专利名称：碳的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有作为抗白血病剂和抗肿瘤剂效用的新型塔三烷(Taxane)。
萜烯类的塔三烷族(落羽松醇(红豆杉醇)是它的一个成员)已居生物技术和化学技术两个方面都吸引了很大兴趣。落羽松醇(红豆杉醇)是一种有前途的癌症化学治疗剂，具有广谱的抗白血病活性和肿瘤抑制活性。落羽松醇有一种2′R，3′S构型和下列结构式 式中Ac是乙酰基。由于这种有前途的活性，落羽松醇目前在法国和美国都在进行临床试验。
Colin等人在美国专利No.4，814，470中报告说，具有以下结构式(2)的落羽松醇衍生物，其活性显著大于落羽松醇(1)的活性。
R′代表氢或乙酰基，且R″和R″′之一代表羟基，另一个代表叔丁氧羰基氨基及其立体异构形式，和它们的混合物。化学式(2)的化合物，其中R″是羟基，R″′是具有2′R，3′S构型的叔丁氧羰基氨基，通常称为taxotere。
尽管落羽松醇和taxotere是有前途的化学治疗剂，但它们并不是普遍有效的。因此，仍需要另外的化学治疗剂。
因此，在本发明的目的中，包括提供属于有价值抗白血病剂和抗肿瘤剂的新型塔三烷(taxane)衍生物。
因此，扼要地说，本发明涉及碳2塔三烷衍生物。在一个较好的实施方案中，这种塔三烷衍生物有一个三环或四环核，对应于如下的化学式
式中X1是-OX6，-SX7或-NX8X9;
X2是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基;
X3和X4独立地是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基或杂芳基;
X5是-COX10，-COOX10，-COSX10，-CONX8X10或-SO2X11;
X6是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，羟基保护基团、或能增加塔三烷衍生物水溶性的官能团;
X7是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或巯基保护基团;
X8是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或杂原子取代的烷基、链烯基、链炔基、芳基或杂芳基;
X9是一个氨基保护基团;
X10是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或杂原子取代的烷基、链烯基、链炔基、芳基或杂芳基;
X11是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，-OX10，或-NX8X14;
X14是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基;
R1是氢，羟基，受保护的羟基或与R14共同形成一种碳酸酯;
R2是-OCOR31;
R2a是氢;
R4是氢，与R4a共同形成一个氧代、环氧乙烷或亚甲基，或与R5a及它们所连接的碳原子共同形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环;
R4a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，氰基，羟基，-OCOR30，或与R4共同形成一个氧代、环氧乙烷或亚甲基;
R5是氢，或与R5a共同形成一个氧代，R5a是氢，羟基，受保护的羟基，酰氧基，与R5共同形成一个氧代，或与R4及它们所连接的碳原子共同形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环;
R6是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基，或与R6a共同形成一个氧代;
R6a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基或与R6共同形成一个氧代;
R7是氢，或与R7a共同形成一个氧代，R7a是氢，卤素，受保护的羟基，-OR28，或与R7共同形成一个氧代;
R9是氢，或与R9a共同形成一个氧代;
R9a是氢、羟基，受保护的羟基、酰氧基，或与R9共同形成一个氧代;
R10是氢，或与R10a共同形成一个氧代，R10a是氢，-OCOR29，羟基，或受保护的羟基，或与R10共同形成一个氧代;
R14是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基，或与R1共同形成一种碳酸酯;
R14a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基;
R28是氢，酰基，羟基保护基团，或一个能增加塔三烷衍生物溶解度的官能团;和R29和R30独立地是氢，烷基，链烯基，链炔基，单环芳基，或单环杂芳基，和
R31是取代的苯基。
本发明的其它目的和特征将部分地是显而易见的，并将部分地在以下指出。
如在本文中所使用的，“Ar”代表芳基;“Ph”代表苯基;
“Ac”代表乙酰基;“Et”代表乙基;“R”代表烷基，除非另有定义;“Bu”代表丁基;“Pr”代表丙基;“TES”代表三乙基甲硅烷基;“TMS”代表三甲基甲硅烷基;“TPAP”代表过钌酸四丙铵;“DMAP”代表对二甲氨基吡啶;“DMF”代表二甲基甲酰胺;“LDA”代表二异丙基氨化锂;“LHMDS”代表六甲基二硅氮化锂;“LAH”代表氢化铝锂;“Red-Al”代表氢化二(2-甲氧基乙氧基)铝钠;“AIBN”代表偶氮二异丁腈;“10-DAB”代表10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ;“FAR”代表2-氯-1，1，2-三氟三乙胺;受保护的羟基系指-OR，其中R是一个羟基保护基团;“巯基保护基团”包括但不限于半硫代缩醛，例如，1-乙氧基乙基和甲氧基甲基，硫代酯类，或硫代碳酸酯;“胺保护基团”包括但不限于氨基甲酸酯类，例如氨基甲酸2，2，2-三氯乙酯或氨基甲酸叔丁酯;“羟基保护基团”包括但不限于醚类，如甲基、叔丁基、苄基，对甲氧基苄基，对硝基苄基，烯丙基，三苯甲基，甲氧基甲基，2-甲氧基丙基，甲氧基乙氧基甲基，乙氧基乙基，四氢吡喃基，四氢硫代吡喃基，和三烷基甲硅烷基的醚类，如三甲基甲硅烷基醚，三乙基甲硅烷基醚，二甲基芳基甲硅烷基醚，三异丙基甲硅烷基醚，和叔丁基二甲基甲硅烷基醚;酯类，例如，苯甲酰基，乙酰基，苯基乙酰基，甲酰基，一、二和三卤乙酰基，如氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、三氟乙酰基;和碳酸酯类，包括但不限于有1-6碳原子的碳酸烷酯，如甲酯、乙酯、正丙酯、异丙酯、正丁酯、叔丁酯、异丁酯、和正戊酯;有1-6碳原子并有1个或多个卤原子取代的碳酸烷酯，例如2，2，2-三氯乙氧基甲酯和2，2，2-三氯乙酯;有2-6碳原子的碳酸链烯酯，如乙烯酯和烯丙酯;有3-6碳原子的碳酸环烷酯;如环丙酯;环丁酯，环戊酯和环己酯;和环上任选地有一个或多个C1-6烷氧基或硝基取代的碳酸苯酯或苄酯。其它的羟基、巯基和氨基保护基团可以参阅“Protective Groups in Organic Synthesis”，T.W.Greene，John Wiley and Sons，1981。
本文中所述的烷基基团，无论单独还是有本文中所定义的各种取代基，较好是主链上含有1-6个碳原子且含有可多达15碳原子的低级烷基。它们可以是有取代的、直链、支链或环状的，并包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、己基、环丙基、环戊基、环己基等。
本文所述的链烯基基团，无论单独还是有本文中所定义的各种取代基，较好是主链上含有2-6碳原子且含有可多达15碳原子的低级链烯基。它们可以是有取代的、直链或支链的，并包括乙烯基，丙烯基，异丙烯基，丁烯基，异丁烯基，己烯基等。
本文所述的链炔基基团，无论单独还是有本文中所定义的各种取代基，较好是主链上含有2-6碳原子且含有可多达15碳原子的低级链炔基。它们可以是有取代的、直链或支链的，并包括乙炔基，丙炔基，丁炔基，异丁炔基，己炔基等。
本文所述的芳基基团，无论单独还是有各种取代基，含有6-15碳原子并包括苯基。取代基包括烷氧基，受保护的羟基，卤素，烷基，芳基，链烯基，酰基，酰氧基，硝基，氨基，酰氨基等。苯基是更好的芳基。
本文所述的杂芳基基团，无论单独还是有各种取代基，含有5-15个原子并包括呋喃基、噻吩基、吡啶基等。取代基包括烷氧基，受保护的羟基，卤素，烷基，芳基，链烯基，酰基，酰氧基，硝基，氨基和酰氨基。
本文中所述的酰氧基基团含有烷基、链烯基、链炔基、芳基或杂芳基基团。
本文中所述的取代的烷基、链烯基、链炔基、芳基和杂芳基基团与残基中的取代基可以是烷基、链烯基、链炔基、芳基、杂芳基和/或可以含有氮、氧、硫、卤素，并包括诸如甲氧基、乙氧基、丁氧基等低级烷氧基，氯、氟等卤素，硝基，氨基和酮基。
按照本发明，已发现对应于结构式3的化合物在离体试验中显示出显著性能，是有价值的抗白血病剂和抗肿瘤剂。它们的生物活性已利用按照Parness等人的方法(J.Cell Biology，91479-487(1981)进行的微管蛋白检定和人体癌细胞系，进行了离体测定，而且可与落羽松醇和taxotere所表现的生物活性相媲美。
在本发明的一个较好的实施方案中，塔三烷具有对应于落羽松醇或taxotere的结构，所不同的是碳2取代基R2，即-OCOR31，其中R31选自如下一组
而Z是烷基、羟基、烷氧基、卤素或三氟甲基。即R14和R14a是氢，R10是氢，R10a是羟基或乙酰氧基，R9和R9a共同形成一个氧代，R7是氢，R7a是羟基，R5是氢，R5a和R4以及它们所连接的碳形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环，R4a是乙酰氧基，R1是羟基，X1是OH，X2是氢，X3是苯基，X4是氢，X5是-COX10，X10是苯基或叔丁氧基，而且这种塔三烷具有2′R，3′S构型。
在本发明的其它实施方案中，塔三烷的结构与落羽松醇或taxotere的结构之间的差异在于碳2取代基和至少一个别的取代基。例如，R9a可以是氢，R9可以是氢、羟基、乙酰氧基或其它酰氧基，R7可以是乙酰氧基或其它酰氧基或卤素，R10a和R10可以各是氢或共同形成一个氧代;X3可以选自异丁烯基，异丙基，环丙基，正丁基，叔丁基，环丁基，环己基，呋喃基，噻吩基，吡啶基或它们的有取代衍生物，X5可以是-COX10或-COOX10，而X10可以选自呋喃基，噻吩基，吡啶基，烷基取代的呋喃基或噻吩基，叔、异或正丁基，乙基，异或正丙基，环丙基，环己基，烯丙基，巴豆基，1，3-二乙氧基-2-丙基，2-甲氧基乙基，戊基，新戊基，PhCH2O-，-NPh2，-NHnPr，-NHPh和-NHEt。
具有通式3的塔三烷可通过如下途径得到使一种β-内酰胺与具有塔三烷三环或四环核和一个C-13金属氧化物取代基的醇盐反应，生成在C-13上有一个β-酰胺酯取代基的化合物。这类β-内酰胺有如下结构式
式中X1-X5的定义同上。
这类β-内酰胺可以从容易得到的材料按以下流程A和B中所说明的那样制备流程A
流程B 试剂(a)三乙胺，CH2Cl2，25℃，18小时;(b)4当量硝酸铵高铈，CH3CN，-10℃，10分钟;(c)KOH，THF，H2O，0℃，30分钟，或吡咯烷，吡啶，25℃，3小时;(d)TESCl，吡啶，25℃，30分钟或2-甲氧基丙烯甲苯磺酸(催化剂)，THF，0℃，2小时;(e)正丁基锂，THF，-78℃，30分钟;和一种酰氯或氯甲酸酯(X5＝-COX10)，磺酰氯(X5＝-COSX10)或异氰酸酯(X5＝-CONX8X10);(f)＝异丙基氨化锂，THF，-78℃～-50℃;(g)六甲基二硅氮化锂，THF，-78℃～0℃;(h)THF，-78℃～25℃，12小时。
起始原料是容易得到的。在流程A中，α-乙酰氧基乙酰氯是从乙醇酸制备的，而在一种叔胺存在下它与从醛和对甲氧基苯胺制备的亚胺发生环化缩合，给出1-对甲氧基苯基-3-酰氧基-4-芳基氮杂环丁-2-酮。对甲氧基苯基基团可以容易地通过用硝酸铵高铈氧化而脱除，而酰氧基可以在对本门技术有经验的人员所熟悉的标准条件下水解，提供3-羟基-4-芳基氮杂环丁-2-酮。在流程B中，α-(三乙基甲硅烷氧基)乙酸乙酯可容易地从乙醇酸制备。
在流程A和B中，X1较好是-OX6而X6是一个羟基保护基团。2-甲氧基丙基(“NOP”)、1-乙氧基乙基(“EE”)等保护基团较好，但各种各样的其它标准保护基团如三乙基甲硅烷基基团或其它三烷基(或芳基)甲硅烷基基团也可以使用。如以上所指出的，进一步的羟基保护基团及其合成可以参阅“Protective groups in Organie Synthesis”，T.W.Greene，John Wiley & Sons，1981。
外消旋的β-内酰胺可以先拆析成纯对映体，然后通过重结晶保护对应的2-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基乙酸酯。然而，以下所述的、带有β-酰胺酯侧链的反应具有高度非对映选择性的优点，因而允许使用侧链前体物的外消旋混合物。
具有三环或四环塔三烷核和一个C-13金属氧化物或铵氧化物取代基的醇盐有如下结构式
式中R1-R14a如以上所定义，M包含铵或者是一种任意选自ⅠA族、ⅡA族和过渡金属这一组的金属，且较好是Li，Mg，Na，K或Ti。最好的是，这种醇盐具有四环塔三烷核并对应于如下结构式 式中M、R2、R4a、R7、R7a、R9、R9a、R10和R10a的定义同上。
这类醇盐可以通过使一种具有塔三烷核和C-13羟基基团的醇在适当的溶剂中与有机金属化合物反应来制备。最好的是，这种醇是一种受保护的浆果赤霉素Ⅲ，具体地说，是7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ(这可以通过Greene等人在JACS1105917(1988)中所述的方法或通过其它路线得到(或7，10-二(0-三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ。
如Greene等人所报导，10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ按照以下反应流程转化成7-0-三乙基甲硅烷基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ
在据报导属于仔细优化条件的情况下，10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ与20当量(C2H5)3SiCl在50ml吡啶/mmol10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ的存在下，在23℃于氩气氛下反应20小时，得到7-三乙基甲硅烷基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ(4a)作为一种反应产物，纯化后的产率为84-86%。然后，这种反应产物可以任选地用5当量CH3COCl和25ml吡啶/mmol 4a在0℃于氩气氛下酰化48小时，得到86%产率的7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ(4b)。Greene等人，JACS 110，5917-5918(1988)。
这种7-保护的浆果赤霉素Ⅲ(4b)与一种有机金属化合物如LHMDS在一种溶剂如四氢呋喃(THF)中反应，生成金属醇盐13-0-锂-7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ，如以下反应流程所示 如以下反应流程所示，13-0-锂-7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ与一种β-内酰胺反应，其中X1较好是-OX6(X6是一个羟基保护基团)且X2-X5的定义同上，得到一种中间产物，其中C-7和C-2′羟基均受保护。然后，这些保护基团在温和条件下水解，以便不干扰酯键或塔三烷取代基。
醇转化成醇盐以及塔三烷衍生物的最终合成，均可在同一反应器中进行。较好的是，β-内酰胺是在醇盐反应器中生成之后添加到该反应器中的。
