针对sars‑cov‑2突变株的抗体及其用途
技术领域：
：1.本发明涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是sars‑cov‑2的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本发明提供了可识别sars‑cov‑2突变株的单克隆抗体，以及包含所述抗体的组合物(例如，诊断剂和治疗剂)。此外，本发明还涉及所述抗体的用途。本发明的抗体可用于诊断、预防和/或治疗sars‑cov‑2感染和/或由所述感染引起的疾病(例如，covid‑19)。
背景技术：
：：2.全球疫苗接种可能是结束sars‑cov‑2大流行不可避免的手段。目前的疫苗主要通过引发对源自早期分离株的刺突蛋白的中和抗体反应从而起到保护作用。然而，出现了具有多个突变的突变株，例如b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1和b.1.617.2等，现有疫苗的有效性可能会受到影响。因此需要寻找更为有效的、针对上述突变毒株的中和抗体，提供有效的诊断、预防和/或治疗突变株感染的手段，从而助力疫情的稳定与消除。技术实现要素：3.本技术发明人经过大量的实验研究后发现了一种抗体，其能够特异性识别和靶向多种sars‑cov‑2突变株的s蛋白，特别是s蛋白的受体结合结构域(rbd)，并且显示出了高效的中和突变毒株的能力。因此，本发明的抗体特别适合用于诊断、预防和治疗sars‑cov‑2感染(特别是突变株感染)或与sars‑cov‑2感染相关的疾病(例如covid‑19)。4.本发明的抗体5.在一个方面，本发明提供了一种抗体或其抗原结合片段，其包含：6.(a)包含下述3个互补决定区(cdrs)的重链可变区(vh)：序列为seqidno:1的vhcdr1、序列为seqidno:2的vhcdr2、序列为seqidno:3的vhcdr3；和/或，包含下述3个互补决定区(cdrs)的轻链可变区(vl)：序列为seqidno:4的vlcdr1、序列为seqidno:5的vlcdr2、序列为seqidno:6的vlcdr3；或7.(b)包含下述3个互补决定区(cdrs)的重链可变区(vh)：序列为seqidno:21的vhcdr1、序列为seqidno:22的vhcdr2、序列为seqidno:23的vhcdr3；和/或，包含下述3个互补决定区(cdrs)的轻链可变区(vl)：序列为seqidno:24的vlcdr1、序列为seqidno:25的vlcdr2、序列为seqidno:26的vlcdr3。8.在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：9.(a)重链可变区(vh)，其包含seqidno：7所示的序列或其变体；和/或，轻链可变区(vl)，其包含seqidno：8所示的序列或其变体；或，10.(b)重链可变区(vh)，其包含seqidno：27所示的序列或其变体；和/或，轻链可变区(vl)，其包含seqidno：28所示的序列或其变体；11.其中，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)，或具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；优选地，所述的置换是保守置换。12.在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含如seqidno:7所示的序列的vh和包含如seqidno:8所示的序列的vl。13.在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含如seqidno:27所示的序列的vh和包含如seqidno:28所示的序列的vl。14.在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段可以进一步包含来源于哺乳动物(例如，人)免疫球蛋白的恒定区序列或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加。15.在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含人免疫球蛋白的重链恒定区(ch)或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；和/或，16.本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含人免疫球蛋白的轻链恒定区(cl)或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的保守置换)。17.在一些实施方案中，所述重链恒定区(ch)的变体与其所源自的序列相比可以具有一个或多个氨基酸的保守置换。在此类实施方案中，所述重链恒定区(ch)的变体与其所源自的野生型序列相比可以具有相同或基本相同的效应子功能。18.在另一些实施方案中，所述重链恒定区(ch)的变体可以包含一个或多个氨基酸突变以改变本发明抗体的下列中的一个或更多个特性：fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基的数目、效应细胞功能或补体功能等。可以通过将抗体恒定区中的至少一个氨基酸残基替换为不同残基，产生功能改变，例如，改变抗体对效应子配体(如fcr或补体c1q)的亲和力，从而改变效应子功能(例如降低)。抗体的fc区介导几种重要的效应子功能，例如adcc、吞噬作用、cdc等。19.在某些实施方案中，所述重链恒定区是igg重链恒定区，例如igg1、igg2、igg3或igg4重链恒定区。在某些实施方案中，所述重链恒定区是人igg1、igg2、igg3或igg4重链恒定区。20.在某些实施方案中，所述轻链恒定区是κ轻链恒定区。在某些实施方案中，所述轻链恒定区是人κ轻链恒定区。21.在某些示例性实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如seqidno:9所示的重链恒定区(ch)和/或如seqidno:10所示的轻链恒定区(cl)。22.在某些示例性实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如seqidno:29所示的重链恒定区(ch)和/或如seqidno:30所示的轻链恒定区(cl)。23.在某些示例性实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：含有如seqidno:7所示的vh以及如seqidno:9所示的ch的重链，和/或，含有如seqidno:8所示的vl以及如seqidno:10所示的cl的轻链。24.在某些示例性实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：含有如seqidno:27所示的vh以及如seqidno:29所示的ch的重链，和/或，含有如seqidno:28所示的vl以及如seqidno:30所示的cl的轻链。25.在某些实施方案中，所述抗原结合片段选自fab、fab’、(fab’)2、fv、二硫键连接的fv、scfv、双抗体(diabody)和单域抗体(sdab)。在某些实施方案中，所述抗体为嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。26.在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段具备以下特征中的1项或多项：27.(1)特异性结合sars‑cov‑2的s蛋白的rbd；28.(2)以小于约5nm，例如小于约4nm、3nm、2nm、1nm、0.5nm、0.1nm或更低的kd结合sars‑cov‑2的s蛋白的rbd；优选地，所述kd通过生物膜干涉技术(bli)测定；29.(3)阻断或抑制sars‑cov‑2对ace2受体的结合，和/或阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染；所述sars‑cov‑2包括突变株，例如b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1和/或b.1.617.2；30.(4)在体外或受试者(例如人)体内中和sars‑cov‑2；所述sars‑cov‑2包括突变株，例如b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1和/或b.1.617.2；31.(5)预防和/或治疗sars‑cov‑2感染或由sars‑cov‑2感染所导致的疾病(例如covid‑19)，所述sars‑cov‑2包括突变株，例如b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1和/或b.1.617.2。32.在本文中，本发明的抗体或其抗原结合片段可以包括这样的变体，所述变体与其所源自的抗体或其抗原结合片段相比差异仅在于一个或多个(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换)氨基酸残基的保守置换，或者与其所源自的抗体或其抗原结合片段具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，且基本保留了其所源自的抗体或其抗原结合片段的上述生物学功能。33.抗体的制备34.本发明的抗体可以本领域已知的各种方法来制备，例如通过基因工程重组技术来获得。例如，通过化学合成或pcr扩增获得编码本发明抗体的重链和轻链基因的dna分子。将所得dna分子插入表达载体内，然后转染宿主细胞。然后，在特定条件下培养转染后的宿主细胞，并表达本发明的抗体。35.本发明的抗原结合片段可以通过水解完整的抗体分子获得(参见morimotoetal.,j.biochem.biophys.methods24:107‑117(1992)andbrennanetal.,science229:81(1985))。另外，这些抗原结合片段也可以直接由重组宿主细胞产生(reviewedinhudson,curr.opin.immunol.11:548‑557(1999)；littleetal.,immunol.today,21:364‑370(2000))。比如，fab’片段可以直接从宿主细胞中获得；可以将fab’片段化学偶联形成f(ab’)2片段(carteretal.,bio/technology,10:163‑167(1992))。另外，fv、fab或f(ab’)2片段也可以直接从重组宿主细胞培养液中直接分离得到。本领域的普通技术人员完全知晓制备这些抗原结合片段的其它技术。36.因此，在另一个方面，本发明提供了一种分离的核酸分子，其包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区的核苷酸序列。在某些实施方案中，所述分离的核酸分子编码本发明的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区。37.在某些实施方案中，所述分离的核酸分子包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链或重链可变区的第一核苷酸序列和编码所述抗体或其抗原结合片段的轻链或轻链可变区的第二核苷酸序列，其中所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列存在于相同或不同的分离的核酸分子上。当所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列存在于不同的分离的核酸分子上时，本发明所述的分离的核酸分子包含含有所述第一核苷酸序列的第一核酸分子以及含有所述第二核苷酸序列的第二核酸分子。38.在某些实施方案中，所述第一核苷酸序列包含seqidnos:11‑13所示的序列，例如包含seqidno:17所示的序列；和/或，所述第二核苷酸序列包含seqidnos:14‑16所示的序列，例如包含seqidno:18所示的序列。39.在某些实施方案中，所述第一核苷酸序列包含seqidnos:31‑33所示的序列，例如包含seqidno:37所示的序列；和/或，所述第二核苷酸序列包含seqidnos:34‑36所示的序列，例如包含seqidno:38所示的序列。40.在另一个方面，本发明提供了一种载体(例如克隆载体或表达载体)，其包含如上所述的分离的核酸分子。在某些实施方案中，本发明的载体是例如质粒，粘粒，噬菌体等。41.在某些实施方案中，所述载体包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链或重链可变区的第一核苷酸序列和编码所述抗体或其抗原结合片段的轻链或轻链可变区的第二核苷酸序列，其中所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列存在于相同或不同的载体上。当所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列存在于不同的载体上时，本发明所述的载体包含含有所述第一核苷酸序列的第一载体以及含有所述第二核苷酸序列的第二载体。42.在某些实施方案中，所述载体包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链可变区的第一核苷酸序列，和/或编码本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的第二核苷酸序列；其中所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列被提供在相同或不同的载体上。43.在某些实施方案中，所述载体包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链的第一核苷酸序列，和/或编码本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链的第二核苷酸序列；其中所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列被提供在相同或不同的载体上。44.在另一个方面，本发明提供了一种宿主细胞，其包含如上所述的分离的核酸分子或载体。此类宿主细胞包括但不限于，原核细胞例如细菌细胞(如大肠杆菌细胞)，以及真核细胞例如真菌细胞(例如酵母细胞)，昆虫细胞，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)。在某些实施方案中，本发明的宿主细胞是哺乳动物细胞，例如hek293。45.在另一个方面，提供了制备本发明的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养如上所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。46.药物组合物及治疗用途47.本发明的抗体或其抗原结合片段可用于体外或在受试者体内中和sars‑cov‑2，阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染，从而达到预防和/或治疗受试者的sars‑cov‑2感染或与sars‑cov‑2感染相关的疾病的目的。48.因此，在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其含有本发明的抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。49.在某些示例性实施方案中，所述药学上可接受的载体和/或赋形剂包含无菌可注射液体(如水性或非水性悬浮液或溶液)。在某些示例性实施方案中，此类无菌可注射液体选自注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化钠溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性剂的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)、ringer氏溶液及其任意组合。50.在另一个方面，本发明提供了用于中和sars‑cov‑2、阻断或抑制sars‑cov‑2对ace2受体的结合、或阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染的方法，其包括使用本发明的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。所述方法可用于在体外或受试者(例如人)体内中和sars‑cov‑2、阻断或抑制sars‑cov‑2对ace2受体的结合或阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染。51.在某些实施方案中，所述方法用于中和样品中sars‑cov‑2的毒力、阻断或抑制sars‑cov‑2对ace2受体的结合、或阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染。在某些实施方案中，所述方法包括：将包含sars‑cov‑2的样品与本发明的抗体或其抗原结合片段或药物组合物接触。52.在某些实施方案中，所述sars‑cov‑2包括突变株。