专利名称：具有抗肿瘤活性的异甘草素衍生物及其合成方法
技术领域：
本发明涉及一种异甘草素衍生物的合成方法以及它们的抗肿瘤活性。
_
背景技术：
异甘草素的化学名为4， 2'， 4'-三羟基査尔酮(4，2'，4'-tryhydroxychalcone)， 难溶于水、易溶于丙酮、乙醚、氯仿等有机溶剂。因最初从豆科植物甘草 G/yc戸tea wra/e"57》Fisch.、 胀果甘草G/yc戸/ /za !> /7她Bat或光果甘草 G/_yc>7T/^fl g/fl6m L.的干燥根及其根茎提取物分离出来而得名。
异甘草素是甘草中的一个重要的査尔酮化合物，具有抗肿瘤、抗病毒、抗自 由基、抑制脂质过氧化、抑制免疫缺陷病毒HIV等生物活性，此外还可治疗肠 痉挛，糖尿病，抑郁性精神病等。其中抗肿瘤作用是近年来国内外的研究热点， 张晶等研究发现异甘草素可以显著抑制人宫颈癌细胞体内外增殖[张晶，杨静,汤 宏斌，异甘草素对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用，中国药理学与毒理学杂 志,2005， 19(6)， 436-442];王小芹等通过研究异甘草素脂质体对人前列腺癌细胞 体外增殖的作用时发现异甘草素能有效地抑制前列腺癌细胞的增生[王小开,杨 静,郑航，异甘草素脂质体对人前列腺癌细胞体外增殖的抑制作用，医学新知杂 志，2007， 17(2)， 84-85]; Tetsuyuki Takahashi等人研究表明异甘草素在鼠和人结肠 癌细胞中，可以抑制细胞生长和促进细胞凋亡[Tetsuyuki Takahashi, Masaki Baba， Hoyoku Nishino, Toru Okuama, Cyclooxygenase-2 plays a suppressive role for induction of apoptosis in isoliquritigenin-treated mouse colon cancer cells, Cancer Letters, 2006,231(2), 319-325]; Hsu等研究了异甘草素能诱导人肝癌G2/M期细胞 停滞并诱导细胞凋亡，从而抑制肝癌细胞的生长[Ya-Ling Hsu， Po-Lin Kuo， Chun隱Ching Lin， Isoliquritigenin induces apoptosis and cell cycle arrest through p53-dependent pathway in Hep G2 cells, Life Sciences, 2005， 77(3)， 279-292]。但由 于异甘草素难溶于水，降低了其体内抗肿瘤活性，进而影响了它在医药领域的广 泛应用。
本发明旨在合成一系列含有氮原子侧链的异甘草素衍生物，增加其抗肿瘤活性及水溶性，使之成为抗肿瘤新药前体，满足医药领域用药需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以异甘草素和小分子伯胺或仲胺为原料，经过 Mannich反应，合成一系列具有良好抗肿瘤活性和水溶性的含氮原子侧链的异甘 草素衍生物的方法。
本发明提供了一类具有良好抗肿瘤活性的含氮原子侧链的异甘草素衍生物， 具有通式I所表示的结构式<formula>formula see original document page 4</formula>
式I中R为各种伯胺甲基或仲胺甲基。
合成如通式I的含氮原子侧链的异甘草素衍生物的方法以异甘草素和小分
<formula>formula see original document page 4</formula>其中R'为各种伯胺或仲胺，CH3COOH为乙酸，R为伯胺甲基或仲胺甲基。 所述含氮原子侧链的异甘草素衍生物(I)的合成具体步骤如下 取异甘草素放入圆底烧瓶中，加入伯胺或仲胺溶液，控制温度为10-50 °C， 电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液与冰乙酸的混合物。滴加完 毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用二氯甲烷、三氯甲垸或乙酸乙酯的其中一 种萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥；硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓 縮至干，得到黄色固体；用体积比范围在l: 1 1: 3的石油醚、丙酮混合溶剂 重结晶得到黄色粉末。
本发明所述的通式I所表示的含氮原子侧链的异甘草素衍生物，具有良好的 抗肿瘤活性、水溶性而且细胞毒性大大低于异甘草素。
具体实施例方式
以下实例详述本发明，但是，本发明不限于具体叙述的下实例-实施例1
3'-二甲胺甲基-2'，4,4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下
■OH<formula>formula see original document page 5</formula>
■OH
0
1
称取异甘草素0.64 g放入圆底烧瓶中，加入质量分数为33%二甲胺水溶液 0.46mL。控制温度为20。C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶 液0.23mL和6mL冰乙酸，滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用乙酸 乙酯萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱， 除去未反应的异甘草素，再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液 浓縮至干，得到黄色固体。用体积比为1: 1的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得 到黄色粉末0.28 g，收率35. 9%。
mp: >176°C '
ESI-MS(附/z): 314[M 1] ; 312[M-l]一
iH隱NMR(500MHz， DMSO): 2.410(6H， s， (CH3)2N-)， 3.836(2H， s， -CH2N)，
6.220(1H， d， J=9Hz， H3), 6.824-6.841(2H, m， H5, H6), 7.670陽7.747(4H， m, H2， 3'， 5， 6,)，13,
8.032(1H， d, J=9Hz, H2). JC-NMR(500MHz， DMSO): 190.65, 172.59, 170.20, 164.47, 160.58， 143.63，
132.05, 131.46, 126.36, 118.04, 116.29, 111.01, 110.15,106.89， 54.17， 43.76
实施例2
3，-吗啉甲基-2',4，4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下
.OH
0
2
称取异甘草素0.64 g放入圆底烧瓶中，加入吗啉0.26 mL，控制温度为20 °C ， 电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6 mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用二氯甲烷萃取。合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，得到黄色固体。用 体积比为h 1.5石油醚、丙酮的混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.36 g，收率40.4W。
mp: >180°C
ESI-MS(m/z): 356[M l] ; 354 [M-l]一
