专利名称：酶催化拆分2-哌啶羟酸烷基酯及所得产物的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及酶催化制备旋光纯的式(1)(2R-反式)-2-哌啶羧酸烷基酯的方法 其中R为(C1-C4)烷氧羰基及R3为氢或(C1-C4)烷基。
这些化合物为合成具有抗血栓形成活性的化合物时所用中间体。
4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯在欧洲专利0，008，746中作了说明，其形式为外消旋体，其中用酒石酸经过相应的酸(4-甲基-2-哌啶羧酸)进行优先结晶可制成其(2R-反式)体。
本发明方法是用可使(2S-反式)对映体优先水解，同时使(2R-反式)对映体不受任何影响的酶分离对映体。
本发明方法可得到旋光纯的(2R-反式)对映体，其收率高，对映体过量98-99%。
将外消旋形态和反式构型的初始化合物溶于有机溶剂如1，1-二甲基乙基甲基醚中，然后加入pH7的0.01M磷酸氢钠和磷酸二氢钾混合物缓冲水溶液。反应介质的pH调为7.4后加入酶。根据所用酶，反应在20-37℃和pH7.4下进行4-25小时，反应期间加1M氢氧化钠溶液并用pH调节器将pH保持恒定。反应的进程由手性相进行高效液相色谱(HPLC)而加以监控。反应结束时pH调为9，必要时滤除不溶物后用有机溶剂如乙醚进行萃取。
本发明用来使(2S-反式)对映体优先水解的酶为脂酶AY，脂酶N，脂酶M Amano 10(Mucor)或Prozyme 6曲霉(Amano Pharmaceutical Ltd.)，蛋白酶米曲霉(Sigma)，胆甾醇酯酶(Boehringer)，羊胰腺丙酮粉(Sigma)或猪Ⅰ型胰腺丙酮粉(Sigma)。
初始化合物为市售产品或在文献中作了说明或可按其中所述的或本专业人员熟知的方法制成。
以下实施例详述本发明方法。元素微量分析及IR和NMR谱证实了所得化合物的结构。
实施例1(2R-反式)-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯方法110g(58.5mmol)(反式)-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯外消旋体溶于40ml1，1-二甲基乙基甲基醚和150ml pH7的0.01M磷酸盐(KH2PO4 Na2HPO4)缓冲液。用1M盐酸溶液将pH调为7.4后加8g猪Ⅰ型胰腺丙酮粉(Sigma)。在4小时30分钟反应期间加1M氢氧化钠溶液并用pH调节器将pH保持恒定并且反应进程由手性相经HPLC进行监视。加31ml氢氧化钠后，加入100ml乙醚，pH调为9后用Celite过滤混合物。该萃取过程重复4次，有机相组合后用硫酸镁干燥，过滤后真空蒸除溶剂。
得到4.23g油状题示化合物，其中对映体超过98%。
收率＝42%[α]22D＝-19°(c＝2.66;乙醇)方法21.21g(7.08mmol)(反式)-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯外消旋体悬浮在30ml pH7的0.01M磷酸盐(KH2PO4 Na2HPO4)缓冲液中。用1M盐酸溶液将pH调为7后加入1.5gProzyme 6(Amano)。在22小时反应期间加1M氢氧化钠溶液并用pH调节器使pH保持恒定并且反应进程由手性相经HPLC进行监视。22小时后PH调为9，并4次用40ml乙醚萃取手性酯。有机相组合后用硫酸镁干燥，过滤后真空蒸除溶剂。
得到430mg油状题示化合物，其中对映体超过96%。
收率＝35%实施例2(2R-反式)-4-乙基-2-哌啶羧酸乙酯1g(5.4mmol)(反式)-4-乙基-2-哌啶羧酸乙酯外消旋体溶于58ml甲苯中。再加入58ml pH7的0.01M磷酸盐(KH2PO4 Na2HPO4)缓冲液和1.3g猪Ⅰ型胰腺丙酮粉(Sigma)。反应进程由手性相经HPLC进行监视，4小时后加入50ml乙醚，pH调为9后用Celite过滤溶液。萃取重复4次，有机相组合后用硫酸镁干燥，过滤后真空蒸除溶剂。
得到500mg油状产物，其中对映体超过99%。
收率＝50%[α]20D＝-13.45°(c＝1.13;氯仿)。
本发明方法所得式(1)衍生物可用于合成式(2)三氟乙酸盐(2R-反式)体 其中R2为羧基或羧酸钠基或式-CONR4R5酰氨基或式-CH2OR4基或式-CN4R4基，R4为氢或(C1-C4)烷基及R5为氢，(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基或苯甲氧基，而R3为氢或(C1-C4)烷基。
式(2)中R2为-CONR4R5，R4为氢或(C1-C4)烷基及R5为氢，(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基或苯甲氧基的化合物可按下述方法得到式(1)化合物在溶剂如二氯甲烷中于常用条件下用二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。得到氮上被保护的化合物，用氢氧化钠水溶液皂化后再与式HNR4R5(R4和R5定义同上)的胺反应而得到酰胺;该反应在碱如4-甲基吗啉或N，N-二异丙基乙基胺(“Hunig碱”)及偶合剂如[(苯并三唑-1-基)氧基]三(二甲基氨基)氟磷酸鏻或氯甲酸异丁酯存在下进行，之后在二氯甲烷中并任选在甲氧基苯存在下将三氟乙酸与所得酰胺反应。
式(2)中R2为-CH2OR4，R4为氢的化合物可按下述方法合成式(1)化合物在溶剂如二氯甲烷中于常用条件下用二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。得到氮上被保护的化合物，用氢氧化钠水溶液皂化后再按Valerio R.M.et al.在Synthesis，1988，P786中所述混合酐方法或在溶剂如四氢呋喃(THF)中经甲硼烷-二甲硫作用而使羧基官能团还原。之后经三氟乙酸作用使胺去保护。
式(2)中R2为-CH2OR4，R4为(C1-C4)烷基的化合物可按下述方法合成式(1)化合物在溶剂如二氯甲烷中于常用条件下用二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。得到氮上被保护的化合物，用氢氧化钠水溶液皂化后产物在碱如氢化钠存在下与烷基卤，优选与烷基碘反应，之后所得化合物再在二氯甲烷中甲三氟乙酸处理。