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白含有突变，例如氨基酸置换、缺失或添加。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白包含选自k417n、e484k、n501y、l452r、t478k中的一个或多个氨基酸置换。在某些实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2或其任意组合。53.在另一个方面，本发明提供了用于预防或治疗受试者的sars‑cov‑2感染或与sars‑cov‑2病毒感染相关的疾病(例如covid‑19)的方法，其包括：给有此需要的受试者施用有效量的本发明的抗体或其抗原结合片段、或药物组合物。54.在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段单独使用，或与另外的药学活性剂(例如另外的抗病毒剂)联合使用。本发明的抗体或其抗原结合片段与所述另外的药学活性剂可以同时、分开或相继施用。55.在某些实施方案中，所述sars‑cov‑2包括突变株。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白含有突变，例如氨基酸置换、缺失或添加。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白包含选自k417n、e484k、n501y、l452r、t478k中的一个或多个氨基酸置换。在某些实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2或其任意组合。56.在另一个方面，本发明涉及本发明的抗体或其抗原结合片段、或药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于下列的一项或多项：57.(1)在体外或受试者(例如人)体内中和sars‑cov‑2；58.(2)阻断或抑制sars‑cov‑2对ace2受体的结合；59.(3)阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染；和/或60.(4)用于预防和/或治疗受试者的sars‑cov‑2感染或与sars‑cov‑2感染相关的疾病(例如covid‑19)。61.在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段单独使用，或与另外的药学活性剂(例如另外的抗病毒剂)联合使用。62.在某些实施方案中，所述sars‑cov‑2包括突变株。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白含有突变，例如氨基酸置换、缺失或添加。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白包含选自k417n、e484k、n501y、l452r、t478k中的一个或多个氨基酸置换。在某些实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2或其任意组合。63.本发明的抗体或其抗原结合片段、或本发明的药物组合物可以配制成医学领域已知的任何剂型，例如，片剂、丸剂、混悬剂、乳剂、溶液、凝胶剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、锭剂、栓剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、吸入剂、喷雾剂等。优选剂型取决于预期的给药方式和治疗用途。本发明的抗体或其抗原结合片段或药物组合物应当是无菌的并在生产和储存条件下稳定。一种优选的剂型是注射剂。此类注射剂可以是无菌注射溶液。例如，可通过下述方法来制备无菌注射溶液：在适当的溶剂中掺入必需剂量的本发明的抗体或其抗原结合片段，以及任选地，同时掺入其他期望的成分(包括但不限于，ph调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂，等渗剂、防腐剂、稀释剂，或其任何组合)，随后过滤除菌。此外，可以将无菌注射溶液制备为无菌冻干粉剂(例如，通过真空干燥或冷冻干燥)以便于储存和使用。此类无菌冻干粉剂可在使用前分散于合适的载体中，例如注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化钠溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性剂的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)、ringer氏溶液及其任意组合。64.本发明的抗体或其抗原结合片段、或本发明的药物组合物可以通过本领域已知的任何合适的方法来施用，包括但不限于，口服、口腔、舌下、眼球、局部、肠胃外、直肠、叶鞘内、内胞浆网槽内、腹股沟、膀胱内、局部(如，粉剂、药膏或滴剂)，或鼻腔途径。但是，对于许多治疗用途而言，优选的给药途径/方式是胃肠外给药(例如静脉注射或推注，皮下注射，腹膜内注射，肌内注射)。技术人员应理解，给药途径和/或方式将根据预期目的而发生变化。在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或药物组合物通过静脉注射或推注给予。65.本发明的药物组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明的抗体或其抗原结合片段。“预防有效量”是指，足以预防，阻止，或延迟疾病的发生的量。“治疗有效量”是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。本发明的抗体或其抗原结合片段的治疗有效量可根据如下因素发生变化：待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。66.在本文中，可调整给药方案以获得最佳目的反应(例如治疗或预防反应)。例如，可以单次给药，可以在一段时间内多次给药，或者可以随治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。67.在本文中，所述受试者可以为哺乳动物，例如人。68.缀合物69.本发明的抗体或其抗原结合片段可进行衍生化，例如被连接至另一个分子(例如另一个多肽或蛋白)。通常，抗体或其抗原结合片段的衍生化(例如，标记)不会不利影响其对sars‑cov‑2的结合。因此，本发明的抗体或其抗原结合片段还意欲包括此类衍生化的形式。例如，可以将本发明的抗体或其抗原结合片段功能性连接(通过化学偶合、基因融合、非共价连接或其它方式)于一个或多个其它分子基团，例如另一个抗体(例如，形成双特异性抗体)，检测试剂，药用试剂，和/或能够介导抗体或抗原结合片段与另一个分子结合的蛋白或多肽(例如，抗生物素蛋白或多组氨酸标签)。此外，本发明的抗体或其抗原结合片段还可以用化学基团进行衍生，例如聚乙二醇(peg)，甲基或乙基，或者糖基。这些基团可用于改善抗体的生物学特性，例如增加血清半衰期。70.因此，在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段带有可检测标记。71.在本文中，本发明所述的可检测的标记可以是可通过荧光、光谱、光化学、生物化学、免疫学、电学、光学或化学手段检测的任何物质。这类标记是本领域熟知的，其实例包括但不限于，酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β‑半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶，等)、放射性核素(例如，3h、125i、35s、14c或32p)、荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(fitc)、荧光素、异硫氰酸四甲基罗丹明(tritc)、藻红蛋白(pe)、德克萨斯红、罗丹明、量子点或花菁染料衍生物(例如cy7、alexa750))、发光物质(例如化学发光物质，如吖啶酯类化合物、鲁米诺及其衍生物、钌衍生物如三联吡啶钌)、磁珠(例如，)、测热标记物例如胶体金或有色玻璃或塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶，等)珠、以及用于结合上述标记物修饰的亲和素(例如，链霉亲和素)的生物素。72.在某些实施方案中，所述可检测的标记能够适用于免疫学检测(例如，酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等)。在某些实施方案中，所述可检测的标记可以选自酶(例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或β‑半乳糖苷酶)、化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物、鲁米诺及其衍生物、或钌衍生物)、荧光染料(例如荧光素或荧光蛋白，如fitc、tritc或pe)、放射性核素或生物素。73.在某些实施方案中，可通过不同长度的接头(linker)将如上所述的可检测的标记连接至本发明的抗体或其抗原结合片段，以降低潜在的位阻。74.试剂盒及检测用途75.本发明的抗体或其抗原结合片段能够特异性结合sars‑cov‑2的s蛋白的rbd，从而可用于检测sars‑cov‑2或其s蛋白或s蛋白的rbd，以及任选地根据上述检测结果来诊断受试者是否感染了sars‑cov‑2。76.因此，在另一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括本发明的抗体或其抗原结合片段、或本发明的缀合物。77.在一些实施方案中，所述试剂盒包含本发明的缀合物。78.在另一些实施方案中，所述试剂盒包含本发明的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段不包含可检测的标记。在某些实施方案中，所述试剂盒进一步包含特异性识别本发明的抗体或其抗原结合片段的第二抗体；任选地，所述第二抗体还包括可检测的标记，例如酶(例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物、鲁米诺及其衍生物、或钌衍生物)、荧光染料(例如荧光素或荧光蛋白)、放射性核素或生物素。79.在某些实施方案中，所述第二抗体对本发明的抗体或其抗原结合片段所包含的恒定区所来自的物种(例如人)的抗体是特异的。80.在某些实施方案中，所述第二抗体是抗‑免疫球蛋白(例如人的免疫球蛋白)抗体，例如抗igg抗体。在某些实施方案中，所述第二抗体是抗人igg抗体。81.在某些实施方案中，本发明的试剂盒可以进一步包含用于使相应可检测的标记被检测到的试剂。例如，当所述可检测的标记为酶时，所述试剂盒还可以包含相应酶的显色底物，例如用于辣根过氧化物酶的邻苯二胺(opd)、四甲基联苯胺(tmb)、abts或鲁米诺类化合物，或用于碱性磷酸酶的对硝基苯磷酸酯(p‑npp)或amppd。例如当所述可检测的标记为化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物)时，所述试剂盒还可以包含用于化学发光的预激发液和/或激发液。82.在另一个方面，本发明提供了检测sars‑cov‑2或其s蛋白或s蛋白的rbd、或被sars‑cov‑2感染的细胞在样品中的存在或其水平的方法，其包括使用本发明的抗体或其抗原结合片段。83.在某些实施方案中，所述方法是免疫学检测，例如酶免疫测定法(例如elisa)、化学发光免疫分析法、荧光免疫分析法或放射免疫测定法。84.在一些实施方案中，所述方法包括使用本发明的缀合物。85.在另一些实施方案中，所述方法包括使用本发明的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段不包含可检测的标记。在某些实施方案中，所述方法还包括使用带有可检测的标记(例如酶(例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物、鲁米诺及其衍生物、或钌衍生物)、荧光染料(例如荧光素或荧光蛋白)、放射性核素或生物素)的第二抗体来检测所述抗体或其抗原结合片段。86.在某些实施方案中，所述第二抗体对本发明的抗体或其抗原结合片段所包含的恒定区所来自的物种(例如人)的抗体是特异的。87.在某些实施方案中，所述第二抗体是抗‑免疫球蛋白(例如人的免疫球蛋白)抗体，例如抗igg抗体。在某些实施方案中，所述第二抗体是抗人igg抗体。88.在某些实施方案中，所述方法包括：(1)将所述样品与本发明的抗体或其抗原结合片段接触；(2)检测抗原‑抗体免疫复合物的形成或检测所述免疫复合物的量。所述免疫复合物的形成表明存在sars‑cov‑2或被sars‑cov‑2感染的细胞。89.在某些实施方案中，所述方法可以用于诊断目的，例如可以根据sars‑cov‑2在样品中的存在或其水平来诊断受试者是否感染了sars‑cov‑2。在此类实施方案中，所述样品可以为来自受试者(例如哺乳动物，优选人)的血液样品(例如，全血、血浆或血清)、排泄物、口腔或鼻腔分泌物、或肺泡灌洗液。90.在某些实施方案中，所述方法可以用于非诊断目的，例如所述样品并非来自受试者的样品，例如疫苗样品。91.在某些实施方案中，所述受试者是哺乳动物，例如人。92.在某些实施方案中，所述sars‑cov‑2包括突变株。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白含有突变，例如氨基酸置换、缺失或添加。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白包含选自k417n、e484k、n501y、l452r、t478k中的一个或多个氨基酸置换。在某些实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2或其任意组合。93.在另一个方面，提供了本发明的抗体或其抗原结合片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测sars‑cov‑2或其s蛋白或s蛋白的rbd、或被sars‑cov‑2感染的细胞在样品中的存在或其水平，和/或用于诊断受试者是否感染了sars‑cov‑2。94.在某些实施方案中，所述方法是免疫学测定，例如酶免疫测定法(例如elisa)、化学发光免疫分析法、荧光免疫分析法或放射免疫测定法。95.在某些实施方案中，所述试剂盒通过如上所述的检测方法来检测sars‑cov‑2或其s蛋白或s蛋白的rbd、或被sars‑cov‑2感染的细胞在样品中的存在或其水平，以及任选地根据所述检测结果诊断受试者是否感染了sars‑cov‑2。96.在某些实施方案中，所述样品为来自受试者(例如哺乳动物，优选人)的血液样品(例如，全血、血浆或血清)、排泄物、口腔或鼻腔分泌物、或肺泡灌洗液。97.在某些实施方案中，所述sars‑cov‑2包括突变株。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白含有突变，例如氨基酸置换、缺失或添加。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白包含选自k417n、e484k、n501y、l452r、t478k中的一个或多个氨基酸置换。在某些实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2或其任意组合。98.术语定义99.在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的病毒学、生物化学、核酸化学、免疫学等实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。100.如本文中所使用的，“严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2，sars‑cov‑2)”，旧称为“新型冠状病毒”或“2019‑ncov”，属于其β冠状病毒属，为含包膜的单链正义rna病毒。sars‑cov‑2至少含有三种膜蛋白，包括表面刺突蛋白(s)、整合膜蛋白(m)和膜蛋白(e)。sars‑cov‑2的受体与sars‑cov一样，均是通过s蛋白上的受体结合结构域(receptorbindingdomain,rbd)与宿主细胞上的血管紧张素转移酶2(ace2)特异性结合后接到了病毒的膜融合和入胞，在病毒感染细胞过程中起着至关重要的作用。101.在本文中，术语“sars‑cov‑2”包含已知的各种分离株，例如既包括原始毒株(例如第一个被测序的分离株genbank：mn908947.3)，也包括后续被发现的突变株。在某些实施方案中，术语“sars‑cov‑2”既包含其spikeprotein不包含突变(例如与参照株mn908947.3相比)的分离株，也包含在其spikeprotein中包含突变(例如与参照株mn908947.3相比的氨基酸置换，例如k417n、e484k、n501y、l452r、t478k或其任意组合)的分离株。在某些实施方案中，所述突变株优选地选自在其spikeprotein中包含突变(例如氨基酸置换，例如k417n、e484k、n501y、l452r、t478k或其任意组合)的分离株。在某些示例性实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2。