一种葵花盘总香豆素提取物及其用途的制作方法

1.本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种葵花盘总香豆素及其用途。


背景技术：

2.香豆素类化合物是指具有苯骈α-吡喃酮母核的基本骨架的邻羟基桂皮酸内酯类化合物的总称，部分化合物有香甜气味，广泛存在于菊科、伞形科、豆科、瑞香科、茄科等植物中，分布于根、果、皮、叶、茎等各个部位，前胡、补骨脂等中药都含有大量香豆素类化合物，具有镇痛抗炎、抗艾滋病、抗肿瘤、抗氧化、抗凝血、降压、抗心律失常等多方面的生物活性，以及相对分子质量较小，合成相对简单，生物利用度高的特点。
3.葵花盘即向日葵的花托，主要功能有清热、平肝、止痛、止血，主要治疗高血压、头痛、头晕、耳鸣、脘腹痛、痛经、子宫出血、疮疹等。葵花盘中不但含有糖类、绿原酸、挥发油有效成分，也含有丰富的钠、钾、钙、镁等元素，同时葵花盘中还含有铁、锌、铜、锰、铬、镍等人体必需微量元素。葵花盘中含有大量的生物活性成分，具有很高的营养价值与保健功能，其提取物中含有倍半萜类及二萜类成分，但是关于从葵花中分离香豆素的相关研究鲜有报道。利用葵花盘提取总香豆素，可以发挥出更大的经济效益和医疗作用，实现充分利用资源。
4.中国专利201110217029.1公开了一种从千金子种皮中提取总香豆素的提取方法：将千金子种皮粉碎成粗粉使用石油醚脱脂得残渣；残渣用乙醇或甲醇提取，得到总香豆素粗品；加入氢氧化钾，调ph7-8，过滤，加入盐酸，调ph2-3，3-5℃冷藏12-16小时，抽滤，弃去滤液，真空干燥得总香豆素。此方法得到的总香豆素含量高，易操作，但是此方法需乙醇萃取2-6h、冷藏12-16h、真空干燥4h，同时也不能实现大量制备，因此耗时长、效率低。
5.中国专利201811654897.4公开了一种了哥王中总香豆素类物质的提取方法，主要包括：将了哥王根茎粗粉用乙醇在超声条件下提取；将乙醇提取液浓缩后，用水稀释，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，合并萃取物；用水混悬，用大孔吸附树脂进行纯化，依次用55％的乙醇，由氯仿和甲醇按体积比1:1组成的洗脱液进行洗脱；合并洗脱液，浓缩干燥，得到所述总香豆素类物质。该提取方法中，对总香豆素粗提物分别经过提取、两次萃取、过柱和两次洗脱，使得操作过程复杂化，成本提高。且该方法用于葵花盘香豆素的提取，效果并不理想，提取速度、提取物纯度等均不能达到要求。
6.有鉴于此，本发明提供一种治疗效果更好的葵花盘总香豆素提取物，同时其提取方法简单、时间短，可以实现有效利用资源，具有很好的应用前景。


技术实现要素：

7.本发明提供一种葵花盘总香豆素提取物，包含质量分数为0.1％-20％的东莨菪素、0.1％-20％的6，7-二氧亚甲代香豆素和0.1％-10％的6-甲基香豆素。
8.其中，
9.所述葵花盘总香豆素提取物，优选的包含质量分数为2.98％-12.95％的东莨菪
素、4.55％-10.62％的6，7-二氧亚甲代香豆素和1.92％-7.65％的6-甲基香豆素。
10.本发明还提供上述葵花盘总香豆素提取物的制备方法，包括以下步骤：
11.(1)前处理：取葵花盘药材粉末，加入有机溶剂提取，得粗提液；
12.(2)大孔树脂吸附处理：将粗提液直接上大孔树脂吸附柱；或者将粗提液进行浓缩得浸膏，加入水使浸膏溶解，离心得上清液，将上清液上大孔树脂吸附柱；
13.(3)梯度洗脱：用洗脱液梯度洗脱葵花盘总香豆素；
14.(4)将洗脱液浓缩、干燥，得到葵花盘总香豆素提取物。
15.其中，
16.所述步骤(1)中，葵花盘药材粉末的粒度为10-30目。
17.所述步骤(1)中，有机溶剂用量为8-16倍药材质量，优选为12倍药材质量。
18.所述步骤(1)中，有机溶剂选自碳数为c1-c5的直链或支链低级醇、石油醚、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷和氯仿中的一种或几种；优选为甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、二氯甲烷、氯仿中的一种或几种；进一步地，优选为乙醇；更进一步地，优选为浓度50-95％的乙醇；再进一步地，优选为浓度80％的乙醇。
