制备糖单脂的方法与流程

本发明涉及用于生产糖单脂的细胞和方法，并且更具体地涉及用于生产鼠李糖单脂的细胞和方法。

背景技术：

1、在个人护理产品中，表面活性剂可用于清洁、发泡、增稠、乳化、增溶和抗微生物效果等用途。但是，通常使用的许多表面活性剂由诸如石化产品之类的起始材料制成，而消费者在其产品中寻求更天然和更温和的材料。生物表面活性剂是微生物来源的表面活性剂，其可以提供改善的功效而没有性能折衷。

技术实现思路

1、一种制备糖单脂的方法，该方法包括：(a)通过在选自以下的酶的存在下使羟基脂肪酸与糖基供体接触，经由单个催化步骤制备糖单脂：i)糖基转移酶和ii)糖苷酶；(b)任选地分离所制备的糖单脂；其中糖单脂具有下式1：

2、

3、式1：

4、其中n为0至15；其中x选自烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、不饱和烯基和不饱和杂烯基，以及它们的组合和立体异构体；并且其中x具有4至22的碳链长度，其中m选自葡萄糖、磺基奎诺糖、果糖、半乳糖、核糖、麦芽糖、木糖、鼠李糖、槐糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖以及它们的组合和立体异构体中的一者或两者；并且其中r选自-h，选自直链、支链或环状烷基的烷基，杂烷基，芳基，杂芳基，杂芳基烷基，芳基烷基，牛磺酰基，以及它们所有可能的立体异构体和组合。

1.一种制备糖单脂的方法，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述羟基脂肪酸是直链羟基脂肪酸；

