抗IL-31RA抗体及其用途的制作方法

本发明提供了适合于向人或犬受试者施用的新型抗il-31ra蛋白和抗体。本发明还提供了在人或犬受试者中治疗特应性皮炎、皮肌炎、瘙痒性皮肤病、过敏性哮喘和炎性肠病、原发性局限性皮肤淀粉样变性2型或引发抗过敏效应的新型组合物和方法，所述方法包括施用有效量的抗il-31ra蛋白、抗体或其片段。所述方法和组合物用于治疗或预防il-31、il-31-r和il-31ra相关病症。

背景技术：

1、白介素31 (il-31)是一种炎症细胞因子，有助于触发针对病原体的细胞介导免疫。多种细胞类型表达il-31，包括激活的th2细胞、cd8+ t细胞、皮肤归巢记忆t细胞、单核细胞、巨噬细胞、单核细胞来源的树突状细胞、肥大细胞、角质形成细胞和真皮成纤维细胞。

2、il-31是白介素6 (il-6)细胞因子家族的成员，所述家族还包括il-6、il-11、il27p28/il-30、白血病抑制因子(lif)、抑瘤素m (osm)、心肌营养素样细胞因子(clc)、睫状神经营养因子(cntf)、心肌营养素-1 (ct-1)和神经生成素。虽然il-31共享il-6家族的四螺旋结构，但il-31并不通过i型细胞因子受体gp130受体传递信号，此在il-6、il-11、il-12、il27、lif和osm受体之间则共享。相反，il-31通过il-31受体(il-31r)传导信号，所述受体是含有il-31受体α (il-31ra)和抑癌素m受体(osmr) β链的异二聚受体复合物。尽管osmrβ链是osmr和il-31r复合物的亚基，但它们各自具有不同的生物学功能。il-31与许多th2驱动的疾病有关，而osm与造血和癌症发展有关。il-31r在巨噬细胞、树突状细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、角质形成细胞和周围神经上表达。

3、高il-31水平与包括瘙痒性皮肤病、过敏性哮喘和炎性肠病的疾患相关。已显示il-31还具有趋化因子诱导活性，它通过靶向诸如肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核细胞/树突状细胞等免疫细胞来诱导炎症。已表明il-31还参与调控造血祖细胞的稳态，以及非造血细胞的增殖和分化。il-31刺激神经元生长和感觉神经分支。在皮肤内，il-31损害角质形成细胞的分化和屏障功能，进而激活角质形成细胞产生细胞因子、趋化因子和瘙痒介质，从而加剧皮肤炎症和瘙痒。il-31还与真皮成纤维细胞相互作用，通过诱导胶原蛋白产生以及细胞因子和趋化因子表达来启动组织重塑。

4、在表达il-31r的感觉神经元中，il-31诱导离子通道(trpv1、trpa1)的激活，并且将瘙痒信号经由脑利钠肽传递至中枢神经系统。

5、il-31ra由多种白细胞亚群以及上皮细胞和基质细胞在稳态中和激活状态下均表达。举例来说，角质形成细胞、成纤维细胞以及背根神经节(drg)神经元的一个独特亚群表达il-31ra并且经由il-31ra进行信号传导。在巨噬细胞中，il-4和il-13上调il-31ra的表达。

6、已发现il-31ra引起原发性局限性皮肤淀粉样变性2型，并且与瘙痒性皮肤病和过敏性皮肤病(诸如特应性皮炎)有关。影响犬、猫和马的il-31ra相关疾病和疾患与人类的那些疾病和疾患类似，包括但不限于特应性皮炎、特应性湿疹、病变性皮肌炎和其它瘙痒性过敏性皮肤病以及昆虫叮咬过敏。

7、用奈莫利珠单抗(nemolizumab)靶向il-31似乎对特应性皮炎和结节性痒疹有效。类似地，用洛凯维单抗(lokivetamab)靶向il-31似乎对治疗犬特应性皮炎有效。

