c端依次为：信号肽、保护肽、骨凝集素、linker和膜蛋白lamp2b。

8、在一个具体实施方案中，保护肽的序列如seq id no:1所示；

9、linker的序列如seq id no:2所示。

10、在一个具体实施方案中，s2包括以下步骤：

11、s21：收获表达骨凝集素的巨噬细胞，加入到低渗缓冲液中，得到细胞悬液；

12、s22：从所述细胞悬液中分离细胞膜，得到细胞膜悬液；

13、s23：将所述细胞膜悬液通过物理挤压，得到所述纳米囊泡。

14、在一个具体实施方案中，s22中包括以下步骤：

15、s221：在匀浆器中碾压细胞悬液使细胞膜剥离，得到匀浆液；

16、s222：将所述匀浆液进行梯度离心得到细胞膜；

17、s223：重悬所述细胞膜，得到所述细胞膜悬液。

18、本发明还提供了上述纳米囊泡在制备类风湿性关节炎治疗药物载剂中的应用。

19、本发明还提供了一种类风湿性关节炎治疗药剂，包括上述纳米囊泡，以及包被在所述纳米囊泡中的药物。

20、在一个具体实施方案中，所述药物为tof。

21、本发明通过慢病毒载体将骨凝集素过表达盒引入到巨噬细胞中，获得了细胞表面展示骨凝集素的巨噬细胞，并利用该细胞制备了纳米囊泡。该纳米囊泡表面展示骨凝集素，可特异性地靶向炎性滑膜成纤维细胞，以及类风湿关节炎病灶，从而为其所负载的药物提供了组织特异性，降低药物的副作用并提高药物在病灶的富集浓度。

1.一种可靶向炎性滑膜成纤维细胞的纳米囊泡，其特征在于，表面展示了骨凝集素。

2.根据权利要求1所述的纳米囊泡，其特征在于，通过以下方法制备：

3.根据权利要求2所述的纳米囊泡，其特征在于，s1中，通过将骨凝集素过表达盒引入巨噬细胞中，来得到所述过表达骨凝集素的巨噬细胞；

4.根据权利要求3所述的纳米囊泡，其特征在于，所述骨凝集素过表达盒编码的蛋白的结构域从n端到c端依次为：信号肽、保护肽、骨凝集素、linker和膜蛋白lamp2b。

5.根据权利要求4所述的纳米囊泡，其特征在于，保护肽的序列如seq id no:1所示；

6.根据权利要求2所述的纳米囊泡，其特征在于，s2包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的纳米囊泡，其特征在于，s22中包括以下步骤：

8.权利要求1-7中任一项所述的纳米囊泡在制备类风湿性关节炎治疗药物载剂中的应用。

9.一种类风湿性关节炎治疗药剂，其特征在于，包括权利要求1-7中任一项所述的纳米囊泡，以及包被在所述纳米囊泡中的药物。

10.根据权利要求9所述的风湿性关节炎治疗药剂，其特征在于，所述药物为tof。