19.所述步骤(1)中，加热温度为50-130℃。
20.所述步骤(1)中，提取方法包括回流提取、浸渍提取、渗漉提取、水煎和超声提取；优选为回流提取、渗漉提取；进一步地，优选为回流提取。
21.所述步骤(1)中，回流提取次数优选为2-5次，渗漉提取流速为0.3-1.0l/kg.h，进一步优选地，回流提取次数优选为3次，渗漉提取流速为0.5l/kg.h。
22.所述步骤(1)中，浸膏的相对密度为1.20(25℃下测定)。
23.所述步骤(2)中，大孔树脂选自以聚苯乙烯、聚丙烯酸酯和聚甲基丙烯酸酯中的任意一种或几种为骨架材料的树脂，优选为d101、dm301、ab-8、ztc-1、dm130、d1400、hpd100、sp825或hp20大孔吸附树脂，进一步地，优选为d101、dm301、ab-8或ztc-1大孔吸附树脂。
24.所述步骤(2)中，所述浓缩倍率为10-40，优选为20。
25.所述步骤(2)中，加水是向浸膏中加入6-10倍葵花盘干燥药材质量的水。
26.所述步骤(3)中，洗脱液选自水、碳数为c1-c5的直链或支链低级醇、石油醚、丙酮和乙酸乙酯中的一种或几种，优选为石油醚丙酮混合溶液或乙醇溶液，进一步地，优选为石油醚与丙酮体积比15:0.1-2的混合溶液。
27.具体的，所述步骤(3)在一些实施例中，洗脱过程为分别以4-16倍柱体积的水及2-5倍柱体积的第一乙醇溶液，洗去柱内未被吸附的杂质，然后以6-10倍柱体积的第二乙醇溶液解吸；第一乙醇溶液浓度5-30％，第二乙醇溶液浓度为30-60％；优选地，第一乙醇溶液浓度为20％，第二乙醇溶液浓度为50％。
28.所述步骤(3)在另一些实施例中，洗脱过程为用石油醚与丙酮的混合溶液梯度洗脱大孔树脂柱，具体的洗脱过程为分别以4-16倍柱体积的水及2-5倍柱体积的第一石油醚丙酮混合溶液，洗去柱内未被吸附的杂质，然后以6-10倍柱体积的第二石油醚丙酮混合溶液解吸；第一石油醚丙酮混合溶液中石油醚和丙酮的体积比5:0.1-0.5，第二石油醚丙酮混合溶液中石油醚和丙酮的体积比15:0.5-2；优选地，第一石油醚丙酮混合溶液中石油醚和丙酮的体积比15:0.2，第二石油醚乙醇混合溶液中石油醚和丙酮的体积比15:1。
29.所述步骤(4)中，浓缩倍率为10-40，优选为20。
30.所述步骤(4)中，干燥方法包括：减压干燥、真空干燥、冷冻干燥和喷雾干燥中的一种，优选为真空干燥，进一步地，真空干燥的条件是60℃，-0.09mpa。
31.以上制备方法所用的乙醇溶液的浓度均为体积浓度。
32.本发明还提供上述葵花盘总香豆素提取物在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。
33.本发明还提供一种治疗高尿酸血症的药物组合物，包括上述葵花盘总香豆素提取物与药学上可接受载体。
34.优选地，所述药物组合物包括但不限于口服制剂和注射剂。
35.优选地，所述药学上可接受载体指常规制剂辅料，或对葵花盘总香豆素提取物的药效没有明显影响的抗氧化剂、氨基酸、维生素、碳水化合物和植物提取物。
36.所述口服制剂包括胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂和滴丸，所述注射剂包括冻干粉针剂或注射液；进一步优选地，所述胶囊剂为软胶囊。
37.与现有技术相比，本发明的有益效果为：
38.1、本发明的葵花盘总香豆素提取物制成的药物，对高尿酸血症药物治疗药效好，而对正常动物血清尿酸水平无影响。
39.2、本发明从向日葵葵花盘中获得总香豆素提取物，提高了葵花盘使用价值，实现全面利用资源。
40.3、本发明的提取方法操作简单，时间短，效率高。
具体实施方式
41.为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，但下述实施例仅仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。