本发明的化学式3的化合物可用于抑制动物(包括人类)体中的肿瘤生长，较好以一种药物组合物的形式给药，该组合物含有一有效抗肿瘤数量的本发明化合物并与药物学上可接受的载体或稀释剂组合。
本文中的抗肿瘤组合物可以以任何一种适合于预期用途的适当形式配制;例如，经口的、非经肠的或表面的给药。非经肠给药的实例是肌肉内、静脉内、腹膜内、经直肠和经皮下的给药。
稀释剂或载体成分不应使这些抗肿瘤化合物的疗效降低。
适合于经口使用的剂量形式包括片剂、可分散粉剂、颗粒剂、胶囊剂、悬浮液剂、糖浆剂和酏剂、片剂的惰性稀释剂和载体包括诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖和滑石。片剂也可以含有造粒剂和崩解剂如淀粉和藻酸，粘合剂如淀粉、明胶和阿拉伯胶，以及润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石。片剂可以是无包衣的也可以用任何已知技术包衣;以便诸如延缓崩解和吸收。可用于胶囊剂中的惰性稀释剂和载体包括诸如碳酸钙、磷酸钙和高岭土、悬浮液剂、糖浆剂和酏剂可以含有惯用赋形剂，例如，甲基纤维素、西黄蓍胶、藻酸钠;润湿剂，如卵磷脂和硬脂酸聚氧乙烯酯;和防腐剂，如对羟基苯甲酸乙酯。
适用于非经肠给药的剂量形式包括溶液、悬浮液、分散液、乳液等。它们也可以制成可在临使用前溶解或悬浮于无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式。它们可以含有本技术中已知的悬浮剂或分散剂。
化学式(3)的化合物的水溶性可以通过C2′和/或C7取代基的改性加以提高。例如，在以下情况下水溶性可以提高X1是-OX6且R7a是-OR28，而X6和R28独立地是氢或-COGCOR1，其中G是亚乙基，亚丙基，-CH＝CH-，1，2-环己烷，或1，2-亚苯基;
R1＝OH碱，NR2R3，OR3，SR3，OCH2CONR4R5，OH;
R2＝氢，甲基;
R3＝(CH2)nNR6R7;(CH2)nN R6R7R8X ;
n＝1～3R4＝氢，含有1～4碳的低级烷基R5＝氢，含有1-4碳的低级烷基，苄基，羟乙基，CH2CO2H，二甲氨基乙基;
R6R7＝含有1或2碳的低级烷基，苄基或R6和R7与NR6R7中的氮原子一起形成以下的环 R8＝含有1或2碳的低级烷基，苄基X ＝卤根碱＝NH3，(HOC2H4)3N，N(CH3)3，CH3N(C2H4OH)2，NH2(CH2)6NH2，N-甲基葡糖胺，NaOH，KOH。
其X1或X2为-COGCOR1的化合物的制备详见Haugwitz美国专利4，942，184，该专利列为本文参考文献。
此外，在以下情况下也可以提高溶解度X1是-OX6且X6是一个具有化学式-COCX＝CHX或-COX-CHX-CHX-SO2O-M的基团，式中X是氢、烷基或芳基，M是氢、碱金属或一个氨基，详见Kingston等人美国专利No.5，059，699(列为本文参考文献)。
具有可供选择的C9取代基的塔三烷可以通过选择还原C9酮取代基来制备，产生对应的C9β-羟基衍生物。还原剂较好是一种硼氢化物，最好是硼氢化四丁铵(Bu4NBH4)或硼氢化三乙酰氧。
如反应流程1中所说明的，浆果赤霉素Ⅲ与Bu4NBH4在二氯甲烷中的反应产生9-脱氧-9β-羟基浆果赤霉素Ⅲ5。在C7羟基基团用三乙基甲硅烷基保护基团保护之后，可诸如把一个适当的侧链连接到7-保护的-9β-羟基衍生物6上，如本文中其它部分所述。因此，脱除留下的保护基团就得到有一个C13侧链的9β-羟基脱氧落羽松醇或其它9β-羟基四环塔三烷。
反应流程1 此外，7-保护的-9β-羟基衍生物6的C13羟基基团也可以用三甲基甲硅烷基或其它能像反应流程2中所说明的那样相对于C7羟基保护基团选择性脱除的保护基团来保护，以便能进一步选择性处置塔三烷的各种取代基。例如，7，13-保护的-9β-羟基衍生物7与KH的反应引起乙酸酯基从C10转移到C9，而且使羟基从C9转移到C10，因而产生-10脱乙酰基衍生物8。10-脱乙酰基衍生物8的C10羟基用三乙基甲硅烷基保护产生了衍生物9。衍生物9上C13羟基保护基团的选择性脱除产生了衍生物10，它可以按以上所述连接一个适当侧链。
反应流程2
如反应流程3中所示，10-氧代衍生物11可以通过10-脱乙酰基衍生物8的氧化来提供。此后，C13羟基保护基团可以选择性脱除，然后按以上所述连接一个侧链，产生有一个C13侧链的9-乙酰氧基-10-氧代落羽松醇或其它9-乙酰氧基-10-氧代四环塔三烷。此外，C9乙酸酯基可以通过用一种还原剂如二碘化钐还原10-氧代衍生物11来选择性脱除，产生9-脱氧-10-氧代衍生物12，其C13羟基保护基团可以选择性脱除，随后按以上所述连接一个侧链，产生有一个C13侧链的9-脱氧-10-氧代落羽松醇或其它9-脱氧-10-氧代四环塔三烷。
反应流程3
反应流程4说明10-DAB还原生成五元醇13的反应。然后，可以用三乙基甲硅烷基或另一种保护基团选择性地保护五元醇13的C7和C10羟基基团，以产生可以按如上所述或在四环取代基进一步改性之后再连接一个C13侧链的三元醇14。
反应流程4 有C9和/或C10酰氧基取代基而没有乙酸酯的塔三烷可以使用10-DAB作为反应流程5中所说明的原料来制备。10-DAB与三乙基甲硅烷基氯在吡啶中的反应产生了7-保护的10-DAB15。然后，7-保护的10-DAB15的C10羟基取代基可以容易地用任何一种标准酰化剂进行酰化，产生具有一个新C10酰氧取代基的衍生物16。衍生物16的C9酮取代基的选择性还原产生9β-羟基衍生物17，后者可以连接一个C13侧链。此外，还可以如以上反应流程2中所述那样使C10和C9基团发生转移。
反应流程5 有备选C2和/或C4酯的塔三烷可以使用浆果赤霉素Ⅲ和10-DAB作为起始材料来制备。浆果赤霉素Ⅲ的C2和/或C4酯和10-DAB可以利用还原剂如LAH或Red-Al选择性地还原成对应的醇，此后，新酯可以利用标准酰化剂如酸酐和酰氯与一种胺如吡啶、三乙胺、DMAP或二异丙基·乙基胺组合进行取代。此外，C2和/或C4醇可以通过用一种适当的碱如LDA处理该种醇而生成对应的醇盐，然后用一种酰化剂如酰氯处理而转化成新的C2和/或C4酯。
在C2和/或C4上有不同取代基的浆果赤霉素Ⅲ和10-DAB类似物可以按照反应流程6-10中所述那样制备。为了简化这种描述，利用10-DAB作为起始原料。然而，应当理解的是，浆果赤霉素Ⅲ衍生物或类似物可以利用同一系列反应(除C10羟基基团的保护外)产生，只需用浆果赤霉素Ⅲ代替10-DAB作为起始材料。在C2和至少一个其它位置例如C1、C4、C7、C9、C10和C13上有不同取代基的浆果赤霉素Ⅲ和10-DAB类似物的衍生物，也可以通过进行本文中所述的其它反应中的任何一种和技术熟练水平之内的任何其它反应来制备。
在反应流程6中，保护的10-DAB3用氢化铝锂转化成三醇18。然后用Cl2CO吡啶溶液，随后用一种亲核试剂(如Grignard试剂或烷基锂试剂)处理，使三醇18转化成对应的C4酯。
流程6 三醇18用LDA脱质子随后引进一种酰氯，能选择性地给出C4酯。例如，当利用乙酰氯时，三醇18就转化成1，2-二醇4，如反应流程7中所述。
三醇18也可以容易地转化成，1，2-碳酸酯19。碳酸酯19在强烈标准条件下的乙酰化能提供碳酸酯21，如反应流程8中所述;烷基锂或者Grignard试剂与碳酸酯19加成，提供在C4上有一个自由羟基基团的C2酯，如反应流程6中所述。
流程7 如反应流程9中所述，其它C4取代基可按如下提供使碳酸酯19与一种酰氯和一种叔胺反应，产生碳酸酯22，然后使之与烷基锂或Grignard试剂反应，提供在C2上有新取代基的10-DAB衍生物。
流程9 此外，浆果赤霉素Ⅲ也可以用作一种起始原料并按反应流程10中所示那样进行反应。在对C7和C13进行保护之后，浆果赤霉素Ⅲ用LAH还原，产生1，2，4，10-四醇24。四醇24利用Cl2CO和吡啶转化成碳酸酯25，而碳酸酯25再用一种酰氯和吡啶在C10上进行酰化而产生碳酸酯26(画出)，也可以用乙酸酐和吡啶进行(未画出)。碳酸酯26在强烈标准条件下的乙酰化提供碳酸酯27，然后使之与烷基锂反应，提供在C2和C10有新取代基的浆果赤霉素Ⅲ衍生物。
反应流程10
浆果赤霉素Ⅲ的10-脱乙酰氧基衍生物和10-DAB的10-脱氧衍生物可以通过使浆果赤霉素Ⅲ或10-DAB(或它们的衍生物)与二碘化钐反应来制备。有一个C10离去基团的四环塔三烷与二碘化钐之间的反应可以在0℃在一种溶剂如四氢呋喃中进行。有益的是，这种二碘化钐能选择性地抽取C10离去基团;四环核上的C13侧链和其它取代基仍不受影响。此后，可以使C9酮取代基还原，以按本文中其它部分所述那样提供对应的9-脱氧-9β-羟基-10-脱乙酰氧基或10-脱氧衍生物。
C7二氢及其它C7取代的塔三烷可以按反应流程11、12和12a中所述那样制备。
反应流程11
如反应流程12中所示，浆果赤霉素Ⅲ可以通过在THF溶液中在室温用FAR处理，转化成7-氟浆果赤霉素Ⅲ。有一个自由C7羟基的其它浆果赤霉素衍生物表现出类似行为。此外，7-氯浆果赤霉素Ⅲ可以通过在含有过量盐酸三乙胺的二氯甲烷溶液中用甲磺酰氯和三乙胺处理浆果赤霉素Ⅲ来制备。
有C7酰氧基取代基的塔三烷可以按反应流程12a中所述那样制备，7，13-保护的10-氧代衍生物11通过选择性脱除C13保护基团并用一种金属如锂代替它而转化成其对应C13醇盐。然后，这种醇盐与一种β-内酰胺或其它侧链前体物反应。随后C7保护基团的水解引起C7羟基取代基转移到C10，C10氧代取代基转移到C9，而C9酰氧基取代基转移到C7。
种类繁多的三环塔三烷是天然存在的，而且通过类似于本文中所述的那些操作，可以使一个适当的侧链连接到这些物质的C13氧上。此外，如反应流程13中所示，7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ可以通过在二氯甲烷溶液中四氟硼酸三甲基氧翁的作用而转化成一种三环塔三烷。然后，这种产品二醇与四乙酸铅反应，提供对应的C4酮。
反应流程13 最近，已在浆果紫杉(Taxus baccata)针叶的提取物中发现一种羟基化的塔三烷(14-羟基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ)(C&EN＜p.36-37，April 12，1993)。具有以上所述各种C2、C4等官能团的这种羟基化塔三烷的衍生物也可以利用这种羟基化塔三烷来制备。此外，C14羟基与10-DAB的C1羟基基团一起，可以按C&EN中所述转化成一种1，2-碳酸酯，也可以按本文中其它部分有关C2、C4、C7、C9、C10和C13取代基的描述，把它转化成各种各样的酯或其它官能团。
以下实例旨在对本发明做更充分说明。
实施例1 (64-4)2-脱苯甲酰基-2-(3-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(48.2毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，在此温度下保持1小时后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配于饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后残留物用硅胶过滤提纯，得到70.8毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向70.8毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃下搅拌13小时，并分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到50.3毫克物料，再用重结晶提纯得到43.1毫克(86%)2-脱苯甲酰基-2-(3-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.162-164℃;[α]25Na-61.6°(C 0.790，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ7.67(m，2H，甲氧基苯甲酸酯，邻位)，7，36(m，6H，芳族)，7.15(m，1H，甲氧基苯甲酸酯)，6.19(m，1H，H13)，5.65(d，J＝6.9Hz，1H，H2β)，5.50(m，1H，NH)，5.21(m，2H，H3′，H10)，4.95(dd，J＝7.8，1.8Hz，1H，H5)，4.60(m，1H，H2′)，4.33(d，J＝8.7Hz，1H，H20α)，4.23(m，1H，H7)，4.17(d，J＝8.7Hz，1H，H20β)，3.89(d，J＝6.9Hz，1H，H3)，3.86(s，3H，甲氧基)，3.56(m，1H，2′OH)，2.55(m，1H，H6α)，2.34(s，3H，4Ac)，2.23(m，2H，H14)，1.83(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.73(s，3H，Me19)，1.32(s，9H，叔丁基)，1.22(s，3H，Me17)，1.11(s，3H，Me16).
实施例2 (65-1)
2-脱苯甲酰基-2-(3-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(47.2毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，在此温度下保持1小时后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配于饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后残留物用硅胶过滤提纯，得到70.0毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向70.0毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃下搅拌13小时，并分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到49.3毫克物料，再用重结晶提纯得到41.9毫克(85%)2-脱苯甲酰基-2-(3-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.169-171℃;[α]25Na-60.4°(C 0.510，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ7.91(m，2H，苯甲酸酯)，7，38(m，7H，芳族)，6.21(m，1H，H13)，5.65(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.42(m，1H，NH)，5.26(m，1H，H3′)，5.20(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，4.94(m，1H，H5)，4.61(m，1H，H2′)，4.31(d，J＝8.7Hz，1H，H20α)，4.24(m，1H，H7)，4.17(d，J＝8.7Hz，1H，H20β)，3.91(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.37(m，1H，2′OH)，2.57(m，1H，H6α)，2.43(s，3H，4Ac)，2.26(m，2H，H14)，2.17(s，3H，甲基苯甲酸酯)，1.84(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.74(s，3H，Me19)，1.33(s，9H，叔丁基)，1.22(s，3H，Me17)，1.12(s，3H，Me16).