式(2)中R2为-CN4R4，R4为氢的化合物可按下述方法合成式(1)化合物在溶剂如二氯甲烷中于常用条件下用二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。得到氮上被保护的化合物，用氢氧化钠水溶液皂化后所得化合物在溶剂如THF中在碱如4-甲基吗啉和偶合剂如氯甲酸异丁酯存在下与氨水缩合。所得酰胺用磷酰氯脱水而得腈，然后在溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)中于叠氮化钠和氯化铵存在下将腈加热。得到四唑基衍生物后用三氟乙酸处理。
式(2)中R2为-CN4R4，R4为(C1-C4)烷基的化合物可按下述方法合成式(1)化合物在溶剂如二氯甲烷中于常用条件下用二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。得到氮上被保护的化合物，用氢氧化钠水溶液皂化后所得化合物在溶剂如THF中在碱如4-甲基吗啉和偶合剂如氯甲酸异丁酯存在下与氨水缩合。所得酰胺用磷酰氯脱水而得腈，然后在溶剂如DMF中在叠氮化钠和氯化铵存在下将腈加热。得到的四唑基衍生物与烷基卤，优选与烷基碘缩合后所得化合物再用三氟乙酸处理。
下述实施例3-5说明了式(1)化合物在合成式(2)化合物时的应用。
实施例3(2R-反式)-N-乙基-4-甲基-2-哌啶甲酰胺三氟乙酸盐3.1.(2R-反式)-4-甲基-1，2-哌啶二羧酸1-(1，1-二甲基乙基)酯氮气氛下0℃将510mg(3mmol)(2R-反式)-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯放在10ml二氯甲烷中并加入654mg(3mmol)二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯。让反应介质温度过夜回到室温，溶剂蒸发后剩余物用4ml乙醇和3ml 1N氢氧化钠溶液提取。混合物室温下放置过夜后再向其中加入3ml 1N氢氧化钠溶液。反应介质再蒸发后剩余物用水提取并用乙醚洗涤。该介质用1N盐酸酸化后用乙醚萃取两次。有机相用10ml饱和氯化钠溶液冲洗后用硫酸镁干燥。
得到0.68g产物。
熔点＝87-90℃收率＝97%。
3.2.(2R-反式)-2-[(乙氨基)羰基]-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯1g(4.11mmol)(2R-反式)-4-甲基-1，2-哌啶二羧酸的1-(1，1-二甲基乙基)酯溶于15mlTHF中。氩气和室温下加入0.45ml(4mmol)4-甲基吗啉，混合物冷却到-10至-15℃。然后加入0.53ml(4mmol)氯甲酸2-甲基丙基酯，之后再加入0.278g(6mmol)乙烷胺在3ml THF中的溶液。介质回到室温后使THF蒸发。剩余物用100ml乙醚提取并依次用50ml 1N盐酸，50ml水和50ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。所得溶液用硫酸镁干燥，得到1.06g产物。
收率＝95%。
3.3.(2R-反式)-N-乙基-4-甲基-2-哌啶甲酰胺三氟乙酸盐0.352g(1.3mmol)(2R-反式)-2-[(乙氨基)羰基]-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯溶于5.4ml二氯甲烷中。再于氩气下0℃加入5.4ml三氟乙酸。介质回到室温后蒸除溶剂。剩余物用50ml二氯甲烷提取后再次蒸除溶剂。
得到0.686g粗产物。
实施例4(2R-反式)-4-甲基-N-(苯甲氧基)-2-哌啶甲酰胺三氟乙酸盐4.1.(2R-反式)-4-甲基-2-[[(苯甲氧基)氨基]羰基]-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯1g(4.03mmol)(2R-反式)-4-甲基-1，2-哌啶二羧酸的1-(1，1-二甲基乙基)酯在氮气下放入15ml THF中。该溶液冷至-15℃后加入0.47ml(4mmol)4-甲基吗啉和0.56ml(4mmol)氯甲酸2-甲基丙基酯。混合物搅拌5分钟后加入0.755g(4.7mmol)O-(苯甲基)羟基胺盐酸盐在5ml THF和0.52ml 4-甲基吗啉的混合物中的溶液。室温下搅拌过夜后反应介质倒入3体积的乙酸乙酯中。混合物依次用50ml 0.1N盐酸，50ml水，50ml碳酸氢钠，50ml水和50ml饱和氯化钠溶液洗涤。所得溶液用硫酸镁干燥后剩余物在乙醚中研制而重结晶。
得到0.95g产物。
熔点＝107-108℃4.2.(2R-反式)-4-甲基-N-(苯甲氧基)-2-哌啶甲酰胺三氟乙酸盐450mg(1.4mmol)(2R-反式)-4-甲基-2-[[(苯甲氧基)氨基]羰基]-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯在5ml三氟乙酸和5ml二氯甲烷的混合物中的溶液0℃下搅拌15分钟。蒸除溶剂后剩余物用10ml苯提取，然后再将溶剂蒸发。
得到700mg油状产物。
实施例5(2R-反式)-4-甲基-2-(1H-四唑-5-基)哌啶三氟乙酸盐5.1.(2R-反式)-2-(氨基羰基)-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯1g(4.03mmol)(2R-反式)-4-甲基-1，2-哌啶二羧酸的1-(1，1-二甲基乙基)酯在氮气下放入15ml THF中。反应介质冷至-15℃后加入0.47ml(4mmol)4-甲基吗啉和0.56ml(4mmol)氯甲酸2-甲基丙基酯。混合物搅拌5分钟后加入过量氨水。让所得混合物回到室温后将反应介质搅拌1小时。将混合物倒入3体积的乙酸乙酯中，所得混合物依次用50ml 0.1N盐酸，50ml水，50ml碳酸氢钠溶液，50ml水和50ml饱和氯化钠溶液洗涤。混合物用硫酸镁干燥后让溶剂蒸发。
得到1g不透明油状产物，可直接用于下一步骤。
