专利名称：10－羟基喜树碱高效生产方法
技术领域：
本发明涉及一种10-羟基喜树碱生产方法，特别涉及一种利用喜树种芽高效生产10-羟基喜树碱的方法。
祖元刚的发明专利“生产10-羟基喜树碱和喜树碱原料的加工方法”，中国知识产权局专利局，申请号02132410.7，专利采用水培发芽的方法进行喜树碱向10-羟基喜树碱的生物转化。技术方案是将喜树种子置于湿度为100％～150％，温度为15℃～30℃的条件下堆积，水培法萌发240～264小时后改变条件，在湿度为70％～80％，温度为32℃～33℃的条件下继续萌发36～72小时，得到生产10-羟基喜树碱和喜树碱的原料。根据高效液相分析仪测定，原料中10-羟基喜树碱含量较未发芽种子提高15～16倍，同时，喜树碱含量保持不变。
祖元刚的发明专利“促进喜树种子芽内10-羟基喜树碱生产的方法”，中国知识产权局专利局，申请号02132922.2，该发明涉及一种促进喜树种子芽内10-羟基喜树碱生成的方法，其工艺流程是将喜树种子水培，使其发芽，将发芽的喜树种子置于加水的超声装置中，进行超声辐射，然后，将辐射后的喜树种芽置于加有乙醇的匀浆机中进行种芽组织的破碎、匀浆处理并过滤，得到含10-羟基喜树碱的滤液。经高效液相分析，10-羟基喜树碱的含量相当于1.5-2‰的投料量的干燥喜树种子，10-羟基喜树碱的含量比干燥的喜树种子增加了20-25倍。
上述工艺，虽然在提取10-羟基喜树碱的原材料及生物转化合成的方法上，以及利用物理方法进行诱导活体内喜树碱向10-羟基喜树碱方向进行生物转化方面进行了深入研究，但还仅局限于小试试验阶段，还存在着提取、分离工艺复杂，生产周期较长，产品得率较低等缺点。
发明内容
本发明目的在于克服上述技术中存在的问题，提供一种提取分离工艺流程简单、生产周期短，10-羟基喜树碱得率为0.1～0.3‰，纯度在98％以上的10-羟基喜树碱生产方法。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案是喜树种子经负压空化混旋破壁、消毒、去除杂质，水培发芽，种芽与提取溶剂混合，匀浆固液萃取，过滤，负压空化混旋固液萃取，过滤，浓缩，负压空化混旋液液萃取，重结晶或硅胶柱层析，得10-羟基喜树碱。
本发明的优点1.具有工艺流程简单，生产周期短、提取率高、溶剂用量少等优点。
2. 10-羟基喜树碱得率为0.1～0.3‰，纯度在98％以上。
3.取代了传统的物料干法粉碎、加热提取或机械搅拌萃取及大孔树脂吸附、逆流液液萃取等加工方法，应用负压空化混旋破壁、匀浆萃取、负压空化混旋固液萃取、负压空化混旋液液萃取工艺。
所述的负压空化混旋破壁、消毒是将喜树种子置于负压空化混旋破壁罐中，用1～2‰高锰酸钾水溶液浸没，采用负压为0.06～0.1MPa进行空化混旋破壁、消毒，时间为10～30分钟。
所述的水培发芽采用淋水的方法，在温度为20～30℃条件下进行发芽，时间为10～14天。
所述的匀浆固液萃取是将发芽的喜树种子与70％乙醇提取溶剂同时置于打浆机或磨浆机中进行匀浆萃取。
所述的过滤可采用80～200目的滤网进行抽滤、压滤或离心过滤。
所述的负压空化混旋固液萃取是将匀浆萃取过滤后的滤渣与70％乙醇提取溶剂同时置于负压空化混旋固液提取罐中，采用负压为0.06～0.1MPa进行空化混旋萃取，时间20～40分钟，过滤得滤液，重复操作2～5次，合并滤液。
所述的浓缩是滤液在温度为80～100℃，负压为0.06～0.1MPa或常压条件下进行提取溶剂回收，得浓缩液。
所述的负压空化混旋液液萃取是将浓缩液与萃取溶剂二氯甲烷或三氯甲烷等体积混合后置于负压空化混旋液液纯化柱中，采用负压为0.06～0.1MPa进行负压空化混旋液液萃取，时间5～30分钟，静止、分液得二氯甲烷或三氯甲烷萃取液，再与4～10％乙醇或3～5％甲醇溶剂等体积混合后进行负压空化混旋液液萃取，时间5～30分钟，得到萃取液，减压回收乙醇或甲醇有机溶剂，过滤得沉淀物。