42.下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
43.以下实施例中，葵花盘药材粉末来自北大世佳科技开发有限公司；
44.甲醇购自北京化工厂，货号为20180622；
45.乙醇购自北京萌发，货号为20190518；
46.丙醇购自dikma，货号为141514；
47.正丁醇购自北京化工厂，货号为20181210；
48.二氯甲烷购自北京化工厂，货号为20190320；
49.氯仿购自北京化工厂，货号为20180828；
50.尿酸测定试剂盒购自中生北控有限公司，货号为20190109。
51.试验用小鼠由斯贝福(北京)生物有限公司提供，动物许可证编号为scxk(京)2019-0010；试验用大鼠由北京大学医学部提供，动物许可证编号为scxk(京)2016-0010。
52.阳性药苯溴马隆购自德国赫曼大药厂，货号为1510345；
53.酵母购自oxoid公司，货号为2046857-02；
54.氧嗪酸钾购自武汉远成共创科技有限公司，货号为143905。
55.实施例1-19葵花盘总香豆素提取物的制备
56.实施例1
57.取粒度为10目的葵花盘药材粉末，用14倍葵花盘干燥药材重量的50％乙醇加热回流提取3次，每次1h。合并提取液，过滤，得到乙醇提取液，将乙醇提取液60℃减压回收乙醇，浓缩成相对密度为1.20(25℃测定)的浸膏，加6倍于葵花盘干燥药材重量的水(60℃)使浸膏溶解，离心，上清液通过ztc-1树脂柱，以4倍于树脂体积(v/w)的水及5倍树脂体积(v/w)的5％的第一乙醇，洗去柱内未被吸附的杂质，然后以6倍于树脂体积(v/w)的40％的第二乙醇解吸，收集洗脱液；将洗脱液减压浓缩，真空干燥，得葵花盘总香豆素提取物。
58.实施例2
59.取粒度为20目的葵花盘药材粉末，用8倍葵花盘干燥药材重量的95％乙醇加热回流提取2次，每次1小时。合并提取液，过滤，得到乙醇提取液，将乙醇提取液60℃减压回收乙醇，浓缩为相对密度1.20(25℃测定)的浸膏，加10倍于葵花盘干燥药材重量的水(60℃)使浸膏溶解，离心，上清液通过d101树脂柱，以6倍于树脂体积(v/w)的水及2.5倍树脂体积(v/w)的10％的第一乙醇，洗去柱内未被吸附的杂质，然后以10倍于树脂体积的60％的第二乙醇解吸。收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得葵花盘总香豆素提取物。
60.实施例3
61.取粒度为30目的葵花盘药材粉末，用10倍葵花盘干燥药材重量的80％乙醇，渗漉提取，得到提取液，将提取液60℃减压回收乙醇，浓缩为相对密度1.20(25℃测定)的浸膏，加8倍于葵花盘干燥药材重量的水(60℃)使浸膏溶解，离心，上清液通过dm301树脂柱，以10倍于树脂体积的水及2倍树脂体积的20％的第一乙醇，洗去柱内未被吸附的杂质，然后以6倍于树脂体积的50％的第二乙醇解吸。收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得葵花盘总香豆素提取物。
62.实施例4
63.取粒度为10目的葵花盘药材粉末，加16倍葵花盘干燥药材重量热水(温度70-90℃)，渗漉提取，得到提取液，将提取液浓缩10倍，离心，上清液通过ab-8树脂柱，以8倍于树脂体积的水及2.5倍树脂体积的10％的第一乙醇，洗去柱内未被吸附的杂质，然后以8倍于树脂体积的30％的第二乙醇解吸。收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得葵花盘总香豆素提取物。
64.实施例5
65.与实施例1不同的是，本实施例中提取用的有机溶剂替换成浓度、用量相同的甲醇，树脂柱为dm130树脂柱，其余皆与实施例1相同。
66.实施例6
67.与实施例1不同的是，本实施例中提取用的有机溶剂替换成浓度、用量相同的丙醇，树脂柱为d1400树脂柱，其余皆与实施例1相同。
68.实施例7
69.与实施例1不同的是，本实施例中提取用的有机溶剂替换成浓度、用量相同的正丁醇，树脂柱为hpd100树脂柱，其余皆与实施例1相同。