3.根据权利要求2所述的方法，其中r选自-h和烷基，并且具有1至4的直链碳长度。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述糖基供体包含至少一种鼠李糖。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述鼠李糖是核苷单磷酸（nmp）、核苷二磷酸（ndp）或核苷三磷酸（ntp）。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述糖单脂是鼠李糖单脂。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述鼠李糖单脂选自rha-c8、rha-c10、rha-c12、rha-c14、rharha-c8、rharha-c10、rharha-c12和rharha-c14。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶是包含与seq id no: 1至seq id no: 12中的任一者及其片段具有至少60%同一性的多肽序列的糖基转移酶。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述糖基转移酶包含与seq id no: 1至seq idno: 12中的任一者及其片段具有至少75%同一性的多肽序列。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶是包含选自以下的至少一个氨基酸突变的糖基转移酶：seq id no: 1的糖基转移酶氨基酸序列中的m1a、h2r、v3i、i4l、i4v、i5l、i5v、t6i、a7p、v8i、f17l、v18l、v18l、v18i、i20l、t23a、t23s、t23s、t23a、t23e、v25a、a26s、v31i、t32s、f33v、f33m、c34a、a35t、a35v、s36y、s36n、s36f、a37p、a37ew、a37ef、a37pa、a37e、a37g、a37p、a38v、a38g、a38y、a38r、f39l、f39a、a40k、a40r、a40p、a40e、a40s、p41e、p41s、p41a、l42s、l42a、i43a、i43v、i43l、e44d、e44g、r45l、r45g、r45e、c46s、c46a、c46p、c46r、g47a、f48m、f48l、n49s、n49a、n49e、n49t、n49g、n49g、n49k、n49e、n49r、n49s、f50v、f50l、l51i、l51v、l51v、l51v、p52a、l53v、l53r、l53i、g54t、t55e、t55s、t55p、r56a、r56a、r56a、r56p、e57n、e57d、e58g、e58q、y59f、y59i、d60e、d60n、d60h、d60a、d60q、d60q、e61a、e61a、v62l、v62i、v62a、v62p、m63i、m63v、m63a、m63l、m63s、m63p、a64t、a64v、a64s、a64y、d65s、d65n、a67r、h70n、h70d、p71s、r72k、r72l、r72e、t73k、t73a、t73g、t73d、s74a、l75f、p76r、p76g、t77v、l78m、k80r、k80r、t81a、t81w、t81v、i82v、i82v、a83g、s84g、s84p、s84t、s84g、t85s、t85a、l86i、e88d、e88p、e88a、q89l、q89h、y90f、r91d、r91e、l92v、l92m、e94q、e94a、q95a、a96l、a96l、a96v、a96e、a96t、a96h、c97a、c97v、c97t、d98n、d99r、d99e、d99g、d99e、e100d、e100q、v102i、m103l、l104i、l104v、l104i、l104v、l104v、g105a、s106h、s106n、s106r、l107s、l107q、l107v、s111a、l115m、l115v、k118r、k118r、h119r、h119y、i121a、i121v、v124a、v124i、t125s、a126g、a126v、a126g、q127e、q127h、v128a、v128l、v128i、v128a、s129t、s129q、s129a、f131w、f131q、f131h、g132n、g132q、g132d、f133l、f133v、f133i、f133i、f133i、f133l、w134l、a136p、a136s、a137q、a137k、a137f、a137l、a137r、a137h、a137m、a138s、a138d、s140a、s140p、s140p、s140p、t141v、t141i、t141v、h142l、h142s、p143-、p144a、p144k、p144k、p144l、g145p、g145r、a146t、a146f、a146t、a146l、a146s、a146l、n147t、n147p、n147s、l148i、l148v、a150e、a150t、a150g、f151s、f151e、f151d、f151t、f151w、f151w、v152l、v152l、p153t、p153s、y154r、y154d、y154r、y154v、y154r、y154l、p155e、v156i、v156p、v156d、v156q、v156g、v156l、v156i、v156a、v156e、v156l、k157r、k157e、k157r、r158a、r158s、r158n、r158k、r158e、r158m、r158q、l159e、l159d、l159g、l159r、l159a、l159k、l159t、l160f、l160i、l160a、l160v、l160y、l161m、l161f、l161m、l161w、l161m、g162l、g162d、g162r、g162r、g162w、m163e、m163i、m163g、m163l、m163l、m163d、m163f、m163v、m163i、m163f、m163v、m163k、i164t、i164e、i164g、i164c、i164a、i164v、e165v、e165y、e165d、e165a、e165i、r166k、r166l、r166e、r166v、r166q、r166h、r166d、r166s、a167g、a167t、a167p、a167l、a167t、a167g、a167s、a167m、a167n、a167s、a167d、a167e、f168i、f168s、f168v、f168c、f168a、f168e、f168v、l169v、r171d、r171e、r171n、r171k、v172t、v172i、v172i、v172a、v172a、v172l、m173c、m173c、a174t、a174k、a174k、a174g、e176d、e176a、s179r、s179t、s179g、s179r、f180l、f180v、f180l、q182s、q182a、q182r、q182r、q182g、q182a、l186m、a187p、a187p、t189a、t189v、t189v、t189a、k190s、k190r、k190r、k190t、k190s、i192f、i193m、i193l、i193f、s194g、s194g、q195e、q195r、i197l、i197v、s198h、s198a、s198h、d201q、r202g、