权利要求
1.一种10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于喜树种子经负压空化混旋破壁、消毒、去除杂质，水培发芽，种芽与提取溶剂混合，匀浆固液萃取，过滤，负压空化混旋固液萃取，过滤，浓缩，负压空化混旋液液萃取，重结晶或硅胶柱层析，得10-羟基喜树碱。
2.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的负压空化混旋破壁、消毒是将喜树种子置于负压空化混旋破壁罐中，用1～2‰高锰酸钾水溶液浸没，采用负压为0.04～0.1MPa进行空化混旋破壁、消毒，时间为10～30分钟。
3.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的水培发芽采用淋水的方法，在温度为20～30℃条件下进行发芽，时间为10～14天。
4.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的匀浆固液萃取是将发芽的喜树种子与70％乙醇提取溶剂同时置于打浆机或磨浆机中进行匀浆萃取。
5.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的过滤可采用80～200目的滤网进行抽滤、压滤或离心过滤。
6.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的负压空化混旋固液萃取是将匀浆萃取过滤后的滤渣与70％乙醇提取溶剂同时置于负压空化混旋固液提取罐中，采用负压为0.06～0.1MPa进行空化混旋萃取，时间20～40分钟，过滤得滤液，重复操作2～5次，合并滤液。
7.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的浓缩是滤液在温度为80～100℃，负压为0.06～0.1MPa或常压条件下进行提取溶剂回收，得浓缩液。
8.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的负压空化混旋液液萃取是将浓缩液与萃取溶剂二氯甲烷或三氯甲烷等体积混合后置于负压空化混旋液液纯化柱中，采用负压为0.06～0.1MPa进行负压空化混旋液液萃取，时间5～30分钟，静止、分液得二氯甲烷或三氯甲烷萃取液，再与4～10％乙醇或3～5％甲醇溶剂等体积混合后进行负压空化混旋液液萃取，时间5～30分钟，得到萃取液，减压回收乙醇或甲醇有机溶剂，过滤得沉淀物。
全文摘要
一种10－羟基喜树碱高效生产方法，它包括喜树种子经负压空化混旋破壁、消毒，去除杂质，水培发芽，种芽与提取溶剂混合，匀浆固液萃取、过滤，负压空化混旋固液萃取，过滤，浓缩，负压空化混旋液液萃取，重结晶或硅胶柱层析，得10－羟基喜树碱。开辟了生产10－羟基喜树碱的植物提取新途径，提高了植物原料中10－羟基喜树碱的得率。取代了传统的物料干法粉碎、加热提取或机械搅拌萃取及大孔树脂吸附、逆流液液萃取等加工方法，应用了负压空化混旋破壁，匀浆萃取，负压空化混旋固液萃取和负压空化混旋液液萃取工艺。本发明具有工艺流程简单，生产周期短、提取率高、溶剂用量少等特点，10－羟基喜树碱得率为0.1～0.3‰，纯度在98％以上。
文档编号C07D491/00GK1450067SQ0311155
公开日2003年10月22日 申请日期2003年4月26日 优先权日2003年4月26日
发明者祖元刚, 史权, 祖柏实, 付玉杰, 唐中华, 张宝友 申请人:东北林业大学, 祖元刚
技术领域：