实施例3 (65-2)2-脱苯甲酰基-2-(3-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(48.4毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，在此温度下保持1小时后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配于饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后残留物通过硅胶过滤提纯，得到71毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向71毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃下搅拌13小时，并分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到50.5毫克物料，再用重结晶提纯得到40.4毫克(80%)2-脱苯甲酰基-2-(3-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.149-150℃;[α]25Na-53.3°(C 0.510，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.11(br s，1H，氯苯甲酸酯邻位)，7.98(d，J＝7.5Hz，1H，氯苯甲酸酯邻位)，7.59(m，1H，氯苯甲酸酯)，7.45(t，J＝7.5Hz，1H， 氯苯甲酸酯)，7.38(m，5H，芳族)，6.18(m，1H，H13)，5.62(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.41(m，1H，H3′)，5.24(m，1H，NH)，5.20(d，J＝1.0Hz，1H，H10)，4.95(dd，J＝9.3，1.2Hz，1H，H5)，4.59(m，1H，H2′)，4.30(d，J＝8.4Hz，1H，H20α)，4.23(m，1H，H7)，4.15(d，J＝8.4Hz，1H，H20β)，3.91(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.35(m，1H，2′OH)，2.58(m，1H，H6α)，2.36(s，3H，4Ac)，2.24(m，2H，H14)，1.84(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.34(s，9H，叔丁基)，1.23(s，3H，Me17)，1.12(s，3H，Me16).
实施例4 (65-3)2-脱苯甲酰基-2-(3-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(50.4毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物通过硅胶过滤提纯，得到73.0毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向73.0毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃下搅拌13小时，再分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到52.6毫克物料，再经重结晶提纯得到41.0毫克(78%)2-脱苯甲酰基-2-(3-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.140-142℃;[α]25Na-50.4°(C 1.055，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.43(s，1H，苯甲酸酯，邻位)，8.29(d，J＝7.8Hz，1H，苯甲酸酯邻位)，7.88(d，J＝7.8Hz，1H，苯甲酸酯)，7.66(t，J＝7.8Hz，1H，苯甲酸酯)，7.38(m，5H，aron芳族)，6.17(m，1H，H13)，5.65(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.38(m，1H，NH)，5.23(m，1H，H3′)，5.21(d，J＝1.8Hz，1H，H10)，4.95(m，1H，H5)，4.58(m，1H，H2′)，4.27(d，J＝8.7Hz，1H，H20α)，4.21(m，1H，H7)，4.15(d，J＝8.7Hz，1H，H20β)，3.93(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.35(m，1H，2′OH)，2.59(m，1H，H6α)，2.33(s，3H，4Ac)，2.23(m，2H，H14)，1.85(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.76(s，3H，Me19)，1.32(s，9H，叔丁基)，1.22(s，3H，Me17)，1.11(s，3H，Me16).
实施例5 (65-4)
2-脱苯甲酰基-2-(4-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(4-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(48.2毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的已烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.24毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到71毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(4-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向71毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃下搅拌13小时，再分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到50.3毫克物料，再用重结晶提纯得到45.2毫克(90%)2-脱苯甲酰基-2-(4-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.160-162℃;[α]25Na-47.6°(c 0.290，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.05(dd，J＝9.0，2H，甲氧基苯甲酸酯，邻位)，7，38(m，5H，芳族)，6.96(dd，J＝9.0，2H，甲氧基苯甲酸酯，间位)，6.23(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.42(m，1H，H3′)，5.27(m，1H，NH)，5.19(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，4.93(dd，J＝7.8，1.8Hz，1H，H5)，4.62(m，1H，H2′)，4.31(d，J＝9.0Hz，1H，H20α)，4.24(m，1H，H7)，4.19(d，J＝9.0Hz，1H，H20β)，3.89(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.65(s，3H，甲氧基)，3.32(m，1H，2′OH)，2.58(m，1H，H6α)，2.37(s，3H，4Ac)，2.26(m，2H，H14)，1.85(s，3H，Me18)，1.78(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.34(s，9H，叔丁基)，1.23(s，3H，Me17)，1.12(s，3H，Me16).
实施例6 (66-1)2-脱苯甲酰基-2-(4-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(4-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(48.4毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的已烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物通过硅胶过滤提纯，得到71毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(4-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向71毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，再分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到51毫克物料，再用重结晶方法提纯，得到37.9毫克(75%)2-脱苯甲酰基-2-(4-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.160-161℃;[α]25Na-46.0°(c 0.104，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.03(d，J＝8.7Hz，2H，氯苯甲酸酯邻位)，7.48(d，J＝8.7Hz，2H，氯苯甲酸酯间位)，7.38(m，5H，芳族)，6.23(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.45(m，1H，H3′)，5.26(m，1H，NH)，5.20(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，4.93(d，J＝7.8 Hz，1H，H5)，4.63(m，1H，H2′)，4.28(d，J＝8.2Hz，1H，H20α)，4.22(m，1H，H7)，4.15(d，J＝8.2Hz，1H，H20β)，3.90(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.36(m，1H，2′OH)，2.58(m，1H，H6α)，2.37(s，3H，4Ac)，2.25(m，2H，H14)，1.85(s，3H，Me18)，1.80(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.32(s，9H，叔丁基)，1.23(s，3H，Me17)，1.11(s，3H，Me16).
实施例7 (66-2)2-脱苯甲酰基-2-(4-氟苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(4-氟苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(47.5毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃溶液中滴加0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配于饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物通过硅胶过滤提纯，得到70毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(4-氟苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向70毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，再分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉醋酸乙酯溶液后得到49.5毫克物料，该物料经重结晶提纯后，得到42.0毫克(85%)2-脱苯甲酰基-2-(4-氟苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.158-160℃;[α]25Na-47.6°(c 0.290，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.13(m，2H，氟苯甲酸酯邻位)，7.38(m，5H，芳族)，7.17(m，2H，氟苯甲酸酯)，6.23(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.41(d，J＝9.9Hz，1H，H3′)，5.26(m，1H，NH)，5.20(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，4.93(dd，J＝9.9，2.1 Hz，1H，H5)，4.63(m，1H，H2′)，4.28(d，J＝8.2Hz，1H，H20α)，4.24(m，1H，H7)，4.17(d，J＝8.2Hz，1H，H20β)，3.91(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.32(m，1H，2′OH)，2.58(m，1H，H6α)，2.37(s，3H，4Ac)，2.25(m，2H，H14)，1.85(s，3H，Me18)，1.80(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.33(s，9H，叔丁基)，1.25(s，3H，Me17)，1.12(s，3H，Me16).
实施例8 (68-1)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-落羽松醇的制备。
在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(2-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-(二)-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ(50.4毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃的溶液中滴加0.066毫升1.00M的LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到73.0毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-(三)-0-三乙基甲硅烷基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向73.0毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，并分配于饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉乙酸乙酯溶液后得52.6毫克物料，该物料用重结晶方法提纯，得到39.4毫克(75%)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇。
m.p.121-123℃;[α]25Na-34.2°(c 0.760，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.10(m，1H，苯甲酸酯，邻位)，7.82(d，J＝7.5Hz，1H，苯甲酸酯)，7.70(m，2H，苯甲酸酯)，7，35(m，5H，芳族)，6.24(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.46(m，1H，NH)，5.28(m，1H，H3′)，5.19(d，J＝1.8Hz，1H，H10)，4.89(dd，J＝8.7，1.2 Hz，1H，H5)，4.63(m，1H，H2′)，4.26(d，J＝8.1Hz，1H，H20α)，4.17(m，2H，H7，H20β)，3.90(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.35(m，1H，2′OH)，2.56(m，1H，H6α)，2.39(m，2H，H14)，2.24(s，3H，4Ac)，1.87(s，3H，Me18)，1.84(m，1H，H6β)，1.76(s，3H，Me19)，1.38(s，9H，叔丁基)，1.24(s，3H，Me17)，1.11(s，3H，Me16).