102.如本文中所使用的，术语“新型冠状病毒肺炎”和“covid‑19”是指，因sars‑cov‑2感染而导致的肺炎，二者具有相同的含义，可互换使用。103.如本文中所使用的，术语“抗体”是指，通常由两对多肽链(每对具有一条轻链(lc)和一条重链(hc))组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ(kappa)和λ(lambda)轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为igm、igd、igg、iga和ige。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“j”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“d”区。各重链由重链可变区(vh)和重链恒定区(ch)组成。重链恒定区由3个结构域(ch1、ch2和ch3)组成。各轻链由轻链可变区(vl)和轻链恒定区(cl)组成。轻链恒定区由一个结构域cl组成。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应子功能，如可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(c1q)的结合。vh和vl区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(cdr))，其间散布有较保守的称为构架区(fr)的区域。各vh和vl由按下列顺序：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4从氨基末端至羧基末端排列的3个cdr和4个fr组成。各重链/轻链对的可变区(vh和vl)分别形成抗原结合部位。氨基酸在各区域或结构域的分配可遵循kabat,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1987and1991))，或chothia&lesk(1987)j.mol.biol.196:901‑917；chothia等人(1989)nature342:878‑883的定义。104.如本文中所使用的，术语“互补决定区”或“cdr”是指抗体可变区中负责抗原结合的氨基酸残基。在重链和轻链的可变区中各含有三个cdr，命名为cdr1、cdr2和cdr3。这些cdr的精确边界可根据本领域已知的各种编号系统进行定义，例如可按照kabat编号系统(kabatetal.,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.,1991)、chothia编号系统(chothia&lesk(1987)j.mol.biol.196:901‑917；chothia等人(1989)nature342:878‑883)或imgt编号系统(lefrancetal.,dev.comparat.immunol.27:55‑77,2003)中的定义。对于给定的抗体，本领域技术人员将容易地鉴别各编号系统所定义的cdr。并且，不同编号系统之间的对应关系是本领域技术人员熟知的(例如，可参见lefrancetal.,dev.comparat.immunol.27:55‑77,2003)。105.如本文中所使用的，术语“构架区”或“fr”残基是指，抗体可变区中除了如上定义的cdr残基以外的那些氨基酸残基。106.术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，igg(例如，igg1，igg2，igg3或igg4亚型)，iga1，iga2，igd，ige或igm抗体。107.如本文中所使用的，术语抗体的“抗原结合片段”是指包含全长抗体的片段的多肽，其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合，其也被称为“抗原结合部分”。通常参见，fundamentalimmunology,ch.7(paul,w.,ed.,第2版，ravenpress,n.y.(1989)，其以其全文通过引用合并入本文，用于所有目的。可通过重组dna技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗体的抗原结合片段。抗原结合片段的非限制性实例包括fab、fab’、f(ab’)2、fd、fv、互补决定区(cdr)片段、scfv、双抗体(diabody)、单域抗体(singledomainantibody)、嵌合抗体、线性抗体(linearantibody)、纳米抗体(技术来自domantis)、probody和这样的多肽，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。工程改造的抗体变体综述于holliger等,2005；natbiotechnol,23:1126‑1136中。108.如本文中所使用的，术语“全长抗体”意指，由两条“全长重链”和两条“全长轻链”组成的抗体。其中，“全长重链”是指这样的多肽链，其在n端到c端的方向上由重链可变区(vh)、重链恒定区ch1结构域、铰链区(hr)、重链恒定区ch2结构域、重链恒定区ch3结构域组成；并且，当所述全长抗体为ige同种型时，任选地还包括重链恒定区ch4结构域。优选地，“全长重链”是在n端到c端方向上由vh、ch1、hr、ch2和ch3组成的多肽链。“全长轻链”是在n端到c端方向上由轻链可变区(vl)和轻链恒定区(cl)组成的多肽链。两对全长抗体链通过在cl和ch1之间的二硫键和两条全长重链的hr之间的二硫键连接在一起。本发明的全长抗体可以来自单一物种，例如人；也可以是嵌合抗体或人源化抗体。本发明的全长抗体包含分别由vh和vl对形成的两个抗原结合部位，这两个抗原结合部位特异性识别/结合相同的抗原。109.如本文中所使用的，术语“fd”意指由vh和ch1结构域组成的抗体片段；术语“dab片段”意指由vh结构域组成的抗体片段(ward等人,nature341:544546(1989))；术语“fab片段”意指由vl、vh、cl和ch1结构域组成的抗体片段；术语“f(ab’)2片段”意指包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个fab片段的抗体片段；术语“fab’片段”意指还原连接f(ab’)2片段中两个重链片段的二硫键后所获片段，由一条完整的轻链和重链的fd片段(由vh和ch1结构域组成)组成。110.如本文中所使用的，术语“fv”意指由抗体的单臂的vl和vh结构域组成的抗体片段。fv片段通常被认为是，能形成完整的抗原结合位点的最小抗体片段。一般认为，六个cdr赋予抗体的抗原结合特异性。然而，即便是一个可变区(例如fd片段，其仅仅含有三个对抗原特异的cdr)也能够识别并结合抗原，尽管其亲和力可能低于完整的结合位点。111.如本文中所使用的，术语“fc”意指，由抗体的第一重链的第二、第三恒定区与第二重链的第二、第三恒定区经二硫键结合而形成的抗体片段。抗体的fc片段具有多种不同的功能，但不参与抗原的结合。112.如本文中所使用的，术语“scfv”是指，包含vl和vh结构域的单个多肽链，其中所述vl和vh通过接头(linker)相连(参见，例如,bird等人,science242:423‑426(1988)；huston等人,proc.natl.acad.sci.usa85:5879‑5883(1988)；和pluckthun，thepharmacologyofmonoclonalantibodies，第113卷，roseburg和moore编，springer‑verlag，纽约，第269‑315页(1994))。此类scfv分子可具有一般结构：nh2‑vl‑接头‑vh‑cooh或nh2‑vh‑接头‑vl‑cooh。合适的现有技术接头由重复的ggggs氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(ggggs)4的接头，但也可使用其变体(holliger等人(1993)，proc.natl.acad.sci.usa90:6444‑6448)。可用于本发明的其他接头由alfthan等人(1995)，proteineng.8:725‑731，choi等人(2001)，eur.j.immunol.31:94‑106，hu等人(1996)，cancerres.56:3055‑3061，kipriyanov等人(1999)，j.mol.biol.293:41‑56和roovers等人(2001)，cancerimmunol.描述。在一些情况下，scfv的vh与vl之间还可以存在二硫键。在本发明的某些实施方案中，scfv可形成di‑scfv，其指的是两个或两个以上单个scfv串联而形成抗体。在本发明的某些实施方案中，scfv可形成(scfv)2，其指的是两个或两个以上单个scfv并联而形成抗体。113.如本文中所使用的，术语“双抗体”意指，其vh和vl结构域在单个多肽链上表达，但使用太短的连接体以致不允许在相同链的两个结构域之间配对，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并且产生两个抗原结合部位(参见，例如,holligerp.等人,proc.natl.acad.sci.usa90:6444‑6448(1993)，和poljakr.j.等人,structure2:1121‑1123(1994))。114.如本文中所使用的，术语“单域抗体(single‑domainantibody,sdab)”具有本领域技术人员通常理解的含义，其是指由单个单体可变抗体结构域(例如单个重链可变区)所组成的抗体片段，其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力。单域抗体也称为纳米抗体(nanobody)。115.上述各个抗体片段均保持了特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合。116.可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组dna技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体(例如本发明提供的抗体)获得抗体的抗原结合片段(例如，上述抗体片段)，并且以与用于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。117.在本文中，除非上下文明确指出，否则当提及术语“抗体”时，其不仅包括完整抗体，而且包括抗体的抗原结合片段。118.如本文中所使用的，术语“特异性结合”是指，两分子间的非随机的结合反应，如抗体和其所针对的抗原之间的反应。特异性结合相互作用的强度或亲和力可以该相互作用的平衡解离常数(kd)表示。在本发明中，术语“kd”是指特定抗体‑抗原相互作用的解离平衡常数，其用于描述抗体与抗原之间的结合亲和力。平衡解离常数越小，抗体‑抗原结合越紧密，抗体与抗原之间的亲和力越高。119.两分子间的特异性结合性质可使用本领域公知的方法进行测定。一种方法涉及测量抗原结合位点/抗原复合物形成和解离的速度。“结合速率常数”(ka或kon)和“解离速率常数”(kdis或koff)两者都可通过浓度及缔合和解离的实际速率而计算得出(参见malmqvistm,nature,1993,361:186‑187)。kdis/kon的比率等于解离常数kd(参见davies等人,annualrevbiochem,1990；59:439‑473)。可用任何有效的方法测量kd、kon和kdis值。在某些实施方案中，可以使用生物膜干涉技术(bli)或表面等离子体共振术(spr)来测量解离常数。120.如本文中所使用的，术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)或p1来源的人工染色体(pac)；噬菌体如λ噬菌体或m13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如sv40)。一种载体可以含有多种控制表达的元件，包括但不限于，启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。121.如本文中所使用的，术语“宿主细胞”是指，可用于导入载体的细胞，其包括但不限于，如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞，如s2果蝇细胞或sf9等的昆虫细胞，或者如纤维原细胞，cho细胞，cos细胞，nso细胞，hela细胞，bhk细胞，hek293细胞或人细胞等的动物细胞。122.如本文中所使用的，术语“同一性”用于指两个多肽之间或两个核酸之间序列的匹配情况。当两个进行比较的序列中的某个位置都被相同的碱基或氨基酸单体亚单元占据时(例如，两个dna分子的每一个中的某个位置都被腺嘌呤占据，或两个多肽的每一个中的某个位置都被赖氨酸占据)，那么各分子在该位置上是同一的。两个序列之间的“百分数同一性”是由这两个序列共有的匹配位置数目除以进行比较的位置数目×100的函数。例如，如果两个序列的10个位置中有6个匹配，那么这两个序列具有60％的同一性。例如，dna序列ctgact和caggtt共有50％的同一性(总共6个位置中有3个位置匹配)。通常，在将两个序列比对以产生最大同一性时进行比较。这样的比对可通过使用，例如，可通过计算机程序例如align程序(dnastar,inc.)方便地进行的needleman等人(1970)j.mol.biol.48：443‑453的方法来实现。还可使用已整合入align程序(版本2.0)的e.meyers和w.miller(comput.applbiosci.，4:11‑17(1988))的算法，使用pam120权重残基表(weightresiduetable)、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。此外，可使用已整合入gcg软件包(可在www.gcg.com上获得)的gap程序中的needleman和wunsch(jmoibiol.48:444‑453(1970))算法，使用blossum62矩阵或pam250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的缺口权重(gapweight)和1、2、3、4、5或6的长度权重来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。123.如本文中所使用的，术语“保守置换”意指不会不利地影响或改变包含氨基酸序列的蛋白/多肽的预期性质的氨基酸置换。例如，可通过本领域内已知的标准技术例如定点诱变和pcr介导的诱变引入保守置换。保守氨基酸置换包括用具有相似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基的置换，例如用在物理学上或功能上与相应的氨基酸残基相似(例如具有相似大小、形状、电荷、化学性质，包括形成共价键或氢键的能力等)的残基进行的置换。已在本领域内定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，优选用来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替代相应的氨基酸残基。鉴定氨基酸保守置换的方法在本领域内是熟知的(参见，例如，brummell等人，biochem.32:1180‑1187(1993)；kobayashi等人proteineng.12(10):879‑884(1999)；和burks等人proc.natlacad.setusa94:412‑417(1997)，其通过引用并入本文)。124.本文涉及的二十个常规氨基酸的编写遵循常规用法。参见例如，immunology‑asynthesis(2ndedition,e.s.golubandd.r.gren,eds.,sinauerassociates,sunderland,mass.(1991))，其以引用的方式并入本文中。在本发明中，术语“多肽”和“蛋白质”具有相同的含义且可互换使用。并且在本发明中，氨基酸通常用本领域公知的单字母和三字母缩写来表示。例如，丙氨酸可用a或ala表示。125.如本文中所使用的，术语“药学上可接受的载体和/或赋形剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如remington'spharmaceuticalsciences.editedbygennaroar,19thed.pennsylvania:mackpublishingcompany,1995)，并且包括但不限于：ph调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂，稀释剂，维持渗透压的试剂，延迟吸收的试剂，防腐剂。例如，ph调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液。表面活性剂包括但不限于阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂，例如tween‑80。离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂，例如对羟苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等。