^-丽R(500MHz， DMSO): 2.506 (4H， s， -(CH2)2N)， 3,611(4H， s， -(CH2)20),
3.744(2H， s, -CH2N)， 6.385(1H, d, J=9Hz， H3), 6.831~6.849(2H， m, H5， H6)， 7.751~7.768(4H， m, H2', 3，， 5，， 6')， 8.133(1H, d, J=9Hz， H2). 13C-NMR(500MHz， DMSO): 191.68, 165.27， 163.75， 160.27, 144.30， 131,47,
131.24, 125.75， 117.31， 115.82, 112.35, 107.99, 107.75,66.00,52.54,51.99. '
实施例33'-环己胺甲基-2',4,4'-三羟基查尔酮的制备，结构式如下:
<formula>formula see original document page 7</formula>
称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入环己胺0.35mL,控制温度为20 °C ，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6 mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓縮至干，得到黄色固体。用 体积比为1: 2的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.40 g，收率43.2%。
mp: >168°C
ESI-MS(w/z): 368[M l] ; 366 [M-1〗—
tH陽NMR(500MHz ， DMSO): 1.138~1.988(10H， m， -CH2-), 2.742(1H， s,
-CHN)，4.008(2H, s, -CH2N)， 5.994(1 H， d, J=9Hz， H3), 6.803~6.820(2H, m， H5， H6), 7.589~7.697(4H, m， H2，， 3，， 5，， 6，)， 7.877(1H, d， J=9Hz， H2).
13C-NMR(500MHz， DMSO): 188.20， 175.04， 164.28， 159.67,141.63,131.33，
130.63, 126.14， 117.91, 115.74, 111.99, 108.27， 105.14， 54.78， 29.88,25.02， 23.93.
实施例4
3'-二异丙胺甲基-2',4,4'-三羟基査尔酮的制备，结果式如下<formula>formula see original document page 8</formula>称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入二异丙胺0.43 mL，控制温度为 20 °C ，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6 mL，滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用三氯甲烷萃取。合并有机相， 用无水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素， 再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，得到黄色固体。 用体积比为1:2的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.35 g，收率38.2%。
mp: >180°C
ESI-MS(附/z): 370[M l] ; 368 [M-1]—
'H隱NMR(500MHz ， DMSO): 1.125(12H, s， -CH3)， 3.228(2H, s， -CHN)，
3.959(2H, s, -CH2N)， 6.156(1H, d, J=9Hz， H3)， 6'820 6.837(2H， m, H5， H6)， 7.704~7.741(4H， m, H2'， 3，， 5，， 6，)， 8細(1H， d, J=9Hz, H2).
13C-NMR(500MHz， DMSO): 190.52, 170.27， 163.17, 160.02， 143.27, 131.01，
125.89， 117.50, 115.78, 110.58， 109.59, 106.60: 49.11,41.99, 30.66， 18.27.
实施例5
3'-二乙胺甲基-2',4,4'-三羟基查尔酮的制备，结构式如下<formula>formula see original document page 9</formula>称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入二乙胺0.32mL，控制温度为20 °C ，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6 mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，得到黄色固体。用 体积比为1: 1的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.45g，收率52.8%。
mp: >176。C
ESI隱MS(w/力342[M l] ; 340 [M-l]_ 1H-画R(500MHz， DMSO): 1.087(6H， t， J=7Hz， CH3), 2.708~2.751(4H, q,
J=7Hz， (CH2)2N-)， 3.924(2H, s， -CH2N)，
6.189(1H， d， J=9Hz， H3), 6.820~6.837(2H, m,
H5， H6)， 7.670 7.748(4H， m, H2，， 3，， 5，， 6，)，
8.023(1H， d, J=9Hz， H2).
13C-NMR(500MHz， DMSO): 190.80, 170.48, 164.19， 160.52， 143.69， 131.85,
131.48, 126.38， 118.03,116.27， 111.08， 110.13,
106.68， 49.28， 46.45， 10.79.
实施例6
3'國仲丁胺甲基-2'，4,4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下<formula>formula see original document page 10</formula>
称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入仲丁胺0.31mL，控制温度为20 °C,电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6 mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓縮至干，得到黄色固体。用 体积比为1: 3的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.32 g，收率37.4%。
mp: >175 °C
ESI-MS(m/z): 342 [M l] ; 340 [M-l]_ 1H國NMR(500MHz， DMSO): 0.916~0.930(6H， d， J=7Hz， CH3)， 1.821~1.875(1H,
m，國CHN)， 2'562(2H， d， J=7Hz， -CH2-) 3'986(2H,
s，-CH2N),6.044(lH，d,J=9Hz, H3)， 6.810~6.827(2H,
m， H5， H6)， 7.609~7.709(4H， m, H2'， 3，， 5，， 6，)，
7.912(1 H, d, J=9Hz, H2).