实施例9 (68-2)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-落羽松醇的制备。
在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(2-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-(二)-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ(47.2毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃的溶液中滴加0.066毫升1.00M的LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到70.0毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-(三)-0-三乙基甲硅烷基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向70.0毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，并分配于饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉乙酸乙酯溶液后得49.3毫克物料，该物料用重结晶方法提纯，得到44.4毫克(90%)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇。
m.p.129-131℃;[α]25Na-50.8°(c 0.750，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.05(m，1H，苯甲酸酯)，7.38(m，8H，芳族)，6.21(m，1H，H13)，5.65(d，J＝6.6Hz，1H，H2β)，5.46(m，1H，NH)，5.24(m，1H，H3′)，5.20(d，J＝0.9Hz，1H，H10)，4.91(dd，J＝9.3，1.5 Hz，1H，H5)，4.60(br s，1H，H2′)，4.25(d，J＝8.1Hz，1H，H20α)，4.24(m，1H，H7)，4.17(d，J＝8.1Hz，1H，H20β)，3.88(d，J＝6.6Hz，1H，H3)，3.37(m，1H，2′OH)，2.63(s，3H，甲基苯甲酸酯)，2.57(m，1H，H6α)，2.30(s，3H，4Ac)，2.58(m，2H，H14)，1.83(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.37(s，9H，叔丁基)，1.24(s，3H，Me17)，1.13(s，3H，Me16).
实施例10 (73-4)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二(三氟甲基)苯甲酰基)-10-脱乙酰基-落羽松醇的制备。
在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二(三氟甲基)苯甲酰基)-7，10-(二)-0-三乙基甲硅烷基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ(51.3毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃的溶液中滴加0.066毫升1.00M的LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到73.9毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-(三)-0-三乙基甲硅烷基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二(三氟甲基)苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向73.9毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，并分配于饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉乙酸乙酯溶液后得53.4毫克物料，该物料用重结晶方法提纯，得到49.1毫克(92%)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二(三氟甲基)苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇。
m.p.141-143℃;[α]25Na-43.6°(c 0.730，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.59(s，2H，苯甲酸酯，邻位)，8.12(s，1H，苯甲酸酯对位)，7.37(m，5H，芳族)，6.14(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.36(m，1H，NH)，5.21(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，5.18(m，1H，H3′)，4.97(dd，J＝9.6，2.1 Hz，1H，H5)，4.58(m，1H，H2′)，4.19(m，3H，H20，H7)，3.95(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.39(m，1H，2′OH)，2.59(m，1H，H6α)，2.30(s，3H，4Ac)，2.25(m，2H，H14)，1.85(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.32(s，9H，叔丁基)，1.22(s，3H，Me17)，1.13(s，3H，Me16).
实施例11 (74-1)
N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二(甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰氧基-落羽松醇的制备。
在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二甲基苯甲酰基)-7，10-(二)-0-三乙基甲硅烷基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ(48.1毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃的溶液中滴加0.066毫升1.00M的LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到70.1毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-(三)-0-三乙基甲硅烷基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰氧基落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向70.1毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，并分配于饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉乙酸乙酯溶液后得50.2毫克物料，该物料用重结晶方法提纯，得到45.1毫克(90%)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇。
m.p.198-200℃;[α]25Na-49.0°(c 0.965，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ7.72(s，2H，苯甲酸酯，邻位)，7，37(m，5H，芳族)，7.23(s，1H，苯甲酸酯，对位)，6.21(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.45(m，1H，NH)，5.25(m，1H，H3′)，5.20(d，J＝1.8Hz，1H，H10)，4.94(dd，J＝9.3，1.2 Hz，1H，H5)，4.61(m，1H，H2′)，4.32(d，J＝8.1Hz，1H，H20α)，4.21(m，1H，H7)，4.16(d，J＝8.7Hz，1H，H20β)，3.89(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.39(m，1H，2′OH)，2.58(m，1H，H6α)，2.38(s，6H，二甲基苯甲酸酯)，2.36(s，3H，4Ac)，2.27(m，2H，H14)，1.88(m，1H，H6β)，1.83(s，3H，Me18)，1.74(s，3H，Me19)，1.33(s，9H，叔丁基)，1.22(s，3H，Me17)，1.12(s，3H，Me16).
实施例12 (74-2)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-羟基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-落羽松醇的制备。
在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3-乙基甲硅烷基氧苯甲酰基)-7，10-(二)-0-三乙基甲硅烷基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ(54.1毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃的溶液中滴加0.066毫升1.00M的LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到76.7毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-(三)-(三乙基甲硅烷基)-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-三乙基甲硅烷基氧苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向76.7毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，并分配于饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉乙酸乙酯溶液后得49.4毫克物料，该物料用重结晶方法提纯，得到43.4毫克(88%)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-羟基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇。
m.p.153-155℃;[α]25Na-45.0°(c 0.560，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ7.36(m，9H，芳族)，7.10(m，1H，OH)，6.38(m，1H，H13)，5.60(d，J＝9.9Hz，NH)，5.53(d，J＝7.5Hz，1H，H2β)，5.37(m，1H，H3′)，5.18(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，4.90(dd，J＝9.9，2.4Hz，1H，H5)，4.75(m，1H，H2′)，4.29(d，J＝8.4Hz，1H，H20α)，4.24(m，2H，H7，H20β)，3.93(d，J＝7.5Hz，1H，H3)，3.29(m，1H，2′OH)，2.56(m，1H，H6α)，2.36(s，3H，4Ac)，2.27(m，2H，H14)，1.91(s，3H，Me18)，1.85(m，1H，H6β)，1.76(s，3H，Me19)，1.33(s，9H，叔丁基)，1.24(s，3H，Me17)，1.08(s，3H，Me16).
实施例13实例1-12的化合物64-4，65-1，65-2，65-3，65-4，66-1，66-2，68-1，68-2，73-4，74-1和74-2，对人体结肠癌细胞HCT-116进行离体细胞毒性活性评估。细胞毒性是在HCT116细胞中用XTT(2，3-二(2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基)-5-[(苯氨基)碳酰]-2H-四唑翁氢氧化物)试验评价的(Scudiero等人，“Evaluation of a soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines”(用人体及其它肿瘤细胞系评估培养基中细胞生长和药物敏感性的可溶四唑嗡/甲 试验)，Cancer Res.，484827-4833，1988)。以4000个细胞/孔把细胞涂在96孔微滴度板上，24小时后添加药物，并进行系列稀释。这些细胞在37℃培养72小时，此时添加四唑鎓染料XTT。活细胞中的脱氢酶使XTT还原成一种在450nm吸收光的形式，它可以用分光光度法定量。吸光度越大，活细胞数就越多。结果用IC50表示，即使细胞增殖(即450nm的吸光度)抑制到未处理对照细胞增值的50%所需的药物浓度。
所有化合物的IC50均小于0.5，且除化合物65-4(实例5)外所有化合物的IC50全都小于0.1，表明它们具有细胞毒性活性。
权利要求
1.下式所示的塔三烷衍生物 式中X1是-OX6，-SX7或-NX8X9；X2是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基；X3和X4独立地是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基或杂芳基；X5是-COX10，-COOX10，-COSX10，-CONX8X10或-SO2X11；X6是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，羟基保护基团、或能增加塔三烷衍生物水溶性的官能团；X7是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或巯基保护基团；X8是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或杂原子取代的烷基、链烯基、链炔基、芳基或杂芳基；X9是一个氨基保护基团；X10是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或杂原子取代的烷基、链烯基、链炔基、芳基或杂芳基；X11是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，-OX10，或-NX8X14；X14是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基；R1是氢，羟基，受保护的羟基或与R14共同形成一种碳酸酯；R2是-OCOR31；R2a是氢；R4是氢，与R4a共同形成一个氧代、环氧乙烷或亚甲基，或与R5a及它们所连接的碳原子共同形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环；R4a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，氰基，羟基，-OCOR30，或与R4共同形成一个氧代、环氧乙烷或亚甲基；R5是氢，或与R5a共同形成一个氧代，R5a是氢，羟基，受保护的羟基，酰氧基，与R5共同形成一个氧代，或与R4及它们所连接的碳原子共同形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环；R6是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基，或与R6a共同形成一个氧代；R6a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基或与R6共同形成一个氧代；R7是氢，或与R7a共同形成一个氧代，R7a是氢，卤素，受保护的羟基，-OR28，或与R7共同形成一个氧代；R9是氢，或与R9a共同形成一个氧代；R9a是氢、羟基，受保护的羟基、酰氧基，或与R9共同形成一个氧代；R10是氢，或与R10a共同形成一个氧代，R10a是氢，-OCOR29，羟基，或受保护的羟基，或与R10共同形成一个氧代；R14是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基，或与R1共同形成一种碳酸酯；R14a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基；R28是氢，酰基，羟基保护基团，或一个能增加塔三烷衍生物溶解度的官能团；和R29和R30独立地是氢，烷基，链烯基，链炔基，单环芳基，或单环杂芳基，和R31是取代的苯基。