5.2.(2R-反式)-2-氰基-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯1g(4mmol)(2R-反式)-2-(氨基羰基)-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯放入5ml吡啶中，混合物冷至-5℃后滴加0.52ml磷酰氯的1ml二氯甲烷溶液。反应介质搅拌1小时后倒入冰中并用100ml乙醚萃取。溶液蒸发后剩余物经硅胶柱层析提纯，其中用二氯甲烷洗脱。
得到0.7g油状产物，可直接用于下一步骤。
5.3.(2R-反式)-4-甲基-2-(1H-四唑-5-基)哌啶0.7g(3.1mmol)(2R-反式)-2-氰基-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯放入密封管中并加入1.5ml DMF，212mg(3mmol)叠氮化钠和180mg(4mmol)氯化铵。反应介质24小时内加热到100℃后让溶剂蒸发。剩余物用碳酸钠和乙醚的混合物提取，收集有机相，用1N盐酸将其pH调为2后混合物用乙醚萃取。有机相回收后用硫酸镁干燥，然后使溶剂蒸发。
得到0.3g油状产物，可直接用于下一步骤。
5.4.(2R-反式)-4-甲基-2-(1H-四唑-5-基)哌啶三氟乙酸盐242mg(0.9mmol)(2R-反式)-4-甲基-2-(1H-四唑-5-基)哌啶氮气下溶于2ml二氯甲烷中，然后加入2ml三氟乙酸。混合物室温下搅拌1小时后使溶剂蒸发，剩余物用二氯甲烷提取。之后再让溶剂蒸发。
得到355mg油状产物。
式(1)和(2)的化合物可用于合成具有抗血栓形成活性的化合物如欧洲专利No.0，008，746所述化合物如argatroban，并且可用于合成欧洲专利申请No.0，565，396所述化合物，该化合物的结构中含有式(3)的哌啶(2R-反式)体 其中R1为(C1-C4)烷氧羰基或羧基或羧酸钠基或式-CONR4R5酰氨基或-CH2OR4或-CN4R4，R4为氢或(C1-C4)烷基及R5为氢，(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基或苯甲氧基，而R3为氢或(C1-C4)烷基。
下述实施例1和6说明了用式(1)和(2)的化合物合成欧洲专利申请No.0，565，396所述化合物的方法。
实施例6(2R-反式)-N-乙基-1-[5-(1H-咪唑-4-基)-2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代戊基]-4-甲基-2-哌啶甲酰胺盐酸盐6.1.(2R-反式)-N-乙基-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊基-2-哌啶甲酰胺0.22lg按实施例3所述方法得到的(1.3mmol)(2R-反式)-N-乙基-4-甲基-2-哌啶甲酰胺三氟乙酸盐溶于10ml二氯甲烷中，氩气下0℃加入0.635g(1mmol)按欧洲专利申请No.0，565，396所述方法得到的(S)-α-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-戊酸，0.486g(1.10mmol)[(苯并三唑-1-基)氧基]三(二甲基氨基)氟磷酸鏻和1.04ml(6mmol)N，N-二异丙基乙基胺。让混合物过夜回到室温后依次用10ml 1N盐酸和10ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤。所得溶液用硫酸镁干燥，得到0.337g产物。
熔点＝30-40℃收率＝43%。
6.2.(2R-反式)-N-乙基-1-[5-(1H-咪唑-4-基)-2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代戊基]-4-甲基-2-哌啶甲酰胺盐酸盐0.332g(0.422mmol)(2R-反式)-N-乙基-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊基-2-哌啶甲酰胺溶于3.7ml乙酸中，然后加入0.7ml水和3ml THF。混合物加热回流1小时后蒸发至干，剩余物经硅胶柱层析提纯，其中用二氯甲烷/乙醇梯度(90/10至85/15)洗脱。
得到0.225g碱形式的产物。
将0.225g碱在4.1ml 0.1N盐酸中的溶液溶于异丙醇中可制成盐酸盐。溶剂蒸发后剩余物用乙醚提取。混合物过滤后滤液干燥。
得到0.200g盐酸盐。
熔点＝105-110℃(分解)[α]20D＝ 33.2°(c＝0.2;甲醇)实施例7[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-(1H-咪唑-4-基)戊基]-2-哌啶羧酸钠的钠配合物7.1.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-(1H-咪唑-4-基)戊基]-2-哌啶羧酸乙酯7.1.1.三苯基[[(1-三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]甲基]氯化鏻向670ml 105.5g(294mmol)4-(氯甲基)-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑在DMF中的溶液中加入77.7g(296mmol)三苯膦。混合物80℃加热3小时。溶剂蒸发后粗产物用乙醚提取并研制。沉淀滤出后用五氧化磷真空干燥。
得到162g带黄色的产物晶体。
熔点＝210℃收率＝89%。
7.1.2.(S，E)-2-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-4-戊烯酸1，1-二甲基乙基酯氩气下向三颈圆底烧瓶中加入50.93g(820mmol)三苯基[[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]甲基]氯化鏻在333ml THF中的溶液。然后-70℃下滴加入51.2ml正丁基锂在己烷中的1.6M溶液(820mmol)。-70℃的(S)-4-氧代-2-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]丁酸1，1-二甲基乙基酯(683mmol)在THF中的0.253M溶液中。让混合物过夜回到室温后用280ml饱和氯化钠水溶液水解。有机相与水相分离，水相2次用140ml乙酸乙酯萃取。有机相组合后用硫酸镁干燥，然后蒸发至干。剩余物经硅胶柱层析提纯，其中用己烷/乙酸乙酯梯度洗脱。