70.实施例8
71.与实施例1不同的是，本实施例中提取用的有机溶剂替换成浓度、用量相同的二氯甲烷，树脂柱为sp825树脂柱，其余皆与实施例1相同。
72.实施例9
73.与实施例1不同的是，本实施例中提取用的有机溶剂替换成浓度、用量相同的氯仿，树脂柱为hp20树脂柱，其余皆与实施例1相同。
74.实施例10
75.与实施例1不同的是，本实施例中提取用的有机溶剂替换成浓度、用量相同的乙酸乙酯，其余皆与实施例1相同。
76.实施例11
77.与实施例1不同的是，本实施例中提取用的有机溶剂替换成用量相同的石油醚和丙酮的混合溶液，石油醚：丙酮体积比15:0.5，其余皆与实施例1相同。
78.实施例12
79.与实施例1不同的是，本实施例中梯度洗脱时用浓度、用量相同的甲醇替代乙醇，其余皆与实施例1相同。
80.实施例13
81.与实施例1不同的是，本实施例中梯度洗脱时用浓度、用量相同的丙醇替代乙醇，其余皆与实施例1相同。
82.实施例14
83.与实施例1不同的是，本实施例中梯度洗脱时用浓度、用量相同的正丁醇替代乙醇，其余皆与实施例1相同。
84.实施例15
85.与实施例1不同的是，本实施例中梯度洗脱时用浓度、用量相同的乙酸乙酯替代乙醇，其余皆与实施例1相同。
86.实施例16
87.与实施例3不同的是，本实施例中梯度洗脱时用用量相同的石油醚和丙酮的混合溶液替代乙醇，其中，第一石油醚丙酮混合溶液中石油醚和丙酮体积比15:0.3，第二石油醚丙酮混合溶液中石油醚和丙酮体积比15:1，其余皆与实施例3相同。
88.实施例17
89.与实施例3不同的是，本实施例中梯度洗脱时用用量相同的石油醚和丙酮的混合溶液替代乙醇，其中，第一石油醚丙酮混合溶液中石油醚和丙酮体积比15:0.1，第二石油醚丙酮混合溶液中石油醚和丙酮体积比15:0.5，其余皆与实施例3相同。
90.实施例18
91.与实施例3不同的是，本实施例中梯度洗脱时用用量相同的石油醚和丙酮的混合溶液替代乙醇，其中，第一石油醚丙酮混合溶液中石油醚和丙酮体积比15:0.5，第二石油醚丙酮混合溶液中石油醚和丙酮体积比15:2，其余皆与实施例3相同。
92.实施例19
93.与实施例3不同的是，本实施例中梯度洗脱时用用量相同的石油醚替代乙醇，其余皆与实施例3相同。
94.对比例1
95.与实施例3不同的是，本实施例中洗脱方式为：以4倍于树脂体积(v/w)的水洗涤，然后以6倍于树脂体积(v/w)的40％乙醇解吸。其余皆与实施例3相同。
96.对比例2
97.与实施例3不同的是，本实施例中梯度洗脱时用用量相同的石油醚和丙酮的混合溶液替代乙醇，石油醚和丙酮的体积比为15:3，其余皆与实施例3相同。
98.对比例3
99.与实施例3不同的是，本实施例中梯度洗脱时以10倍于树脂体积(v/w)的水及2倍树脂体积(v/w)的3％乙醇，洗去柱内未被吸附的杂质，然后以6倍于树脂体积(v/w)的25％乙醇解吸，其余皆与实施例3相同。
100.对比例4
101.与实施例3不同的是，本实施例中梯度洗脱时以10倍于树脂体积(v/w)的水及2倍树脂体积(v/w)的35％乙醇，洗去柱内未被吸附的杂质，然后以6倍于树脂体积(v/w)的65％乙醇解吸，其余皆与实施例3相同。
102.组分测定
103.1、东莨菪素的测定
104.色谱条件
105.色谱柱为agilent c18柱(150mm
×
4.6mm，5μm)，流动相为甲醇－水(46:54,v/v)的混合液，流速为0.8ml/min，检测波长为360nm，进样量10μl。
106.供试品的制备
107.各称取2.0g待测样品于100ml的圆底蒸馏瓶，加入50ml 75％的乙醇，60℃回流6h，过滤，取25ml滤液减压浓缩至无醇味，并与10ml盐酸(3mol/l)混合，2h后移入分液漏斗，75ml氯仿萃取5次，向萃取后的氯仿部分加入1g无水硫酸钠，过滤。滤液蒸干，加入2ml甲醇溶解，定溶到25ml，0.22μm的微孔滤膜过滤后待用。
108.对照品溶液的制备