13C-NMR(500MHz， DMSO): 189.17, 174.56， 164.68, 160.22, 142.45, 131.84，
131.19,126.59， 118.34,116.24,111.95， 109.23，
105.78, 54.73， 44.17， 26.79,20.58.
实施例7
3'-叔丁胺甲基-2',4,4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下称取异甘草素0.64 g放入圆底烧瓶中，加入叔丁胺0.33 mL，控制温度为20 °C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用二氯甲垸萃取。合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓縮至干，得到黄色固体。用 体积比为1: 3的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.41 g，收率48.5%。
mp: >170°C
ESI國MS(附/z): 342 [M l] ; 340 [M-1]—
^-NMR(500MHz ， DMSO): 1.268(9H, s， CH3), 3.975(2H， s, -CH2N)，
5.993(1H，d， J=9Hz, H3), 6.810~6.827(2H， m， H5， H6)， 7.593 7.697(4H， m, H2'， 3，， 5，， 6，), 7.880(1 H, d, J=9Hz, H2). 13C-NMR(500MHz， DMSO):188.59, 164.80， 160.18， 142.09， 131.89,126.63，
118.39， 116.24， 112.66, 108.63, 105.64， 54.03, 37.54， 26.47.
实施例8
3'-乙醇胺甲基-2'，4，4'-三羟基查尔酮的制备，结构式如下<formula>formula see original document page 12</formula>
称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入乙醇胺0.18mL，控制温度为20 °C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，得到黄色固体。用 体积比为1:2.5石油醚、丙酮的混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.29 g，收率35.3%。
mp: >180°C
ESI國MS(附/z): 330 [M l] ; 328 [M—1]-
!H-NMR(500MHz， DMSO): 2.821(2H, s， -CH2OH), 3.585(2H， s, -CH2N)，
4.012(2H, s, -CH2N), 6.034(1 H， d， J=8Hz， H3)， 6.818~6.829(2H, m， H5, H6)， 7.634 7.691(4H, m, H2，， 3，， 5，， 6，)， 7.902(1H， d， J=8Hz, H2). 13C-NMR(500MHz， DMSO): 165.03， 160.16, 142.20， 131.89, 131.14， 126.64，
118.40， 116.23， 112.23， 108.95， 105.79， 58.14, 49.26， 43.30.
实施例9
3'-二乙醇胺甲基-2'，4，4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下<formula>formula see original document page 13</formula>■OH
O
9
称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入二乙醇胺0.29mL，控制温度为 20 °C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸 6 mL，滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用三氯甲烷萃取。合并有机 相，用无水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草 素，再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓縮至干，得到黄色 固体。用体积比为1: 1的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.44 g， 收率47.5%。
mp: 106 °C
ESI掘—)374 [M 1] ; 372 [M-1]_
'H-NMR(500MHz， DMSO): 2.741(4H， s， -(CH2)2N), 3.578~3.601(4H, t, J=6Hz,
-CH2OH)， 3.980(2H, s， -CH2N)， 6.284(1H， d, J=9Hz， H3)， 6.832~6.848(2H， m, H5, H6)， 7.742~7.759(4H， m， H2，， 3,, 5，， 6，)， 8.085(1H, d， J=9Hz， H2)
13C-NMR(500MHz， DMSO): 191.61， 172.47， 168.05， 164.05， 160.66, 144.30，
131.88， 131.62， 126.31, 117.93， 116.30， 112.05， 109.29， 108.12, 58.07， 55.86, 50.29, 21.53.
实施例10
3'-吡咯烷基甲基-2'，4，4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下<formula>formula see original document page 14</formula>
称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入四氢吡咯0.25mL，控制温度为 20°C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36鬼甲醛溶液0.23mL和冰乙酸6 mL，滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用三氯甲垸萃取，合并有机相， 用无水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素， 再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓縮至干，得到黄色固体。 用体积比为1:1石油醚、丙酮的混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.38 g，收率45.4%。
mp: 117 。C
ESI-MS(附/z): 340 [M l] ; 338 [M-l]—
工H-NMR(500MHz， DMSO): 1.837(4H, s, -CH2-CH2-)， 2.824~2.843(4H, t,
J=6Hz，(CH2)2N-)，3.986(2H，s, -CH2N)， 6.180(1H， d, J=9Hz, H3), 6.818~6.836(2H, m, H5, H6)， 7.654~7.732(4H, m, H2，， 3，， 5，， 6，)， 8.000(1H, d， J=9Hz， H2)
13C-NMR(500MHz， DMSO): 190.20， 172.54, 171.03, 164.57， 160.48, 143.31,
132.02， 131.39， 126.43， 118.10, 116.28， 110.64，， 110.51， 107.10, 53.34， 50.31， 23.54.