得到顺式和反式烯烃的混合物。
对于顺式体熔点＝66℃Rf＝0.30[己烷/乙酸乙酯(60/40)]。
对于反式体Rf＝0.15[己烷/乙酸乙酯(60/40)]收率＝40%。
7.1.3.(S)-2-氨基-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸1，1-二甲基乙基酯盐酸盐5.83g(9.50mmol)(S，E)-2-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-4-戊烯酸1，1-二甲基乙基酯顺式体溶于120ml乙醇中。在钯炭作为催化剂存在下于0.3MPa进行5小时催化加氢。催化剂用Celite/二氧化硅混合物滤除后蒸除溶剂。收集到4.32g产物，将其溶于90ml热“盐酸”异丙醇(HCl＝0.1N)。溶剂蒸发后产物用乙醚沉淀出来并将其真空干燥。
得到3.62g产物。
熔点＝73℃收率＝73%。
7.1.4.(S)-2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸1，1-二甲基乙基酯1.76g(7.28mmol)8-(氯磺酰基-3-甲基喹啉在50ml氯仿中的溶液在2.1ml(14.5mmol)三乙胺存在下于5℃加入3.8g(7.26mmol)(S)-2-氨基-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸1，1-二甲基乙基酯盐酸盐中，反应介质搅拌3小时，有机相分离后用0.1N盐酸溶液洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱层析提纯，其中用乙醇/二氯甲烷(5/95)混合物洗脱。
得到3.6g产物。
熔点＝56℃收率＝72%。
7.1.5.(S)-2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸氮气下15分钟内向冷至0℃的2.33g(3.39mmol)(S)-2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸1，1-二甲基乙基酯在34ml苯中的溶液鼓泡通入气态盐酸。让反应介质回到室温并在该温度下搅拌2小时。溶剂真空下蒸发后剩余物经硅胶柱层析提纯，其中用乙醇/二氯甲烷(20/80)混合物洗脱。
得到1.42g微白色粉状产物。
熔点＝170℃收率＝66%。
7.1.6.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊基]-2-哌啶羧酸乙酯氮气下0℃向2.23g(3.53mmol)(S)-2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸的50ml乙腈悬浮液中加入1.56g(3.53mmol)[(苯并三唑-1-基)氧基]三(二甲基氨基)氟磷酸鏻，0.78ml(7.06mmol)4-甲基吗啉，0.61g(3.57mmol)(2R-反式)-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯和30ml二氯甲烷。混合物室温下搅拌5小时。反应介质用饱和氯化钠溶液水解后用氯仿萃取。有机相依次用0.1N盐酸溶液，饱和碳酸氢钠溶液，水和氯伦钠溶液洗涤。再用硫酸镁干燥有机相后得到的粗产物经硅胶柱层析提纯，其中用乙醇/二氯甲烷(5/95)混合物洗脱。
得到1.94g产物。
Rf＝0.68(二氯甲烷/乙醇95/5)收率＝70%。
7.1.7.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-(1H-咪唑-4-基)戊基]-2-哌啶羧酸乙酯盐酸盐向1.94g(2.47mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊基]-2-哌啶羧酸乙酯中加入70ml乙醇和17ml乙酸。在钯/炭存在下于80℃进行6小时催化加氢。混合物过滤后使溶剂蒸发。所得剩余物用1N盐酸提取，用乙醚洗涤后用乙酸乙酯萃取。
得到1.05g产物。
熔点＝104℃(盐酸盐)收率＝78%[α]20D＝ 101°(c＝0.2;甲醇)。
7.2.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-(1H-咪唑-4-基)戊基]-2-哌啶羧酸钠的钠配合物氩气下于室温向0.201g(0.4mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-(1H-咪唑-4-基)戊基]-2-哌啶羧酸乙酯中加入0.4ml滴定1N氢氧化钠溶液。反应介质室温下搅拌36小时，其中反应进程由薄层色谱监视。反应结束时，反应介质7小时内加热到55℃。再让反应介质冷却后加入1ml乙醇和50ml乙醚。研制后得到微白色沉淀，过滤后干燥。
得到170mg白色粉状产物。
熔点＝215℃收率＝86%[α]20D＝ 67.2°(c＝0.1;甲醇)。
权利要求
1.式(1)(2R-反式)-2-哌啶羧酸烷基酯的制备方法 其中R为(C1-C4)烷氧羰基及R3为氢或(C1-C4)烷基，其特征在于将2-哌啶羧酸烷基酯的反式构型外消旋体与可使(2S-反式)对映体特异性降解，同时使(2R-反式)对映体基本上不受影响的酶反应。
2.如权利要求1的方法，其特征在于酶选自脂酶AY，脂酶N，脂酶M Amano 10(Mucor)或Prozyme 6曲霉(Amano Pharmaceutical Ltd.)，蛋白酶米曲霉(Sigma)，胆甾醇酯酶(Boehringer)，羊胰腺丙酮粉(Sigma)或猪Ⅰ型胰腺丙酮粉(Sigma)。
3.如权利要求1的方法，其特征在于酶为Prozyme 6曲霉(Amano Pharmaceutical Ltd.)