维持渗透压的试剂包括但不限于糖、nacl及其类似物。延迟吸收的试剂包括但不限于单硬脂酸盐和明胶。稀释剂包括但不限于水，水性缓冲液(如缓冲盐水)，醇和多元醇(如甘油)等。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂，例如硫柳汞，2‑苯氧乙醇，对羟苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等。稳定剂具有本领域技术人员通常理解的含义，其能够稳定药物中的活性成分的期望活性，包括但不限于谷氨酸钠，明胶，spga，糖类(如山梨醇，甘露醇，淀粉，蔗糖，乳糖，葡聚糖，或葡萄糖)，氨基酸(如谷氨酸，甘氨酸)，蛋白质(如干燥乳清，白蛋白或酪蛋白)或其降解产物(如乳白蛋白水解物)等。在某些示例性实施方案中，所述药学上可接受的载体或赋形剂包括无菌可注射液体(如水性或非水性悬浮液或溶液)。在某些示例性实施方案中，此类无菌可注射液体选自注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化钠溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性剂的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)、ringer氏溶液及其任意组合。126.如本文中所使用的，术语“预防”是指，为了阻止或延迟疾病或病症或症状(例如，sars‑cov‑2感染)在受试者体内的发生而实施的方法。如本文中所使用的，术语“治疗”是指，为了获得有益或所需临床结果而实施的方法。为了本发明的目的，有益或所需的临床结果包括(但不限于)减轻症状、缩小疾病的范围、稳定(即，不再恶化)疾病的状态，延迟或减缓疾病的发展、改善或减轻疾病的状态、和缓解症状(无论部分或全部)，无论是可检测或是不可检测的。此外，“治疗”还可以指，与期望的存活期相比(如果未接受治疗)，延长存活期。127.如本文中所使用的，术语“受试者”是指哺乳动物，例如人。在某些实施方案中，所述受试者(例如人)患有sars‑cov‑2感染或与sars‑cov‑2感染相关的疾病(例如covid‑19)，或者，具有患有上述疾病的风险。128.如本文中所使用的，术语“有效量”是指足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如，预防疾病(例如sars‑cov‑2感染)有效量是指，足以预防，阻止，或延迟疾病(例如sars‑cov‑2感染)的发生的量；治疗疾病有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如，对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。129.如本文中所使用的，术语“中和活性”是指抗体或抗体片段具有与病毒上的抗原蛋白相结合，从而阻止病毒感染细胞和/或病毒子代的成熟和/或病毒子代的释放的功能活性，具有中和活性的抗体或抗体片段可以阻止病毒的扩增，从而抑制或消除病毒的感染。130.发明的有益效果131.本发明的抗体能够特异性识别和靶向多种sars‑cov‑2突变株，并且显示出了高效的中和突变毒株的能力。因此，本发明的抗体特别适合用于诊断、预防和治疗sars‑cov‑2感染(特别是突变株感染)或与sars‑cov‑2感染相关的疾病(例如covid‑19)，具有重要临床价值。132.下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得显然。附图说明133.图1a‑1b分别显示了抗体bd812和bd836的sds‑page检测结果。134.图2a‑2b分别显示了使用bli技术检测抗体bd812和bd836与s蛋白的亲和力的测定结果。135.图3显示了抗体bd812和bd836结合突变株b.1.351rbd的结构解析。136.序列信息137.本发明涉及的部分序列的信息提供于下面的表1中。138.表1：序列的描述139.140.141.142.143.144.具体实施方式145.现参照下列意在举例说明本发明(而非限定本发明)的实施例来描述本发明。146.除非特别指明，本发明中所使用的分子生物学实验方法和免疫检测法，基本上参照j.sambrook等人，分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉港实验室出版社，1989，以及f.m.ausubel等人，精编分子生物学实验指南，第3版，johnwiley&sons,inc.，1995中所述的方法进行；限制性内切酶的使用依照产品制造商推荐的条件。本领域技术人员知晓，实施例以举例方式描述本发明，且不意欲限制本发明所要求保护的范围。147.以下实施例中所涉及的sars‑cov‑2突变株信息提供如下：148.b.1.1.7：https://en.wikipedia.org/wiki/sars‑cov‑2_alpha_variant149.b.1.351：https://en.wikipedia.org/wiki/sars‑cov‑2_beta_variant150.b.1.617.1：https://en.wikipedia.org/wiki/sars‑cov‑2_kappa_variant151.b.1.617.2：https://en.wikipedia.org/wiki/sars‑cov‑2_delta_variant152.实施例1：抗体bd812和bd836的制备153.1.1抗体序列的获得154.1)b细胞的分离155.采集感染sars‑cov‑2病毒且痊愈半年以上人员的血液(由北京佑安医院提供)，并提取外周血单核细胞。利用stemcelleasyseptmhumanbcellisolationkit(stemcell，17954)从外周血单核细胞中分离出b细胞。156.2)抗原特异性b细胞的富集及测序157.将抗原蛋白(rbd、s1、s2)与带有dna寡核苷酸及荧光的链酶亲和素组合成复合物：将rbd(sinobiological40592‑v27h‑b)与totalseqtm‑c0951pestreptavidin(biolegend405261)按照制造商的说明书组装成复合物，同理将s1(sinobiological40591‑v27h‑b)和totalseqtm‑c0952pestreptavidin(biolegend405263)、s2(sinobiological40590‑v08b‑b)totalseqtm‑c0956apcstreptavidin(biolegend405283)组装成复合物。158.用上述抗原蛋白链酶亲和素复合物和以下免疫细胞表面标志分子抗体对富集的b细胞进行染色孵育：brilliantviolet605tmanti‑humancd14antibody(biolegend367126)，brilliantviolet605tmanti‑humancd16antibody(biolegend302040)，fitcanti‑humancd19antibody(biolegend392508)，bv421‑humancd27antibody(biolegend302824)，利用贝克曼库尔特astrioseq流式细胞分选仪分选cd14阴性，cd16阴性，cd19阳性，cd27阳性，rbd或s1或s2阳性细胞。159.根据制造商的说明书，使用chromiumnextgemsinglecellv(d)jreagentkitsv1.1withfeaturebarcodetechnologyforcellsurfaceprotein对上述分选到的抗原特异性b细胞进行单细胞转录组、vdj、表面结合抗原寡核苷酸测序。对测序结果进行分析，获得两株抗体，分别命名为bd812，bd836。抗体的序列信息如下所示。[0160][0161]3)抗体的制备纯化[0162]根据鉴定到的抗体的序列信息，委托北京义翘神州有限公司表达和纯化bd812和bd836抗体。简言之，在体外合成编码抗体重链和轻链的基因序列，分别克隆到表达载体中。将分别编码抗体重链和轻链的重组表达载体质粒与转染试剂(sinobiologicals，stf02)混合后共转染用293无血清cd培养基(sinobiologicals，smm293‑ti)传代培养的hek293细胞。转染后第1,3,5天添加293无血清加料液(sinobiologicals，m293‑supi‑100)。细胞在5％co2，温度37℃条件下摇瓶培养7天后进行蛋白纯化。培养料液离心后，用滤器过滤，通过proteina亲和纯化柱从培养物中纯化目标抗体蛋白。随后，通过还原性和非还原性sds‑page检测所纯化的目的蛋白。两株抗体的电泳结果分别如图1a‑1b所示。结果显示，经纯化的bd812和bd836抗体的纯度分别为96.6％和97.3％。[0163]实施例2：抗体bd812和bd836抗原结合能力的鉴定[0164]使用重组表达的rbd(sinobiologicals，cat:40592‑v08b，其包含rbd片段序列yp_009724390.1以及his标签)作为包被抗原，使用辣根过氧化物酶(hrp)标记的goatanti‑humanigg(h l)(jackson,109‑036‑088)作为二抗，通过elisa实验检测纯化的抗原反应特异性。简言之，用重组表达的s蛋白rbd(其氨基酸序列为seqidno:41)包被96孔板，随后用封闭液对96孔板进行封闭。然后，分别加入待测单抗(无关对照抗体，bd812，bd836)并孵育。用elisa洗涤液进行洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的goatanti‑humanigg(h l)作为二抗(以1:5000稀释)，并继续孵育。用pbst洗涤酶标板，加入显色剂显色。随后在酶标仪(thermomk3)上读取od450的吸收值。结果如表2所示。表2的结果显示，bd812、bd836均能够特异性识别并结合s蛋白rbd。[0165]表2：通过elisa检测的抗体与s蛋白rbd的反应性(od450读数)[0166][0167]此外，还采用生物膜干涉技术(bli)检测抗体与spike蛋白rbd区域的亲和力。使用蛋白相互作用仪red384进行测量，样品制备过程如下：1)使用pbst溶液将2019‑ncovspikerbdprotein(40592‑v08h)稀释到15.1nm,7.54nm,3.77nm,1.88nm,0.942nm,0.471nm和0nm；2)使用pbst溶液分别将待测抗体稀释到0.5μg/ml；分析过程如下：在pbst溶液中用ahc探针捕获待测抗体；随后与2019‑ncovspikerbdprotein(40592‑v08h)进行反应，充分反应后的固相结合物在pbst缓冲液中进行解离分析。以dataanalysis软件对结果分析，获得结合速率、解离速率及亲和力常数。结果如表3及图2a‑2b所示，结果表明bd812和bd836两株抗体与新型冠状病毒s蛋白具有良好的亲和力。[0168]表3：待测抗体的亲和力分析结果[0169][0170]实施例3：抗体bd812和bd836中和假病毒能力的评估[0171]本实验所使用的sars‑cov‑2假病毒(突变株假病毒)由中国食品药品检定研究院提供，该假病毒能模拟真病毒相似的细胞感染特点，并且携带荧光素报告基因用于检测，实验步骤可参考：nie,j.,li,q.,wu,j.etal.quantificationofsars‑cov‑2neutralizingantibodybyapseudotypedvirus‑basedassay.natprotoc15,3699–3715(2020).https://doi.org/10.1038/s41596‑020‑0394‑5。具体步骤如下：[0172]1)96孔板中样品的排布方式如下：b2‑g2为细胞对照孔(cc)，含有huh‑7细胞，不含抗体样本和假病毒；b3‑g3为病毒对照孔(vc)，含有huh‑7细胞和假病毒，不含抗体样本；b4‑g11的孔为实验孔，含有不同稀释梯度的抗体、细胞和假病毒。huh‑7细胞由中国食品药品检定研究院提供。[0173]孔板中样品的排布方式：[0174][0175]2)向第二列cc孔中加入150μl的dmem完全培养基(含有1％双抗，25mmhepes，10％fbs)，向第3‑11列中加入150μldmem完全培养基，向b4‑b11孔中再加入49μl的完全培养基。[0176]3)向b4‑b11孔中加入抗体样品。用多道移液对c到g排进行梯度稀释。[0177]4)用dmem完全培养基将假病毒稀释至1.3×104tcid50/ml，向3‑11列加入50ul假病毒。[0178]5)将96孔板放置于细胞培养箱中(37℃，5％co2)孵育1小时。[0179]6)将huh‑7细胞消化并稀释至浓度为2×105个/ml，向每孔中中加入100μl的细胞。然后在细胞培养箱中培养24小时。[0180]7)培养后从每孔中吸弃150μl上清，然后加入100μl荧光素酶底物和裂解试剂(perkinelmer,6066769)，在室温下避光孵育2分钟。从每孔内吸出150μl液体转移到对应的96孔化学发光检测板中，用多功能酶标仪(perkinelmerensight)读取发光值。[0181]8)计算中和抑制率：抑制率＝[1－(实验孔的发光强度均值－cc孔的发光强度均值)/(vv孔的发光强度均值－cc孔的发光强度均值)]×100％。[0182]9)利用二参数非线形回归拟合抑制曲线，计算待测抗体的半数抑制浓度ic50。[0183]实验结果如表3所示，bd812、bd836抗体对多种sars‑cov‑2突变株包括who正在密切关注的b.1.351、b.1.1.7、b.1.617.1、b.1.617.2变异株的假病毒均具有良好的中和活性。[0184]表3：抗体中和假病毒的ic50测定结果[0185][0186]实施例4：抗体bd812和bd836结合突变体rbd的结构解析[0187]4.1蛋白表达和纯化[0188]s6p表达载体编码刺突蛋白胞外域(1‑1208位氨基酸)，有六个脯氨酸突变(f817p，a892p，a899p，a942p，k986p和v987p)和furin位点(682‑685位氨基酸)的“gsas”替换。b.1.351s6p在此基础上添加了l18f，d80a，δ242‑244，d215g，k417n，e484k，n501y，d614g和a701v突变。s6p胞外域蛋白的表达：将s6p(b.1.351)质粒和pei混和转染hek293f细胞，s6p(b.1.351)蛋白从培养基中使用ni‑nta树脂提取，用s6凝胶过滤层析柱将蛋白置换到20mmhepes,ph7.2,和150mmnacl的缓冲液中。为了纯化抗体fab片段，编码抗体重链区和轻链区的质粒共转入hek293f细胞，重链区编码质粒的c端带有6×his标签。抗体fab片段从培养基中使用ni‑nta树脂提取，用s200凝胶过滤层析柱将蛋白置换到最终缓冲液中。[0189]4.2冷冻电镜数据的收集，处理和结构搭建[0190]冷冻电镜样品的制备：4μls6p(b.1.351)蛋白，浓度为7mg/ml,与相同体积的bd‑812和bd‑836的fab区(各1mg/ml)混合，在feivitrobotiv(4摄氏度和100％湿度)的环境中，迅速加至经辉光放电处理后的金网(quantifoil,r1.2/1.3)，而后在液态乙烷中完成制备。使用talosarctica(200kv)对样品进行筛选，筛选好的样品使用titankrios(300kv)，k3相机进行数据的收集。[0191]用cryosparc进行图像的处理，使用patchmotioncorrection(multi)进行图片的漂移校正和电子剂量加权。对比度传递函数(ctf)参数使用patchctfestimation(multi)进行估计。manuallycurateexposures选择合格的图片用于进一步的处理，使用blobpicker和基于模板的templatepicker进行颗粒的挑选，提取所选颗粒进行二维分类以除去噪音和垃圾颗粒。选择好的二维分类模板颗粒进行三维重建(ab‑initioreconstruction)和三维分类(heterogeneousrefinement),收集合格的颗粒进行细化精修(homogeneousrefinement)。为了提高fab和rbd相互作用界面的局部分辨率，使用包含bd‑812和bd‑836的fab和rbd的mask进行局部细化(lcalrefinement)，mask使用ucsfchimera和relion制作，使用cryosparc计算局部分辨率。使用coot和phenix进行结构的建模和精修。ucsfchimerax进行图的绘制。[0192]bd812fab、bd836fab与突变株b.1.351rbd结构如图3所示。结果显示，bd812和bd836以非竞争的方式分别与rbd的右肩和左肩结合，分别覆盖rbd上和表面积。bd812的表位既不涉及leu452也不涉及thr478，这解释了其对b.1.617.2(delta)突变株的中和活性。bd836也不与leu452相互作用。bd812和bd836都与rbd和ace2的结合界面发生冲突。[0193]尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，但本领域技术人员将理解：根据已经公布的所有教导，可以对细节进行各种修改和变动，并且这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部分为由所附权利要求及其任何等同物给出。当前第1页12当前第1页12