8、本技术中任何文件的引用或标识并不构成承认此类文件可作为本发明的现有技术。

技术实现思路

1、在一个方面，本发明提供了一种特异性结合至白介素-31受体α (il-31ra)的抗原结合蛋白。在某些实施方案中，il-31ra结合蛋白包含：(a)重链互补决定区1 (hcdr1)，其包含x26x27x28x29x30x31x32x33 (seq id no:53)，其中x26包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x27包含a、g、i、l、m、w、f、p、v或y，x28包含c、s、t、y、n或q，x29包含a、g、i、l、m、w、f、p、v或y，x30包含d或e，x31包含d或e，x32包含c、s、t、y、n或q，并且x33包含a、g、i、l、m、w、f、p或v；(b)重链互补决定区2(hcdr2)，其包含x51x52x53x54x55x56x57 (seq id no:54)，其中x51包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x52包含c、s、t、y、n或q，x53包含a、i、l、m、f、p、w、y或v，x54包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x55包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x56包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，并且x57包含c、s、t、y、n或q；(c)重链互补决定区3 (hcdr3)，其包含x97x98x99x100x101x102x103x104x105x106x107x108x109x110x111x112x113x114x115x116 x117x118x119 (seq id no:55)，其中x97包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x98包含h、k或r，x99包含e或d，x100包含c、s、t、y、n或q，x101包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x102包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x103包含h、k或r，x104包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x105包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x106包含e或d，x107包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x108包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x109包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x110包含e或d，x111包含c、s、t、y、n或q，x112包含a、g、i、l、m、w、f、p、v或y，x113包含c、s、t、y、n或q，x114包含c、s、t、y、n或q，x115包含c、s、t、y、n或q，x116包含c、s、t、y、n或q，x117包含c、s、t、y、n或q，x118包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，并且x119包含e或d；(d)轻链互补决定区1(lcdr1)，其包含x27x28x29x30x31x32x33 (seq id no:56)，其中x27包含c、s、t、y、n或q，x28包含c、s、t、y、n或q，x29包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x30包含c、s、t、y、n或q，x31包含c、s、t、y、n或q，x32包含h、k或r，并且x33包含c、s、t、y、n或q；(e)轻链互补决定区2 (lcdr2)，其包含x51x52x53，其中x51包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x52包含c、s、t、y、n或q，并且x53包含c、s、t、y、n或q；以及(f)轻链互补决定区3 (lcdr3)，其包含x90x91x92x93x94x95x96x97x98 (seq id no:57)，其中x90包含c、s、t、y、n或q，x91包含c、s、t、y、n或q，x92包含c、s、t、y、n或q，x93包含e或d，x94包含c、s、t、y、n或q，x95包含c、l、s、t、y、n或q，x96包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x97包含h、k或r，并且x98包含c、s、t、y、n或q。

2、在某些实施方案中，(a) hcdr1包含gftfddyg (seq id no:29)或在不超过一个或两个位置处存在差异；和/或(b) hcdr2包含inx53aggt (seq id no:58)，其中x53包含f、w或y；和/或(c) hcdr3包含aresplrlgdlggdyfyyyyyx118d (seq id no:59)，其中x118包含i、l或m；和/或(d) lcdr1包含qsvssry (seq id no:32)或在不超过一个或两个位置处存在差异；和/或(e) lcdr2包含gts或在不超过一个或两个位置处存在差异；和/或(f) lcdr3包含qqydx94x95prt (seq id no:60)，其中x94包含n或q，x95包含s或l。

3、在某些实施方案中，重链可变结构域包含w53f、w53y、m118i或m118l，并且/或者轻链可变结构域包含n94q或s95l。

4、在某些实施方案中，重链可变结构域包含表6的hcdr2序列、hcdr3序列和lcdr3序列。

5、在某些实施方案中，重链可变结构域包含seq id no:1、seq id no:10、seq idno:14、seq id no:15、seq id no:16或seq id no:17的imgt cdr，并且其中轻链可变结构域包含seq id no:2、seq id no:11、seq id no:19或seq id no:20的cdr。

6、在某些实施方案中，特异性结合至il-31ra的抗原结合蛋白包含：(a)重链互补决定区1 (hcdr1)，其包含x26x27x28x29x30x31x32x33 (seq id no:61)，其中x26包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x27包含a、g、i、l、m、w、f、p、v或y，x28包含c、s、t、y、n或q，x29包含a、g、i、l、m、w、f、p、v或y，x30包含c、s、t、y、n或q，x31包含c、s、t、y、n或q，x32包含c、s、t、y、n或q，并且x33包含a、g、i、l、m、w、f、p或v；(b)重链互补决定区2 (hcdr2)，其包含x51x52x53x54x55x56x57 (seq id no:62)，其中x51包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x52包含c、s、t、y、n或q，x53包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x54包含c、s、t、y、n或q，x55包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x56包含c、s、t、y、n或q，并且x57包含a、c、s、t、y、n或q；(c)重链互补决定区3 (hcdr3)，其包含x97x98x99x100x101x102x103x104x105x106x107 (seq id no:63)，其中x97包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x98包含c、s、t、y、n或q，x99包含c、s、t、y、n或q，x100包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x101包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x102包含c、s、t、y、n或q，x103包含c、s、t、y、n或q，x104包含a、g、i、l、m、w、f、p、v或y，x105包含h、k或r，x106包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，并且x107包含e或d；(d)轻链互补决定区1 (lcdr1)，其包含x27x28x29x30x31x32 (seq id no:64)，其中x27包含c、s、t、y、n或q，x28包含c、s、t、y、n或q，x29包含a、g、i、l、m、v、w、f、p或v，x30包含c、s、t、y、n或q，x31包含c、s、t、y、n或q，并且x32包含c、s、t、y、n或q；(e)轻链互补决定区2 (lcdr2)，其包含x50x51x52，其中x50包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x51包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，并且x52包含c、s、t、y、n或q；以及(f)轻链互补决定区3(lcdr3)，其包含x89x90x91x92x93x94x95x96x97x98 (seq id no:65)，其中x89包含c、s、t、y、n或q，x90包含c、s、t、y、n或q，x91包含a、g、i、l、m、w、f、p、v或y，x92包含a、g、i、l、m、w、f、p、v或y，x93包含c、s、t、y、n或q，x94包含a、i、l、m、f、p、w、y或v，x95包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x96包含a、g、i、l、m、w、f、p或v，x97包含a、g、i、l、m、w、f、p、v或y，并且x98包含c、s、t、y、n或q。