实施例11
含氮原子侧链的异甘草素衍生物抗肿瘤活性实验
(1)含氮原子侧链的异甘草素衍生物体外抗肿瘤活性实验，具体实验步骤如
下
①分别取处于指数生长期的肿瘤细胞，用含有10X胎牛血清的RPMI1640培 养液稀释成20000个细胞/mL。② 96孔板每孔中加入200 ^L细胞悬液，置于37 °C、 52培养箱中培养24h。
③ 将药物用二甲基亚砜溶解，每孔中加入设定浓度药物，稀释至需要的工作 浓度，用RPMI1640细胞维持稀释，同时以异甘草素为阳性对照。
④ 置于37'C、 5XC02培养箱中培养72h。
⑤ MTT:用无血清RPMI1640培养液配成5 mg/mL溶液，每孔中加入20pL， 置于37 °C 、 5 % C02孵箱中孵育4 h。
⑥ 吸出上清，用培养液洗三次加入100pL二甲基亚砜溶解沉淀物，用振荡器 摇匀测定OD570值。
⑦ 按下列公式计算药物对肿瘤细胞的抑制率 公式:肿瘤细胞生长抑制率=(1 —实验组OD/对照组OD) xl00% 根据72h的实验数据，由OD值计算生长抑制率，进而计算出半数抑制浓度
IC50值。
含氮原子侧链的异甘草素衍生物对肿瘤细胞PC-3、 MCF-7、 HO-4980的体外
半数抑制浓度化合物IC50 (ng/ml)
PC-3MCF-7HO-4980
136.95744.04937.396
217.268>跳00078.831
310.39590.48460.366
4>100扁>100扁>100細
522.51236.45033.185
619.45487.14776.966
765.41648.2405L060
828.86121.71629.284
920.56919細18.966
1037.13527.74525.382
异甘草素9.44616.41217.519
(2)含氮原子侧链的异甘草素衍生物体内抗肿瘤活性实验，具体实验步骤如
下
试验用小鼠随机分为对照组(生理盐水200ml/kg)、异甘草素(40mg/kg)、 衍生物高剂量组(180 mg/kg)、衍生物低剂量组(90 mg/kg)，异甘草素作为阳 性对照药品。选取移植肿瘤7天、肿瘤生长良好、腹部隆起明显的小鼠，腹部皮 肤消毒，用一次性无毒采血器经腹壁剌入腹腔，抽取腹水，放入无菌烧杯中以生
15理盐水稀释成体积比为l: 3的癌细胞混悬液，于每只小鼠右腋下接种0.2 ml， 各组动物与接种肿瘤次日开始给药，每日一次，连续给药10天。给药结束后， 将动物称重处死，剥离肿块称重，比较各组肿瘤生长情况，其中各组动物初始数 目为10只，表中所列动物数均为去除死亡动物后剩余的数目。对S180的肿瘤抑 制率具体结果见下表
含氮原子侧链的异甘草素衍生物对肿瘤细胞S180的体内抑制率
剂量动物数 动物体重 瘤重 抑瘤率
组别 -
mg/kg (n) 给药前 给药后 (g) (%)
对照组 - 10 25.4326.56 1.23±0.534 0
异甘草素40 10 26.5825.77 0.85±0.369 32.44
高剂量组180 10 24.0925.96 0.35±0.442 71.68
低剂量组90 10 25.8729.15 0.74±0.618 39.72
本发明的化合物具有较明显的体内肿瘤抑制作用，且其肿瘤抑制率均大于异 甘草素，细胞毒低于异甘草素，并且水溶性好，具有被开发成新药的潜力。
1权利要求
1.一类具有良好抗肿瘤活性的含氮原子侧链的异甘草素衍生物，其特征在于具有通式I所表示的结构式，式I中R为各种伯胺甲基或仲胺甲基。
2. 合成如通式I的含氮原子侧链的异甘草素衍生物的方法，其特征在于以 异甘草素和小分子伯胺或仲胺为原料，经过Mannich反应，合成一系列含氮原子侧链的异甘草素衍生物，其具体合成步骤如下取异甘草素放入圆底烧瓶中，加入伯胺或仲胺溶液，控制温度为10-50°C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液与冰乙酸的混合物，滴加完毕立刻停止反应，加入少量水稀释，用二氯甲垸、三氯甲烷或乙酸乙酯的其中一种萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥；硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓 缩至干，得到黄色固体；用体积比范围在l: 1 1: 3的石油醚、丙酮混合溶剂 重结晶得到黄色粉末。
3. 权利要求2所述的含氮原子侧链的异甘草素衍生物的合成过程，其特征 在于原料异甘草素既可以通过人工全合成也可以通过天然产物提取获得。
4. 权利要求1所述的通式I所表示的含氮原子侧链的异甘草素衍生物，其 特征在于具有良好的抗肿瘤活性、水溶性而且细胞毒性大大低于异甘草素。
全文摘要
本发明涉及一类具有抗肿瘤活性的异甘草素衍生物及其合成方法，属于医药技术领域。以异甘草素和小分子伯胺或仲胺为原料，经过Mannich反应，合成一系列含氮原子侧链的异甘草素衍生物。此合成方法具有步骤简单，条件温和，产物易纯化的优点。该类化合物拥有良好的抗肿瘤活性、水溶性而且细胞毒性大大低于异甘草素。
文档编号C07C225/16GK101648883SQ20091007281
公开日2010年2月17日 申请日期2009年9月8日 优先权日2009年9月8日
发明者付玉杰, 羽 孔, 李双明, 祖元刚, 猛 罗, 马永婷, 浩 骆 申请人:东北林业大学;付玉杰
技术领域：
本发明涉及一种异甘草素衍生物的合成方法以及它们的抗肿瘤活性。
_
背景技术：
异甘草素的化学名为4， 2'， 4'-三羟基査尔酮(4，2'，4'-tryhydroxychalcone)， 难溶于水、易溶于丙酮、乙醚、氯仿等有机溶剂。因最初从豆科植物甘草 G/yc戸tea wra/e"57》Fisch.、 胀果甘草G/yc戸/ /za !> /7她Bat或光果甘草 G/_yc>7T/^fl g/fl6m L.的干燥根及其根茎提取物分离出来而得名。
异甘草素是甘草中的一个重要的査尔酮化合物，具有抗肿瘤、抗病毒、抗自 由基、抑制脂质过氧化、抑制免疫缺陷病毒HIV等生物活性，此外还可治疗肠 痉挛，糖尿病，抑郁性精神病等。其中抗肿瘤作用是近年来国内外的研究热点， 张晶等研究发现异甘草素可以显著抑制人宫颈癌细胞体内外增殖[张晶，杨静,汤 宏斌，异甘草素对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用，中国药理学与毒理学杂 志,2005， 19(6)， 436-442];王小芹等通过研究异甘草素脂质体对人前列腺癌细胞 体外增殖的作用时发现异甘草素能有效地抑制前列腺癌细胞的增生[王小开,杨 静,郑航，异甘草素脂质体对人前列腺癌细胞体外增殖的抑制作用，医学新知杂 志，2007， 17(2)， 84-85]; Tetsuyuki Takahashi等人研究表明异甘草素在鼠和人结肠 癌细胞中，可以抑制细胞生长和促进细胞凋亡[Tetsuyuki Takahashi, Masaki Baba， Hoyoku Nishino, Toru Okuama, Cyclooxygenase-2 plays a suppressive role for induction of apoptosis in isoliquritigenin-treated mouse colon cancer cells, Cancer Letters, 2006,231(2), 319-325]; Hsu等研究了异甘草素能诱导人肝癌G2/M期细胞 停滞并诱导细胞凋亡，从而抑制肝癌细胞的生长[Ya-Ling Hsu， Po-Lin Kuo， Chun隱Ching Lin， Isoliquritigenin induces apoptosis and cell cycle arrest through p53-dependent pathway in Hep G2 cells, Life Sciences, 2005， 77(3)， 279-292]。但由 于异甘草素难溶于水，降低了其体内抗肿瘤活性，进而影响了它在医药领域的广 泛应用。