2.权利要求1的塔三烷衍生物，其中R31选自下列基团 且Z是烷基、羟基、烷氧基、卤素或三氟甲基。
3.权利要求2的塔三烷衍生物，其中R14和R14a是氢，R10是氢，R10a是羟基或乙酰氧基，R9和R9a共同形成一个氧代，R7是氢，R7a是羟基，R5是氢，R5a和R4以及它们所连接的碳形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环，R4a是乙酰氧基，R1是羟基，X1是OH，X2是氢，X3是苯基，X4是氢，X5是-COX10，X10是苯基或叔丁氧基，而且这种塔三烷具有2′R，3′S构型。
4.权利要求2的塔三烷衍生物，其中R14和R14a是氢，R10是氢，R10a是羟基或乙酰氧基，R9和R9a共同形成一个氧代，R7是氢，R7a是羟基，R5是氢，R5a和R4以及它们所连接的碳形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环，R4a是乙酰氧基，R1是羟基，X1是OH，X2是氢，X3是烷基或链烯基，X4是氢，X5是-COX10，X10是苯基，叔-、异-、或正-丁氧基，乙氧基，异-或正丙氧基，环己氧基、烯丙氧基、巴豆氧基，1，3-二乙氧-2-丙氧基，2-甲氧基乙氧基，戊氧基，新戊氧基，PhCH2O-，-NPh2，-NHnPr，-NHPh和-NHEt。
5.一种含有权利要求1的塔三烷衍生物和一种或多种药理学上可接受的惰性或生理活性的稀释剂或辅助剂的药物组合物。
全文摘要
具有可供选择的C
文档编号C07D407/12GK1101346SQ94101158
公开日1995年4月12日 申请日期1994年1月29日 优先权日1993年1月29日
发明者R·A·霍尔顿, C·-L·陶 申请人:佛罗里达州立大学
技术领域：
本发明涉及具有作为抗白血病剂和抗肿瘤剂效用的新型塔三烷(Taxane)。
萜烯类的塔三烷族(落羽松醇(红豆杉醇)是它的一个成员)已居生物技术和化学技术两个方面都吸引了很大兴趣。落羽松醇(红豆杉醇)是一种有前途的癌症化学治疗剂，具有广谱的抗白血病活性和肿瘤抑制活性。落羽松醇有一种2′R，3′S构型和下列结构式 式中Ac是乙酰基。由于这种有前途的活性，落羽松醇目前在法国和美国都在进行临床试验。
Colin等人在美国专利No.4，814，470中报告说，具有以下结构式(2)的落羽松醇衍生物，其活性显著大于落羽松醇(1)的活性。
R′代表氢或乙酰基，且R″和R″′之一代表羟基，另一个代表叔丁氧羰基氨基及其立体异构形式，和它们的混合物。化学式(2)的化合物，其中R″是羟基，R″′是具有2′R，3′S构型的叔丁氧羰基氨基，通常称为taxotere。
尽管落羽松醇和taxotere是有前途的化学治疗剂，但它们并不是普遍有效的。因此，仍需要另外的化学治疗剂。
因此，在本发明的目的中，包括提供属于有价值抗白血病剂和抗肿瘤剂的新型塔三烷(taxane)衍生物。
因此，扼要地说，本发明涉及碳2塔三烷衍生物。在一个较好的实施方案中，这种塔三烷衍生物有一个三环或四环核，对应于如下的化学式
式中X1是-OX6，-SX7或-NX8X9;
X2是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基;
X3和X4独立地是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基或杂芳基;
X5是-COX10，-COOX10，-COSX10，-CONX8X10或-SO2X11;
X6是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，羟基保护基团、或能增加塔三烷衍生物水溶性的官能团;
X7是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或巯基保护基团;
X8是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或杂原子取代的烷基、链烯基、链炔基、芳基或杂芳基;
X9是一个氨基保护基团;
X10是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或杂原子取代的烷基、链烯基、链炔基、芳基或杂芳基;
X11是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，-OX10，或-NX8X14;
X14是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基;
R1是氢，羟基，受保护的羟基或与R14共同形成一种碳酸酯;
R2是-OCOR31;
R2a是氢;
R4是氢，与R4a共同形成一个氧代、环氧乙烷或亚甲基，或与R5a及它们所连接的碳原子共同形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环;
R4a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，氰基，羟基，-OCOR30，或与R4共同形成一个氧代、环氧乙烷或亚甲基;
R5是氢，或与R5a共同形成一个氧代，R5a是氢，羟基，受保护的羟基，酰氧基，与R5共同形成一个氧代，或与R4及它们所连接的碳原子共同形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环;
R6是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基，或与R6a共同形成一个氧代;
R6a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基或与R6共同形成一个氧代;
R7是氢，或与R7a共同形成一个氧代，R7a是氢，卤素，受保护的羟基，-OR28，或与R7共同形成一个氧代;
R9是氢，或与R9a共同形成一个氧代;
R9a是氢、羟基，受保护的羟基、酰氧基，或与R9共同形成一个氧代;
R10是氢，或与R10a共同形成一个氧代，R10a是氢，-OCOR29，羟基，或受保护的羟基，或与R10共同形成一个氧代;
R14是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基，或与R1共同形成一种碳酸酯;
R14a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基;
R28是氢，酰基，羟基保护基团，或一个能增加塔三烷衍生物溶解度的官能团;和R29和R30独立地是氢，烷基，链烯基，链炔基，单环芳基，或单环杂芳基，和
R31是取代的苯基。
本发明的其它目的和特征将部分地是显而易见的，并将部分地在以下指出。
如在本文中所使用的，“Ar”代表芳基;“Ph”代表苯基;
“Ac”代表乙酰基;“Et”代表乙基;“R”代表烷基，除非另有定义;“Bu”代表丁基;“Pr”代表丙基;“TES”代表三乙基甲硅烷基;“TMS”代表三甲基甲硅烷基;“TPAP”代表过钌酸四丙铵;“DMAP”代表对二甲氨基吡啶;“DMF”代表二甲基甲酰胺;“LDA”代表二异丙基氨化锂;“LHMDS”代表六甲基二硅氮化锂;“LAH”代表氢化铝锂;“Red-Al”代表氢化二(2-甲氧基乙氧基)铝钠;“AIBN”代表偶氮二异丁腈;“10-DAB”代表10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ;“FAR”代表2-氯-1，1，2-三氟三乙胺;受保护的羟基系指-OR，其中R是一个羟基保护基团;“巯基保护基团”包括但不限于半硫代缩醛，例如，1-乙氧基乙基和甲氧基甲基，硫代酯类，或硫代碳酸酯;“胺保护基团”包括但不限于氨基甲酸酯类，例如氨基甲酸2，2，2-三氯乙酯或氨基甲酸叔丁酯;“羟基保护基团”包括但不限于醚类，如甲基、叔丁基、苄基，对甲氧基苄基，对硝基苄基，烯丙基，三苯甲基，甲氧基甲基，2-甲氧基丙基，甲氧基乙氧基甲基，乙氧基乙基，四氢吡喃基，四氢硫代吡喃基，和三烷基甲硅烷基的醚类，如三甲基甲硅烷基醚，三乙基甲硅烷基醚，二甲基芳基甲硅烷基醚，三异丙基甲硅烷基醚，和叔丁基二甲基甲硅烷基醚;酯类，例如，苯甲酰基，乙酰基，苯基乙酰基，甲酰基，一、二和三卤乙酰基，如氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、三氟乙酰基;和碳酸酯类，包括但不限于有1-6碳原子的碳酸烷酯，如甲酯、乙酯、正丙酯、异丙酯、正丁酯、叔丁酯、异丁酯、和正戊酯;有1-6碳原子并有1个或多个卤原子取代的碳酸烷酯，例如2，2，2-三氯乙氧基甲酯和2，2，2-三氯乙酯;有2-6碳原子的碳酸链烯酯，如乙烯酯和烯丙酯;有3-6碳原子的碳酸环烷酯;如环丙酯;环丁酯，环戊酯和环己酯;和环上任选地有一个或多个C1-6烷氧基或硝基取代的碳酸苯酯或苄酯。其它的羟基、巯基和氨基保护基团可以参阅“Protective Groups in Organic Synthesis”，T.W.Greene，John Wiley and Sons，1981。
本文中所述的烷基基团，无论单独还是有本文中所定义的各种取代基，较好是主链上含有1-6个碳原子且含有可多达15碳原子的低级烷基。它们可以是有取代的、直链、支链或环状的，并包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、己基、环丙基、环戊基、环己基等。
本文所述的链烯基基团，无论单独还是有本文中所定义的各种取代基，较好是主链上含有2-6碳原子且含有可多达15碳原子的低级链烯基。它们可以是有取代的、直链或支链的，并包括乙烯基，丙烯基，异丙烯基，丁烯基，异丁烯基，己烯基等。
本文所述的链炔基基团，无论单独还是有本文中所定义的各种取代基，较好是主链上含有2-6碳原子且含有可多达15碳原子的低级链炔基。它们可以是有取代的、直链或支链的，并包括乙炔基，丙炔基，丁炔基，异丁炔基，己炔基等。
本文所述的芳基基团，无论单独还是有各种取代基，含有6-15碳原子并包括苯基。取代基包括烷氧基，受保护的羟基，卤素，烷基，芳基，链烯基，酰基，酰氧基，硝基，氨基，酰氨基等。苯基是更好的芳基。
本文所述的杂芳基基团，无论单独还是有各种取代基，含有5-15个原子并包括呋喃基、噻吩基、吡啶基等。取代基包括烷氧基，受保护的羟基，卤素，烷基，芳基，链烯基，酰基，酰氧基，硝基，氨基和酰氨基。
本文中所述的酰氧基基团含有烷基、链烯基、链炔基、芳基或杂芳基基团。
本文中所述的取代的烷基、链烯基、链炔基、芳基和杂芳基基团与残基中的取代基可以是烷基、链烯基、链炔基、芳基、杂芳基和/或可以含有氮、氧、硫、卤素，并包括诸如甲氧基、乙氧基、丁氧基等低级烷氧基，氯、氟等卤素，硝基，氨基和酮基。
按照本发明，已发现对应于结构式3的化合物在离体试验中显示出显著性能，是有价值的抗白血病剂和抗肿瘤剂。它们的生物活性已利用按照Parness等人的方法(J.Cell Biology，91479-487(1981)进行的微管蛋白检定和人体癌细胞系，进行了离体测定，而且可与落羽松醇和taxotere所表现的生物活性相媲美。
在本发明的一个较好的实施方案中，塔三烷具有对应于落羽松醇或taxotere的结构，所不同的是碳2取代基R2，即-OCOR31，其中R31选自如下一组
而Z是烷基、羟基、烷氧基、卤素或三氟甲基。即R14和R14a是氢，R10是氢，R10a是羟基或乙酰氧基，R9和R9a共同形成一个氧代，R7是氢，R7a是羟基，R5是氢，R5a和R4以及它们所连接的碳形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环，R4a是乙酰氧基，R1是羟基，X1是OH，X2是氢，X3是苯基，X4是氢，X5是-COX10，X10是苯基或叔丁氧基，而且这种塔三烷具有2′R，3′S构型。
在本发明的其它实施方案中，塔三烷的结构与落羽松醇或taxotere的结构之间的差异在于碳2取代基和至少一个别的取代基。例如，R9a可以是氢，R9可以是氢、羟基、乙酰氧基或其它酰氧基，R7可以是乙酰氧基或其它酰氧基或卤素，R10a和R10可以各是氢或共同形成一个氧代;X3可以选自异丁烯基，异丙基，环丙基，正丁基，叔丁基，环丁基，环己基，呋喃基，噻吩基，吡啶基或它们的有取代衍生物，X5可以是-COX10或-COOX10，而X10可以选自呋喃基，噻吩基，吡啶基，烷基取代的呋喃基或噻吩基，叔、异或正丁基，乙基，异或正丙基，环丙基，环己基，烯丙基，巴豆基，1，3-二乙氧基-2-丙基，2-甲氧基乙基，戊基，新戊基，PhCH2O-，-NPh2，-NHnPr，-NHPh和-NHEt。
具有通式3的塔三烷可通过如下途径得到使一种β-内酰胺与具有塔三烷三环或四环核和一个C-13金属氧化物取代基的醇盐反应，生成在C-13上有一个β-酰胺酯取代基的化合物。这类β-内酰胺有如下结构式
式中X1-X5的定义同上。
这类β-内酰胺可以从容易得到的材料按以下流程A和B中所说明的那样制备流程A
流程B 试剂(a)三乙胺，CH2Cl2，25℃，18小时;(b)4当量硝酸铵高铈，CH3CN，-10℃，10分钟;(c)KOH，THF，H2O，0℃，30分钟，或吡咯烷，吡啶，25℃，3小时;(d)TESCl，吡啶，25℃，30分钟或2-甲氧基丙烯甲苯磺酸(催化剂)，THF，0℃，2小时;(e)正丁基锂，THF，-78℃，30分钟;和一种酰氯或氯甲酸酯(X5＝-COX10)，磺酰氯(X5＝-COSX10)或异氰酸酯(X5＝-CONX8X10);(f)＝异丙基氨化锂，THF，-78℃～-50℃;(g)六甲基二硅氮化锂，THF，-78℃～0℃;(h)THF，-78℃～25℃，12小时。
起始原料是容易得到的。在流程A中，α-乙酰氧基乙酰氯是从乙醇酸制备的，而在一种叔胺存在下它与从醛和对甲氧基苯胺制备的亚胺发生环化缩合，给出1-对甲氧基苯基-3-酰氧基-4-芳基氮杂环丁-2-酮。对甲氧基苯基基团可以容易地通过用硝酸铵高铈氧化而脱除，而酰氧基可以在对本门技术有经验的人员所熟悉的标准条件下水解，提供3-羟基-4-芳基氮杂环丁-2-酮。在流程B中，α-(三乙基甲硅烷氧基)乙酸乙酯可容易地从乙醇酸制备。
在流程A和B中，X1较好是-OX6而X6是一个羟基保护基团。2-甲氧基丙基(“NOP”)、1-乙氧基乙基(“EE”)等保护基团较好，但各种各样的其它标准保护基团如三乙基甲硅烷基基团或其它三烷基(或芳基)甲硅烷基基团也可以使用。如以上所指出的，进一步的羟基保护基团及其合成可以参阅“Protective groups in Organie Synthesis”，T.W.Greene，John Wiley & Sons，1981。
外消旋的β-内酰胺可以先拆析成纯对映体，然后通过重结晶保护对应的2-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基乙酸酯。然而，以下所述的、带有β-酰胺酯侧链的反应具有高度非对映选择性的优点，因而允许使用侧链前体物的外消旋混合物。
具有三环或四环塔三烷核和一个C-13金属氧化物或铵氧化物取代基的醇盐有如下结构式