4.如权利要求1的方法，其特征在于酶为猪Ⅰ型胰腺丙酮粉(Sigma)。
5.如权利要求1所述的方法得到的式(1)(2R-反式)-2-哌啶羧酸烷基酯。
6.如权利要求5所述化合物用于制备式(2)三氟乙酸盐(2R-反式)体 其中R2为羧基或羧酸钠基或式-CONR4R5酰氨基或式-CH2OR4基或式-CN4R4基，R4为氢或(C1-C4)烷基及R5为氢，(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基或苯甲氧基，而R3为氢或(C1-C4)烷基。
7.式(1)和(2)的衍生物用于制备具有抗血栓形成活性的化合物，该化合物的结构中含有式(3)的哌啶(2R-反式)体 其中R1为(C1-C4)烷氧羰基或羧基或羧酸钠基或式-CONR4R5酰氨基或-CH2OR4或-CN4R4，R4为氢或(C1-C4)烷基及R5为氢，(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基或苯甲氧基，而R3为氢或(C1-C4)烷基。
全文摘要
本发明提出式(1)(2R-反式)-2-哌啶羧酸烷基酯的制备方法。其中R为(C
文档编号C07D401/14GK1100143SQ94102250
公开日1995年3月15日 申请日期1994年3月2日 优先权日1993年3月3日
发明者S·佩拉德, L·扎德, G·罗西 申请人:合成实验室公司
技术领域：
本发明涉及酶催化制备旋光纯的式(1)(2R-反式)-2-哌啶羧酸烷基酯的方法 其中R为(C1-C4)烷氧羰基及R3为氢或(C1-C4)烷基。
这些化合物为合成具有抗血栓形成活性的化合物时所用中间体。
4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯在欧洲专利0，008，746中作了说明，其形式为外消旋体，其中用酒石酸经过相应的酸(4-甲基-2-哌啶羧酸)进行优先结晶可制成其(2R-反式)体。
本发明方法是用可使(2S-反式)对映体优先水解，同时使(2R-反式)对映体不受任何影响的酶分离对映体。
本发明方法可得到旋光纯的(2R-反式)对映体，其收率高，对映体过量98-99%。
将外消旋形态和反式构型的初始化合物溶于有机溶剂如1，1-二甲基乙基甲基醚中，然后加入pH7的0.01M磷酸氢钠和磷酸二氢钾混合物缓冲水溶液。反应介质的pH调为7.4后加入酶。根据所用酶，反应在20-37℃和pH7.4下进行4-25小时，反应期间加1M氢氧化钠溶液并用pH调节器将pH保持恒定。反应的进程由手性相进行高效液相色谱(HPLC)而加以监控。反应结束时pH调为9，必要时滤除不溶物后用有机溶剂如乙醚进行萃取。
本发明用来使(2S-反式)对映体优先水解的酶为脂酶AY，脂酶N，脂酶M Amano 10(Mucor)或Prozyme 6曲霉(Amano Pharmaceutical Ltd.)，蛋白酶米曲霉(Sigma)，胆甾醇酯酶(Boehringer)，羊胰腺丙酮粉(Sigma)或猪Ⅰ型胰腺丙酮粉(Sigma)。
初始化合物为市售产品或在文献中作了说明或可按其中所述的或本专业人员熟知的方法制成。
以下实施例详述本发明方法。元素微量分析及IR和NMR谱证实了所得化合物的结构。
实施例1(2R-反式)-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯方法110g(58.5mmol)(反式)-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯外消旋体溶于40ml1，1-二甲基乙基甲基醚和150ml pH7的0.01M磷酸盐(KH2PO4 Na2HPO4)缓冲液。用1M盐酸溶液将pH调为7.4后加8g猪Ⅰ型胰腺丙酮粉(Sigma)。在4小时30分钟反应期间加1M氢氧化钠溶液并用pH调节器将pH保持恒定并且反应进程由手性相经HPLC进行监视。加31ml氢氧化钠后，加入100ml乙醚，pH调为9后用Celite过滤混合物。该萃取过程重复4次，有机相组合后用硫酸镁干燥，过滤后真空蒸除溶剂。
得到4.23g油状题示化合物，其中对映体超过98%。
收率＝42%[α]22D＝-19°(c＝2.66;乙醇)方法21.21g(7.08mmol)(反式)-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯外消旋体悬浮在30ml pH7的0.01M磷酸盐(KH2PO4 Na2HPO4)缓冲液中。用1M盐酸溶液将pH调为7后加入1.5gProzyme 6(Amano)。在22小时反应期间加1M氢氧化钠溶液并用pH调节器使pH保持恒定并且反应进程由手性相经HPLC进行监视。22小时后PH调为9，并4次用40ml乙醚萃取手性酯。有机相组合后用硫酸镁干燥，过滤后真空蒸除溶剂。
得到430mg油状题示化合物，其中对映体超过96%。
收率＝35%实施例2(2R-反式)-4-乙基-2-哌啶羧酸乙酯1g(5.4mmol)(反式)-4-乙基-2-哌啶羧酸乙酯外消旋体溶于58ml甲苯中。再加入58ml pH7的0.01M磷酸盐(KH2PO4 Na2HPO4)缓冲液和1.3g猪Ⅰ型胰腺丙酮粉(Sigma)。反应进程由手性相经HPLC进行监视，4小时后加入50ml乙醚，pH调为9后用Celite过滤溶液。萃取重复4次，有机相组合后用硫酸镁干燥，过滤后真空蒸除溶剂。
得到500mg油状产物，其中对映体超过99%。
收率＝50%[α]20D＝-13.45°(c＝1.13;氯仿)。
本发明方法所得式(1)衍生物可用于合成式(2)三氟乙酸盐(2R-反式)体 其中R2为羧基或羧酸钠基或式-CONR4R5酰氨基或式-CH2OR4基或式-CN4R4基，R4为氢或(C1-C4)烷基及R5为氢，(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基或苯甲氧基，而R3为氢或(C1-C4)烷基。
式(2)中R2为-CONR4R5，R4为氢或(C1-C4)烷基及R5为氢，(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基或苯甲氧基的化合物可按下述方法得到式(1)化合物在溶剂如二氯甲烷中于常用条件下用二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。得到氮上被保护的化合物，用氢氧化钠水溶液皂化后再与式HNR4R5(R4和R5定义同上)的胺反应而得到酰胺;该反应在碱如4-甲基吗啉或N，N-二异丙基乙基胺(“Hunig碱”)及偶合剂如[(苯并三唑-1-基)氧基]三(二甲基氨基)氟磷酸鏻或氯甲酸异丁酯存在下进行，之后在二氯甲烷中并任选在甲氧基苯存在下将三氟乙酸与所得酰胺反应。