本发明旨在合成一系列含有氮原子侧链的异甘草素衍生物，增加其抗肿瘤活性及水溶性，使之成为抗肿瘤新药前体，满足医药领域用药需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以异甘草素和小分子伯胺或仲胺为原料，经过 Mannich反应，合成一系列具有良好抗肿瘤活性和水溶性的含氮原子侧链的异甘 草素衍生物的方法。
本发明提供了一类具有良好抗肿瘤活性的含氮原子侧链的异甘草素衍生物， 具有通式I所表示的结构式<formula>formula see original document page 4</formula>
式I中R为各种伯胺甲基或仲胺甲基。
合成如通式I的含氮原子侧链的异甘草素衍生物的方法以异甘草素和小分
<formula>formula see original document page 4</formula>其中R'为各种伯胺或仲胺，CH3COOH为乙酸，R为伯胺甲基或仲胺甲基。 所述含氮原子侧链的异甘草素衍生物(I)的合成具体步骤如下 取异甘草素放入圆底烧瓶中，加入伯胺或仲胺溶液，控制温度为10-50 °C， 电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液与冰乙酸的混合物。滴加完 毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用二氯甲烷、三氯甲垸或乙酸乙酯的其中一 种萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥；硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓 縮至干，得到黄色固体；用体积比范围在l: 1 1: 3的石油醚、丙酮混合溶剂 重结晶得到黄色粉末。
本发明所述的通式I所表示的含氮原子侧链的异甘草素衍生物，具有良好的 抗肿瘤活性、水溶性而且细胞毒性大大低于异甘草素。
具体实施例方式
以下实例详述本发明，但是，本发明不限于具体叙述的下实例-实施例1
3'-二甲胺甲基-2'，4,4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下
■OH<formula>formula see original document page 5</formula>
■OH
0
1
称取异甘草素0.64 g放入圆底烧瓶中，加入质量分数为33%二甲胺水溶液 0.46mL。控制温度为20。C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶 液0.23mL和6mL冰乙酸，滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用乙酸 乙酯萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱， 除去未反应的异甘草素，再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液 浓縮至干，得到黄色固体。用体积比为1: 1的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得 到黄色粉末0.28 g，收率35. 9%。
mp: >176°C '
ESI-MS(附/z): 314[M 1] ; 312[M-l]一
iH隱NMR(500MHz， DMSO): 2.410(6H， s， (CH3)2N-)， 3.836(2H， s， -CH2N)，
6.220(1H， d， J=9Hz， H3), 6.824-6.841(2H, m， H5, H6), 7.670陽7.747(4H， m, H2， 3'， 5， 6,)，13,
8.032(1H， d, J=9Hz, H2). JC-NMR(500MHz， DMSO): 190.65, 172.59, 170.20, 164.47, 160.58， 143.63，
132.05, 131.46, 126.36, 118.04, 116.29, 111.01, 110.15,106.89， 54.17， 43.76
实施例2
3，-吗啉甲基-2',4，4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下
.OH
0
2
称取异甘草素0.64 g放入圆底烧瓶中，加入吗啉0.26 mL，控制温度为20 °C ， 电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6 mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用二氯甲烷萃取。合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，得到黄色固体。用 体积比为h 1.5石油醚、丙酮的混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.36 g，收率40.4W。
mp: >180°C
ESI-MS(m/z): 356[M l] ; 354 [M-l]一
^-丽R(500MHz， DMSO): 2.506 (4H， s， -(CH2)2N)， 3,611(4H， s， -(CH2)20),
3.744(2H， s, -CH2N)， 6.385(1H, d, J=9Hz， H3), 6.831~6.849(2H， m, H5， H6)， 7.751~7.768(4H， m, H2', 3，， 5，， 6')， 8.133(1H, d, J=9Hz， H2). 13C-NMR(500MHz， DMSO): 191.68, 165.27， 163.75， 160.27, 144.30， 131,47,
131.24, 125.75， 117.31， 115.82, 112.35, 107.99, 107.75,66.00,52.54,51.99. '
实施例33'-环己胺甲基-2',4,4'-三羟基查尔酮的制备，结构式如下:
<formula>formula see original document page 7</formula>