式中R1-R14a如以上所定义，M包含铵或者是一种任意选自ⅠA族、ⅡA族和过渡金属这一组的金属，且较好是Li，Mg，Na，K或Ti。最好的是，这种醇盐具有四环塔三烷核并对应于如下结构式 式中M、R2、R4a、R7、R7a、R9、R9a、R10和R10a的定义同上。
这类醇盐可以通过使一种具有塔三烷核和C-13羟基基团的醇在适当的溶剂中与有机金属化合物反应来制备。最好的是，这种醇是一种受保护的浆果赤霉素Ⅲ，具体地说，是7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ(这可以通过Greene等人在JACS1105917(1988)中所述的方法或通过其它路线得到(或7，10-二(0-三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ。
如Greene等人所报导，10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ按照以下反应流程转化成7-0-三乙基甲硅烷基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ
在据报导属于仔细优化条件的情况下，10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ与20当量(C2H5)3SiCl在50ml吡啶/mmol10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ的存在下，在23℃于氩气氛下反应20小时，得到7-三乙基甲硅烷基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ(4a)作为一种反应产物，纯化后的产率为84-86%。然后，这种反应产物可以任选地用5当量CH3COCl和25ml吡啶/mmol 4a在0℃于氩气氛下酰化48小时，得到86%产率的7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ(4b)。Greene等人，JACS 110，5917-5918(1988)。
这种7-保护的浆果赤霉素Ⅲ(4b)与一种有机金属化合物如LHMDS在一种溶剂如四氢呋喃(THF)中反应，生成金属醇盐13-0-锂-7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ，如以下反应流程所示 如以下反应流程所示，13-0-锂-7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ与一种β-内酰胺反应，其中X1较好是-OX6(X6是一个羟基保护基团)且X2-X5的定义同上，得到一种中间产物，其中C-7和C-2′羟基均受保护。然后，这些保护基团在温和条件下水解，以便不干扰酯键或塔三烷取代基。
醇转化成醇盐以及塔三烷衍生物的最终合成，均可在同一反应器中进行。较好的是，β-内酰胺是在醇盐反应器中生成之后添加到该反应器中的。
本发明的化学式3的化合物可用于抑制动物(包括人类)体中的肿瘤生长，较好以一种药物组合物的形式给药，该组合物含有一有效抗肿瘤数量的本发明化合物并与药物学上可接受的载体或稀释剂组合。
本文中的抗肿瘤组合物可以以任何一种适合于预期用途的适当形式配制;例如，经口的、非经肠的或表面的给药。非经肠给药的实例是肌肉内、静脉内、腹膜内、经直肠和经皮下的给药。
稀释剂或载体成分不应使这些抗肿瘤化合物的疗效降低。
适合于经口使用的剂量形式包括片剂、可分散粉剂、颗粒剂、胶囊剂、悬浮液剂、糖浆剂和酏剂、片剂的惰性稀释剂和载体包括诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖和滑石。片剂也可以含有造粒剂和崩解剂如淀粉和藻酸，粘合剂如淀粉、明胶和阿拉伯胶，以及润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石。片剂可以是无包衣的也可以用任何已知技术包衣;以便诸如延缓崩解和吸收。可用于胶囊剂中的惰性稀释剂和载体包括诸如碳酸钙、磷酸钙和高岭土、悬浮液剂、糖浆剂和酏剂可以含有惯用赋形剂，例如，甲基纤维素、西黄蓍胶、藻酸钠;润湿剂，如卵磷脂和硬脂酸聚氧乙烯酯;和防腐剂，如对羟基苯甲酸乙酯。
适用于非经肠给药的剂量形式包括溶液、悬浮液、分散液、乳液等。它们也可以制成可在临使用前溶解或悬浮于无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式。它们可以含有本技术中已知的悬浮剂或分散剂。
化学式(3)的化合物的水溶性可以通过C2′和/或C7取代基的改性加以提高。例如，在以下情况下水溶性可以提高X1是-OX6且R7a是-OR28，而X6和R28独立地是氢或-COGCOR1，其中G是亚乙基，亚丙基，-CH＝CH-，1，2-环己烷，或1，2-亚苯基;
R1＝OH碱，NR2R3，OR3，SR3，OCH2CONR4R5，OH;
R2＝氢，甲基;
R3＝(CH2)nNR6R7;(CH2)nN R6R7R8X ;
n＝1～3R4＝氢，含有1～4碳的低级烷基R5＝氢，含有1-4碳的低级烷基，苄基，羟乙基，CH2CO2H，二甲氨基乙基;
R6R7＝含有1或2碳的低级烷基，苄基或R6和R7与NR6R7中的氮原子一起形成以下的环 R8＝含有1或2碳的低级烷基，苄基X ＝卤根碱＝NH3，(HOC2H4)3N，N(CH3)3，CH3N(C2H4OH)2，NH2(CH2)6NH2，N-甲基葡糖胺，NaOH，KOH。
其X1或X2为-COGCOR1的化合物的制备详见Haugwitz美国专利4，942，184，该专利列为本文参考文献。
此外，在以下情况下也可以提高溶解度X1是-OX6且X6是一个具有化学式-COCX＝CHX或-COX-CHX-CHX-SO2O-M的基团，式中X是氢、烷基或芳基，M是氢、碱金属或一个氨基，详见Kingston等人美国专利No.5，059，699(列为本文参考文献)。
具有可供选择的C9取代基的塔三烷可以通过选择还原C9酮取代基来制备，产生对应的C9β-羟基衍生物。还原剂较好是一种硼氢化物，最好是硼氢化四丁铵(Bu4NBH4)或硼氢化三乙酰氧。
如反应流程1中所说明的，浆果赤霉素Ⅲ与Bu4NBH4在二氯甲烷中的反应产生9-脱氧-9β-羟基浆果赤霉素Ⅲ5。在C7羟基基团用三乙基甲硅烷基保护基团保护之后，可诸如把一个适当的侧链连接到7-保护的-9β-羟基衍生物6上，如本文中其它部分所述。因此，脱除留下的保护基团就得到有一个C13侧链的9β-羟基脱氧落羽松醇或其它9β-羟基四环塔三烷。
反应流程1 此外，7-保护的-9β-羟基衍生物6的C13羟基基团也可以用三甲基甲硅烷基或其它能像反应流程2中所说明的那样相对于C7羟基保护基团选择性脱除的保护基团来保护，以便能进一步选择性处置塔三烷的各种取代基。例如，7，13-保护的-9β-羟基衍生物7与KH的反应引起乙酸酯基从C10转移到C9，而且使羟基从C9转移到C10，因而产生-10脱乙酰基衍生物8。10-脱乙酰基衍生物8的C10羟基用三乙基甲硅烷基保护产生了衍生物9。衍生物9上C13羟基保护基团的选择性脱除产生了衍生物10，它可以按以上所述连接一个适当侧链。
反应流程2
如反应流程3中所示，10-氧代衍生物11可以通过10-脱乙酰基衍生物8的氧化来提供。此后，C13羟基保护基团可以选择性脱除，然后按以上所述连接一个侧链，产生有一个C13侧链的9-乙酰氧基-10-氧代落羽松醇或其它9-乙酰氧基-10-氧代四环塔三烷。此外，C9乙酸酯基可以通过用一种还原剂如二碘化钐还原10-氧代衍生物11来选择性脱除，产生9-脱氧-10-氧代衍生物12，其C13羟基保护基团可以选择性脱除，随后按以上所述连接一个侧链，产生有一个C13侧链的9-脱氧-10-氧代落羽松醇或其它9-脱氧-10-氧代四环塔三烷。
反应流程3
反应流程4说明10-DAB还原生成五元醇13的反应。然后，可以用三乙基甲硅烷基或另一种保护基团选择性地保护五元醇13的C7和C10羟基基团，以产生可以按如上所述或在四环取代基进一步改性之后再连接一个C13侧链的三元醇14。
反应流程4 有C9和/或C10酰氧基取代基而没有乙酸酯的塔三烷可以使用10-DAB作为反应流程5中所说明的原料来制备。10-DAB与三乙基甲硅烷基氯在吡啶中的反应产生了7-保护的10-DAB15。然后，7-保护的10-DAB15的C10羟基取代基可以容易地用任何一种标准酰化剂进行酰化，产生具有一个新C10酰氧取代基的衍生物16。衍生物16的C9酮取代基的选择性还原产生9β-羟基衍生物17，后者可以连接一个C13侧链。此外，还可以如以上反应流程2中所述那样使C10和C9基团发生转移。
反应流程5 有备选C2和/或C4酯的塔三烷可以使用浆果赤霉素Ⅲ和10-DAB作为起始材料来制备。浆果赤霉素Ⅲ的C2和/或C4酯和10-DAB可以利用还原剂如LAH或Red-Al选择性地还原成对应的醇，此后，新酯可以利用标准酰化剂如酸酐和酰氯与一种胺如吡啶、三乙胺、DMAP或二异丙基·乙基胺组合进行取代。此外，C2和/或C4醇可以通过用一种适当的碱如LDA处理该种醇而生成对应的醇盐，然后用一种酰化剂如酰氯处理而转化成新的C2和/或C4酯。
在C2和/或C4上有不同取代基的浆果赤霉素Ⅲ和10-DAB类似物可以按照反应流程6-10中所述那样制备。为了简化这种描述，利用10-DAB作为起始原料。然而，应当理解的是，浆果赤霉素Ⅲ衍生物或类似物可以利用同一系列反应(除C10羟基基团的保护外)产生，只需用浆果赤霉素Ⅲ代替10-DAB作为起始材料。在C2和至少一个其它位置例如C1、C4、C7、C9、C10和C13上有不同取代基的浆果赤霉素Ⅲ和10-DAB类似物的衍生物，也可以通过进行本文中所述的其它反应中的任何一种和技术熟练水平之内的任何其它反应来制备。
在反应流程6中，保护的10-DAB3用氢化铝锂转化成三醇18。然后用Cl2CO吡啶溶液，随后用一种亲核试剂(如Grignard试剂或烷基锂试剂)处理，使三醇18转化成对应的C4酯。
流程6 三醇18用LDA脱质子随后引进一种酰氯，能选择性地给出C4酯。例如，当利用乙酰氯时，三醇18就转化成1，2-二醇4，如反应流程7中所述。
三醇18也可以容易地转化成，1，2-碳酸酯19。碳酸酯19在强烈标准条件下的乙酰化能提供碳酸酯21，如反应流程8中所述;烷基锂或者Grignard试剂与碳酸酯19加成，提供在C4上有一个自由羟基基团的C2酯，如反应流程6中所述。
流程7 如反应流程9中所述，其它C4取代基可按如下提供使碳酸酯19与一种酰氯和一种叔胺反应，产生碳酸酯22，然后使之与烷基锂或Grignard试剂反应，提供在C2上有新取代基的10-DAB衍生物。
流程9 此外，浆果赤霉素Ⅲ也可以用作一种起始原料并按反应流程10中所示那样进行反应。在对C7和C13进行保护之后，浆果赤霉素Ⅲ用LAH还原，产生1，2，4，10-四醇24。四醇24利用Cl2CO和吡啶转化成碳酸酯25，而碳酸酯25再用一种酰氯和吡啶在C10上进行酰化而产生碳酸酯26(画出)，也可以用乙酸酐和吡啶进行(未画出)。碳酸酯26在强烈标准条件下的乙酰化提供碳酸酯27，然后使之与烷基锂反应，提供在C2和C10有新取代基的浆果赤霉素Ⅲ衍生物。
反应流程10
浆果赤霉素Ⅲ的10-脱乙酰氧基衍生物和10-DAB的10-脱氧衍生物可以通过使浆果赤霉素Ⅲ或10-DAB(或它们的衍生物)与二碘化钐反应来制备。有一个C10离去基团的四环塔三烷与二碘化钐之间的反应可以在0℃在一种溶剂如四氢呋喃中进行。有益的是，这种二碘化钐能选择性地抽取C10离去基团;四环核上的C13侧链和其它取代基仍不受影响。此后，可以使C9酮取代基还原，以按本文中其它部分所述那样提供对应的9-脱氧-9β-羟基-10-脱乙酰氧基或10-脱氧衍生物。
C7二氢及其它C7取代的塔三烷可以按反应流程11、12和12a中所述那样制备。
反应流程11
如反应流程12中所示，浆果赤霉素Ⅲ可以通过在THF溶液中在室温用FAR处理，转化成7-氟浆果赤霉素Ⅲ。有一个自由C7羟基的其它浆果赤霉素衍生物表现出类似行为。此外，7-氯浆果赤霉素Ⅲ可以通过在含有过量盐酸三乙胺的二氯甲烷溶液中用甲磺酰氯和三乙胺处理浆果赤霉素Ⅲ来制备。
有C7酰氧基取代基的塔三烷可以按反应流程12a中所述那样制备，7，13-保护的10-氧代衍生物11通过选择性脱除C13保护基团并用一种金属如锂代替它而转化成其对应C13醇盐。然后，这种醇盐与一种β-内酰胺或其它侧链前体物反应。随后C7保护基团的水解引起C7羟基取代基转移到C10，C10氧代取代基转移到C9，而C9酰氧基取代基转移到C7。
种类繁多的三环塔三烷是天然存在的，而且通过类似于本文中所述的那些操作，可以使一个适当的侧链连接到这些物质的C13氧上。此外，如反应流程13中所示，7-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ可以通过在二氯甲烷溶液中四氟硼酸三甲基氧翁的作用而转化成一种三环塔三烷。然后，这种产品二醇与四乙酸铅反应，提供对应的C4酮。
反应流程13 最近，已在浆果紫杉(Taxus baccata)针叶的提取物中发现一种羟基化的塔三烷(14-羟基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ)(C&EN＜p.36-37，April 12，1993)。具有以上所述各种C2、C4等官能团的这种羟基化塔三烷的衍生物也可以利用这种羟基化塔三烷来制备。此外，C14羟基与10-DAB的C1羟基基团一起，可以按C&EN中所述转化成一种1，2-碳酸酯，也可以按本文中其它部分有关C2、C4、C7、C9、C10和C13取代基的描述，把它转化成各种各样的酯或其它官能团。
以下实例旨在对本发明做更充分说明。
实施例1 (64-4)2-脱苯甲酰基-2-(3-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(48.2毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，在此温度下保持1小时后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配于饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后残留物用硅胶过滤提纯，得到70.8毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向70.8毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃下搅拌13小时，并分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到50.3毫克物料，再用重结晶提纯得到43.1毫克(86%)2-脱苯甲酰基-2-(3-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.162-164℃;[α]25Na-61.6°(C 0.790，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ7.67(m，2H，甲氧基苯甲酸酯，邻位)，7，36(m，6H，芳族)，7.15(m，1H，甲氧基苯甲酸酯)，6.19(m，1H，H13)，5.65(d，J＝6.9Hz，1H，H2β)，5.50(m，1H，NH)，5.21(m，2H，H3′，H10)，4.95(dd，J＝7.8，1.8Hz，1H，H5)，4.60(m，1H，H2′)，4.33(d，J＝8.7Hz，1H，H20α)，4.23(m，1H，H7)，4.17(d，J＝8.7Hz，1H，H20β)，3.89(d，J＝6.9Hz，1H，H3)，3.86(s，3H，甲氧基)，3.56(m，1H，2′OH)，2.55(m，1H，H6α)，2.34(s，3H，4Ac)，2.23(m，2H，H14)，1.83(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.73(s，3H，Me19)，1.32(s，9H，叔丁基)，1.22(s，3H，Me17)，1.11(s，3H，Me16).