式(2)中R2为-CH2OR4，R4为氢的化合物可按下述方法合成式(1)化合物在溶剂如二氯甲烷中于常用条件下用二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。得到氮上被保护的化合物，用氢氧化钠水溶液皂化后再按Valerio R.M.et al.在Synthesis，1988，P786中所述混合酐方法或在溶剂如四氢呋喃(THF)中经甲硼烷-二甲硫作用而使羧基官能团还原。之后经三氟乙酸作用使胺去保护。
式(2)中R2为-CH2OR4，R4为(C1-C4)烷基的化合物可按下述方法合成式(1)化合物在溶剂如二氯甲烷中于常用条件下用二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。得到氮上被保护的化合物，用氢氧化钠水溶液皂化后产物在碱如氢化钠存在下与烷基卤，优选与烷基碘反应，之后所得化合物再在二氯甲烷中甲三氟乙酸处理。
式(2)中R2为-CN4R4，R4为氢的化合物可按下述方法合成式(1)化合物在溶剂如二氯甲烷中于常用条件下用二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。得到氮上被保护的化合物，用氢氧化钠水溶液皂化后所得化合物在溶剂如THF中在碱如4-甲基吗啉和偶合剂如氯甲酸异丁酯存在下与氨水缩合。所得酰胺用磷酰氯脱水而得腈，然后在溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)中于叠氮化钠和氯化铵存在下将腈加热。得到四唑基衍生物后用三氟乙酸处理。
式(2)中R2为-CN4R4，R4为(C1-C4)烷基的化合物可按下述方法合成式(1)化合物在溶剂如二氯甲烷中于常用条件下用二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。得到氮上被保护的化合物，用氢氧化钠水溶液皂化后所得化合物在溶剂如THF中在碱如4-甲基吗啉和偶合剂如氯甲酸异丁酯存在下与氨水缩合。所得酰胺用磷酰氯脱水而得腈，然后在溶剂如DMF中在叠氮化钠和氯化铵存在下将腈加热。得到的四唑基衍生物与烷基卤，优选与烷基碘缩合后所得化合物再用三氟乙酸处理。
下述实施例3-5说明了式(1)化合物在合成式(2)化合物时的应用。
实施例3(2R-反式)-N-乙基-4-甲基-2-哌啶甲酰胺三氟乙酸盐3.1.(2R-反式)-4-甲基-1，2-哌啶二羧酸1-(1，1-二甲基乙基)酯氮气氛下0℃将510mg(3mmol)(2R-反式)-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯放在10ml二氯甲烷中并加入654mg(3mmol)二碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯。让反应介质温度过夜回到室温，溶剂蒸发后剩余物用4ml乙醇和3ml 1N氢氧化钠溶液提取。混合物室温下放置过夜后再向其中加入3ml 1N氢氧化钠溶液。反应介质再蒸发后剩余物用水提取并用乙醚洗涤。该介质用1N盐酸酸化后用乙醚萃取两次。有机相用10ml饱和氯化钠溶液冲洗后用硫酸镁干燥。
得到0.68g产物。
熔点＝87-90℃收率＝97%。
3.2.(2R-反式)-2-[(乙氨基)羰基]-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯1g(4.11mmol)(2R-反式)-4-甲基-1，2-哌啶二羧酸的1-(1，1-二甲基乙基)酯溶于15mlTHF中。氩气和室温下加入0.45ml(4mmol)4-甲基吗啉，混合物冷却到-10至-15℃。然后加入0.53ml(4mmol)氯甲酸2-甲基丙基酯，之后再加入0.278g(6mmol)乙烷胺在3ml THF中的溶液。介质回到室温后使THF蒸发。剩余物用100ml乙醚提取并依次用50ml 1N盐酸，50ml水和50ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。所得溶液用硫酸镁干燥，得到1.06g产物。
收率＝95%。
3.3.(2R-反式)-N-乙基-4-甲基-2-哌啶甲酰胺三氟乙酸盐0.352g(1.3mmol)(2R-反式)-2-[(乙氨基)羰基]-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯溶于5.4ml二氯甲烷中。再于氩气下0℃加入5.4ml三氟乙酸。介质回到室温后蒸除溶剂。剩余物用50ml二氯甲烷提取后再次蒸除溶剂。
得到0.686g粗产物。
实施例4(2R-反式)-4-甲基-N-(苯甲氧基)-2-哌啶甲酰胺三氟乙酸盐4.1.(2R-反式)-4-甲基-2-[[(苯甲氧基)氨基]羰基]-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯1g(4.03mmol)(2R-反式)-4-甲基-1，2-哌啶二羧酸的1-(1，1-二甲基乙基)酯在氮气下放入15ml THF中。该溶液冷至-15℃后加入0.47ml(4mmol)4-甲基吗啉和0.56ml(4mmol)氯甲酸2-甲基丙基酯。混合物搅拌5分钟后加入0.755g(4.7mmol)O-(苯甲基)羟基胺盐酸盐在5ml THF和0.52ml 4-甲基吗啉的混合物中的溶液。室温下搅拌过夜后反应介质倒入3体积的乙酸乙酯中。混合物依次用50ml 0.1N盐酸，50ml水，50ml碳酸氢钠，50ml水和50ml饱和氯化钠溶液洗涤。所得溶液用硫酸镁干燥后剩余物在乙醚中研制而重结晶。
得到0.95g产物。
熔点＝107-108℃4.2.(2R-反式)-4-甲基-N-(苯甲氧基)-2-哌啶甲酰胺三氟乙酸盐450mg(1.4mmol)(2R-反式)-4-甲基-2-[[(苯甲氧基)氨基]羰基]-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯在5ml三氟乙酸和5ml二氯甲烷的混合物中的溶液0℃下搅拌15分钟。蒸除溶剂后剩余物用10ml苯提取，然后再将溶剂蒸发。
得到700mg油状产物。
实施例5(2R-反式)-4-甲基-2-(1H-四唑-5-基)哌啶三氟乙酸盐5.1.(2R-反式)-2-(氨基羰基)-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯1g(4.03mmol)(2R-反式)-4-甲基-1，2-哌啶二羧酸的1-(1，1-二甲基乙基)酯在氮气下放入15ml THF中。反应介质冷至-15℃后加入0.47ml(4mmol)4-甲基吗啉和0.56ml(4mmol)氯甲酸2-甲基丙基酯。混合物搅拌5分钟后加入过量氨水。让所得混合物回到室温后将反应介质搅拌1小时。将混合物倒入3体积的乙酸乙酯中，所得混合物依次用50ml 0.1N盐酸，50ml水，50ml碳酸氢钠溶液，50ml水和50ml饱和氯化钠溶液洗涤。混合物用硫酸镁干燥后让溶剂蒸发。
得到1g不透明油状产物，可直接用于下一步骤。