109.精确称量东莨菪素标准品15mg，用甲醇溶解，并定容于50ml容量瓶中，配制成300μg/ml的标准溶液，稀释至终浓度分别为150μg/ml、75μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml的标准品溶液。以东莨菪素样品浓度(x)为横坐标，色谱峰面积(y)为纵坐标，绘制标准曲线，并进行回归分析，得出回归方程。
110.取供试品和对照品各10μl，进行测定。
111.2、6,7-二氧亚甲代香豆素的测定
112.色谱条件
113.色谱柱为agilent-c18色谱柱(4.6mm
×
250mm，5μm)；流动相甲醇-0.1％醋酸水溶液(25:75)；流速1.0ml
·
min-1
，柱温35℃，检测波长为340nm；进样量10μl。
114.供试品的制备
115.取待测样品各约1.0g，置25ml量瓶中，加入甲醇10ml，称重，超声处理30min，冷却，称重，补失减重，0.22μm的微孔滤膜过滤后待用。
116.对照品溶液的制备
117.精密称取6,7-二氧亚甲代香豆素10.44mg至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成质量浓度为208.8μg/ml混合对照品溶液。稀释至终浓度分别为104.4μg/ml、52.2μg/ml、17.4μg/ml、8.7μg/ml、4.35μg/ml的标准品溶液。以6,7-二氧亚甲代香豆素样品浓度(x)为横坐标，色谱峰面积(y)为纵坐标，绘制标准曲线，并进行回归分析，得出回归方程。
118.取供试品和对照品各10μl，进行测定。
119.3、6-甲基香豆素的测定
120.色谱条件
121.色谱柱：岛津c18色谱柱(250mm
×
4.6mm，5μm)；流动相：甲醇－0.02mol/l；磷酸二氢钠缓冲溶液(ph＝3.5)；柱温:30℃；流速：1ml/min。检测波长:275nm；进样量：10μl。
122.供试品的制备
123.准确称取待测样品1.0g于10ml容量瓶中，加入5ml甲醇，涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20min，冷却至室温后，用甲醇稀释至刻度，经0.45μm滤膜过滤，滤液供液相色谱测定。
124.对照品溶液的制备
125.精密称取6－甲基香豆素标准品10.19mg，用甲醇溶解后定容至10ml容量瓶中，得到1.019mg/ml的6－甲基香豆素标准储备液。分别精密量取一定体积的6－甲基香豆素标准中间使用液和苯甲醇标准储备液用甲醇稀释成浓度依次为含6－甲基香豆素(0.1019μg/ml，0.2548μg/ml，0.5095μg/ml，1.019μg/ml，2.038μg/ml，5.095μg/ml，10.19μg/ml)溶液。
126.取供试品和对照品各10μl，进行测定。
127.4、总香豆素含量的测定
128.供试品溶液的制备
129.称取待测样品约80mg，于25ml量瓶中，加20ml，70％甲醇，超声(功率250w，频率33khz)提取30min，冷却，溶剂定容，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
130.对照品溶液的制备
131.精密称取5.78mg东莨菪素对照品于5ml量瓶中，加甲醇配制成1.156mg/ml的对照品溶液，备用。
132.标准曲线的制备
133.对照品溶液逐步稀释，依次配成231.2μg/ml，115.6μg/ml，57.8μg/ml，23.12μg/ml和11.56μg/ml的对照品溶液。分别从57.8μg/ml的对照品溶液量取0.2，0.3，0.5，0.7，0.8ml于5ml量瓶中，甲醇稀释定容，再从23.12μg/ml的对照品溶液量取2.3ml于5ml量瓶中，甲醇稀释定容。以甲醇为空白，照紫外分光光度法在波长344nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，求得线性范围和标准曲线的回归方程。
134.取供试品或对照品溶液，在波长344nm处测定吸光度，进而计算总香豆素含量。
135.经检测，本葵花盘总香豆素各成分及含量如表1：
136.表1.