称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入环己胺0.35mL,控制温度为20 °C ，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6 mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓縮至干，得到黄色固体。用 体积比为1: 2的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.40 g，收率43.2%。
mp: >168°C
ESI-MS(w/z): 368[M l] ; 366 [M-1〗—
tH陽NMR(500MHz ， DMSO): 1.138~1.988(10H， m， -CH2-), 2.742(1H， s,
-CHN)，4.008(2H, s, -CH2N)， 5.994(1 H， d, J=9Hz， H3), 6.803~6.820(2H, m， H5， H6), 7.589~7.697(4H, m， H2，， 3，， 5，， 6，)， 7.877(1H, d， J=9Hz， H2).
13C-NMR(500MHz， DMSO): 188.20， 175.04， 164.28， 159.67,141.63,131.33，
130.63, 126.14， 117.91, 115.74, 111.99, 108.27， 105.14， 54.78， 29.88,25.02， 23.93.
实施例4
3'-二异丙胺甲基-2',4,4'-三羟基査尔酮的制备，结果式如下<formula>formula see original document page 8</formula>称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入二异丙胺0.43 mL，控制温度为 20 °C ，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6 mL，滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用三氯甲烷萃取。合并有机相， 用无水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素， 再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，得到黄色固体。 用体积比为1:2的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.35 g，收率38.2%。
mp: >180°C
ESI-MS(附/z): 370[M l] ; 368 [M-1]—
'H隱NMR(500MHz ， DMSO): 1.125(12H, s， -CH3)， 3.228(2H, s， -CHN)，
3.959(2H, s, -CH2N)， 6.156(1H, d, J=9Hz， H3)， 6'820 6.837(2H， m, H5， H6)， 7.704~7.741(4H， m, H2'， 3，， 5，， 6，)， 8細(1H， d, J=9Hz, H2).
13C-NMR(500MHz， DMSO): 190.52, 170.27， 163.17, 160.02， 143.27, 131.01，
125.89， 117.50, 115.78, 110.58， 109.59, 106.60: 49.11,41.99, 30.66， 18.27.
实施例5
3'-二乙胺甲基-2',4,4'-三羟基查尔酮的制备，结构式如下<formula>formula see original document page 9</formula>称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入二乙胺0.32mL，控制温度为20 °C ，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6 mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，得到黄色固体。用 体积比为1: 1的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.45g，收率52.8%。
mp: >176。C
ESI隱MS(w/力342[M l] ; 340 [M-l]_ 1H-画R(500MHz， DMSO): 1.087(6H， t， J=7Hz， CH3), 2.708~2.751(4H, q,
J=7Hz， (CH2)2N-)， 3.924(2H, s， -CH2N)，
6.189(1H， d， J=9Hz， H3), 6.820~6.837(2H, m,
H5， H6)， 7.670 7.748(4H， m, H2，， 3，， 5，， 6，)，
8.023(1H， d, J=9Hz， H2).
13C-NMR(500MHz， DMSO): 190.80, 170.48, 164.19， 160.52， 143.69， 131.85,
131.48, 126.38， 118.03,116.27， 111.08， 110.13,
106.68， 49.28， 46.45， 10.79.
实施例6
3'國仲丁胺甲基-2'，4,4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下<formula>formula see original document page 10</formula>
称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入仲丁胺0.31mL，控制温度为20 °C,电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6 mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓縮至干，得到黄色固体。用 体积比为1: 3的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.32 g，收率37.4%。
mp: >175 °C
ESI-MS(m/z): 342 [M l] ; 340 [M-l]_ 1H國NMR(500MHz， DMSO): 0.916~0.930(6H， d， J=7Hz， CH3)， 1.821~1.875(1H,
m，國CHN)， 2'562(2H， d， J=7Hz， -CH2-) 3'986(2H,
s，-CH2N),6.044(lH，d,J=9Hz, H3)， 6.810~6.827(2H,
m， H5， H6)， 7.609~7.709(4H， m, H2'， 3，， 5，， 6，)，
7.912(1 H, d, J=9Hz, H2).
13C-NMR(500MHz， DMSO): 189.17, 174.56， 164.68, 160.22, 142.45, 131.84，
131.19,126.59， 118.34,116.24,111.95， 109.23，
105.78, 54.73， 44.17， 26.79,20.58.
