一种基于均相时间分辨荧光的生物素定量测定方法与流程

技术特征：
1.一种基于均相时间分辨荧光的定量测定样本中生物素的方法，其特征在于，包括酶切步骤；所述酶切步骤为：将样本与蛋白酶混合后进行酶解，得到经酶切的样本。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶为丝氨酸蛋白酶。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述酶切步骤后还包括孵育步骤；所述孵育步骤为：先将经酶切的样本与用荧光基团1标记的工作试剂1混合后进行孵育，得到孵育液1，然后将孵育液1与用荧光基团2标记的工作试剂2混合后进行孵育，得到孵育液2。4.如权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述用荧光基团1标记的工作试剂1为别藻蓝蛋白标记的生物素和eu
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标记的链霉亲和素中的至少一种。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，当用荧光基团1标记的工作试剂1为别藻蓝蛋白标记的生物素时，所述用荧光基团2标记的工作试剂2为eu
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标记的链霉亲和素；当用荧光基团1标记的工作试剂1为eu
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标记的链霉亲和素时，所述用荧光基团2标记的工作试剂2为别藻蓝蛋白标记的生物素。6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述别藻蓝蛋白标记的生物素溶液和eu
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标记的链霉亲和素溶液的溶剂为工作液；所述工作液的成分包含缓冲剂、盐和蛋白质保护剂。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述工作液的成分包含2～60g/l缓冲剂、5～100g/l盐和0.4～10g/l蛋白质保护剂。8.如权利要求1～7任一项所述的方法，其特征在于，所述孵育步骤后还包括测定步骤；所述测定步骤为：先对孵育液2进行荧光的激发，然后确定孵育液2的荧光信号，最后根据荧光信号和荧光信号与生物素浓度之间的关系，计算得到样本中生物素的浓度。9.一种用于定量测定样本中生物素的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括蛋白酶、用荧光基团1标记的工作试剂1以及用荧光基团2标记的工作试剂2。10.权利要求1～8任一项所述的方法或权利要求9任一项所述的试剂盒在生物素定量测定中的应用。

技术总结
本发明涉及一种基于均相时间分辨荧光的生物素定量测定方法，属于体外诊断均相时间分辨荧光技术领域。本发明提供了一种基于均相时间分辨荧光的定量测定样本中生物素的方法，所述方法包括酶切步骤，所述酶切步骤为：将样本与蛋白酶混合后进行酶解，得到经酶切的样本；所述方法基于均相时间分辨荧光，均相时间分辨荧光可通过时间分辨监测，很容易地从短寿命荧光背景中分辨出荧光信号，进而有效避免背景光干扰，使定量测定结果更加准确；所述方法通过酶切有效避免了蛋白质生物素化水平的差异和空间位阻对固定化生物素测定结果造成的偏差，进一步提高了定量测定结果的准确性；使用所述方法定量测定生物素的检测限仅有0.03nM，测定灵敏度极高。灵敏度极高。灵敏度极高。


技术研发人员：陈衡 刘涛
受保护的技术使用者：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
技术研发日：2021.07.15
技术公布日：2021/10/23