[0137][0138][0139]
实验例药效学实验
[0140]
实验例1葵花盘总香豆素提取物对酵母致小鼠高尿酸血症的影响
[0141]
具体实施步骤如下：
[0142]
(1)将72只雄性km小鼠(体重18-22g)随机分为6组，每组12只，分别为空白对照组、模型组、阳性药(苯溴马龙20mg/kg)、葵花盘总香豆素提取物低剂量组(5mg/kg)、中剂量(10mg/kg)、高剂量(20mg/kg)组。其中，葵花盘总香豆素提取物来自于实施例3。
[0143]
(2)除空白对照组外，将其余各组小鼠按0.2ml/10g体积灌胃30g/kg酵母膏造模，每天1次，连续1周。空白对照组灌胃等体积蒸馏水。
[0144]
(3)从造模第3天起，各组分别灌胃给药5天，每天给药一次。
[0145]
(4)末次给药后30min，小鼠眼眶取血，按试剂盒法测定小鼠血清尿酸水平。
[0146]
实验结果：如表2所示。
[0147]
表2.葵花盘总香豆素提取物对酵母致小鼠高尿酸血症的影响
[0148][0149][0150]
注：与空白对照组相比，
**
p<0.01；与模型组相比，
#
p<0.05，
##
p<0.01
[0151]
由上表可知，与空白对照组相比，模型组小鼠血清尿酸值明显升高，具有统计学差异(p<0.01)；与模型组相比，阳性药苯溴马隆组小鼠血清尿酸值明显降低，具有统计学差异(p<0.01)。与模型组相比，葵花盘总香豆素提取物高、中、低剂量组小鼠血清尿酸值明显降低，具有统计学差异(p<0.01或p<0.05)。结果显示，葵花盘总香豆素提取物具有明显的降高尿酸作用。
[0152]
实验例2葵花盘总香豆素提取物对大鼠高尿酸血症的影响
[0153]
具体实施步骤如下：
[0154]
(1)将144只雄性sd大鼠(体重180-220g)，随机分为6组，每组24只，分别为空白对照组、模型组、阳性药(苯溴马龙10mg/kg)、葵花盘总香豆素提取物大剂量组(2.5mg/kg)、中剂量(5mg/kg)、高剂量(10mg/kg)组。其中，葵花盘总香豆素提取物来自实施例3。
[0155]
(2)除空白对照组外，将其余各组大鼠按1ml/100g体积灌胃1.5g/kg氧嗪酸钾造模，每天1次，连续3周。空白对照组灌胃等体积蒸馏水。
[0156]
(3)从造模第8天起，各组分别灌胃给药14天，每天给药一次。
[0157]
(4)造模第14天给药后，各组取12只大鼠，禁食不禁水12h，大鼠眼眶取血，按试剂盒法测定大鼠血清尿酸和黄嘌呤氧化酶(xod)水平。
[0158]
(5)造模第21天给药后，各组取剩余12只大鼠，禁食不禁水12h，大鼠眼眶取血，按试剂盒法测定大鼠血清尿酸和黄嘌呤氧化酶(xod)水平。
[0159]
实验结果：如表3和表4所示。
[0160]
表3.葵花盘总香豆素提取物对大鼠高尿酸血症的影响
[0161][0162]
注：与空白对照组比较，**p<0.01；与模型组比较，##p<0.01，
#
p<0.05
[0163]
表4葵花盘总香豆素提取物对大鼠高尿酸血症的抑制率
[0164][0165][0166]
由上表可知，给药第7天和第14天，与空白对照组相比，模型组大鼠血清尿酸值和黄嘌呤氧化酶活性明显升高，具有统计学差异(p<0.01)；与模型组相比，阳性药苯溴马隆组大鼠血清尿酸值和黄嘌呤氧化酶活性明显降低，具有统计学差异(p<0.01)。与模型组相比，