5.2.(2R-反式)-2-氰基-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯1g(4mmol)(2R-反式)-2-(氨基羰基)-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯放入5ml吡啶中，混合物冷至-5℃后滴加0.52ml磷酰氯的1ml二氯甲烷溶液。反应介质搅拌1小时后倒入冰中并用100ml乙醚萃取。溶液蒸发后剩余物经硅胶柱层析提纯，其中用二氯甲烷洗脱。
得到0.7g油状产物，可直接用于下一步骤。
5.3.(2R-反式)-4-甲基-2-(1H-四唑-5-基)哌啶0.7g(3.1mmol)(2R-反式)-2-氰基-4-甲基-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙基酯放入密封管中并加入1.5ml DMF，212mg(3mmol)叠氮化钠和180mg(4mmol)氯化铵。反应介质24小时内加热到100℃后让溶剂蒸发。剩余物用碳酸钠和乙醚的混合物提取，收集有机相，用1N盐酸将其pH调为2后混合物用乙醚萃取。有机相回收后用硫酸镁干燥，然后使溶剂蒸发。
得到0.3g油状产物，可直接用于下一步骤。
5.4.(2R-反式)-4-甲基-2-(1H-四唑-5-基)哌啶三氟乙酸盐242mg(0.9mmol)(2R-反式)-4-甲基-2-(1H-四唑-5-基)哌啶氮气下溶于2ml二氯甲烷中，然后加入2ml三氟乙酸。混合物室温下搅拌1小时后使溶剂蒸发，剩余物用二氯甲烷提取。之后再让溶剂蒸发。
得到355mg油状产物。
式(1)和(2)的化合物可用于合成具有抗血栓形成活性的化合物如欧洲专利No.0，008，746所述化合物如argatroban，并且可用于合成欧洲专利申请No.0，565，396所述化合物，该化合物的结构中含有式(3)的哌啶(2R-反式)体 其中R1为(C1-C4)烷氧羰基或羧基或羧酸钠基或式-CONR4R5酰氨基或-CH2OR4或-CN4R4，R4为氢或(C1-C4)烷基及R5为氢，(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基或苯甲氧基，而R3为氢或(C1-C4)烷基。
下述实施例1和6说明了用式(1)和(2)的化合物合成欧洲专利申请No.0，565，396所述化合物的方法。
实施例6(2R-反式)-N-乙基-1-[5-(1H-咪唑-4-基)-2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代戊基]-4-甲基-2-哌啶甲酰胺盐酸盐6.1.(2R-反式)-N-乙基-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊基-2-哌啶甲酰胺0.22lg按实施例3所述方法得到的(1.3mmol)(2R-反式)-N-乙基-4-甲基-2-哌啶甲酰胺三氟乙酸盐溶于10ml二氯甲烷中，氩气下0℃加入0.635g(1mmol)按欧洲专利申请No.0，565，396所述方法得到的(S)-α-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-戊酸，0.486g(1.10mmol)[(苯并三唑-1-基)氧基]三(二甲基氨基)氟磷酸鏻和1.04ml(6mmol)N，N-二异丙基乙基胺。让混合物过夜回到室温后依次用10ml 1N盐酸和10ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤。所得溶液用硫酸镁干燥，得到0.337g产物。
熔点＝30-40℃收率＝43%。
6.2.(2R-反式)-N-乙基-1-[5-(1H-咪唑-4-基)-2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代戊基]-4-甲基-2-哌啶甲酰胺盐酸盐0.332g(0.422mmol)(2R-反式)-N-乙基-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊基-2-哌啶甲酰胺溶于3.7ml乙酸中，然后加入0.7ml水和3ml THF。混合物加热回流1小时后蒸发至干，剩余物经硅胶柱层析提纯，其中用二氯甲烷/乙醇梯度(90/10至85/15)洗脱。
得到0.225g碱形式的产物。
将0.225g碱在4.1ml 0.1N盐酸中的溶液溶于异丙醇中可制成盐酸盐。溶剂蒸发后剩余物用乙醚提取。混合物过滤后滤液干燥。
得到0.200g盐酸盐。
熔点＝105-110℃(分解)[α]20D＝ 33.2°(c＝0.2;甲醇)实施例7[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-(1H-咪唑-4-基)戊基]-2-哌啶羧酸钠的钠配合物7.1.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-(1H-咪唑-4-基)戊基]-2-哌啶羧酸乙酯7.1.1.三苯基[[(1-三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]甲基]氯化鏻向670ml 105.5g(294mmol)4-(氯甲基)-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑在DMF中的溶液中加入77.7g(296mmol)三苯膦。混合物80℃加热3小时。溶剂蒸发后粗产物用乙醚提取并研制。沉淀滤出后用五氧化磷真空干燥。
得到162g带黄色的产物晶体。
熔点＝210℃收率＝89%。
7.1.2.(S，E)-2-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-4-戊烯酸1，1-二甲基乙基酯氩气下向三颈圆底烧瓶中加入50.93g(820mmol)三苯基[[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]甲基]氯化鏻在333ml THF中的溶液。然后-70℃下滴加入51.2ml正丁基锂在己烷中的1.6M溶液(820mmol)。-70℃的(S)-4-氧代-2-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]丁酸1，1-二甲基乙基酯(683mmol)在THF中的0.253M溶液中。让混合物过夜回到室温后用280ml饱和氯化钠水溶液水解。有机相与水相分离，水相2次用140ml乙酸乙酯萃取。有机相组合后用硫酸镁干燥，然后蒸发至干。剩余物经硅胶柱层析提纯，其中用己烷/乙酸乙酯梯度洗脱。
得到顺式和反式烯烃的混合物。
对于顺式体熔点＝66℃Rf＝0.30[己烷/乙酸乙酯(60/40)]。
对于反式体Rf＝0.15[己烷/乙酸乙酯(60/40)]收率＝40%。
