一种可分隔的层析柱的制作方法

1.本实用新型涉及一种液相层析工艺研发装置，更具体的，涉及一种可分隔的层析柱。


背景技术：

2.蛋白纯化是生物制药和生物工程的一个重要环节，是将从原料中分离出来的蛋白去除杂质、获得具有一定纯度的目标蛋白的过程。蛋白纯化工艺对产品的质量、成本有重大的影响，是新药、新生物工程产品开发过程中的一项重要的研究内容。
3.液相色谱(液相层析)是大多数蛋白纯化所采用的核心技术，具有分辨精度高、条件柔和、对蛋白损伤小等特点，被生物制药和生物工程所广泛采用。蛋白纯化所使用的液相色谱一般是柱液相色谱，采用液相色谱仪控制待纯化的样品和缓冲液按一定顺序和流速流过装于层析柱内的填料(固定相)，根据样品中目标蛋白和杂质(包括宿主细胞残留物、培养液残留物、上游工艺残留、外源污染以及目标蛋白的降解体、聚集物、变性体等)在固定相中保留条件或保留时间的不同，将蛋白和杂质分离，从而实现蛋白纯化。常用于蛋白纯化的液相色谱有尺寸排阻层析(又称分子筛、凝胶过滤层析)、亲和层析、离子交换层析、反相层析等。固定相所使用的柱填料一般是不同交联度的葡聚糖或琼脂糖，并根据层析的性质进行修饰。液相色谱的过程一般包括平衡(balance)、上样(load)、冲洗(wash)、洗脱(elute)、再生(regenerate)等几个阶段，每个阶段采用不同成分、浓度、ph的缓冲液，改变柱内的条件，从而促使目标蛋白的结合或者洗脱。目前市场上所供应的填料为固定型号的几种，为了获得最优的纯化效果，往往需要对缓冲液的配方进行大量的实验和对比，从而摸索最优配方。由于上样缓冲液、冲洗缓冲液、洗脱缓冲液都有大量的候选配方，因此摸索缓冲液的最优条件往往需要耗费大量的时间、物料和人工。
4.如果能提高缓冲液配方优化的时间，将大大加快纯化工艺的研发进度并降低研发成本。