技术领域：
：1.本发明涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是sars‑cov‑2的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本发明提供了可识别sars‑cov‑2突变株的单克隆抗体，以及包含所述抗体的组合物(例如，诊断剂和治疗剂)。此外，本发明还涉及所述抗体的用途。本发明的抗体可用于诊断、预防和/或治疗sars‑cov‑2感染和/或由所述感染引起的疾病(例如，covid‑19)。
背景技术：
：：2.全球疫苗接种可能是结束sars‑cov‑2大流行不可避免的手段。目前的疫苗主要通过引发对源自早期分离株的刺突蛋白的中和抗体反应从而起到保护作用。然而，出现了具有多个突变的突变株，例如b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1和b.1.617.2等，现有疫苗的有效性可能会受到影响。因此需要寻找更为有效的、针对上述突变毒株的中和抗体，提供有效的诊断、预防和/或治疗突变株感染的手段，从而助力疫情的稳定与消除。技术实现要素：3.本技术发明人经过大量的实验研究后发现了一种抗体，其能够特异性识别和靶向多种sars‑cov‑2突变株的s蛋白，特别是s蛋白的受体结合结构域(rbd)，并且显示出了高效的中和突变毒株的能力。因此，本发明的抗体特别适合用于诊断、预防和治疗sars‑cov‑2感染(特别是突变株感染)或与sars‑cov‑2感染相关的疾病(例如covid‑19)。4.本发明的抗体5.在一个方面，本发明提供了一种抗体或其抗原结合片段，其包含：6.(a)包含下述3个互补决定区(cdrs)的重链可变区(vh)：序列为seqidno:1的vhcdr1、序列为seqidno:2的vhcdr2、序列为seqidno:3的vhcdr3；和/或，包含下述3个互补决定区(cdrs)的轻链可变区(vl)：序列为seqidno:4的vlcdr1、序列为seqidno:5的vlcdr2、序列为seqidno:6的vlcdr3；或7.(b)包含下述3个互补决定区(cdrs)的重链可变区(vh)：序列为seqidno:21的vhcdr1、序列为seqidno:22的vhcdr2、序列为seqidno:23的vhcdr3；和/或，包含下述3个互补决定区(cdrs)的轻链可变区(vl)：序列为seqidno:24的vlcdr1、序列为seqidno:25的vlcdr2、序列为seqidno:26的vlcdr3。8.在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：9.(a)重链可变区(vh)，其包含seqidno：7所示的序列或其变体；和/或，轻链可变区(vl)，其包含seqidno：8所示的序列或其变体；或，10.(b)重链可变区(vh)，其包含seqidno：27所示的序列或其变体；和/或，轻链可变区(vl)，其包含seqidno：28所示的序列或其变体；11.其中，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)，或具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；优选地，所述的置换是保守置换。12.在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含如seqidno:7所示的序列的vh和包含如seqidno:8所示的序列的vl。13.在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含如seqidno:27所示的序列的vh和包含如seqidno:28所示的序列的vl。14.在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段可以进一步包含来源于哺乳动物(例如，人)免疫球蛋白的恒定区序列或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加。15.在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含人免疫球蛋白的重链恒定区(ch)或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；和/或，16.本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含人免疫球蛋白的轻链恒定区(cl)或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的保守置换)。17.在一些实施方案中，所述重链恒定区(ch)的变体与其所源自的序列相比可以具有一个或多个氨基酸的保守置换。在此类实施方案中，所述重链恒定区(ch)的变体与其所源自的野生型序列相比可以具有相同或基本相同的效应子功能。18.在另一些实施方案中，所述重链恒定区(ch)的变体可以包含一个或多个氨基酸突变以改变本发明抗体的下列中的一个或更多个特性：fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基的数目、效应细胞功能或补体功能等。可以通过将抗体恒定区中的至少一个氨基酸残基替换为不同残基，产生功能改变，例如，改变抗体对效应子配体(如fcr或补体c1q)的亲和力，从而改变效应子功能(例如降低)。抗体的fc区介导几种重要的效应子功能，例如adcc、吞噬作用、cdc等。19.在某些实施方案中，所述重链恒定区是igg重链恒定区，例如igg1、igg2、igg3或igg4重链恒定区。在某些实施方案中，所述重链恒定区是人igg1、igg2、igg3或igg4重链恒定区。20.在某些实施方案中，所述轻链恒定区是κ轻链恒定区。在某些实施方案中，所述轻链恒定区是人κ轻链恒定区。21.在某些示例性实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如seqidno:9所示的重链恒定区(ch)和/或如seqidno:10所示的轻链恒定区(cl)。22.在某些示例性实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如seqidno:29所示的重链恒定区(ch)和/或如seqidno:30所示的轻链恒定区(cl)。23.在某些示例性实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：含有如seqidno:7所示的vh以及如seqidno:9所示的ch的重链，和/或，含有如seqidno:8所示的vl以及如seqidno:10所示的cl的轻链。24.在某些示例性实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：含有如seqidno:27所示的vh以及如seqidno:29所示的ch的重链，和/或，含有如seqidno:28所示的vl以及如seqidno:30所示的cl的轻链。25.在某些实施方案中，所述抗原结合片段选自fab、fab’、(fab’)2、fv、二硫键连接的fv、scfv、双抗体(diabody)和单域抗体(sdab)。在某些实施方案中，所述抗体为嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。26.在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段具备以下特征中的1项或多项：27.(1)特异性结合sars‑cov‑2的s蛋白的rbd；28.(2)以小于约5nm，例如小于约4nm、3nm、2nm、1nm、0.5nm、0.1nm或更低的kd结合sars‑cov‑2的s蛋白的rbd；优选地，所述kd通过生物膜干涉技术(bli)测定；29.(3)阻断或抑制sars‑cov‑2对ace2受体的结合，和/或阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染；所述sars‑cov‑2包括突变株，例如b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1和/或b.1.617.2；30.(4)在体外或受试者(例如人)体内中和sars‑cov‑2；所述sars‑cov‑2包括突变株，例如b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1和/或b.1.617.2；31.(5)预防和/或治疗sars‑cov‑2感染或由sars‑cov‑2感染所导致的疾病(例如covid‑19)，所述sars‑cov‑2包括突变株，例如b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1和/或b.1.617.2。32.在本文中，本发明的抗体或其抗原结合片段可以包括这样的变体，所述变体与其所源自的抗体或其抗原结合片段相比差异仅在于一个或多个(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换)氨基酸残基的保守置换，或者与其所源自的抗体或其抗原结合片段具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，且基本保留了其所源自的抗体或其抗原结合片段的上述生物学功能。33.抗体的制备34.本发明的抗体可以本领域已知的各种方法来制备，例如通过基因工程重组技术来获得。例如，通过化学合成或pcr扩增获得编码本发明抗体的重链和轻链基因的dna分子。将所得dna分子插入表达载体内，然后转染宿主细胞。然后，在特定条件下培养转染后的宿主细胞，并表达本发明的抗体。35.本发明的抗原结合片段可以通过水解完整的抗体分子获得(参见morimotoetal.,j.biochem.biophys.methods24:107‑117(1992)andbrennanetal.,science229:81(1985))。另外，这些抗原结合片段也可以直接由重组宿主细胞产生(reviewedinhudson,curr.opin.immunol.11:548‑557(1999)；littleetal.,immunol.today,21:364‑370(2000))。比如，fab’片段可以直接从宿主细胞中获得；可以将fab’片段化学偶联形成f(ab’)2片段(carteretal.,bio/technology,10:163‑167(1992))。另外，fv、fab或f(ab’)2片段也可以直接从重组宿主细胞培养液中直接分离得到。本领域的普通技术人员完全知晓制备这些抗原结合片段的其它技术。36.因此，在另一个方面，本发明提供了一种分离的核酸分子，其包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区的核苷酸序列。在某些实施方案中，所述分离的核酸分子编码本发明的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区。37.在某些实施方案中，所述分离的核酸分子包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链或重链可变区的第一核苷酸序列和编码所述抗体或其抗原结合片段的轻链或轻链可变区的第二核苷酸序列，其中所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列存在于相同或不同的分离的核酸分子上。当所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列存在于不同的分离的核酸分子上时，本发明所述的分离的核酸分子包含含有所述第一核苷酸序列的第一核酸分子以及含有所述第二核苷酸序列的第二核酸分子。38.在某些实施方案中，所述第一核苷酸序列包含seqidnos:11‑13所示的序列，例如包含seqidno:17所示的序列；和/或，所述第二核苷酸序列包含seqidnos:14‑16所示的序列，例如包含seqidno:18所示的序列。39.在某些实施方案中，所述第一核苷酸序列包含seqidnos:31‑33所示的序列，例如包含seqidno:37所示的序列；和/或，所述第二核苷酸序列包含seqidnos:34‑36所示的序列，例如包含seqidno:38所示的序列。40.在另一个方面，本发明提供了一种载体(例如克隆载体或表达载体)，其包含如上所述的分离的核酸分子。在某些实施方案中，本发明的载体是例如质粒，粘粒，噬菌体等。41.在某些实施方案中，所述载体包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链或重链可变区的第一核苷酸序列和编码所述抗体或其抗原结合片段的轻链或轻链可变区的第二核苷酸序列，其中所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列存在于相同或不同的载体上。当所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列存在于不同的载体上时，本发明所述的载体包含含有所述第一核苷酸序列的第一载体以及含有所述第二核苷酸序列的第二载体。42.在某些实施方案中，所述载体包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链可变区的第一核苷酸序列，和/或编码本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的第二核苷酸序列；其中所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列被提供在相同或不同的载体上。43.在某些实施方案中，所述载体包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链的第一核苷酸序列，和/或编码本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链的第二核苷酸序列；其中所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列被提供在相同或不同的载体上。44.在另一个方面，本发明提供了一种宿主细胞，其包含如上所述的分离的核酸分子或载体。此类宿主细胞包括但不限于，原核细胞例如细菌细胞(如大肠杆菌细胞)，以及真核细胞例如真菌细胞(例如酵母细胞)，昆虫细胞，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)。在某些实施方案中，本发明的宿主细胞是哺乳动物细胞，例如hek293。45.在另一个方面，提供了制备本发明的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养如上所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。46.药物组合物及治疗用途47.本发明的抗体或其抗原结合片段可用于体外或在受试者体内中和sars‑cov‑2，阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染，从而达到预防和/或治疗受试者的sars‑cov‑2感染或与sars‑cov‑2感染相关的疾病的目的。48.因此，在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其含有本发明的抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。49.在某些示例性实施方案中，所述药学上可接受的载体和/或赋形剂包含无菌可注射液体(如水性或非水性悬浮液或溶液)。在某些示例性实施方案中，此类无菌可注射液体选自注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化钠溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性剂的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)、ringer氏溶液及其任意组合。50.在另一个方面，本发明提供了用于中和sars‑cov‑2、阻断或抑制sars‑cov‑2对ace2受体的结合、或阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染的方法，其包括使用本发明的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。所述方法可用于在体外或受试者(例如人)体内中和sars‑cov‑2、阻断或抑制sars‑cov‑2对ace2受体的结合或阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染。51.在某些实施方案中，所述方法用于中和样品中sars‑cov‑2的毒力、阻断或抑制sars‑cov‑2对ace2受体的结合、或阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染。在某些实施方案中，所述方法包括：将包含sars‑cov‑2的样品与本发明的抗体或其抗原结合片段或药物组合物接触。52.在某些实施方案中，所述sars‑cov‑2包括突变株。