7.1.3.(S)-2-氨基-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸1，1-二甲基乙基酯盐酸盐5.83g(9.50mmol)(S，E)-2-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-4-戊烯酸1，1-二甲基乙基酯顺式体溶于120ml乙醇中。在钯炭作为催化剂存在下于0.3MPa进行5小时催化加氢。催化剂用Celite/二氧化硅混合物滤除后蒸除溶剂。收集到4.32g产物，将其溶于90ml热“盐酸”异丙醇(HCl＝0.1N)。溶剂蒸发后产物用乙醚沉淀出来并将其真空干燥。
得到3.62g产物。
熔点＝73℃收率＝73%。
7.1.4.(S)-2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸1，1-二甲基乙基酯1.76g(7.28mmol)8-(氯磺酰基-3-甲基喹啉在50ml氯仿中的溶液在2.1ml(14.5mmol)三乙胺存在下于5℃加入3.8g(7.26mmol)(S)-2-氨基-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸1，1-二甲基乙基酯盐酸盐中，反应介质搅拌3小时，有机相分离后用0.1N盐酸溶液洗涤并蒸发。粗产物经硅胶柱层析提纯，其中用乙醇/二氯甲烷(5/95)混合物洗脱。
得到3.6g产物。
熔点＝56℃收率＝72%。
7.1.5.(S)-2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸氮气下15分钟内向冷至0℃的2.33g(3.39mmol)(S)-2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸1，1-二甲基乙基酯在34ml苯中的溶液鼓泡通入气态盐酸。让反应介质回到室温并在该温度下搅拌2小时。溶剂真空下蒸发后剩余物经硅胶柱层析提纯，其中用乙醇/二氯甲烷(20/80)混合物洗脱。
得到1.42g微白色粉状产物。
熔点＝170℃收率＝66%。
7.1.6.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊基]-2-哌啶羧酸乙酯氮气下0℃向2.23g(3.53mmol)(S)-2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊酸的50ml乙腈悬浮液中加入1.56g(3.53mmol)[(苯并三唑-1-基)氧基]三(二甲基氨基)氟磷酸鏻，0.78ml(7.06mmol)4-甲基吗啉，0.61g(3.57mmol)(2R-反式)-4-甲基-2-哌啶羧酸乙酯和30ml二氯甲烷。混合物室温下搅拌5小时。反应介质用饱和氯化钠溶液水解后用氯仿萃取。有机相依次用0.1N盐酸溶液，饱和碳酸氢钠溶液，水和氯伦钠溶液洗涤。再用硫酸镁干燥有机相后得到的粗产物经硅胶柱层析提纯，其中用乙醇/二氯甲烷(5/95)混合物洗脱。
得到1.94g产物。
Rf＝0.68(二氯甲烷/乙醇95/5)收率＝70%。
7.1.7.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-(1H-咪唑-4-基)戊基]-2-哌啶羧酸乙酯盐酸盐向1.94g(2.47mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊基]-2-哌啶羧酸乙酯中加入70ml乙醇和17ml乙酸。在钯/炭存在下于80℃进行6小时催化加氢。混合物过滤后使溶剂蒸发。所得剩余物用1N盐酸提取，用乙醚洗涤后用乙酸乙酯萃取。
得到1.05g产物。
熔点＝104℃(盐酸盐)收率＝78%[α]20D＝ 101°(c＝0.2;甲醇)。
7.2.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-(1H-咪唑-4-基)戊基]-2-哌啶羧酸钠的钠配合物氩气下于室温向0.201g(0.4mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-甲基-1-[2-[[(3-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-8-基)磺酰基]氨基]-1-氧代-5-(1H-咪唑-4-基)戊基]-2-哌啶羧酸乙酯中加入0.4ml滴定1N氢氧化钠溶液。反应介质室温下搅拌36小时，其中反应进程由薄层色谱监视。反应结束时，反应介质7小时内加热到55℃。再让反应介质冷却后加入1ml乙醇和50ml乙醚。研制后得到微白色沉淀，过滤后干燥。
得到170mg白色粉状产物。
熔点＝215℃收率＝86%[α]20D＝ 67.2°(c＝0.1;甲醇)。
权利要求
1.式(1)(2R-反式)-2-哌啶羧酸烷基酯的制备方法 其中R为(C1-C4)烷氧羰基及R3为氢或(C1-C4)烷基，其特征在于将2-哌啶羧酸烷基酯的反式构型外消旋体与可使(2S-反式)对映体特异性降解，同时使(2R-反式)对映体基本上不受影响的酶反应。
2.如权利要求1的方法，其特征在于酶选自脂酶AY，脂酶N，脂酶M Amano 10(Mucor)或Prozyme 6曲霉(Amano Pharmaceutical Ltd.)，蛋白酶米曲霉(Sigma)，胆甾醇酯酶(Boehringer)，羊胰腺丙酮粉(Sigma)或猪Ⅰ型胰腺丙酮粉(Sigma)。
3.如权利要求1的方法，其特征在于酶为Prozyme 6曲霉(Amano Pharmaceutical Ltd.)
4.如权利要求1的方法，其特征在于酶为猪Ⅰ型胰腺丙酮粉(Sigma)。
5.如权利要求1所述的方法得到的式(1)(2R-反式)-2-哌啶羧酸烷基酯。
6.如权利要求5所述化合物用于制备式(2)三氟乙酸盐(2R-反式)体 其中R2为羧基或羧酸钠基或式-CONR4R5酰氨基或式-CH2OR4基或式-CN4R4基，R4为氢或(C1-C4)烷基及R5为氢，(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基或苯甲氧基，而R3为氢或(C1-C4)烷基。
7.式(1)和(2)的衍生物用于制备具有抗血栓形成活性的化合物，该化合物的结构中含有式(3)的哌啶(2R-反式)体 其中R1为(C1-C4)烷氧羰基或羧基或羧酸钠基或式-CONR4R5酰氨基或-CH2OR4或-CN4R4，R4为氢或(C1-C4)烷基及R5为氢，(C1-C4)烷基，羟基，(C1-C4)烷氧基或苯甲氧基，而R3为氢或(C1-C4)烷基。
全文摘要
本发明提出式(1)(2R-反式)-2-哌啶羧酸烷基酯的制备方法。其中R为(C
文档编号C07D401/14GK1100143SQ94102250
公开日1995年3月15日 申请日期1994年3月2日 优先权日1993年3月3日
发明者S·佩拉德, L·扎德, G·罗西 申请人:合成实验室公司
再多了解一些
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