一种CCNE1基因扩增用于胃癌预后检测的试剂盒

本发明涉及一种ccne1基因扩增用于胃癌预后检测的试剂盒，属于生物医药。

背景技术：

1、胃癌是消化道常见恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均居全球恶性肿瘤第5位。据globocan 2022数据显示，全球新发病例约96.9万例，其中亚洲地区发病率最高，占全球病例的75.7%。中国每年新发胃癌约35.9万例，死亡约26万例，发病率居中国恶性肿瘤第5位，死亡率居第3位。幽门螺杆菌感染、饮食习惯、环境因素及遗传因素等均为胃癌的重要危险因素。此外，50岁以下早发性胃癌的发病率近年来呈上升趋势。

2、目前，胃癌的治疗手段主要包括手术、放疗、化疗、靶向治疗及免疫治疗等综合疗法。其中，手术是早期和局部进展期胃癌的主要治疗方式，晚期胃癌则以化疗、免疫治疗和靶向治疗为主。

3、在组织学层面，胃癌可分为肠型、弥漫型、混合型、实体型四种亚型。其中，肠型胃癌多与慢性炎症及幽门螺杆菌感染相关，预后相对良好；弥漫型胃癌则常见于年轻人群，侵袭性较强，预后较差；混合型的临床病理特征及预后介于两者之间，实体型胃癌是一种罕见的、缺乏腺管结构的侵袭性亚型，预后通常较差，与幽门螺杆菌感染的关联性不强。在分子分型方面，根据癌症基因组图谱（tcga）分类标准，胃癌可划分为四种分子亚型，各亚型在预后评估和治疗响应方面呈现显著差异：ebv阳性型约占9%，其预后相对较好，可能与该型特有的肿瘤免疫微环境密切相关；微卫星不稳定型（msi型）约占22%，常伴有错配修复系统功能缺陷，对免疫检查点抑制剂治疗较为敏感；基因组稳定型约占20%，多对应弥漫型胃癌，常伴印戒细胞分化，目前治疗选择有限，预后普遍欠佳；染色体不稳定型（cin型）约占50%，以基因拷贝数变异频繁为特征，肿瘤侵袭性较强。

4、荧光原位杂交（fish）是一种融合分子生物学与细胞遗传学的经典技术，能够在间期细胞核、中期染色体乃至甲醛固定、石蜡包埋的组织切片上，对特定dna序列进行精确的空间定位与定性定量分析。其基本原理是利用荧光标记的单链核酸探针，依据碱基互补配对原则与靶序列杂交，借助荧光显微镜对杂交信号的位置、大小及数量进行判读，从而推断目标基因是否存在缺失、扩增、断裂或染色体易位等结构性异常。该技术具有安全、快速、经济、灵敏且操作相对简便等多项优势，已广泛应用于分子病理学、发育生物学、生物化学等研究领域。近年来，高敏探针的开发、多靶标共检技术的进步以及自动化图像分析平台的引入，进一步拓展了fish在“基因组可视化”方面的应用价值。在肿瘤分子诊断领域，多项国际指南将其列为重要检测手段之一。

5、ccne1基因定位于人类染色体19q12，编码细胞周期蛋白e1（cyclin e1），属于细胞周期调控蛋白家族。该蛋白与cdk2结合形成复合物，推动细胞由g1期进入s期（dna合成期），在细胞增殖、分化及肿瘤发生过程中发挥重要作用。ccne1基因扩增在卵巢癌、乳腺癌、胃癌及子宫内膜癌等实体瘤中较为常见，发生率约为10%-30%，其中胃癌中的总体扩增率约为10%-20%。大量研究表明，当ccne1发生基因扩增或蛋白过表达时，细胞周期检查点调控失衡，可导致dna复制压力增加及基因组不稳定性累积，进而驱动正常细胞的恶性转化并促进肿瘤演进。