实施例2 (65-1)
2-脱苯甲酰基-2-(3-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(47.2毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，在此温度下保持1小时后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配于饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后残留物用硅胶过滤提纯，得到70.0毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向70.0毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃下搅拌13小时，并分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到49.3毫克物料，再用重结晶提纯得到41.9毫克(85%)2-脱苯甲酰基-2-(3-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.169-171℃;[α]25Na-60.4°(C 0.510，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ7.91(m，2H，苯甲酸酯)，7，38(m，7H，芳族)，6.21(m，1H，H13)，5.65(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.42(m，1H，NH)，5.26(m，1H，H3′)，5.20(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，4.94(m，1H，H5)，4.61(m，1H，H2′)，4.31(d，J＝8.7Hz，1H，H20α)，4.24(m，1H，H7)，4.17(d，J＝8.7Hz，1H，H20β)，3.91(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.37(m，1H，2′OH)，2.57(m，1H，H6α)，2.43(s，3H，4Ac)，2.26(m，2H，H14)，2.17(s，3H，甲基苯甲酸酯)，1.84(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.74(s，3H，Me19)，1.33(s，9H，叔丁基)，1.22(s，3H，Me17)，1.12(s，3H，Me16).
实施例3 (65-2)2-脱苯甲酰基-2-(3-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(48.4毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，在此温度下保持1小时后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配于饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后残留物通过硅胶过滤提纯，得到71毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向71毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃下搅拌13小时，并分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到50.5毫克物料，再用重结晶提纯得到40.4毫克(80%)2-脱苯甲酰基-2-(3-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.149-150℃;[α]25Na-53.3°(C 0.510，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.11(br s，1H，氯苯甲酸酯邻位)，7.98(d，J＝7.5Hz，1H，氯苯甲酸酯邻位)，7.59(m，1H，氯苯甲酸酯)，7.45(t，J＝7.5Hz，1H， 氯苯甲酸酯)，7.38(m，5H，芳族)，6.18(m，1H，H13)，5.62(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.41(m，1H，H3′)，5.24(m，1H，NH)，5.20(d，J＝1.0Hz，1H，H10)，4.95(dd，J＝9.3，1.2Hz，1H，H5)，4.59(m，1H，H2′)，4.30(d，J＝8.4Hz，1H，H20α)，4.23(m，1H，H7)，4.15(d，J＝8.4Hz，1H，H20β)，3.91(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.35(m，1H，2′OH)，2.58(m，1H，H6α)，2.36(s，3H，4Ac)，2.24(m，2H，H14)，1.84(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.34(s，9H，叔丁基)，1.23(s，3H，Me17)，1.12(s，3H，Me16).
实施例4 (65-3)2-脱苯甲酰基-2-(3-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(50.4毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物通过硅胶过滤提纯，得到73.0毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向73.0毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃下搅拌13小时，再分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到52.6毫克物料，再经重结晶提纯得到41.0毫克(78%)2-脱苯甲酰基-2-(3-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.140-142℃;[α]25Na-50.4°(C 1.055，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.43(s，1H，苯甲酸酯，邻位)，8.29(d，J＝7.8Hz，1H，苯甲酸酯邻位)，7.88(d，J＝7.8Hz，1H，苯甲酸酯)，7.66(t，J＝7.8Hz，1H，苯甲酸酯)，7.38(m，5H，aron芳族)，6.17(m，1H，H13)，5.65(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.38(m，1H，NH)，5.23(m，1H，H3′)，5.21(d，J＝1.8Hz，1H，H10)，4.95(m，1H，H5)，4.58(m，1H，H2′)，4.27(d，J＝8.7Hz，1H，H20α)，4.21(m，1H，H7)，4.15(d，J＝8.7Hz，1H，H20β)，3.93(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.35(m，1H，2′OH)，2.59(m，1H，H6α)，2.33(s，3H，4Ac)，2.23(m，2H，H14)，1.85(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.76(s，3H，Me19)，1.32(s，9H，叔丁基)，1.22(s，3H，Me17)，1.11(s，3H，Me16).
实施例5 (65-4)
2-脱苯甲酰基-2-(4-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(4-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(48.2毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的已烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.24毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到71毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(4-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向71毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃下搅拌13小时，再分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到50.3毫克物料，再用重结晶提纯得到45.2毫克(90%)2-脱苯甲酰基-2-(4-甲氧基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.160-162℃;[α]25Na-47.6°(c 0.290，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.05(dd，J＝9.0，2H，甲氧基苯甲酸酯，邻位)，7，38(m，5H，芳族)，6.96(dd，J＝9.0，2H，甲氧基苯甲酸酯，间位)，6.23(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.42(m，1H，H3′)，5.27(m，1H，NH)，5.19(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，4.93(dd，J＝7.8，1.8Hz，1H，H5)，4.62(m，1H，H2′)，4.31(d，J＝9.0Hz，1H，H20α)，4.24(m，1H，H7)，4.19(d，J＝9.0Hz，1H，H20β)，3.89(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.65(s，3H，甲氧基)，3.32(m，1H，2′OH)，2.58(m，1H，H6α)，2.37(s，3H，4Ac)，2.26(m，2H，H14)，1.85(s，3H，Me18)，1.78(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.34(s，9H，叔丁基)，1.23(s，3H，Me17)，1.12(s，3H，Me16).
实施例6 (66-1)2-脱苯甲酰基-2-(4-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(4-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(48.4毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃溶液中逐滴加入0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的已烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物通过硅胶过滤提纯，得到71毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(4-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向71毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，再分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸发掉乙酸乙酯溶液后得到51毫克物料，再用重结晶方法提纯，得到37.9毫克(75%)2-脱苯甲酰基-2-(4-氯苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.160-161℃;[α]25Na-46.0°(c 0.104，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.03(d，J＝8.7Hz，2H，氯苯甲酸酯邻位)，7.48(d，J＝8.7Hz，2H，氯苯甲酸酯间位)，7.38(m，5H，芳族)，6.23(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.45(m，1H，H3′)，5.26(m，1H，NH)，5.20(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，4.93(d，J＝7.8 Hz，1H，H5)，4.63(m，1H，H2′)，4.28(d，J＝8.2Hz，1H，H20α)，4.22(m，1H，H7)，4.15(d，J＝8.2Hz，1H，H20β)，3.90(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.36(m，1H，2′OH)，2.58(m，1H，H6α)，2.37(s，3H，4Ac)，2.25(m，2H，H14)，1.85(s，3H，Me18)，1.80(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.32(s，9H，叔丁基)，1.23(s，3H，Me17)，1.11(s，3H，Me16).
实施例7 (66-2)2-脱苯甲酰基-2-(4-氟苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇的制备在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(4-氟苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-二(三乙基甲硅烷基)浆果赤霉素Ⅲ(47.5毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃溶液中滴加0.066毫升1.00M LiN(SiMe3)2的己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮，(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配于饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物通过硅胶过滤提纯，得到70毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-三(三乙基甲硅烷基)-2-脱苯甲酰基-2-(4-氟苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向70毫克从上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，再分配在饱和的碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉醋酸乙酯溶液后得到49.5毫克物料，该物料经重结晶提纯后，得到42.0毫克(85%)2-脱苯甲酰基-2-(4-氟苯甲酰基)-10-脱乙酰基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)落羽松醇。
m.p.158-160℃;[α]25Na-47.6°(c 0.290，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.13(m，2H，氟苯甲酸酯邻位)，7.38(m，5H，芳族)，7.17(m，2H，氟苯甲酸酯)，6.23(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.41(d，J＝9.9Hz，1H，H3′)，5.26(m，1H，NH)，5.20(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，4.93(dd，J＝9.9，2.1 Hz，1H，H5)，4.63(m，1H，H2′)，4.28(d，J＝8.2Hz，1H，H20α)，4.24(m，1H，H7)，4.17(d，J＝8.2Hz，1H，H20β)，3.91(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.32(m，1H，2′OH)，2.58(m，1H，H6α)，2.37(s，3H，4Ac)，2.25(m，2H，H14)，1.85(s，3H，Me18)，1.80(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.33(s，9H，叔丁基)，1.25(s，3H，Me17)，1.12(s，3H，Me16).
实施例8 (68-1)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-落羽松醇的制备。
在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(2-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-(二)-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ(50.4毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃的溶液中滴加0.066毫升1.00M的LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到73.0毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-(三)-0-三乙基甲硅烷基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向73.0毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，并分配于饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉乙酸乙酯溶液后得52.6毫克物料，该物料用重结晶方法提纯，得到39.4毫克(75%)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-三氟甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇。
m.p.121-123℃;[α]25Na-34.2°(c 0.760，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.10(m，1H，苯甲酸酯，邻位)，7.82(d，J＝7.5Hz，1H，苯甲酸酯)，7.70(m，2H，苯甲酸酯)，7，35(m，5H，芳族)，6.24(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.46(m，1H，NH)，5.28(m，1H，H3′)，5.19(d，J＝1.8Hz，1H，H10)，4.89(dd，J＝8.7，1.2 Hz，1H，H5)，4.63(m，1H，H2′)，4.26(d，J＝8.1Hz，1H，H20α)，4.17(m，2H，H7，H20β)，3.90(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.35(m，1H，2′OH)，2.56(m，1H，H6α)，2.39(m，2H，H14)，2.24(s，3H，4Ac)，1.87(s，3H，Me18)，1.84(m，1H，H6β)，1.76(s，3H，Me19)，1.38(s，9H，叔丁基)，1.24(s，3H，Me17)，1.11(s，3H，Me16).