7、在某些实施方案中，(a) hcdr1包含gftfssya (seq id no:34)；和/或(b) hcdr2包含isgsgx56x57t (seq id no:66)，其中x56包含n或q；并且x57包含a或s；和/或(c) hcdr3包含atqvvyyfkx106dv (seq id no:67)，其中x106包含i、l或m；和/或(d) lcdr1包含qsvssn(seq id no:37)；和/或(e) lcdr2包含gas；和/或(f) lcdr3包含qqyynx94ppft (seq idno:68)，其中x94包含f、y或w。

8、在某些实施方案中，重链可变结构域包含n56q、s57a、m106i或m1106l，并且/或者轻链可变结构域包含w94f或w94y。

9、在某些实施方案中，重链可变结构域包含表7的hcdr2序列、hcdr3序列和lcdr3序列。

10、在某些实施方案中，重链可变结构域包含seq id no:3、seq id no:12、seq idno:21、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24或seq idno:25的imgt cdr，并且其中轻链可变结构域包含seq id no:4、seq id no:13、seq id no:26或seq id no:27的cdr。

11、在某些实施方案中，抗原结合蛋白包含与seq id no:3、seq id no:12、seq idno:21、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24或seq idno:25的重链可变结构域具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%同一性的重链可变结构域，以及与seq id no:4、seq id no:13、seq id no:26或seq id no:27的轻链可变结构域具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%同一性的轻链可变结构域。

12、在一个方面，本发明提供了一种编码前述抗il-31ra抗体或抗体片段中的任一者的分离的核酸序列，以及一种包含或能够表达抗il-31ra抗体或抗体片段中的任一者的载体。

13、在另一个方面，本发明提供了一种重组细胞，其包含编码前述抗il-31ra抗体或抗体片段中的任一者的核酸序列，或包含或能够表达抗il-31ra抗体或抗体片段中的任一者的载体。

14、本发明提供了一种产生前述抗il-31ra抗体或抗体片段中的任一者的方法，所述方法包括在导致产生所述抗体或抗体片段的条件下培养能够表达所述抗il-31ra抗体或抗体片段的细胞。

15、本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的前述抗il-31ra抗体或抗体片段中的任一者。

16、在一个方面，本发明提供了一种抑制受试者中il-31与il-31ra的结合的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的前述抗il-31ra抗体或抗体片段中的任一者。

17、在一个方面，本发明提供了一种遏制受试者的特应性皮炎的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的前述抗il-31ra抗体或抗体片段中的任一者。

18、在某些非限制性实施方案中，受试者是人、犬、猫或马。

19、在一个方面，本发明提供了一种阻断样品中il-31与il-31ra的结合的方法，所述方法包括将所述样品与前述抗il-31ra抗体或抗体片段中的任一者一起孵育并且检测il-31是否结合至il-31ra。

20、因此，本发明的目的是本发明内不涵盖任何先前已知的产品、制造产品的工艺或使用产品的方法，以使得申请人保留权利并特此公开对任何先前已知的产品、工艺或方法的放弃。还应当注意的是，本发明不旨在将不符合uspto (35 u.s.c. 112，第一段)或epo(epc的第83条)的书面描述和可实施性要求的任何产品、制造产品的工艺或使用产品的方法涵盖在本发明的范围内，以使得申请人保留权利并特此公开对任何先前描述的产品、制造产品的工艺或使用产品的方法的放弃。在本发明的实践中遵守art. 53(c) epc以及rule28(b)和(c) epc可能是有利的。明确放弃作为申请人在本技术的谱系或任何其它谱系或任何第三方的任何在先提交的申请中的任何授权专利的主题的任何实施方案的所有权利都是明确保留的。本文中的任何内容都不应被解释为承诺。

21、应注意，在本公开中并且特别是在权利要求书和/或段落中，诸如“包含(comprises)”、“包含(comprised)”、“包含(comprising)”等的术语可以具有美国专利法中赋予其的含义；例如，它们可意指“包括(includes)”、“包括(included)”、“包括(including)”等；并且诸如“基本上由…组成(consisting essentially of)”和“基本上由…组成(consists essentially of)”的术语具有美国专利法中赋予它们的含义，例如，它们允许未明确列举的要素，但排除背景技术中发现的或影响本发明的基本或新颖特征的要素。

22、这些和其它实施方案在下文具体实施方式中被公开，或者从下文具体实施方式中是显而易见的，并且被下文具体实施方式所涵盖。