葵花盘总香豆素提取物高、中、低剂量组大鼠血清尿酸值和黄嘌呤氧化酶活性均明显降低，具有统计学差异(p<0.01或p<0.05)。
[0167]
实验例3葵花盘总香豆素提取物对正常小鼠血清尿酸水平的影响
[0168]
km小鼠60只，体重18-22g，雄性。随机分为5组，每组12只，分别为空白对照组、阳性药(苯溴马龙20mg/kg)、葵花盘总香豆素提取物小剂量组(5mg/kg)、中剂量(10mg/kg)、高剂量(20mg/kg)组。除空白对照组外，各组分别灌胃给药5天，每天给药一次，空白对照组灌胃等体积蒸馏水。末次给药后30min，小鼠眼眶取血，按试剂盒法测定小鼠血清中尿酸水平。其中，葵花盘总香豆素提取物来自实施例3。
[0169]
结果见表5：
[0170]
表5.葵花盘总香豆素提取物对正常小鼠血液中尿酸的影响
[0171][0172]
注：与空白对照组相比，
**
p<0.01
[0173]
由上表可知，葵花盘总香豆素提取物高(20mg/kg)、中(10mg/kg)、低剂量组(5mg/kg)灌胃给药，对正常小鼠血清尿酸值无明显影响。苯溴马隆(20mg/kg)呈现明显的降尿酸作用。表明本发明所述的葵花盘总香豆素提取物，对高尿酸血症具有治疗作用，对正常动物血清尿酸水平无影响。由此，我们可推断本发明所述的葵花盘总香豆素也可以用于人和其他哺乳动物的高尿酸血症的治疗。
[0174]
对比实验例
[0175]
(1)将170只雄性km小鼠(体重18-22g)随机分为17组，每组10只，分别为高剂量a组、中剂量a组、低剂量a组、高剂量b组、中剂量b组、低剂量b组、高剂量c组、中剂量c组、低剂量c组、高剂量d组、中剂量d组、低剂量d组、高剂量e组、中剂量e组、低剂量e组、高剂量f组、高剂量g组。其中，低剂量组为5mg/kg、中剂量组为10mg/kg、高剂量组为20mg/kg。
[0176]
(2)各组小鼠按0.2ml/10g体积灌胃30g/kg酵母膏造模，每天1次，连续1周。
[0177]
(3)从造模第3天起，各组分别灌胃给药5天，每天给药一次。
[0178]
(4)末次给药后30min，小鼠眼眶取血，按试剂盒法测定小鼠血清尿酸水平，以及副反应发生情况，结果如表6所示。
[0179]
其中：a：按照专利cn201110217029.1中实施例1公开的方法制备的香豆素提取物；
[0180]
b：按照专利cn109535115a中实施例1公开的方法制备的香豆素提取物；
[0181]
c：按照专利cn105943575a中实施例1公开的方法制备的香豆素提取物；
[0182]
d：市售降尿酸类药物；
[0183]
e：本发明实施例3制备的香豆素提取物；
[0184]
f：本发明实施例18制备的香豆素提取物；
[0185]
g：本发明对比例2制备的香豆素提取物。
[0186]
表6.各组样品对小鼠高尿酸血症的抑制率
[0187][0188][0189]
从表中可看出，本发明得到的葵花盘总香豆素提取物，不但制备方法简单，而且应用于降高尿酸血症的药物组合物，能够明显降低高尿酸血症模型的血清尿酸值，且能够明显抑制黄嘌呤氧化酶的活性，抑制尿酸的生成，对高尿酸血症具有较好的治疗作用。同时与市售药物相比，高剂量时具有更高的药效。
[0190]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。