本发明涉及一种10-羟基喜树碱生产方法，特别涉及一种利用喜树种芽高效生产10-羟基喜树碱的方法。
祖元刚的发明专利“生产10-羟基喜树碱和喜树碱原料的加工方法”，中国知识产权局专利局，申请号02132410.7，专利采用水培发芽的方法进行喜树碱向10-羟基喜树碱的生物转化。技术方案是将喜树种子置于湿度为100％～150％，温度为15℃～30℃的条件下堆积，水培法萌发240～264小时后改变条件，在湿度为70％～80％，温度为32℃～33℃的条件下继续萌发36～72小时，得到生产10-羟基喜树碱和喜树碱的原料。根据高效液相分析仪测定，原料中10-羟基喜树碱含量较未发芽种子提高15～16倍，同时，喜树碱含量保持不变。
祖元刚的发明专利“促进喜树种子芽内10-羟基喜树碱生产的方法”，中国知识产权局专利局，申请号02132922.2，该发明涉及一种促进喜树种子芽内10-羟基喜树碱生成的方法，其工艺流程是将喜树种子水培，使其发芽，将发芽的喜树种子置于加水的超声装置中，进行超声辐射，然后，将辐射后的喜树种芽置于加有乙醇的匀浆机中进行种芽组织的破碎、匀浆处理并过滤，得到含10-羟基喜树碱的滤液。经高效液相分析，10-羟基喜树碱的含量相当于1.5-2‰的投料量的干燥喜树种子，10-羟基喜树碱的含量比干燥的喜树种子增加了20-25倍。
上述工艺，虽然在提取10-羟基喜树碱的原材料及生物转化合成的方法上，以及利用物理方法进行诱导活体内喜树碱向10-羟基喜树碱方向进行生物转化方面进行了深入研究，但还仅局限于小试试验阶段，还存在着提取、分离工艺复杂，生产周期较长，产品得率较低等缺点。
发明内容
本发明目的在于克服上述技术中存在的问题，提供一种提取分离工艺流程简单、生产周期短，10-羟基喜树碱得率为0.1～0.3‰，纯度在98％以上的10-羟基喜树碱生产方法。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案是喜树种子经负压空化混旋破壁、消毒、去除杂质，水培发芽，种芽与提取溶剂混合，匀浆固液萃取，过滤，负压空化混旋固液萃取，过滤，浓缩，负压空化混旋液液萃取，重结晶或硅胶柱层析，得10-羟基喜树碱。
本发明的优点1.具有工艺流程简单，生产周期短、提取率高、溶剂用量少等优点。
2. 10-羟基喜树碱得率为0.1～0.3‰，纯度在98％以上。
3.取代了传统的物料干法粉碎、加热提取或机械搅拌萃取及大孔树脂吸附、逆流液液萃取等加工方法，应用负压空化混旋破壁、匀浆萃取、负压空化混旋固液萃取、负压空化混旋液液萃取工艺。
所述的负压空化混旋破壁、消毒是将喜树种子置于负压空化混旋破壁罐中，用1～2‰高锰酸钾水溶液浸没，采用负压为0.06～0.1MPa进行空化混旋破壁、消毒，时间为10～30分钟。
所述的水培发芽采用淋水的方法，在温度为20～30℃条件下进行发芽，时间为10～14天。
所述的匀浆固液萃取是将发芽的喜树种子与70％乙醇提取溶剂同时置于打浆机或磨浆机中进行匀浆萃取。
所述的过滤可采用80～200目的滤网进行抽滤、压滤或离心过滤。
所述的负压空化混旋固液萃取是将匀浆萃取过滤后的滤渣与70％乙醇提取溶剂同时置于负压空化混旋固液提取罐中，采用负压为0.06～0.1MPa进行空化混旋萃取，时间20～40分钟，过滤得滤液，重复操作2～5次，合并滤液。
所述的浓缩是滤液在温度为80～100℃，负压为0.06～0.1MPa或常压条件下进行提取溶剂回收，得浓缩液。
所述的负压空化混旋液液萃取是将浓缩液与萃取溶剂二氯甲烷或三氯甲烷等体积混合后置于负压空化混旋液液纯化柱中，采用负压为0.06～0.1MPa进行负压空化混旋液液萃取，时间5～30分钟，静止、分液得二氯甲烷或三氯甲烷萃取液，再与4～10％乙醇或3～5％甲醇溶剂等体积混合后进行负压空化混旋液液萃取，时间5～30分钟，得到萃取液，减压回收乙醇或甲醇有机溶剂，过滤得沉淀物。