r202k、r202g、e209d、e209d、v214p、v214t、v214a、h216t、h216r、h216p、h216q、h216s、h216s、a220s、a220s、q221h、q221n、q221r、t222a、t222i、v223s、v223a、f230y、s233a、s233a、s233g、s233t、g234s、g234d、l235d、l235e、l235g、l235f、q236h、q236e、q236l、q236h、q236r、q236e、q236l、p237t、p237t、p237q、p237e、p237a、p237q、p237q、l238v、l238p、l238t、l238m、l238i、l238r、l238v、a240t、a240p、a240d、e243d、d244a、d244e、d244e、n247a、n247a、n247s、n247s、n247q、n247r、e248g、e248a、e248a、a249g、a249e、a249t、a249g、a249s、s250p、s250p、s250p、v253i、t259a、t259s、m260n、v261r、v261i、v261l、v261i、n262d、n262d、n262h、n262d、n262d、n262d、g263a、g263a、g263s、g263p、g263s、g263e、g263e、e264g、e264p、e264q、e264t、e264d、e264a、q265a、q265t、q265r、q265r、q265s、y266f、t268r、t268a、t268s、a269t、v271a、v271i、v271l、v271a、v271a、q272e、q272e、l274c、k275r、k275r、l276s、l276r、l276k、l276a、l276r、i277t、i277l、i277a、i277l、i277m、n278g、n278g、v282i、f283l、t285a、s286g、s286r、s286k、s286r、s286r、q287n、q287d、q287e、q287g、s288p、s288t、s288a、s288e、s288g、v289d、v289a、v289t、v289p、d290e、d290l、d290v、p291d、p291a、p291h、p291q、s292v、s292p、s292t、s292a、s292e、v293p、v293l、v293l、v293d、v293p、v293a、s294p、s294a、s294l、s295r、s295t、s295a、s295l、e296s、e296a、e296s、e296d、e296g、e296p、g297s、g297s、g297d、g297s、g297p、g297d、g297p、r298q、r298q、r298n、r298d、r298e、i299v、v301l、r303s、r303p、v305a、s308t、r309k、r309l、r309a、r309s、i310l、h313q、h313r、s314t、s314a、s314a、s314a、s314c、s314c、a315s、a315t、l317i、v323i、v323i、t326a、t326v、l328q、m330i、m330l、m330i、m330l、m330f、m330l、v334i、i337l、i337v、i337l、a338v、a338v、f341l、f346l、m352l、m352v、m352i、e353q、c357v、c357v、l359i、l359v、v361l、v361i、v361l、v361i、v361l、f362s、f362d、f362l、f362r、f362r、f362l、f362k、f362l、f362s、f362p、f362d、p363g、p363a、p363r、p363s、p364s、p364r、p364k、a365v、s366t、s366q、a367g、a367g、a367t、e368r、e368q、s369r、s369p、s369a、l370i、a371s、a371t、a371t、t372a、t372r、d375q、d375q、d375r、d375e、k376r、k376t、k376r、k376r、i377l、i377v、n379d、n379k、n379k、n379g、n379d、s380d、s380d、s380d、s380e、q381p、e382a、e382q、e382a、v383i、v383i、r384s、r384a、r384t、a385e、a385e、s386n、s386a、s386n、s386k、s386r、s386a、e388t、e388a、e388a、e388d、e388q、e388r、r389q、r389k、r389e、y390m、y390t、y390m、y390l、y390i、r391a、t392q、t392a、t392k、t392k、t392p、t392s、t392k、t392k、l393r、l393r、l393q、i394v、i394m、i394l、i394f、i394m、p395a、s396t、g397s、g397a、d398p、d398e、d398e、d398e、s399a、s399t、s399r、a400g、s401l、s401c、s401c、s401a、e402q、a403s、a403r、a403t、a403k、l406s、l406e、l406d、l406n、l406r、q407f、q407a、q407f、i408v、a410t、a410s、l411v、l411m、l411f、l411i、a412v、a412s、r413s、r413p、r413t、r413a、t414r、t414p、t414l、t414s、t414e、a415p、a415k、a415r、a415s、r416a、r416i、r416t、r416k、r416g、s417r、s417y、s417a、s417k、r418q、r418t、a419t、a419t、a419v和a420r。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶是在重组宿主细胞中产生的糖基转移酶，其中所述宿主细胞是真核生物或原核生物中的至少一者。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所产生的糖单脂是在无细胞系统中在6至10的ph下，在25℃至42℃的温度下，并且任选地在缓冲溶液中搅拌下产生的鼠李糖单脂。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶是包含与seq id no: 30至seq id no: 62和80及其片段具有至少60%同一性的多肽序列的糖苷酶。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶是在重组宿主细胞中产生的糖苷酶，其中所述宿主细胞是以下中的至少一者：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、天蓝色链霉菌、铜绿假单胞菌、毕赤酵母、酿酒酵母、乳酸克鲁维酵母、黑曲霉、里氏木霉、棒状杆菌属、恶臭假单胞菌、泰国伯克霍尔德氏菌、类伯克霍尔德菌属、不动杆菌属、食烷菌属、热阳光南极杆菌属、芽孢杆菌属、伯克霍尔德菌属、假丝酵母、纤维化纤维单胞菌、真养产碱杆菌、肠杆菌属、盐单胞菌属、乳酸杆菌属、海杆菌属、粘球菌属、类诺卡氏菌属、假交替单胞菌属、假单胞菌属、假黄色单胞菌属、鲑肾杆菌、红球菌属、博戈里亚红酵母、韩国四联球菌、甲基杆菌属和甲基红色杆菌属。