技术实现要素：

5.本实用新型提供一种可分隔的层析柱，用于蛋白液相层析纯化工艺的研发，能够节约研发时间，并实现多个缓冲液配方在同样的上游条件下进行对比、增强了对比性。
6.本实用新型的技术方案如下：
7.一种可分隔的层析柱(图1)，包括柱体(1)、一级入口(2)、一级出口(3)、二级入口(4)、二级出口(5)；柱体(1)内有一级缓冲室(6)、二级缓冲室(7)、凝胶室(8)；一级入口(2)、一级缓冲室(6)、凝胶室(8)、一级出口(3)构成依次排列的液体通道，二级入口(4)、二级缓冲室(7)凝胶室(8)、二级出口(5)亦构成依次排列的液体通道，这两种液体通道呈垂直方向。
8.柱体(1)内还有分隔间隙(9)，分隔间隙(9)位于相邻的二级缓冲室(7)或者相邻的二级出口(5)之间，分隔间隙(9)与柱内壁之间仅有薄层相连，分隔间隙(9)内可插入隔板
(10)并将凝胶室(8)分隔成多个内室(图3)。
9.所述的二级入口(4)、二级缓冲室(7)、二级出口(5)的数量相等，为3至10个。
10.层析柱还配有密封栓(11)。所述的一级入口(2)、一级出口(3)、二级入口(4)、二级出口(5)均可用密封栓(11)封闭，从而调控缓冲液进入和流出的路径。
11.一种可分隔的层析柱的使用方法如下：
12.第一步：用密封栓(11)将所有的二级入口(4)、二级出口(5)封闭；启动液相色谱仪或者蠕动泵，使平衡缓冲液、上样缓冲液(含样品)依次流过一级入口(2)、一级缓冲室(6)、凝胶室(8)、一级出口(3)；如图2所示(图中箭头代表液体流动方向)。
13.第二步：将隔板(10)插入分隔间隙(9)，将凝胶室(8)分隔成多个小室；用密封栓(11)将一级入口(2)、一级出口(3)封闭；取下二级入口(4)、二级出口(5)的密封栓(11)；如图3所示(图中箭头代表液体流动方向)。
14.第三步：将不同的二级入口(4)、二级出口(5)分别与不同配方的冲洗缓冲液(和/或洗脱缓冲液)、收集容器相连，启动液相色谱仪或者蠕动泵，使平衡缓冲液、上样缓冲液(含样品)依次流过二级入口(4)、二级缓冲室(7)、凝胶室(8)、二级出口(5)。
15.通过以上过程，将原先需要重复多次的实验过程，简化为多通道并联进行，并且实现多个缓冲液配方在同样的上游条件下进行后续的效果测试。
16.本实用新型的有益效果是，大大节约了液相色谱纯化工艺研发的实验时间、提高了实验效率，并增强了实验结果的可对比性。
附图说明
17.图1：一种可分隔的层析柱的结构图
18.图2：一种可分隔的层析柱的使用方法示意图
19.图3：一种可分隔的层析柱的使用方法示意图
20.附图标记：
21.柱体(1)、一级入口(2)、一级出口(3)、二级入口(4)、二级出口(5)、一级缓冲室(6)、二级缓冲室(7)、凝胶室(8)、分隔间隙(9)、隔板(10)、密封栓(11)
具体实施方式
22.实施例1、一种可分隔的层析柱的结构
23.一种可分隔的层析柱(图1)，包括柱体(1)、一级入口(2)、一级出口(3)、二级入口(4)、二级出口(5)；柱体(1)内有一级缓冲室(6)、二级缓冲室(7)、凝胶室(8)；一级入口(2)、一级缓冲室(6)、凝胶室(8)、一级出口(3)构成依次排列的液体通道，二级入口(4)、二级缓冲室(7)凝胶室(8)、二级出口(5)亦构成依次排列的液体通道，这两种液体通道呈垂直方向。
24.柱体(1)内还有分隔间隙(9)，分隔间隙(9)位于相邻的二级缓冲室(7)或者相邻的二级出口(5)之间，分隔间隙(9)与柱内壁之间仅有薄层相连，分隔间隙(9)内可插入隔板(10)并将凝胶室(8)分隔成多个内室(图3)。
25.所述的二级入口(4)、二级缓冲室(7)、二级出口(5)的数量相等，为5个。
26.层析柱还配有密封栓(11)。所述的一级入口(2)、一级出口(3)、二级入口(4)、二级
出口(5)均可用密封栓(11)封闭，从而调控缓冲液进入和流出的路径。
27.实施例2、一种可分隔的层析柱的使用方法
28.一种可分隔的层析柱的使用方法如下：
29.第一步：用密封栓(11)将所有的二级入口(4)、二级出口(5)封闭；启动液相色谱仪或者蠕动泵，使平衡缓冲液、上样缓冲液(含样品)依次流过一级入口(2)、一级缓冲室(6)、凝胶室(8)、一级出口(3)；如图2所示(图中箭头代表液体流动方向)。
30.第二步：将隔板(10)插入分隔间隙(9)，将凝胶室(8)分隔成多个小室；用密封栓(11)将一级入口(2)、一级出口(3)封闭；取下二级入口(4)、二级出口(5)的密封栓(11)；如图3所示(图中箭头代表液体流动方向)。
31.第三步：将不同的二级入口(4)、二级出口(5)分别与不同配方的冲洗缓冲液(和/或洗脱缓冲液)、收集容器相连，启动液相色谱仪或者蠕动泵，使平衡缓冲液、上样缓冲液(含样品)依次流过二级入口(4)、二级缓冲室(7)、凝胶室(8)、二级出口(5)。
32.通过对比使用不同的缓冲液所获得的纯化产物的纯度和数量，可以确定最优化的缓冲液配方。