权利要求
1.一种10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于喜树种子经负压空化混旋破壁、消毒、去除杂质，水培发芽，种芽与提取溶剂混合，匀浆固液萃取，过滤，负压空化混旋固液萃取，过滤，浓缩，负压空化混旋液液萃取，重结晶或硅胶柱层析，得10-羟基喜树碱。
2.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的负压空化混旋破壁、消毒是将喜树种子置于负压空化混旋破壁罐中，用1～2‰高锰酸钾水溶液浸没，采用负压为0.04～0.1MPa进行空化混旋破壁、消毒，时间为10～30分钟。
3.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的水培发芽采用淋水的方法，在温度为20～30℃条件下进行发芽，时间为10～14天。
4.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的匀浆固液萃取是将发芽的喜树种子与70％乙醇提取溶剂同时置于打浆机或磨浆机中进行匀浆萃取。
5.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的过滤可采用80～200目的滤网进行抽滤、压滤或离心过滤。
6.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的负压空化混旋固液萃取是将匀浆萃取过滤后的滤渣与70％乙醇提取溶剂同时置于负压空化混旋固液提取罐中，采用负压为0.06～0.1MPa进行空化混旋萃取，时间20～40分钟，过滤得滤液，重复操作2～5次，合并滤液。
7.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的浓缩是滤液在温度为80～100℃，负压为0.06～0.1MPa或常压条件下进行提取溶剂回收，得浓缩液。
8.按照权利要求1所述的10-羟基喜树碱高效生产方法，其特征在于所述的负压空化混旋液液萃取是将浓缩液与萃取溶剂二氯甲烷或三氯甲烷等体积混合后置于负压空化混旋液液纯化柱中，采用负压为0.06～0.1MPa进行负压空化混旋液液萃取，时间5～30分钟，静止、分液得二氯甲烷或三氯甲烷萃取液，再与4～10％乙醇或3～5％甲醇溶剂等体积混合后进行负压空化混旋液液萃取，时间5～30分钟，得到萃取液，减压回收乙醇或甲醇有机溶剂，过滤得沉淀物。
全文摘要
一种10－羟基喜树碱高效生产方法，它包括喜树种子经负压空化混旋破壁、消毒，去除杂质，水培发芽，种芽与提取溶剂混合，匀浆固液萃取、过滤，负压空化混旋固液萃取，过滤，浓缩，负压空化混旋液液萃取，重结晶或硅胶柱层析，得10－羟基喜树碱。开辟了生产10－羟基喜树碱的植物提取新途径，提高了植物原料中10－羟基喜树碱的得率。取代了传统的物料干法粉碎、加热提取或机械搅拌萃取及大孔树脂吸附、逆流液液萃取等加工方法，应用了负压空化混旋破壁，匀浆萃取，负压空化混旋固液萃取和负压空化混旋液液萃取工艺。本发明具有工艺流程简单，生产周期短、提取率高、溶剂用量少等特点，10－羟基喜树碱得率为0.1～0.3‰，纯度在98％以上。
文档编号C07D491/00GK1450067SQ0311155
公开日2003年10月22日 申请日期2003年4月26日 优先权日2003年4月26日
发明者祖元刚, 史权, 祖柏实, 付玉杰, 唐中华, 张宝友 申请人:东北林业大学, 祖元刚
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