15.一种糖基转移酶变体，所述糖基转移酶变体包含在选自以下的至少一个氨基酸中的突变：seq id no: 1的糖基转移酶氨基酸序列中的m1a、h2r、v3i、i4l、i4v、i5l、i5v、t6i、a7p、v8i、f17l、v18l、v18l、v18i、i20l、t23a、t23s、t23s、t23a、t23e、v25a、a26s、v31i、t32s、f33v、f33m、c34a、a35t、a35v、s36y、s36n、s36f、a37p、a37ew、a37ef、a37pa、a37e、a37g、a37p、a38v、a38g、a38y、a38r、f39l、f39a、a40k、a40r、a40p、a40e、a40s、p41e、p41s、p41a、l42s、l42a、i43a、i43v、i43l、e44d、e44g、r45l、r45g、r45e、c46s、c46a、c46p、c46r、g47a、f48m、f48l、n49s、n49a、n49e、n49t、n49g、n49g、n49k、n49e、n49r、n49s、f50v、f50l、l51i、l51v、l51v、l51v、p52a、l53v、l53r、l53i、g54t、t55e、t55s、t55p、r56a、r56a、r56a、r56p、e57n、e57d、e58g、e58q、y59f、y59i、d60e、d60n、d60h、d60a、d60q、d60q、e61a、e61a、v62l、v62i、v62a、v62p、m63i、m63v、m63a、m63l、m63s、m63p、a64t、a64v、a64s、a64y、d65s、d65n、a67r、h70n、h70d、p71s、r72k、r72l、r72e、t73k、t73a、t73g、t73d、s74a、l75f、p76r、p76g、t77v、l78m、k80r、k80r、t81a、t81w、t81v、i82v、i82v、a83g、s84g、s84p、s84t、s84g、t85s、t85a、l86i、e88d、e88p、e88a、q89l、q89h、y90f、r91d、r91e、l92v、l92m、e94q、e94a、q95a、a96l、a96l、a96v、a96e、a96t、a96h、c97a、c97v、c97t、d98n、d99r、d99e、d99g、d99e、e100d、e100q、v102i、m103l、l104i、l104v、l104i、l104v、l104v、g105a、s106h、s106n、s106r、l107s、l107q、l107v、s111a、l115m、l115v、k118r、k118r、h119r、h119y、i121a、i121v、v124a、v124i、t125s、a126g、a126v、a126g、q127e、q127h、v128a、v128l、v128i、v128a、s129t、s129q、s129a、f131w、f131q、f131h、g132n、g132q、g132d、f133l、f133v、f133i、f133i、f133i、f133l、w134l、a136p、a136s、a137q、a137k、a137f、a137l、a137r、a137h、a137m、a138s、a138d、s140a、s140p、s140p、s140p、t141v、t141i、t141v、h142l、h142s、p143-、p144a、p144k、p144k、p144l、g145p、g145r、a146t、a146f、a146t、a146l、a146s、a146l、n147t、n147p、n147s、l148i、l148v、a150e、a150t、a150g、f151s、f151e、f151d、f151t、f151w、f151w、v152l、v152l、p153t、p153s、y154r、y154d、y154r、y154v、y154r、y154l、p155e、v156i、v156p、v156d、v156q、v156g、v156l、v156i、v156a、v156e、v156l、k157r、k157e、k157r、r158a、r158s、r158n、r158k、r158e、r158m、r158q、l159e、l159d、l159g、l159r、l159a、l159k、l159t、l160f、l160i、l160a、l160v、l160y、l161m、l161f、l161m、l161w、l161m、g162l、g162d、g162r、g162r、g162w、m163e、m163i、m163g、m163l、m163l、m163d、m163f、m163v、m163i、m163f、m163v、m163k、i164t、i164e、i164g、i164c、i164a、i164v、e165v、e165y、e165d、e165a、e165i、r166k、r166l、r166e、r166v、r166q、r166h、r166d、r166s、a167g、a167t、a167p、a167l、a167t、a167g、a167s、a167m、a167n、a167s、a167d、a167e、f168i、f168s、f168v、f168c、f168a、f168e、f168v、l169v、r171d、r171e、r171n、r171k、v172t、v172i、v172i、v172a、v172a、v172l、m173c、m173c、a174t、a174k、a174k、a174g、e176d、e176a、s179r、s179t、s179g、s179r、f180l、f180v、f180l、q182s、q182a、q182r、q182r、q182g、q182a、l186m、a187p、a187p、t189a、t189v、t189v、t189a、k190s、k190r、k190r、k190t、k190s、i192f、i193m、i193l、i193f、s194g、s194g、q195e、q195r、i