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白含有突变，例如氨基酸置换、缺失或添加。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白包含选自k417n、e484k、n501y、l452r、t478k中的一个或多个氨基酸置换。在某些实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2或其任意组合。53.在另一个方面，本发明提供了用于预防或治疗受试者的sars‑cov‑2感染或与sars‑cov‑2病毒感染相关的疾病(例如covid‑19)的方法，其包括：给有此需要的受试者施用有效量的本发明的抗体或其抗原结合片段、或药物组合物。54.在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段单独使用，或与另外的药学活性剂(例如另外的抗病毒剂)联合使用。本发明的抗体或其抗原结合片段与所述另外的药学活性剂可以同时、分开或相继施用。55.在某些实施方案中，所述sars‑cov‑2包括突变株。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白含有突变，例如氨基酸置换、缺失或添加。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白包含选自k417n、e484k、n501y、l452r、t478k中的一个或多个氨基酸置换。在某些实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2或其任意组合。56.在另一个方面，本发明涉及本发明的抗体或其抗原结合片段、或药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于下列的一项或多项：57.(1)在体外或受试者(例如人)体内中和sars‑cov‑2；58.(2)阻断或抑制sars‑cov‑2对ace2受体的结合；59.(3)阻断或抑制sars‑cov‑2对细胞的感染；和/或60.(4)用于预防和/或治疗受试者的sars‑cov‑2感染或与sars‑cov‑2感染相关的疾病(例如covid‑19)。61.在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段单独使用，或与另外的药学活性剂(例如另外的抗病毒剂)联合使用。62.在某些实施方案中，所述sars‑cov‑2包括突变株。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白含有突变，例如氨基酸置换、缺失或添加。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白包含选自k417n、e484k、n501y、l452r、t478k中的一个或多个氨基酸置换。在某些实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2或其任意组合。63.本发明的抗体或其抗原结合片段、或本发明的药物组合物可以配制成医学领域已知的任何剂型，例如，片剂、丸剂、混悬剂、乳剂、溶液、凝胶剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、锭剂、栓剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、吸入剂、喷雾剂等。优选剂型取决于预期的给药方式和治疗用途。本发明的抗体或其抗原结合片段或药物组合物应当是无菌的并在生产和储存条件下稳定。一种优选的剂型是注射剂。此类注射剂可以是无菌注射溶液。例如，可通过下述方法来制备无菌注射溶液：在适当的溶剂中掺入必需剂量的本发明的抗体或其抗原结合片段，以及任选地，同时掺入其他期望的成分(包括但不限于，ph调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂，等渗剂、防腐剂、稀释剂，或其任何组合)，随后过滤除菌。此外，可以将无菌注射溶液制备为无菌冻干粉剂(例如，通过真空干燥或冷冻干燥)以便于储存和使用。此类无菌冻干粉剂可在使用前分散于合适的载体中，例如注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化钠溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性剂的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)、ringer氏溶液及其任意组合。64.本发明的抗体或其抗原结合片段、或本发明的药物组合物可以通过本领域已知的任何合适的方法来施用，包括但不限于，口服、口腔、舌下、眼球、局部、肠胃外、直肠、叶鞘内、内胞浆网槽内、腹股沟、膀胱内、局部(如，粉剂、药膏或滴剂)，或鼻腔途径。但是，对于许多治疗用途而言，优选的给药途径/方式是胃肠外给药(例如静脉注射或推注，皮下注射，腹膜内注射，肌内注射)。技术人员应理解，给药途径和/或方式将根据预期目的而发生变化。在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段或药物组合物通过静脉注射或推注给予。65.本发明的药物组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明的抗体或其抗原结合片段。“预防有效量”是指，足以预防，阻止，或延迟疾病的发生的量。“治疗有效量”是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。本发明的抗体或其抗原结合片段的治疗有效量可根据如下因素发生变化：待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。66.在本文中，可调整给药方案以获得最佳目的反应(例如治疗或预防反应)。例如，可以单次给药，可以在一段时间内多次给药，或者可以随治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。67.在本文中，所述受试者可以为哺乳动物，例如人。68.缀合物69.本发明的抗体或其抗原结合片段可进行衍生化，例如被连接至另一个分子(例如另一个多肽或蛋白)。通常，抗体或其抗原结合片段的衍生化(例如，标记)不会不利影响其对sars‑cov‑2的结合。因此，本发明的抗体或其抗原结合片段还意欲包括此类衍生化的形式。例如，可以将本发明的抗体或其抗原结合片段功能性连接(通过化学偶合、基因融合、非共价连接或其它方式)于一个或多个其它分子基团，例如另一个抗体(例如，形成双特异性抗体)，检测试剂，药用试剂，和/或能够介导抗体或抗原结合片段与另一个分子结合的蛋白或多肽(例如，抗生物素蛋白或多组氨酸标签)。此外，本发明的抗体或其抗原结合片段还可以用化学基团进行衍生，例如聚乙二醇(peg)，甲基或乙基，或者糖基。这些基团可用于改善抗体的生物学特性，例如增加血清半衰期。70.因此，在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段带有可检测标记。71.在本文中，本发明所述的可检测的标记可以是可通过荧光、光谱、光化学、生物化学、免疫学、电学、光学或化学手段检测的任何物质。这类标记是本领域熟知的，其实例包括但不限于，酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β‑半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶，等)、放射性核素(例如，3h、125i、35s、14c或32p)、荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(fitc)、荧光素、异硫氰酸四甲基罗丹明(tritc)、藻红蛋白(pe)、德克萨斯红、罗丹明、量子点或花菁染料衍生物(例如cy7、alexa750))、发光物质(例如化学发光物质，如吖啶酯类化合物、鲁米诺及其衍生物、钌衍生物如三联吡啶钌)、磁珠(例如，)、测热标记物例如胶体金或有色玻璃或塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶，等)珠、以及用于结合上述标记物修饰的亲和素(例如，链霉亲和素)的生物素。72.在某些实施方案中，所述可检测的标记能够适用于免疫学检测(例如，酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等)。在某些实施方案中，所述可检测的标记可以选自酶(例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或β‑半乳糖苷酶)、化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物、鲁米诺及其衍生物、或钌衍生物)、荧光染料(例如荧光素或荧光蛋白，如fitc、tritc或pe)、放射性核素或生物素。73.在某些实施方案中，可通过不同长度的接头(linker)将如上所述的可检测的标记连接至本发明的抗体或其抗原结合片段，以降低潜在的位阻。74.试剂盒及检测用途75.本发明的抗体或其抗原结合片段能够特异性结合sars‑cov‑2的s蛋白的rbd，从而可用于检测sars‑cov‑2或其s蛋白或s蛋白的rbd，以及任选地根据上述检测结果来诊断受试者是否感染了sars‑cov‑2。76.因此，在另一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括本发明的抗体或其抗原结合片段、或本发明的缀合物。77.在一些实施方案中，所述试剂盒包含本发明的缀合物。78.在另一些实施方案中，所述试剂盒包含本发明的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段不包含可检测的标记。在某些实施方案中，所述试剂盒进一步包含特异性识别本发明的抗体或其抗原结合片段的第二抗体；任选地，所述第二抗体还包括可检测的标记，例如酶(例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物、鲁米诺及其衍生物、或钌衍生物)、荧光染料(例如荧光素或荧光蛋白)、放射性核素或生物素。79.在某些实施方案中，所述第二抗体对本发明的抗体或其抗原结合片段所包含的恒定区所来自的物种(例如人)的抗体是特异的。80.在某些实施方案中，所述第二抗体是抗‑免疫球蛋白(例如人的免疫球蛋白)抗体，例如抗igg抗体。在某些实施方案中，所述第二抗体是抗人igg抗体。81.在某些实施方案中，本发明的试剂盒可以进一步包含用于使相应可检测的标记被检测到的试剂。例如，当所述可检测的标记为酶时，所述试剂盒还可以包含相应酶的显色底物，例如用于辣根过氧化物酶的邻苯二胺(opd)、四甲基联苯胺(tmb)、abts或鲁米诺类化合物，或用于碱性磷酸酶的对硝基苯磷酸酯(p‑npp)或amppd。例如当所述可检测的标记为化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物)时，所述试剂盒还可以包含用于化学发光的预激发液和/或激发液。82.在另一个方面，本发明提供了检测sars‑cov‑2或其s蛋白或s蛋白的rbd、或被sars‑cov‑2感染的细胞在样品中的存在或其水平的方法，其包括使用本发明的抗体或其抗原结合片段。83.在某些实施方案中，所述方法是免疫学检测，例如酶免疫测定法(例如elisa)、化学发光免疫分析法、荧光免疫分析法或放射免疫测定法。84.在一些实施方案中，所述方法包括使用本发明的缀合物。85.在另一些实施方案中，所述方法包括使用本发明的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段不包含可检测的标记。在某些实施方案中，所述方法还包括使用带有可检测的标记(例如酶(例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物、鲁米诺及其衍生物、或钌衍生物)、荧光染料(例如荧光素或荧光蛋白)、放射性核素或生物素)的第二抗体来检测所述抗体或其抗原结合片段。86.在某些实施方案中，所述第二抗体对本发明的抗体或其抗原结合片段所包含的恒定区所来自的物种(例如人)的抗体是特异的。87.在某些实施方案中，所述第二抗体是抗‑免疫球蛋白(例如人的免疫球蛋白)抗体，例如抗igg抗体。在某些实施方案中，所述第二抗体是抗人igg抗体。88.在某些实施方案中，所述方法包括：(1)将所述样品与本发明的抗体或其抗原结合片段接触；(2)检测抗原‑抗体免疫复合物的形成或检测所述免疫复合物的量。所述免疫复合物的形成表明存在sars‑cov‑2或被sars‑cov‑2感染的细胞。89.在某些实施方案中，所述方法可以用于诊断目的，例如可以根据sars‑cov‑2在样品中的存在或其水平来诊断受试者是否感染了sars‑cov‑2。在此类实施方案中，所述样品可以为来自受试者(例如哺乳动物，优选人)的血液样品(例如，全血、血浆或血清)、排泄物、口腔或鼻腔分泌物、或肺泡灌洗液。90.在某些实施方案中，所述方法可以用于非诊断目的，例如所述样品并非来自受试者的样品，例如疫苗样品。91.在某些实施方案中，所述受试者是哺乳动物，例如人。92.在某些实施方案中，所述sars‑cov‑2包括突变株。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白含有突变，例如氨基酸置换、缺失或添加。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白包含选自k417n、e484k、n501y、l452r、t478k中的一个或多个氨基酸置换。在某些实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2或其任意组合。93.在另一个方面，提供了本发明的抗体或其抗原结合片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测sars‑cov‑2或其s蛋白或s蛋白的rbd、或被sars‑cov‑2感染的细胞在样品中的存在或其水平，和/或用于诊断受试者是否感染了sars‑cov‑2。94.在某些实施方案中，所述方法是免疫学测定，例如酶免疫测定法(例如elisa)、化学发光免疫分析法、荧光免疫分析法或放射免疫测定法。95.在某些实施方案中，所述试剂盒通过如上所述的检测方法来检测sars‑cov‑2或其s蛋白或s蛋白的rbd、或被sars‑cov‑2感染的细胞在样品中的存在或其水平，以及任选地根据所述检测结果诊断受试者是否感染了sars‑cov‑2。96.在某些实施方案中，所述样品为来自受试者(例如哺乳动物，优选人)的血液样品(例如，全血、血浆或血清)、排泄物、口腔或鼻腔分泌物、或肺泡灌洗液。97.在某些实施方案中，所述sars‑cov‑2包括突变株。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白含有突变，例如氨基酸置换、缺失或添加。在某些实施方案中，所述突变株的s蛋白包含选自k417n、e484k、n501y、l452r、t478k中的一个或多个氨基酸置换。在某些实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2或其任意组合。98.术语定义99.在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的病毒学、生物化学、核酸化学、免疫学等实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。100.如本文中所使用的，“严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2，sars‑cov‑2)”，旧称为“新型冠状病毒”或“2019‑ncov”，属于其β冠状病毒属，为含包膜的单链正义rna病毒。sars‑cov‑2至少含有三种膜蛋白，包括表面刺突蛋白(s)、整合膜蛋白(m)和膜蛋白(e)。sars‑cov‑2的受体与sars‑cov一样，均是通过s蛋白上的受体结合结构域(receptorbindingdomain,rbd)与宿主细胞上的血管紧张素转移酶2(ace2)特异性结合后接到了病毒的膜融合和入胞，在病毒感染细胞过程中起着至关重要的作用。101.在本文中，术语“sars‑cov‑2”包含已知的各种分离株，例如既包括原始毒株(例如第一个被测序的分离株genbank：mn908947.3)，也包括后续被发现的突变株。在某些实施方案中，术语“sars‑cov‑2”既包含其spikeprotein不包含突变(例如与参照株mn908947.3相比)的分离株，也包含在其spikeprotein中包含突变(例如与参照株mn908947.3相比的氨基酸置换，例如k417n、e484k、n501y、l452r、t478k或其任意组合)的分离株。在某些实施方案中，所述突变株优选地选自在其spikeprotein中包含突变(例如氨基酸置换，例如k417n、e484k、n501y、l452r、t478k或其任意组合)的分离株。在某些示例性实施方案中，所述突变株选自b.1.1.7、b.1.351、b.1.617.1、b.1.617.2。102.如本文中所使用的，术语“新型冠状病毒肺炎”和“covid‑19”是指，因sars‑cov‑2感染而导致的肺炎，二者具有相同的含义，可互换使用。