抗sFas-L抗体PC111的新靶标亲和力和特异性的制作方法
本公开涉及对可溶性形式的人fas配体(sfasl；也称为cd95l或cd178或apo1l)具有高亲和力和特异性的抗体及其用途。
背景技术：
1、fas配体是一种40kda的同源三聚体ii型跨膜蛋白，其属于肿瘤坏死因子(tnf)超家族。fasl主要表达于活化的免疫细胞如t细胞、b细胞、树突状细胞和nk细胞。表达fasl的免疫细胞识别靶细胞表面上的fas死亡受体(fas)，所述fas死亡受体在与fas配体(fasl)结合后在许多细胞系统中触发凋亡(sharma等人，2000)。
2、fasl以膜结合形式(mfasl)和可溶性形式(sfasl)存在。可溶性fas配体(sfasl)是通过由锌调节的基质金属蛋白酶(mmp)对质膜(mfasl)处表达的mfasl的细胞外结构域进行蛋白水解切割而产生并释放的。可溶性形式(sfasl)表现出凋亡和非凋亡活性二者。
3、fas-fasl相互作用和由此触发的信号传导通路已经显示在免疫系统的生理调节中起重要作用，并且已经涉及各种恶性肿瘤和免疫炎性和感染性病况的发病机制和进展。例如，fas-fasl通路的参与已经被证实是天疱疮中的角质形成细胞的凋亡和棘层松解的关键介质(lotti等人，2018)。进一步的研究已经证明，fas-fasl系统在例如史蒂文斯-约翰逊-综合征(stevens-johnson-syndrome，sjs)和中毒性表皮坏死松解症(ten)等严重皮肤病况的发生过程中起关键作用(viard等人，1998；abe等人，2003，chang等人，2004，murata等人，2008)。
4、然而，fas/fas配体系统也在免疫细胞稳态、预防自身免疫和癌症进展中发挥关键作用。为了维持免疫系统中的稳态，在细胞毒性淋巴细胞上表达的膜结合mfasl与fas受体(fas)结合并诱导受感染细胞、过度增殖的t淋巴细胞以及癌细胞经由凋亡的裂解(o’reilly 等人，nature，2009年10月1日，461(7264):659-63)。fas/fasl通路的缺陷可能限制免疫监视的效率并导致淋巴组织增生性病症、自身免疫和癌症(tuomela等人，frontimmunol. 2022年3月23日;13:867098)。
5、携带膜结合fasl的活化的免疫细胞和携带膜结合fas的靶细胞之间的细胞间相互作用(cell-to-cell interaction)是维持免疫系统中的稳态所需的。抑制这些fas-mfasl相互作用可能因此限制免疫监视的效率并导致淋巴组织增生性病症、自身免疫和/或癌症的引发和/或进展。
6、因此，虽然抑制fas-fasl凋亡通路是治疗多种疾病的关键目标，但mfasl与fas受体的细胞间相互作用也是维持免疫系统的稳态所必需的。因此，抑制mfasl-fas相互作用的抑制剂可能导致不期望的生理效应。
7、因此，开发靶向fasl但不影响由fas/mfasl系统调控的监视和稳态通路的抑制剂是至关重要的。
8、相应地，需要一种能够选择性地抑制fas与可溶性形式的fasl (sfasl)之间的相互作用而不抑制fas与膜结合形式的fasl (mfasl)之间的相互作用的试剂。
9、因此，本公开的目的在于提供以高亲和力和选择性特异性靶向可溶性形式的fasl(sfasl)的试剂，用于预防和治疗与可溶性fasl (sfasl)相关和/或由可溶性fasl (sfasl)介导的病症。
技术实现思路
1、本公开提供了特异性针对可溶性形式的fas配体蛋白(sfasl)、特别是人fas配体蛋白(hsfasl)的试剂，作为用于治疗受到由可溶性fasl介导和/或触发的疾病(sfasl介导的病症)的影响的受试者、特别是人受试者的活性剂。
2、在第一方面，受试者、特别是人受试者受到sfasl介导的病症的影响，并且另外罹患免疫稳态失调和/或具有增加的发生免疫稳态失调的风险。
3、在第二方面，受试者、特别是人受试者受到sfasl介导的病症的影响，并且另外罹患继发性共病(co-morbidity)。
4、在第三方面，受试者、特别是人受试者的特征在于第一和第二方面的组合，即受试者、特别是人受试者受到sfasl介导的病症的影响，另外罹患免疫稳态失调和/或具有增加的发生免疫稳态失调的风险，并且进一步另外罹患继发性共病。