197l、i197v、s198h、s198a、s198h、d201q、r202g、r202k、r202g、e209d、e209d、v214p、v214t、v214a、h216t、h216r、h216p、h216q、h216s、h216s、a220s、a220s、q221h、q221n、q221r、t222a、t222i、v223s、v223a、f230y、s233a、s233a、s233g、s233t、g234s、g234d、l235d、l235e、l235g、l235f、q236h、q236e、q236l、q236h、q236r、q236e、q236l、p237t、p237t、p237q、p237e、p237a、p237q、p237q、l238v、l238p、l238t、l238m、l238i、l238r、l238v、a240t、a240p、a240d、e243d、d244a、d244e、d244e、n247a、n247a、n247s、n247s、n247q、n247r、e248g、e248a、e248a、a249g、a249e、a249t、a249g、a249s、s250p、s250p、s250p、v253i、t259a、t259s、m260n、v261r、v261i、v261l、v261i、n262d、n262d、n262h、n262d、n262d、n262d、g263a、g263a、g263s、g263p、g263s、g263e、g263e、e264g、e264p、e264q、e264t、e264d、e264a、q265a、q265t、q265r、q265r、q265s、y266f、t268r、t268a、t268s、a269t、v271a、v271i、v271l、v271a、v271a、q272e、q272e、l274c、k275r、k275r、l276s、l276r、l276k、l276a、l276r、i277t、i277l、i277a、i277l、i277m、n278g、n278g、v282i、f283l、t285a、s286g、s286r、s286k、s286r、s286r、q287n、q287d、q287e、q287g、s288p、s288t、s288a、s288e、s288g、v289d、v289a、v289t、v289p、d290e、d290l、d290v、p291d、p291a、p291h、p291q、s292v、s292p、s292t、s292a、s292e、v293p、v293l、v293l、v293d、v293p、v293a、s294p、s294a、s294l、s295r、s295t、s295a、s295l、e296s、e296a、e296s、e296d、e296g、e296p、g297s、g297s、g297d、g297s、g297p、g297d、g297p、r298q、r298q、r298n、r298d、r298e、i299v、v301l、r303s、r303p、v305a、s308t、r309k、r309l、r309a、r309s、i310l、h313q、h313r、s314t、s314a、s314a、s314a、s314c、s314c、a315s、a315t、l317i、v323i、v323i、t326a、t326v、l328q、m330i、m330l、m330i、m330l、m330f、m330l、v334i、i337l、i337v、i337l、a338v、a338v、f341l、f346l、m352l、m352v、m352i、e353q、c357v、c357v、l359i、l359v、v361l、v361i、v361l、v361i、v361l、f362s、f362d、f362l、f362r、f362r、f362l、f362k、f362l、f362s、f362p、f362d、p363g、p363a、p363r、p363s、p364s、p364r、p364k、a365v、s366t、s366q、a367g、a367g、a367t、e368r、e368q、s369r、s369p、s369a、l370i、a371s、a371t、a371t、t372a、t372r、d375q、d375q、d375r、d375e、k376r、k376t、k376r、k376r、i377l、i377v、n379d、n379k、n379k、n379g、n379d、s380d、s380d、s380d、s380e、q381p、e382a、e382q、e382a、v383i、v383i、r384s、r384a、r384t、a385e、a385e、s386n、s386a、s386n、s386k、s386r、s386a、e388t、e388a、e388a、e388d、e388q、e388r、r389q、r389k、r389e、y390m、y390t、y390m、y390l、y390i、r391a、t392q、t392a、t392k、t392k、t392p、t392s、t392k、t392k、l393r、l393r、l393q、i394v、i394m、i394l、i394f、i394m、p395a、s396t、g397s、g397a、d398p、d398e、d398e、d398e、s399a、s399t、s399r、a400g、s401l、s401c、s401c、s401a、e402q、a403s、a403r、a403t、a403k、l406s、l406e、l406d、l406n、l406r、q407f、q407a、q407f、i408v、a410t、a410s、l411v、l411m、l411f、l411i、a412v、a412s、r413s、r413p、r413t、r413a、t414r、t414p、t414l、t414s、t414e、a415p、a41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