实施例7
3'-叔丁胺甲基-2',4,4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下称取异甘草素0.64 g放入圆底烧瓶中，加入叔丁胺0.33 mL，控制温度为20 °C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用二氯甲垸萃取。合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓縮至干，得到黄色固体。用 体积比为1: 3的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.41 g，收率48.5%。
mp: >170°C
ESI國MS(附/z): 342 [M l] ; 340 [M-1]—
^-NMR(500MHz ， DMSO): 1.268(9H, s， CH3), 3.975(2H， s, -CH2N)，
5.993(1H，d， J=9Hz, H3), 6.810~6.827(2H， m， H5， H6)， 7.593 7.697(4H， m, H2'， 3，， 5，， 6，), 7.880(1 H, d, J=9Hz, H2). 13C-NMR(500MHz， DMSO):188.59, 164.80， 160.18， 142.09， 131.89,126.63，
118.39， 116.24， 112.66, 108.63, 105.64， 54.03, 37.54， 26.47.
实施例8
3'-乙醇胺甲基-2'，4，4'-三羟基查尔酮的制备，结构式如下<formula>formula see original document page 12</formula>
称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入乙醇胺0.18mL，控制温度为20 °C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸6mL， 滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无 水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用 体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，得到黄色固体。用 体积比为1:2.5石油醚、丙酮的混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.29 g，收率35.3%。
mp: >180°C
ESI國MS(附/z): 330 [M l] ; 328 [M—1]-
!H-NMR(500MHz， DMSO): 2.821(2H, s， -CH2OH), 3.585(2H， s, -CH2N)，
4.012(2H, s, -CH2N), 6.034(1 H， d， J=8Hz， H3)， 6.818~6.829(2H, m， H5, H6)， 7.634 7.691(4H, m, H2，， 3，， 5，， 6，)， 7.902(1H， d， J=8Hz, H2). 13C-NMR(500MHz， DMSO): 165.03， 160.16, 142.20， 131.89, 131.14， 126.64，
118.40， 116.23， 112.23， 108.95， 105.79， 58.14, 49.26， 43.30.
实施例9
3'-二乙醇胺甲基-2'，4，4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下<formula>formula see original document page 13</formula>■OH
O
9
称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入二乙醇胺0.29mL，控制温度为 20 °C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液0.23 mL和冰乙酸 6 mL，滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用三氯甲烷萃取。合并有机 相，用无水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草 素，再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓縮至干，得到黄色 固体。用体积比为1: 1的石油醚、丙酮混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.44 g， 收率47.5%。
mp: 106 °C
ESI掘—)374 [M 1] ; 372 [M-1]_
'H-NMR(500MHz， DMSO): 2.741(4H， s， -(CH2)2N), 3.578~3.601(4H, t, J=6Hz,
-CH2OH)， 3.980(2H, s， -CH2N)， 6.284(1H， d, J=9Hz， H3)， 6.832~6.848(2H， m, H5, H6)， 7.742~7.759(4H， m， H2，， 3,, 5，， 6，)， 8.085(1H, d， J=9Hz， H2)
13C-NMR(500MHz， DMSO): 191.61， 172.47， 168.05， 164.05， 160.66, 144.30，
131.88， 131.62， 126.31, 117.93， 116.30， 112.05， 109.29， 108.12, 58.07， 55.86, 50.29, 21.53.
实施例10
3'-吡咯烷基甲基-2'，4，4'-三羟基査尔酮的制备，结构式如下<formula>formula see original document page 14</formula>
称取异甘草素0.64g放入圆底烧瓶中，加入四氢吡咯0.25mL，控制温度为 20°C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36鬼甲醛溶液0.23mL和冰乙酸6 mL，滴加完毕立刻停止反应。加入少量水稀释，用三氯甲垸萃取，合并有机相， 用无水硫酸钠干燥，硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素， 再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓縮至干，得到黄色固体。 用体积比为1:1石油醚、丙酮的混合溶剂重结晶得到黄色粉末0.38 g，收率45.4%。
mp: 117 。C
ESI-MS(附/z): 340 [M l] ; 338 [M-l]—
工H-NMR(500MHz， DMSO): 1.837(4H, s, -CH2-CH2-)， 2.824~2.843(4H, t,
J=6Hz，(CH2)2N-)，3.986(2H，s, -CH2N)， 6.180(1H， d, J=9Hz, H3), 6.818~6.836(2H, m, H5, H6)， 7.654~7.732(4H, m, H2，， 3，， 5，， 6，)， 8.000(1H, d， J=9Hz， H2)
13C-NMR(500MHz， DMSO): 190.20， 172.54, 171.03, 164.57， 160.48, 143.31,
132.02， 131.39， 126.43， 118.10, 116.28， 110.64，， 110.51， 107.10, 53.34， 50.31， 23.54.
