DNA表观修饰的建库方法、测序方法及其建库试剂盒与流程

技术特征：
1.一种dna表观修饰的建库方法，其特征在于，包括以下步骤：提供待测dna；将所述待测dna与多肽接触，得到被定位dna，所述多肽可与dna表观修饰位点特异性结合，所述dna表观修饰位点包括甲基化位点和/或羟甲基化位点；采用转座酶与所述被定位dna进行转座反应，得到片段化的表观修饰dna体系，所述转座酶可靶向所述多肽并切割与所述多肽结合的dna；将所述片段化的表观修饰dna体系与多个标签体进行连接反应，得到标记表观修饰dna体系，多个所述标签体可与多个dna片段一一对应连接，多个所述dna片段经过所述转座酶的切割得到；将所述标记表观修饰dna体系采用扩增引物进行扩增反应，得到dna表观修饰的文库，所述扩增引物可特异性地扩增连接所述标签体的所述dna片段并引入文库标签。2.如权利要求1所述的dna表观修饰的建库方法，其特征在于，所述多肽选自5-甲基胞嘧啶单克隆抗体、mbd2b蛋白、5-羟甲基胞嘧啶单克隆抗体中的一种；和/或，所述转座酶为protein a/g融合的转座酶；和/或，多个所述标签体包括相同的第一接头结合标签和接头1’，所述转座酶含有第一接头和第二接头，所述第一接头可与所述接头1’连接，所述扩增引物包括第一引物和第二引物，其中，所述第一引物包含与所述第一接头结合标签相同的序列，所述第二引物包含结合序列以及文库标签，所述结合序列与所述第二接头的序列部分或全部相同。3.如权利要求1所述的dna表观修饰的建库方法，其特征在于，所述提供待测dna的步骤包括：提供待检测细胞样品，所述待检测细胞样品包括待检测全细胞和/或待检测细胞核；将所述待检测细胞样品进行固定和透化，得到透化细胞；采用分离试剂去除所述透化细胞中dna的核小体，得到所述待测dna。4.如权利要求3所述的dna表观修饰的建库方法，其特征在于，所述待检测细胞样品由多个隔离的单细胞样品共同构成，所述单细胞样品为单细胞或单细胞核。5.如权利要求2所述的dna表观修饰的建库方法，其特征在于，所述待测dna由多个单细胞的dna共同构成，其中：各所述标签体还包括细胞标签，在多个所述标签体中，与来自同一所述单细胞的多个所述dna片段连接的多个所述标签体的所述细胞标签相同，与来自不同所述单细胞的多个所述dna片段连接的多个所述标签体的所述细胞标签不同。6.如权利要求1所述的dna表观修饰的建库方法，其特征在于，所述待测dna由多个单细胞的dna共同构成，其中：所述转座酶含有接头1；所述转座酶与所述被定位dna进行转座反应，得到由多个单细胞片段化的表观修饰dna体系共同构成的所述片段化的表观修饰dna体系，且多个所述单细胞片段化的表观修饰dna体系与多个所述单细胞一一对应；所述将所述片段化的表观修饰dna体系与多个标签体进行连接反应，得到标记表观修饰dna体系的步骤包括：提供多个细胞标签载体，各所述细胞标签载体包括载体本体以及多条标签体，各所述
标签体含有细胞标签和与所述细胞标签一端连接的接头1’，所述载体本体与所述细胞标签的另一端连接且与所述细胞标签可条件性断裂，所述接头1’可与所述接头1连接，同一所述载体本体连接的所述标签体的所述细胞标签相同，不同所述载体本体连接的所述标签体的所述细胞标签不同；将多个所述细胞标签载体与多个所述单细胞片段化的表观修饰dna体系一一对应混合，进行连接反应，所述连接反应可使所述接头1’与所述接头1连接；施加条件，所述条件可使所述细胞标签与所述载体本体条件性断裂，得到所述标记表观修饰dna体系。7.如权利要求1所述的dna表观修饰的建库方法，其特征在于，所述将所述标记表观修饰dna体系采用扩增引物进行扩增反应，得到所述dna表观修饰的文库的步骤包括：将所述标记表观修饰dna体系进行延伸反应；进行转化操作，所述转化操作可将进行所述延伸反应后的片段中的5-甲基化胞嘧啶和/或5-羟甲基化胞嘧啶转化成二氢尿嘧啶；采用扩增引物进行index pcr，得到所述表观修饰dna文库。8.如权利要求7所述的dna表观修饰的建库方法，其特征在于，所述转化操作的步骤包括：加入氧化剂进行反应，所述氧化剂可使5-甲基化胞嘧啶和/或5-羟甲基化胞嘧啶氧化为羧基胞嘧啶；加入还原剂进行反应，所述还原剂可将羧基胞嘧啶碱基还原为所述二氢尿嘧啶。9.一种用于dna表观修饰的建库的试剂盒，其特征在于，所述用于dna表观修饰的建库的试剂盒包括：多肽，所述多肽用于与dna中的甲基化位点和/或羟甲基化位点特异性结合；转座酶，所述转座酶可靶向所述多肽后对dna进行片段化；标记体系，所述标记体系包括多个标签体，所述多个标签体可与多个dna片段一一对应连接，多个所述dna片段经过所述转座酶的切割得到；扩增体系，所述扩增引物可特异性地扩增连接所述标签体的所述dna片段。10.一种dna表观修饰的测序方法，其特征在于，包括以下步骤：采用如权利要求1~8任一项所述的dna表观修饰的建库方法构建表观修饰dna文库；对所述表观修饰dna文库进行测序。

技术总结
本发明属于基因测序领域，具体涉及DNA表观修饰的建库方法、测序方法及其建库试剂盒，包括以下步骤：提供待测DNA；将待测DNA与多肽接触，得到被定位DNA；采用转座酶与被定位DNA进行转座反应，得到片段化的表观修饰DNA体系；将片段化的表观修饰DNA体系与多个标签体进行连接反应，得到标记表观修饰DNA体系；将标记表观修饰DNA体系采用扩增引物进行扩增反应。本发明通过采用多肽特异性结合对表观修饰碱基的DNA进行定位，再转座酶进行靶向定位点后，对定位点附近的DNA进行切割，因此被切割的部分只限定于表观修饰碱基的区域，进而有效地筛选表观修饰DNA信息加以应用，减少了非表观修饰碱基区域干扰。碱基区域干扰。碱基区域干扰。


技术研发人员：谢莹莹 李金炜 桑国芹 石焕焕 罗云超 韦秋霞 焦少灼 李宗文
受保护的技术使用者：北京寻因生物科技有限公司
技术研发日：2022.10.26
技术公布日：2022/11/25