6、尽管ccne1基因扩增在卵巢癌、乳腺癌及食管鳞癌中已被广泛报道与不良预后相关，并被作为潜在治疗靶点推进至临床试验阶段，但在胃癌领域，目前相关研究数量有限，且现有结论尚存分歧。一项基于日本c-cat数据库（包含2028例胃癌基因组数据）的分析发现，ccne1基因扩增在淋巴结转移阳性病例中检出频率较高；该团队随后对360例手术标本进行免疫组化验证，结果提示ccne1阳性表达与术后复发之间存在一定相关性，阳性组无复发生存期呈现差于阴性组。然而，一项基于7083例食管胃肿瘤的大规模多组学研究在真实世界生存分析中未观察到ccne1扩增与胃腺癌总体生存期的显著关联，提示其在整体人群中的独立预后价值可能较为有限。部分研究还提示ccne1基因扩增在不同治疗背景下可能呈现相异的临床意义，例如在her2阳性胃癌中，ccne1共扩增可能与曲妥珠单抗治疗后较短的无进展生存期相关，而在接受免疫检查点抑制剂治疗的胃癌患者中，ccne1基因扩增患者预后较好。上述不同研究之间结论的不一致，可能与样本量差异、检测方法（fish或二代测序）及阳性判读标准不统一、未充分依据临床分期和组织分型进行分层分析等因素有关。

7、针对上述问题，本研究纳入419例具有完整临床病理及随访资料的胃癌手术标本，统一采用fish法检测ccne1基因扩增状态，着重探讨以下问题：ccne1基因扩增在不同tnm分期及lauren分型患者中的阳性率分布是否存在差异；其预后意义是否随临床分期和组织分型的不同而有所变化。通过对上述问题的系统评估，本研究旨在明确ccne1基因扩增可能适用的患者亚群，为胃癌风险分层策略提供精细化、可操作的分子依据，同时也为该标志物的临床合理应用提供参考。

技术实现思路

1、本发明的目的是为解决将ccne1基因扩增作为胃癌预后的标志物，为胃癌风险分层策略提供精细化、可操作的分子依据，以及将该标志物在临床上合理应用的技术问题。

2、为达到解决上述问题的目的，本发明第一方面提供一种用于早期肠型胃癌预后评估的分子靶标，所述分子靶标为ccne1基因；所述靶标ccne1的区间位置是chr19：29,606,726- 30,072,262。

3、本发明提供一种用于胃癌预后检测的试剂，所述试剂包括用于检测上述分子靶标的探针；所述探针包括一种基于荧光原位杂交技术的用于胃癌预后评估的探针组合。

4、本发明第二方面提供ccne1基因作为一种分子标志物在制备用于早期肠型胃癌预后评估的产品中的应用。

5、本发明提供ccne1基因在制备用于早期肠型胃癌预后评估的诊断试剂中的应用。

6、本发明提供ccne1基因在制备用于早期肠型胃癌预后评估的诊断试剂盒中的应用。

7、本发明第三方面提供ccne1基因作为一种分子标志物在制备用于肠型胃癌患者肿瘤临床分期的产品中的应用。

8、本发明提供ccne1基因在制备用于肠型胃癌患者肿瘤临床分期的诊断试剂中的应用。

9、本发明提供ccne1基因在制备用于肠型胃癌患者肿瘤临床分期的诊断试剂盒中的应用。

10、本发明第四方面提供一种检测系统，所述检测系统可用于早期肠型胃癌预后评估和肠型胃癌患者肿瘤临床分期；所述检测系统中包括检测ccne1基因的试剂。

11、相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

12、（1）本发明提供了新的胃癌不良预后指标，通过检测ccne1基因扩增情况预测早期肠型胃癌患者无瘤生存期和总生存期。

13、（2）本发明提供了一种基于荧光原位杂交技术的用于胃癌预后评估的探针组合及其制备方法、试剂盒与应用。通过检测ccne1基因的扩增情况，可辅助预测早期肠型胃癌患者的预后情况。本发明的探针及配套试剂盒可用于获取与胃癌预后和分子分型相关的重要信息，从而为制定更精准有效的个体化随访及治疗策略提供支持。

14、（3）本发明的试剂应用范围广泛，可以用于各种需要检测ccne1基因扩增状态的组织样本、细胞样本，如肿瘤细胞、正常细胞等；同时，本发明的检测方法简单、高效，可以满足临床快速诊断的需求。