实施例9 (68-2)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-落羽松醇的制备。
在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(2-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-7，10-(二)-0-三乙基甲硅烷基浆果赤霉素Ⅲ(47.2毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃的溶液中滴加0.066毫升1.00M的LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到70.0毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-(三)-0-三乙基甲硅烷基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向70.0毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，并分配于饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉乙酸乙酯溶液后得49.3毫克物料，该物料用重结晶方法提纯，得到44.4毫克(90%)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(2-甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇。
m.p.129-131℃;[α]25Na-50.8°(c 0.750，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.05(m，1H，苯甲酸酯)，7.38(m，8H，芳族)，6.21(m，1H，H13)，5.65(d，J＝6.6Hz，1H，H2β)，5.46(m，1H，NH)，5.24(m，1H，H3′)，5.20(d，J＝0.9Hz，1H，H10)，4.91(dd，J＝9.3，1.5 Hz，1H，H5)，4.60(br s，1H，H2′)，4.25(d，J＝8.1Hz，1H，H20α)，4.24(m，1H，H7)，4.17(d，J＝8.1Hz，1H，H20β)，3.88(d，J＝6.6Hz，1H，H3)，3.37(m，1H，2′OH)，2.63(s，3H，甲基苯甲酸酯)，2.57(m，1H，H6α)，2.30(s，3H，4Ac)，2.58(m，2H，H14)，1.83(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.37(s，9H，叔丁基)，1.24(s，3H，Me17)，1.13(s，3H，Me16).
实施例10 (73-4)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二(三氟甲基)苯甲酰基)-10-脱乙酰基-落羽松醇的制备。
在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二(三氟甲基)苯甲酰基)-7，10-(二)-0-三乙基甲硅烷基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ(51.3毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃的溶液中滴加0.066毫升1.00M的LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到73.9毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-(三)-0-三乙基甲硅烷基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二(三氟甲基)苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向73.9毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，并分配于饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉乙酸乙酯溶液后得53.4毫克物料，该物料用重结晶方法提纯，得到49.1毫克(92%)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二(三氟甲基)苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇。
m.p.141-143℃;[α]25Na-43.6°(c 0.730，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ8.59(s，2H，苯甲酸酯，邻位)，8.12(s，1H，苯甲酸酯对位)，7.37(m，5H，芳族)，6.14(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.36(m，1H，NH)，5.21(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，5.18(m，1H，H3′)，4.97(dd，J＝9.6，2.1 Hz，1H，H5)，4.58(m，1H，H2′)，4.19(m，3H，H20，H7)，3.95(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.39(m，1H，2′OH)，2.59(m，1H，H6α)，2.30(s，3H，4Ac)，2.25(m，2H，H14)，1.85(s，3H，Me18)，1.79(m，1H，H6β)，1.75(s，3H，Me19)，1.32(s，9H，叔丁基)，1.22(s，3H，Me17)，1.13(s，3H，Me16).
实施例11 (74-1)
N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二(甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰氧基-落羽松醇的制备。
在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二甲基苯甲酰基)-7，10-(二)-0-三乙基甲硅烷基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ(48.1毫克，0.060毫摩尔)的0.5毫升四氢呋喃的溶液中滴加0.066毫升1.00M的LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到70.1毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-(三)-0-三乙基甲硅烷基-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰氧基落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向70.1毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，并分配于饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉乙酸乙酯溶液后得50.2毫克物料，该物料用重结晶方法提纯，得到45.1毫克(90%)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3，5-二甲基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇。
m.p.198-200℃;[α]25Na-49.0°(c 0.965，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ7.72(s，2H，苯甲酸酯，邻位)，7，37(m，5H，芳族)，7.23(s，1H，苯甲酸酯，对位)，6.21(m，1H，H13)，5.64(d，J＝7.2Hz，1H，H2β)，5.45(m，1H，NH)，5.25(m，1H，H3′)，5.20(d，J＝1.8Hz，1H，H10)，4.94(dd，J＝9.3，1.2 Hz，1H，H5)，4.61(m，1H，H2′)，4.32(d，J＝8.1Hz，1H，H20α)，4.21(m，1H，H7)，4.16(d，J＝8.7Hz，1H，H20β)，3.89(d，J＝7.2Hz，1H，H3)，3.39(m，1H，2′OH)，2.58(m，1H，H6α)，2.38(s，6H，二甲基苯甲酸酯)，2.36(s，3H，4Ac)，2.27(m，2H，H14)，1.88(m，1H，H6β)，1.83(s，3H，Me18)，1.74(s，3H，Me19)，1.33(s，9H，叔丁基)，1.22(s，3H，Me17)，1.12(s，3H，Me16).
实施例12 (74-2)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-羟基苯甲酰基)-10-脱乙酰基-落羽松醇的制备。
在-45℃向2-脱苯甲酰基-2-(3-乙基甲硅烷基氧苯甲酰基)-7，10-(二)-0-三乙基甲硅烷基-10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ(54.1毫克，0.060毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃的溶液中滴加0.066毫升1.00M的LiN(SiMe3)2己烷溶液。在-45℃保持0.5小时后，将顺-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷基氧-4-苯基氮杂-2-环丁酮(90毫克，0.240毫摩尔)在0.5毫升四氢呋喃中的溶液滴加到该混合物中。溶液升温至0℃，并在此温度下保持1小时，然后加入0.5毫升10%乙酸的四氢呋喃溶液。将混合物分配在饱和的NaHCO3水溶液和60/40乙酸乙酯/己烷之间。有机层蒸发后得到的残留物用硅胶过滤提纯，得到76.7毫克含有(2′R，3′S)-2′，7，10-(三)-(三乙基甲硅烷基)-N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-三乙基甲硅烷基氧苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇和极少量(2′S，3′R)异构体的混合物。
在0℃向76.7毫克由上述反应得到的混合物在4毫升乙腈和0.19毫升吡啶的溶液中加入0.52毫升48%HF水溶液。该混合物在0℃搅拌3小时，然后在25℃搅拌13小时，并分配于饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间。蒸掉乙酸乙酯溶液后得49.4毫克物料，该物料用重结晶方法提纯，得到43.4毫克(88%)N-脱苯甲酰基-N-(叔丁氧基羰基)-2-脱苯甲酰基-2-(3-羟基苯甲酰基)-10-脱乙酰基落羽松醇。
m.p.153-155℃;[α]25Na-45.0°(c 0.560，CHCl3).
1H NMR(CDCl3，300 MHz)δ7.36(m，9H，芳族)，7.10(m，1H，OH)，6.38(m，1H，H13)，5.60(d，J＝9.9Hz，NH)，5.53(d，J＝7.5Hz，1H，H2β)，5.37(m，1H，H3′)，5.18(d，J＝1.2Hz，1H，H10)，4.90(dd，J＝9.9，2.4Hz，1H，H5)，4.75(m，1H，H2′)，4.29(d，J＝8.4Hz，1H，H20α)，4.24(m，2H，H7，H20β)，3.93(d，J＝7.5Hz，1H，H3)，3.29(m，1H，2′OH)，2.56(m，1H，H6α)，2.36(s，3H，4Ac)，2.27(m，2H，H14)，1.91(s，3H，Me18)，1.85(m，1H，H6β)，1.76(s，3H，Me19)，1.33(s，9H，叔丁基)，1.24(s，3H，Me17)，1.08(s，3H，Me16).
实施例13实例1-12的化合物64-4，65-1，65-2，65-3，65-4，66-1，66-2，68-1，68-2，73-4，74-1和74-2，对人体结肠癌细胞HCT-116进行离体细胞毒性活性评估。细胞毒性是在HCT116细胞中用XTT(2，3-二(2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基)-5-[(苯氨基)碳酰]-2H-四唑翁氢氧化物)试验评价的(Scudiero等人，“Evaluation of a soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines”(用人体及其它肿瘤细胞系评估培养基中细胞生长和药物敏感性的可溶四唑嗡/甲 试验)，Cancer Res.，484827-4833，1988)。以4000个细胞/孔把细胞涂在96孔微滴度板上，24小时后添加药物，并进行系列稀释。这些细胞在37℃培养72小时，此时添加四唑鎓染料XTT。活细胞中的脱氢酶使XTT还原成一种在450nm吸收光的形式，它可以用分光光度法定量。吸光度越大，活细胞数就越多。结果用IC50表示，即使细胞增殖(即450nm的吸光度)抑制到未处理对照细胞增值的50%所需的药物浓度。
所有化合物的IC50均小于0.5，且除化合物65-4(实例5)外所有化合物的IC50全都小于0.1，表明它们具有细胞毒性活性。
权利要求
1.下式所示的塔三烷衍生物 式中X1是-OX6，-SX7或-NX8X9；X2是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基；X3和X4独立地是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基或杂芳基；X5是-COX10，-COOX10，-COSX10，-CONX8X10或-SO2X11；X6是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，羟基保护基团、或能增加塔三烷衍生物水溶性的官能团；X7是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或巯基保护基团；X8是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或杂原子取代的烷基、链烯基、链炔基、芳基或杂芳基；X9是一个氨基保护基团；X10是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，或杂原子取代的烷基、链烯基、链炔基、芳基或杂芳基；X11是烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，-OX10，或-NX8X14；X14是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基；R1是氢，羟基，受保护的羟基或与R14共同形成一种碳酸酯；R2是-OCOR31；R2a是氢；R4是氢，与R4a共同形成一个氧代、环氧乙烷或亚甲基，或与R5a及它们所连接的碳原子共同形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环；R4a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，杂芳基，氰基，羟基，-OCOR30，或与R4共同形成一个氧代、环氧乙烷或亚甲基；R5是氢，或与R5a共同形成一个氧代，R5a是氢，羟基，受保护的羟基，酰氧基，与R5共同形成一个氧代，或与R4及它们所连接的碳原子共同形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环；R6是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基，或与R6a共同形成一个氧代；R6a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基或与R6共同形成一个氧代；R7是氢，或与R7a共同形成一个氧代，R7a是氢，卤素，受保护的羟基，-OR28，或与R7共同形成一个氧代；R9是氢，或与R9a共同形成一个氧代；R9a是氢、羟基，受保护的羟基、酰氧基，或与R9共同形成一个氧代；R10是氢，或与R10a共同形成一个氧代，R10a是氢，-OCOR29，羟基，或受保护的羟基，或与R10共同形成一个氧代；R14是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基，羟基，受保护的羟基，或与R1共同形成一种碳酸酯；R14a是氢，烷基，链烯基，链炔基，芳基，或杂芳基；R28是氢，酰基，羟基保护基团，或一个能增加塔三烷衍生物溶解度的官能团；和R29和R30独立地是氢，烷基，链烯基，链炔基，单环芳基，或单环杂芳基，和R31是取代的苯基。
2.权利要求1的塔三烷衍生物，其中R31选自下列基团 且Z是烷基、羟基、烷氧基、卤素或三氟甲基。
3.权利要求2的塔三烷衍生物，其中R14和R14a是氢，R10是氢，R10a是羟基或乙酰氧基，R9和R9a共同形成一个氧代，R7是氢，R7a是羟基，R5是氢，R5a和R4以及它们所连接的碳形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环，R4a是乙酰氧基，R1是羟基，X1是OH，X2是氢，X3是苯基，X4是氢，X5是-COX10，X10是苯基或叔丁氧基，而且这种塔三烷具有2′R，3′S构型。
4.权利要求2的塔三烷衍生物，其中R14和R14a是氢，R10是氢，R10a是羟基或乙酰氧基，R9和R9a共同形成一个氧代，R7是氢，R7a是羟基，R5是氢，R5a和R4以及它们所连接的碳形成一个螺[4，4]二氧己烷(oxetane)环，R4a是乙酰氧基，R1是羟基，X1是OH，X2是氢，X3是烷基或链烯基，X4是氢，X5是-COX10，X10是苯基，叔-、异-、或正-丁氧基，乙氧基，异-或正丙氧基，环己氧基、烯丙氧基、巴豆氧基，1，3-二乙氧-2-丙氧基，2-甲氧基乙氧基，戊氧基，新戊氧基，PhCH2O-，-NPh2，-NHnPr，-NHPh和-NHEt。
5.一种含有权利要求1的塔三烷衍生物和一种或多种药理学上可接受的惰性或生理活性的稀释剂或辅助剂的药物组合物。
全文摘要
具有可供选择的C
文档编号C07D407/12GK1101346SQ94101158
公开日1995年4月12日 申请日期1994年1月29日 优先权日1993年1月29日
发明者R·A·霍尔顿, C·-L·陶 申请人:佛罗里达州立大学
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