实施例11
含氮原子侧链的异甘草素衍生物抗肿瘤活性实验
(1)含氮原子侧链的异甘草素衍生物体外抗肿瘤活性实验，具体实验步骤如
下
①分别取处于指数生长期的肿瘤细胞，用含有10X胎牛血清的RPMI1640培 养液稀释成20000个细胞/mL。② 96孔板每孔中加入200 ^L细胞悬液，置于37 °C、 52培养箱中培养24h。
③ 将药物用二甲基亚砜溶解，每孔中加入设定浓度药物，稀释至需要的工作 浓度，用RPMI1640细胞维持稀释，同时以异甘草素为阳性对照。
④ 置于37'C、 5XC02培养箱中培养72h。
⑤ MTT:用无血清RPMI1640培养液配成5 mg/mL溶液，每孔中加入20pL， 置于37 °C 、 5 % C02孵箱中孵育4 h。
⑥ 吸出上清，用培养液洗三次加入100pL二甲基亚砜溶解沉淀物，用振荡器 摇匀测定OD570值。
⑦ 按下列公式计算药物对肿瘤细胞的抑制率 公式:肿瘤细胞生长抑制率=(1 —实验组OD/对照组OD) xl00% 根据72h的实验数据，由OD值计算生长抑制率，进而计算出半数抑制浓度
IC50值。
含氮原子侧链的异甘草素衍生物对肿瘤细胞PC-3、 MCF-7、 HO-4980的体外
半数抑制浓度化合物IC50 (ng/ml)
PC-3MCF-7HO-4980
136.95744.04937.396
217.268>跳00078.831
310.39590.48460.366
4>100扁>100扁>100細
522.51236.45033.185
619.45487.14776.966
765.41648.2405L060
828.86121.71629.284
920.56919細18.966
1037.13527.74525.382
异甘草素9.44616.41217.519
(2)含氮原子侧链的异甘草素衍生物体内抗肿瘤活性实验，具体实验步骤如
下
试验用小鼠随机分为对照组(生理盐水200ml/kg)、异甘草素(40mg/kg)、 衍生物高剂量组(180 mg/kg)、衍生物低剂量组(90 mg/kg)，异甘草素作为阳 性对照药品。选取移植肿瘤7天、肿瘤生长良好、腹部隆起明显的小鼠，腹部皮 肤消毒，用一次性无毒采血器经腹壁剌入腹腔，抽取腹水，放入无菌烧杯中以生
15理盐水稀释成体积比为l: 3的癌细胞混悬液，于每只小鼠右腋下接种0.2 ml， 各组动物与接种肿瘤次日开始给药，每日一次，连续给药10天。给药结束后， 将动物称重处死，剥离肿块称重，比较各组肿瘤生长情况，其中各组动物初始数 目为10只，表中所列动物数均为去除死亡动物后剩余的数目。对S180的肿瘤抑 制率具体结果见下表
含氮原子侧链的异甘草素衍生物对肿瘤细胞S180的体内抑制率
剂量动物数 动物体重 瘤重 抑瘤率
组别 -
mg/kg (n) 给药前 给药后 (g) (%)
对照组 - 10 25.4326.56 1.23±0.534 0
异甘草素40 10 26.5825.77 0.85±0.369 32.44
高剂量组180 10 24.0925.96 0.35±0.442 71.68
低剂量组90 10 25.8729.15 0.74±0.618 39.72
本发明的化合物具有较明显的体内肿瘤抑制作用，且其肿瘤抑制率均大于异 甘草素，细胞毒低于异甘草素，并且水溶性好，具有被开发成新药的潜力。
1权利要求
1.一类具有良好抗肿瘤活性的含氮原子侧链的异甘草素衍生物，其特征在于具有通式I所表示的结构式，式I中R为各种伯胺甲基或仲胺甲基。
2. 合成如通式I的含氮原子侧链的异甘草素衍生物的方法，其特征在于以 异甘草素和小分子伯胺或仲胺为原料，经过Mannich反应，合成一系列含氮原子侧链的异甘草素衍生物，其具体合成步骤如下取异甘草素放入圆底烧瓶中，加入伯胺或仲胺溶液，控制温度为10-50°C，电磁搅拌过程中，快速滴加质量分数为36%甲醛溶液与冰乙酸的混合物，滴加完毕立刻停止反应，加入少量水稀释，用二氯甲垸、三氯甲烷或乙酸乙酯的其中一种萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥；硅胶柱分离，先用乙酸乙酯洗脱，除去未反应的异甘草素，再用体积比为4: 1的乙酸乙酯-甲醇溶液洗脱，洗脱液浓 缩至干，得到黄色固体；用体积比范围在l: 1 1: 3的石油醚、丙酮混合溶剂 重结晶得到黄色粉末。
3. 权利要求2所述的含氮原子侧链的异甘草素衍生物的合成过程，其特征 在于原料异甘草素既可以通过人工全合成也可以通过天然产物提取获得。
4. 权利要求1所述的通式I所表示的含氮原子侧链的异甘草素衍生物，其 特征在于具有良好的抗肿瘤活性、水溶性而且细胞毒性大大低于异甘草素。
全文摘要
本发明涉及一类具有抗肿瘤活性的异甘草素衍生物及其合成方法，属于医药技术领域。以异甘草素和小分子伯胺或仲胺为原料，经过Mannich反应，合成一系列含氮原子侧链的异甘草素衍生物。此合成方法具有步骤简单，条件温和，产物易纯化的优点。该类化合物拥有良好的抗肿瘤活性、水溶性而且细胞毒性大大低于异甘草素。
文档编号C07C225/16GK101648883SQ20091007281
公开日2010年2月17日 申请日期2009年9月8日 优先权日2009年9月8日
发明者付玉杰, 羽 孔, 李双明, 祖元刚, 猛 罗, 马永婷, 浩 骆 申请人:东北林业大学;付玉杰
再多了解一些
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