一种肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法与流程

技术特征：
1.一种肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将氯化石蜡溶于有机溶剂，得到氯化石蜡溶液，并向其中加入血清，静置平衡后得到底物体系；(2)向底物体系先后加入磷酸钾缓冲溶液、肝微粒体和nadph酶再生体系，摇匀后得到最终反应体系，然后置于37℃水浴中振荡反应；(3)向步骤(2)的反应体系加入冰冷的有机溶剂终止反应，然后进行离心，取上层清液，测定氯化石蜡含量。2.根据权利要求1所述的肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，其特征在于：所述步骤(1)血清加入的体积为氯化石蜡溶液的1～10倍。3.根据权利要求2所述的肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，其特征在于：所述步骤(1)中静置平衡的过程是在4℃下进行6～12h，或在室温下进行1～3h。4.根据权利要求3所述的肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，其特征在于：所述有机溶剂为乙腈。5.根据权利要求4所述的肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，其特征在于：所述步骤(1)中有机溶剂的体积在最终反应体系中所占比例不超过5％。6.根据权利要求5所述的肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，其特征在于：所述最终反应体系中氯化石蜡的浓度为0.2～1.0μg/ml。7.根据权利要求6所述的肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，其特征在于：所述步骤(2)中最终反应体系的总体积为0.4～0.6ml。8.根据权利要求7所述的肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的反应时间为0.5～6h。9.根据权利要求8所述的肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，其特征在于：所述步骤(3)中采用超高效液相色谱
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电喷雾离子源
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高分辨质谱仪(uplc
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esi
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hrms)测定氯化石蜡含量。10.根据权利要求9所述的肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，在4℃和10000rpm/min的转速下，离心5min。

技术总结
本发明公开一种肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，包括以下步骤：(1)将氯化石蜡溶于有机溶剂，得到氯化石蜡溶液，并向其中加入血清，静置平衡后得到底物体系；(2)向底物体系先后加入磷酸钾缓冲溶液、肝微粒体和NADPH酶再生体系，摇匀后得到最终反应体系，然后置于37℃水浴中振荡反应；(3)向步骤(2)的反应体系加入冰冷的有机溶剂终止反应，然后进行离心，取上层清液，测定氯化石蜡含量。本发明采用血清作为氯化石蜡的载体，促进氯化石蜡与肝微粒体反应，显著提高氯化石蜡的代谢清除率，实现肝微粒体离体代谢氯化石蜡的代谢清除率的测定。粒体离体代谢氯化石蜡的代谢清除率的测定。粒体离体代谢氯化石蜡的代谢清除率的测定。


技术研发人员：黄晓梅 王旭 殷秋妙 丁晨红 王威利 苏秋权 王英 崔泽锋
受保护的技术使用者：广东省农业科学院农业质量标准与监测技术研究所
技术研发日：2021.06.18
技术公布日：2021/10/23