5、在特定实施方案中，试剂是针对fasl、特别是人fasl的抗体或其抗原结合片段，并且其显示了与可溶性形式的fasl的选择性高亲和力结合，同时实质上不抑制mfasl与fas的结合。与sfasl的选择性结合允许靶向抑制病理形式的sfasl，而实质上不抑制体内稳态形式的mfasl。因此，mfasl与fas受体的相互作用实质上不受影响，从而避免对免疫稳态的不期望的影响。在某些实施方案中，对免疫稳态的不期望的影响包括抑制携带mfasl的活化免疫细胞的功能，这可能导致淋巴组织增生性病症、自身免疫性病症、癌症疾病和免疫赦免部位处的异常免疫应答。
6、因此，本公开提供了用于可溶性fasl介导的病症的高度选择性和靶向治疗，其具有改进的安全性概况，使通过抑制mfasl和fas的相互作用而触发的不期望的影响的风险最小化。该风险可包括引起和/或增加免疫稳态失调，这可导致淋巴组织增生性病症、自身免疫性病症和/或癌症的发生和/或进展。
7、术语“免疫稳态”特别是指待处理的受试者的免疫系统的充分和/或平衡的功能。术语“失调”特别是指免疫系统的紊乱，例如，携带膜结合fasl的免疫细胞的功能的紊乱，并且更特别是指那些免疫细胞与携带fas受体的靶细胞相互作用的能力的紊乱。
8、根据特定方面，本公开涉及罹患可溶性fasl介导的病症如天疱疮和其它皮肤起疱性疾病的受试者的有效且安全的治疗，其中所述受试者另外罹患免疫系统相关失调或具有增加的发生免疫系统相关失调的风险，所述免疫系统相关失调如免疫炎性病症、自身免疫性病症和/或癌症。
9、在某些实施方案中，受试者罹患免疫受损性病症(immune-compromisingdisorder)如hiv感染、hbv感染和/或hcv感染，和/或接受免疫抑制药物如环孢菌素。在进一步的实施方案中，受试者罹患免疫炎性病症，例如自身免疫性淋巴组织增生综合征(alps)。在进一步的实施方案中，受试者罹患自身免疫性病症，例如桥本氏甲状腺炎。在进一步的实施方案中，受试者罹患癌症，例如淋巴瘤。在进一步的实施方案中，受试者具有增加的发生如上所述的病况的风险。
10、根据本发明的进一步优选的方面，本公开涉及罹患sfasl介导的病症如天疱疮或另一皮肤起疱性疾病的受试者的有效且安全的治疗，其中所述受试者另外罹患继发性共病病症。
11、术语“共病病症”特别是指与sfasl介导的病症同时影响受试者的继发性病症。在某些实施方案中，共病病症是另外的sfasl介导的病症。在某些实施方案中，共病病症是非sfasl介导的病症。在某些实施方案中，共病病症由sfasl介导的病症触发。在某些实施方案中，共病病症与可溶性fasl介导的病症无关和/或独立于可溶性fasl介导的病症。在某些实施方案中，共病病症是医源性诱导的共病，即由治疗(例如sfasl介导的病症的既往或伴随治疗、特别是sfasl介导的病症的免疫抑制性治疗)引起和/或诱导的共病。
12、抗体或抗原结合片段的治疗效用是基于对可溶性形式的人fasl的高结合亲和力和选择性的组合。
13、在本公开的特定实施方案中，试剂是单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有如seq id no：1、3和5中指定的互补决定区cdr h1、cdr h2和cdr h3的vh区以及具有如seqid no：7至9中指定的互补决定区cdr l1、cdr l2和cdr l3的vl区。在更特别的实施方案中，抗体具有igg重链恒定区，例如人igg重链恒定区，优选igg1或igg4重链恒定区。
14、本公开还涉及编码如本文所公开的单克隆抗体或其抗原片段的核酸分子，用于治疗受到由sfasl介导和/或触发的疾病的影响的受试者、特别是人受试者。在第一方面，受试者另外罹患免疫稳态失调和/或具有增加的发生免疫稳态失调的风险。在第二方面，受试者另外罹患继发性共病病症。在第三方面，受试者的特征在于第一和第二上述方面的组合。
15、本公开的仍进一步的方面是一种药物组合物，其包含本文公开的抗体或抗原结合片段或核酸分子以及一种或多种药学上可接受的运载体(carrier)，用于治疗受到由可溶性fasl介导和/或触发的疾病的影响的受试者、特别是人受试者的用途。在第一方面，组合物用于另外罹患免疫稳态失调和/或具有增加的发生免疫稳态失调的风险的受试者的用途。在第二方面，组合物用于另外罹患继发性共病病症的受试者的用途。在第三方面，受试者的特征在于第一和第二上述方面的组合。