103.如本文中所使用的，术语“抗体”是指，通常由两对多肽链(每对具有一条轻链(lc)和一条重链(hc))组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ(kappa)和λ(lambda)轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为igm、igd、igg、iga和ige。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“j”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“d”区。各重链由重链可变区(vh)和重链恒定区(ch)组成。重链恒定区由3个结构域(ch1、ch2和ch3)组成。各轻链由轻链可变区(vl)和轻链恒定区(cl)组成。轻链恒定区由一个结构域cl组成。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应子功能，如可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(c1q)的结合。vh和vl区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(cdr))，其间散布有较保守的称为构架区(fr)的区域。各vh和vl由按下列顺序：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4从氨基末端至羧基末端排列的3个cdr和4个fr组成。各重链/轻链对的可变区(vh和vl)分别形成抗原结合部位。氨基酸在各区域或结构域的分配可遵循kabat,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1987and1991))，或chothia&lesk(1987)j.mol.biol.196:901‑917；chothia等人(1989)nature342:878‑883的定义。104.如本文中所使用的，术语“互补决定区”或“cdr”是指抗体可变区中负责抗原结合的氨基酸残基。在重链和轻链的可变区中各含有三个cdr，命名为cdr1、cdr2和cdr3。这些cdr的精确边界可根据本领域已知的各种编号系统进行定义，例如可按照kabat编号系统(kabatetal.,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.,1991)、chothia编号系统(chothia&lesk(1987)j.mol.biol.196:901‑917；chothia等人(1989)nature342:878‑883)或imgt编号系统(lefrancetal.,dev.comparat.immunol.27:55‑77,2003)中的定义。对于给定的抗体，本领域技术人员将容易地鉴别各编号系统所定义的cdr。并且，不同编号系统之间的对应关系是本领域技术人员熟知的(例如，可参见lefrancetal.,dev.comparat.immunol.27:55‑77,2003)。105.如本文中所使用的，术语“构架区”或“fr”残基是指，抗体可变区中除了如上定义的cdr残基以外的那些氨基酸残基。106.术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，igg(例如，igg1，igg2，igg3或igg4亚型)，iga1，iga2，igd，ige或igm抗体。107.如本文中所使用的，术语抗体的“抗原结合片段”是指包含全长抗体的片段的多肽，其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合，其也被称为“抗原结合部分”。通常参见，fundamentalimmunology,ch.7(paul,w.,ed.,第2版，ravenpress,n.y.(1989)，其以其全文通过引用合并入本文，用于所有目的。可通过重组dna技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗体的抗原结合片段。抗原结合片段的非限制性实例包括fab、fab’、f(ab’)2、fd、fv、互补决定区(cdr)片段、scfv、双抗体(diabody)、单域抗体(singledomainantibody)、嵌合抗体、线性抗体(linearantibody)、纳米抗体(技术来自domantis)、probody和这样的多肽，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。工程改造的抗体变体综述于holliger等,2005；natbiotechnol,23:1126‑1136中。108.如本文中所使用的，术语“全长抗体”意指，由两条“全长重链”和两条“全长轻链”组成的抗体。其中，“全长重链”是指这样的多肽链，其在n端到c端的方向上由重链可变区(vh)、重链恒定区ch1结构域、铰链区(hr)、重链恒定区ch2结构域、重链恒定区ch3结构域组成；并且，当所述全长抗体为ige同种型时，任选地还包括重链恒定区ch4结构域。优选地，“全长重链”是在n端到c端方向上由vh、ch1、hr、ch2和ch3组成的多肽链。“全长轻链”是在n端到c端方向上由轻链可变区(vl)和轻链恒定区(cl)组成的多肽链。两对全长抗体链通过在cl和ch1之间的二硫键和两条全长重链的hr之间的二硫键连接在一起。本发明的全长抗体可以来自单一物种，例如人；也可以是嵌合抗体或人源化抗体。本发明的全长抗体包含分别由vh和vl对形成的两个抗原结合部位，这两个抗原结合部位特异性识别/结合相同的抗原。109.如本文中所使用的，术语“fd”意指由vh和ch1结构域组成的抗体片段；术语“dab片段”意指由vh结构域组成的抗体片段(ward等人,nature341:544546(1989))；术语“fab片段”意指由vl、vh、cl和ch1结构域组成的抗体片段；术语“f(ab’)2片段”意指包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个fab片段的抗体片段；术语“fab’片段”意指还原连接f(ab’)2片段中两个重链片段的二硫键后所获片段，由一条完整的轻链和重链的fd片段(由vh和ch1结构域组成)组成。110.如本文中所使用的，术语“fv”意指由抗体的单臂的vl和vh结构域组成的抗体片段。fv片段通常被认为是，能形成完整的抗原结合位点的最小抗体片段。一般认为，六个cdr赋予抗体的抗原结合特异性。然而，即便是一个可变区(例如fd片段，其仅仅含有三个对抗原特异的cdr)也能够识别并结合抗原，尽管其亲和力可能低于完整的结合位点。111.如本文中所使用的，术语“fc”意指，由抗体的第一重链的第二、第三恒定区与第二重链的第二、第三恒定区经二硫键结合而形成的抗体片段。抗体的fc片段具有多种不同的功能，但不参与抗原的结合。112.如本文中所使用的，术语“scfv”是指，包含vl和vh结构域的单个多肽链，其中所述vl和vh通过接头(linker)相连(参见，例如,bird等人,science242:423‑426(1988)；huston等人,proc.natl.acad.sci.usa85:5879‑5883(1988)；和pluckthun，thepharmacologyofmonoclonalantibodies，第113卷，roseburg和moore编，springer‑verlag，纽约，第269‑315页(1994))。此类scfv分子可具有一般结构：nh2‑vl‑接头‑vh‑cooh或nh2‑vh‑接头‑vl‑cooh。合适的现有技术接头由重复的ggggs氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(ggggs)4的接头，但也可使用其变体(holliger等人(1993)，proc.natl.acad.sci.usa90:6444‑6448)。可用于本发明的其他接头由alfthan等人(1995)，proteineng.8:725‑731，choi等人(2001)，eur.j.immunol.31:94‑106，hu等人(1996)，cancerres.56:3055‑3061，kipriyanov等人(1999)，j.mol.biol.293:41‑56和roovers等人(2001)，cancerimmunol.描述。在一些情况下，scfv的vh与vl之间还可以存在二硫键。在本发明的某些实施方案中，scfv可形成di‑scfv，其指的是两个或两个以上单个scfv串联而形成抗体。在本发明的某些实施方案中，scfv可形成(scfv)2，其指的是两个或两个以上单个scfv并联而形成抗体。113.如本文中所使用的，术语“双抗体”意指，其vh和vl结构域在单个多肽链上表达，但使用太短的连接体以致不允许在相同链的两个结构域之间配对，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并且产生两个抗原结合部位(参见，例如,holligerp.等人,proc.natl.acad.sci.usa90:6444‑6448(1993)，和poljakr.j.等人,structure2:1121‑1123(1994))。114.如本文中所使用的，术语“单域抗体(single‑domainantibody,sdab)”具有本领域技术人员通常理解的含义，其是指由单个单体可变抗体结构域(例如单个重链可变区)所组成的抗体片段，其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力。单域抗体也称为纳米抗体(nanobody)。115.上述各个抗体片段均保持了特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合。116.可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组dna技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体(例如本发明提供的抗体)获得抗体的抗原结合片段(例如，上述抗体片段)，并且以与用于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。117.在本文中，除非上下文明确指出，否则当提及术语“抗体”时，其不仅包括完整抗体，而且包括抗体的抗原结合片段。118.如本文中所使用的，术语“特异性结合”是指，两分子间的非随机的结合反应，如抗体和其所针对的抗原之间的反应。特异性结合相互作用的强度或亲和力可以该相互作用的平衡解离常数(kd)表示。在本发明中，术语“kd”是指特定抗体‑抗原相互作用的解离平衡常数，其用于描述抗体与抗原之间的结合亲和力。平衡解离常数越小，抗体‑抗原结合越紧密，抗体与抗原之间的亲和力越高。119.两分子间的特异性结合性质可使用本领域公知的方法进行测定。一种方法涉及测量抗原结合位点/抗原复合物形成和解离的速度。“结合速率常数”(ka或kon)和“解离速率常数”(kdis或koff)两者都可通过浓度及缔合和解离的实际速率而计算得出(参见malmqvistm,nature,1993,361:186‑187)。kdis/kon的比率等于解离常数kd(参见davies等人,annualrevbiochem,1990；59:439‑473)。可用任何有效的方法测量kd、kon和kdis值。在某些实施方案中，可以使用生物膜干涉技术(bli)或表面等离子体共振术(spr)来测量解离常数。120.如本文中所使用的，术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)或p1来源的人工染色体(pac)；噬菌体如λ噬菌体或m13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如sv40)。一种载体可以含有多种控制表达的元件，包括但不限于，启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。121.如本文中所使用的，术语“宿主细胞”是指，可用于导入载体的细胞，其包括但不限于，如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞，如s2果蝇细胞或sf9等的昆虫细胞，或者如纤维原细胞，cho细胞，cos细胞，nso细胞，hela细胞，bhk细胞，hek293细胞或人细胞等的动物细胞。122.如本文中所使用的，术语“同一性”用于指两个多肽之间或两个核酸之间序列的匹配情况。当两个进行比较的序列中的某个位置都被相同的碱基或氨基酸单体亚单元占据时(例如，两个dna分子的每一个中的某个位置都被腺嘌呤占据，或两个多肽的每一个中的某个位置都被赖氨酸占据)，那么各分子在该位置上是同一的。两个序列之间的“百分数同一性”是由这两个序列共有的匹配位置数目除以进行比较的位置数目×100的函数。例如，如果两个序列的10个位置中有6个匹配，那么这两个序列具有60％的同一性。例如，dna序列ctgact和caggtt共有50％的同一性(总共6个位置中有3个位置匹配)。通常，在将两个序列比对以产生最大同一性时进行比较。这样的比对可通过使用，例如，可通过计算机程序例如align程序(dnastar,inc.)方便地进行的needleman等人(1970)j.mol.biol.48：443‑453的方法来实现。还可使用已整合入align程序(版本2.0)的e.meyers和w.miller(comput.applbiosci.，4:11‑17(1988))的算法，使用pam120权重残基表(weightresiduetable)、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。此外，可使用已整合入gcg软件包(可在www.gcg.com上获得)的gap程序中的needleman和wunsch(jmoibiol.48:444‑453(1970))算法，使用blossum62矩阵或pam250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的缺口权重(gapweight)和1、2、3、4、5或6的长度权重来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。123.如本文中所使用的，术语“保守置换”意指不会不利地影响或改变包含氨基酸序列的蛋白/多肽的预期性质的氨基酸置换。例如，可通过本领域内已知的标准技术例如定点诱变和pcr介导的诱变引入保守置换。保守氨基酸置换包括用具有相似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基的置换，例如用在物理学上或功能上与相应的氨基酸残基相似(例如具有相似大小、形状、电荷、化学性质，包括形成共价键或氢键的能力等)的残基进行的置换。已在本领域内定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，优选用来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替代相应的氨基酸残基。鉴定氨基酸保守置换的方法在本领域内是熟知的(参见，例如，brummell等人，biochem.32:1180‑1187(1993)；kobayashi等人proteineng.12(10):879‑884(1999)；和burks等人proc.natlacad.setusa94:412‑417(1997)，其通过引用并入本文)。124.本文涉及的二十个常规氨基酸的编写遵循常规用法。参见例如，immunology‑asynthesis(2ndedition,e.s.golubandd.r.gren,eds.,sinauerassociates,sunderland,mass.(1991))，其以引用的方式并入本文中。在本发明中，术语“多肽”和“蛋白质”具有相同的含义且可互换使用。并且在本发明中，氨基酸通常用本领域公知的单字母和三字母缩写来表示。例如，丙氨酸可用a或ala表示。125.如本文中所使用的，术语“药学上可接受的载体和/或赋形剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如remington'spharmaceuticalsciences.editedbygennaroar,19thed.pennsylvania:mackpublishingcompany,1995)，并且包括但不限于：ph调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂，稀释剂，维持渗透压的试剂，延迟吸收的试剂，防腐剂。例如，ph调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液。表面活性剂包括但不限于阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂，例如tween‑80。离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂，例如对羟苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等。维持渗透压的试剂包括但不限于糖、nacl及其类似物。延迟吸收的试剂包括但不限于单硬脂酸盐和明胶。稀释剂包括但不限于水，水性缓冲液(如缓冲盐水)，醇和多元醇(如甘油)等。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂，例如硫柳汞，2‑苯氧乙醇，对羟苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等。稳定剂具有本领域技术人员通常理解的含义，其能够稳定药物中的活性成分的期望活性，包括但不限于谷氨酸钠，明胶，spga，糖类(如山梨醇，甘露醇，淀粉，蔗糖，乳糖，葡聚糖，或葡萄糖)，氨基酸(如谷氨酸，甘氨酸)，蛋白质(如干燥乳清，白蛋白或酪蛋白)或其降解产物(如乳白蛋白水解物)等。在某些示例性实施方案中，所述药学上可接受的载体或赋形剂包括无菌可注射液体(如水性或非水性悬浮液或溶液)。在某些示例性实施方案中，此类无菌可注射液体选自注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化钠溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性剂的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)、ringer氏溶液及其任意组合。126.如本文中所使用的，术语“预防”是指，为了阻止或延迟疾病或病症或症状(例如，sars‑cov‑2感染)在受试者体内的发生而实施的方法。如本文中所使用的，术语“治疗”是指，为了获得有益或所需临床结果而实施的方法。为了本发明的目的，有益或所需的临床结果包括(但不限于)减轻症状、缩小疾病的范围、稳定(即，不再恶化)疾病的状态，延迟或减缓疾病的发展、改善或减轻疾病的状态、和缓解症状(无论部分或全部)，无论是可检测或是不可检测的。此外，“治疗”还可以指，与期望的存活期相比(如果未接受治疗)，延长存活期。127.如本文中所使用的，术语“受试者”是指哺乳动物，例如人。在某些实施方案中，所述受试者(例如人)患有sars‑cov‑2感染或与sars‑cov‑2感染相关的疾病(例如covid‑19)，或者，具有患有上述疾病的风险。128.如本文中所使用的，术语“有效量”是指足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如，预防疾病(例如sars‑cov‑2感染)有效量是指，足以预防，阻止，或延迟疾病(例如sars‑cov‑2感染)的发生的量；治疗疾病有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如，对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。129.如本文中所使用的，术语“中和活性”是指抗体或抗体片段具有与病毒上的抗原蛋白相结合，从而阻止病毒感染细胞和/或病毒子代的成熟和/或病毒子代的释放的功能活性，具有中和活性的抗体或抗体片段可以阻止病毒的扩增，从而抑制或消除病毒的感染。130.发明的有益效果131.本发明的抗体能够特异性识别和靶向多种sars‑cov‑2突变株，并且显示出了高效的中和突变毒株的能力。因此，本发明的抗体特别适合用于诊断、预防和治疗sars‑cov‑2感染(特别是突变株感染)或与sars‑cov‑2感染相关的疾病(例如covid‑19)，具有重要临床价值。132.下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得显然。附图说明133.图1a‑1b分别显示了抗体bd812和bd836的sds‑page检测结果。134.图2a‑2b分别显示了使用bli技术检测抗体bd812和bd836与s蛋白的亲和力的测定结果。135.图3显示了抗体bd812和bd836结合突变株b.1.351rbd的结构解析。136.序列信息137.本发明涉及的部分序列的信息提供于下面的表1中。138.表1：序列的描述139.140.141.142.143.144.具体实施方式145.现参照下列意在举例说明本发明(而非限定本发明)的实施例来描述本发明。146.除非特别指明，本发明中所使用的分子生物学实验方法和免疫检测法，基本上参照j.sambrook等人，分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉港实验室出版社，1989，以及f.m.ausubel等人，精编分子生物学实验指南，第3版，johnwiley&sons,inc.，1995中所述的方法进行；限制性内切酶的使用依照产品制造商推荐的条件。本领域技术人员知晓，实施例以举例方式描述本发明，且不意欲限制本发明所要求保护的范围。147.以下实施例中所涉及的sars‑cov‑2突变株信息提供如下：148.b.1.1.7：https://en.wikipedia.org/wiki/sars‑cov‑2_alpha_variant149.b.1.351：https://en.wikipedia.org/wiki/sars‑cov‑2_beta_variant150.b.1.617.1：https://en.wikipedia.org/wiki/sars‑cov‑2_kappa_variant151.b.1.617.2：https://en.wikipedia.org/wiki/sars‑cov‑2_delta_variant152.实施例1：抗体bd812和bd836的制备153.1.1抗体序列的获得154.1)b细胞的分离155.采集感染sars‑cov‑2病毒且痊愈半年以上人员的血液(由北京佑安医院提供)，并提取外周血单核细胞。利用stemcelleasyseptmhumanbcellisolationkit(stemcell，17954)从外周血单核细胞中分离出b细胞。156.2)抗原特异性b细胞的富集及测序157.将抗原蛋白(rbd、s1、s2)与带有dna寡核苷酸及荧光的链酶亲和素组合成复合物：将rbd(sinobiological40592‑v27h‑b)与totalseqtm‑c0951pestreptavidin(biolegend405261)按照制造商的说明书组装成复合物，同理将s1(sinobiological40591‑v27h‑b)和totalseqtm‑c0952pestreptavidin(biolegend405263)、s2(sinobiological40590‑v08b‑b)totalseqtm‑c0956apcstreptavidin(biolegend405283)组装成复合物。158.用上述抗原蛋白链酶亲和素复合物和以下免疫细胞表面标志分子抗体对富集的b细胞进行染色孵育：brilliantviolet605tmanti‑humancd14antibody(biolegend367126)，brilliantviolet605tmanti‑humancd16antibody(biolegend302040)，fitcanti‑humancd19antibody(biolegend392508)，bv421‑humancd27antibody(biolegend302824)，利用贝克曼库尔特astrioseq流式细胞分选仪分选cd14阴性，cd16阴性，cd19阳性，cd27阳性，rbd或s1或s2阳性细胞。159.根据制造商的说明书，使用chromiumnextgemsinglecellv(d)jreagentkitsv1.1withfeaturebarcodetechnologyforcellsurfaceprotein对上述分选到的抗原特异性b细胞进行单细胞转录组、vdj、表面结合抗原寡核苷酸测序。对测序结果进行分析，获得两株抗体，分别命名为bd812，bd836。抗体的序列信息如下所示。[0160][0161]3)抗体的制备纯化[0162]根据鉴定到的抗体的序列信息，委托北京义翘神州有限公司表达和纯化bd812和bd836抗体。简言之，在体外合成编码抗体重链和轻链的基因序列，分别克隆到表达载体中。将分别编码抗体重链和轻链的重组表达载体质粒与转染试剂(sinobiologicals，stf02)混合后共转染用293无血清cd培养基(sinobiologicals，smm293‑ti)传代培养的hek293细胞。转染后第1,3,5天添加293无血清加料液(sinobiologicals，m293‑supi‑100)。细胞在5％co2，温度37℃条件下摇瓶培养7天后进行蛋白纯化。培养料液离心后，用滤器过滤，通过proteina亲和纯化柱从培养物中纯化目标抗体蛋白。随后，通过还原性和非还原性sds‑page检测所纯化的目的蛋白。两株抗体的电泳结果分别如图1a‑1b所示。结果显示，经纯化的bd812和bd836抗体的纯度分别为96.6％和97.3％。[0163]实施例2：抗体bd812和bd836抗原结合能力的鉴定[0164]使用重组表达的rbd(sinobiologicals，cat:40592‑v08b，其包含rbd片段序列yp_009724390.1以及his标签)作为包被抗原，使用辣根过氧化物酶(hrp)标记的goatanti‑humanigg(h l)(jackson,109‑036‑088)作为二抗，通过elisa实验检测纯化的抗原反应特异性。简言之，用重组表达的s蛋白rbd(其氨基酸序列为seqidno:41)包被96孔板，随后用封闭液对96孔板进行封闭。然后，分别加入待测单抗(无关对照抗体，bd812，bd836)并孵育。用elisa洗涤液进行洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的goatanti‑humanigg(h l)作为二抗(以1:5000稀释)，并继续孵育。用pbst洗涤酶标板，加入显色剂显色。随后在酶标仪(thermomk3)上读取od450的吸收值。结果如表2所示。表2的结果显示，bd812、bd836均能够特异性识别并结合s蛋白rbd。[0165]表2：通过elisa检测的抗体与s蛋白rbd的反应性(od450读数)[0166][0167]此外，还采用生物膜干涉技术(bli)检测抗体与spike蛋白rbd区域的亲和力。使用蛋白相互作用仪red384进行测量，样品制备过程如下：1)使用pbst溶液将2019‑ncovspikerbdprotein(40592‑v08h)稀释到15.1nm,7.54nm,3.77nm,1.88nm,0.942nm,0.471nm和0nm；2)使用pbst溶液分别将待测抗体稀释到0.5μg/ml；分析过程如下：在pbst溶液中用ahc探针捕获待测抗体；随后与2019‑ncovspikerbdprotein(40592‑v08h)进行反应，充分反应后的固相结合物在pbst缓冲液中进行解离分析。以dataanalysis软件对结果分析，获得结合速率、解离速率及亲和力常数。结果如表3及图2a‑2b所示，结果表明bd812和bd836两株抗体与新型冠状病毒s蛋白具有良好的亲和力。[0168]表3：待测抗体的亲和力分析结果[0169][0170]实施例3：抗体bd812和bd836中和假病毒能力的评估[0171]本实验所使用的sars‑cov‑2假病毒(突变株假病毒)由中国食品药品检定研究院提供，该假病毒能模拟真病毒相似的细胞感染特点，并且携带荧光素报告基因用于检测，实验步骤可参考：nie,j.,li,q.,wu,j.etal.quantificationofsars‑cov‑2neutralizingantibodybyapseudotypedvirus‑basedassay.natprotoc15,3699–3715(2020).https://doi.org/10.1038/s41596‑020‑0394‑5。具体步骤如下：[0172]1)96孔板中样品的排布方式如下：b2‑g2为细胞对照孔(cc)，含有huh‑7细胞，不含抗体样本和假病毒；b3‑g3为病毒对照孔(vc)，含有huh‑7细胞和假病毒，不含抗体样本；b4‑g11的孔为实验孔，含有不同稀释梯度的抗体、细胞和假病毒。huh‑7细胞由中国食品药品检定研究院提供。[0173]孔板中样品的排布方式：[0174][0175]2)向第二列cc孔中加入150μl的dmem完全培养基(含有1％双抗，25mmhepes，10％fbs)，向第3‑11列中加入150μldmem完全培养基，向b4‑b11孔中再加入49μl的完全培养基。[0176]3)向b4‑b11孔中加入抗体样品。用多道移液对c到g排进行梯度稀释。[0177]4)用dmem完全培养基将假病毒稀释至1.3×104tcid50/ml，向3‑11列加入50ul假病毒。[0178]5)将96孔板放置于细胞培养箱中(37℃，5％co2)孵育1小时。[0179]6)将huh‑7细胞消化并稀释至浓度为2×105个/ml，向每孔中中加入100μl的细胞。然后在细胞培养箱中培养24小时。[0180]7)培养后从每孔中吸弃150μl上清，然后加入100μl荧光素酶底物和裂解试剂(perkinelmer,6066769)，在室温下避光孵育2分钟。从每孔内吸出150μl液体转移到对应的96孔化学发光检测板中，用多功能酶标仪(perkinelmerensight)读取发光值。[0181]8)计算中和抑制率：抑制率＝[1－(实验孔的发光强度均值－cc孔的发光强度均值)/(vv孔的发光强度均值－cc孔的发光强度均值)]×100％。[0182]9)利用二参数非线形回归拟合抑制曲线，计算待测抗体的半数抑制浓度ic50。[0183]实验结果如表3所示，bd812、bd836抗体对多种sars‑cov‑2突变株包括who正在密切关注的b.1.351、b.1.1.7、b.1.617.1、b.1.617.2变异株的假病毒均具有良好的中和活性。[0184]表3：抗体中和假病毒的ic50测定结果[0185][0186]实施例4：抗体bd812和bd836结合突变体rbd的结构解析[0187]4.1蛋白表达和纯化[0188]s6p表达载体编码刺突蛋白胞外域(1‑1208位氨基酸)，有六个脯氨酸突变(f817p，a892p，a899p，a942p，k986p和v987p)和furin位点(682‑685位氨基酸)的“gsas”替换。b.1.351s6p在此基础上添加了l18f，d80a，δ242‑244，d215g，k417n，e484k，n501y，d614g和a701v突变。s6p胞外域蛋白的表达：将s6p(b.1.351)质粒和pei混和转染hek293f细胞，s6p(b.1.351)蛋白从培养基中使用ni‑nta树脂提取，用s6凝胶过滤层析柱将蛋白置换到20mmhepes,ph7.2,和150mmnacl的缓冲液中。为了纯化抗体fab片段，编码抗体重链区和轻链区的质粒共转入hek293f细胞，重链区编码质粒的c端带有6×his标签。抗体fab片段从培养基中使用ni‑nta树脂提取，用s200凝胶过滤层析柱将蛋白置换到最终缓冲液中。[0189]4.2冷冻电镜数据的收集，处理和结构搭建[0190]冷冻电镜样品的制备：4μls6p(b.1.351)蛋白，浓度为7mg/ml,与相同体积的bd‑812和bd‑836的fab区(各1mg/ml)混合，在feivitrobotiv(4摄氏度和100％湿度)的环境中，迅速加至经辉光放电处理后的金网(quantifoil,r1.2/1.3)，而后在液态乙烷中完成制备。使用talosarctica(200kv)对样品进行筛选，筛选好的样品使用titankrios(300kv)，k3相机进行数据的收集。[0191]用cryosparc进行图像的处理，使用patchmotioncorrection(multi)进行图片的漂移校正和电子剂量加权。对比度传递函数(ctf)参数使用patchctfestimation(multi)进行估计。manuallycurateexposures选择合格的图片用于进一步的处理，使用blobpicker和基于模板的templatepicker进行颗粒的挑选，提取所选颗粒进行二维分类以除去噪音和垃圾颗粒。选择好的二维分类模板颗粒进行三维重建(ab‑initioreconstruction)和三维分类(heterogeneousrefinement),收集合格的颗粒进行细化精修(homogeneousrefinement)。为了提高fab和rbd相互作用界面的局部分辨率，使用包含bd‑812和bd‑836的fab和rbd的mask进行局部细化(lcalrefinement)，mask使用ucsfchimera和relion制作，使用cryosparc计算局部分辨率。使用coot和phenix进行结构的建模和精修。ucsfchimerax进行图的绘制。[0192]bd812fab、bd836fab与突变株b.1.351rbd结构如图3所示。结果显示，bd812和bd836以非竞争的方式分别与rbd的右肩和左肩结合，分别覆盖rbd上和表面积。bd812的表位既不涉及leu452也不涉及thr478，这解释了其对b.1.617.2(delta)突变株的中和活性。bd836也不与leu452相互作用。bd812和bd836都与rbd和ace2的结合界面发生冲突。[0193]尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，但本领域技术人员将理解：根据已经公布的所有教导，可以对细节进行各种修改和变动，并且这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部分为由所附权利要求及其任何等同物给出。当前第1页12当前第1页12
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