羟基磷灰石和胶原蛋白组合物及其用于祛痣、祛斑、降低色素沉着、美白的用途的制作方法

1.本发明涉及医药、医疗器械及化妆品领域。具体涉及羟基磷灰石复合胶原蛋白用于祛痣/淡痣、祛斑/淡斑、降低色素沉着、美白的用途及基于其的组合物及制剂。


背景技术：

2.随着生活水平和医疗水平的不断提高，皮肤形态的恢复已不仅仅是为单独恢复其功能，而更重要的是满足美学要求，提高生存质量。面部色斑和黑色素痣的治疗和预防一直是医学界的难题，特别是30岁以上的光老化皮肤色素沉着斑、老年斑、日光性角化病、痤疮后色素沉着斑、雀斑、雀斑样痣、各种以及色素痣等发病率非常高，而且会随着年龄的增加或病理原因而产生、增加、扩大，并难以消除。
3.目前，对色斑和黑色素痣的治疗方法主要有有激光、微波、电灼、冷冻、化学换肤术、磨削术等，其共同的特点是通过物理或化学的方法将色斑除掉，但这些方法成本高、复发率高、且具有安全。如化学药物常具有腐蚀性，使用不当很可能出现长久的色素沉着或色素脱失，甚至产生瘢痕，毁容等。
4.所以本领域需要提供能够安全祛痣/淡痣、祛斑/淡斑、降低色素沉着、美白的产品。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种能够安全祛痣/淡痣、祛斑/淡斑、降低色素沉着、美白的产品。
6.本发明第一方面，提供了一种活性成分的用途，用于制备一组合物或制剂或产品，所述组合物或制剂或产品用于：(a)祛痣和/或淡痣；(b)祛斑和/或淡斑；和/或(c)降低色素沉着和/或美白；
7.其中，所述的活性成分包括：(y1)第一活性成分：羟基磷灰石。
8.在另一优选例中，所述的活性成分包括：(y1)第一活性成分：羟基磷灰石；和(y2)第二活性成分：胶原蛋白。
9.在另一优选例中，所述第一活性成分和第二活性成分的质量比为1:10～10:1，较佳地，1：5-5:1，更佳地，1:2-2:1。
10.在另一优选例中，所述的组合物包括：
11.(y1)第一活性成分：羟基磷灰石；
12.(y2)第二活性成分：胶原蛋白；和
13.(z)药学上或化妆品学上可接受的载体。
14.在另一优选例中，所述的组合物为药物组合物或化妆品组合物。
15.在另一优选例中，所述组合物的剂型选自下组：固体剂型、半固体剂型、或液体剂型，如溶液、凝胶、膏霜、乳液、膏剂、霜剂、糊剂、饼、粉剂、贴剂等。
16.在另一优选例中，所述的产品选自下组：乳液、霜、露、防晒剂、面膜、洗面奶、精华液、粉底、白粉、腮红、肥皂。
17.在另一优选例中，所述痣选自下组：先天性黑素细胞痣、雀斑样痣、皮脂腺痣、痣细胞痣、色素痣、黑素细胞痣、获得性黑色素细胞痣，或其组合
18.在另一优选例中，所述斑选自下组：黄褐斑、黑斑、雀斑、老年斑、或其组合。
19.在另一优选例中，所述色素沉着选自下组：日晒后黑色色素沉着(光老化)、瘢痕造成黑色色素沉着、痤疮后色素沉着，或其组合。
20.在另一优选例中，所述美白选自下组：提高皮肤亮度、改善肤色不均，或其组合。
21.本发明第二方面，提供了一种组合物，所述组合物包括：
22.(y1)第一活性成分：羟基磷灰石；
23.(y2)第二活性成分：胶原蛋白；和
24.(z)药学或化妆品学上可接受的载体。
25.在另一优选例中，所述羟基磷灰石选自下组：陶瓷类羟基磷灰石、非陶瓷类羟基磷灰石、非晶态羟基磷灰石、缺钙型羟基磷灰石、无定型羟基磷灰石、羟基磷灰石和磷酸钙的混合物，或其组合；较佳地，缺钙型羟基磷灰石。
26.在另一优选例中，所述第一活性成分和第二活性成分的质量比为1:10～10:1，较佳地，1：5-5:1，更佳地，1:2-2:1。
27.在另一优选例中，所述羟基磷灰石的钙磷摩尔比＜1.67，较佳地，1.5-1.67、1.53-1.65或1.55-1.62。
28.在另一优选例中，例如所述胶原蛋白分子量≤6000da，较佳地，≤5000da、≤3000da、≤2000da或≤1000da，优选地，≥200da。
29.在另一优选例中，所述羟基磷灰石的形态选自下组：针状、棒状、球形，或其组合，较佳地，针状或棒状。
30.在另一优选例中，所述羟基磷灰石的尺寸为0.5nm-950μm，较佳地1nm-100μm、2nm-10μm、5nm-2μm或10nm-1μm、20nm-500nm。
31.在另一优选例中，所述胶原蛋白选自下组：人胶原蛋白、牛胶原蛋白、猪胶原蛋白、鱼胶原蛋白、驴胶原蛋白，或其组合；较佳地，鱼胶原蛋白。
32.在另一优选例中，所述胶原蛋白为天然的胶原蛋白或重组胶原蛋白。
33.在另一优选例中，所述组合物中胶原蛋白的含量为1-10wt％，较佳地，3-9wt％，更佳地，4-7wt％。
34.在另一优选例中，所述组合物中羟基磷灰石的含量为1-20wt％，较佳地，2-15wt％，更佳地，3-12wt％或4％～9％。
35.在另一优选例中，所述组合物中所述第一活性成分和第二活性成分之和占比为0.1～95wt％，较佳地0.5-80wt％、1-60wt％、2-50wt％、4-30wt％或5-25wt％。
36.在另一优选例中，所述的组合物为药物组合物或化妆品组合物。
37.在另一优选例中，所述组合物还包括选自下组的额外组分：抗炎成分、抗氧化成分、抗紫外线成分、或其组合。
38.在另一优选例中，所述化妆品学上可接受的载体或赋形剂选自下组：保湿剂、抗氧化剂、抗紫外线剂、防腐剂、成膜剂、油溶性凝胶化剂、有机改性粘土矿物、树脂、抗菌剂、香
精、盐类、ph调节剂、螯合剂、清凉剂、抗炎剂、皮肤美化用成分、维生素、氨基酸、核酸、激素、包合化合物或其组合。
39.应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
40.图1显示了不同比例的hap和胶原蛋白联合使用时，对b16黑素瘤细胞黑色素合成的影响；
41.图2显示了本发明组合物的一个实施例淡痣/祛痣的效果；
42.图3显示了本发明组合物的一个实施例淡斑/祛斑、降低色素沉着的效果；
具体实施方式
43.本发明人经过广泛而深入的研究，通过大量筛选和测试，提供了一种包含羟基磷灰石和胶原蛋白的组合物，本发明人发现，羟基磷灰石具有很好的祛痣、祛斑和美白的功效，令人惊讶地，羟基磷灰石和胶原蛋白在祛痣、祛斑和美白相关方面具有显著的协同作用。在此基础上完成了本发明。
44.术语
45.除非另有定义，否则本文中所用的全部技术术语和科学术语均具有如本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同含义。
46.如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
47.如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由
…
构成”、或“由
…
构成”。
48.如本文所用，术语“室温”是指温度为4-40℃，较佳地，25
±
5℃。
49.羟基磷灰石
50.羟基磷灰石(hydroxyapatite，hap)，又称羟磷灰石，碱式磷酸钙，是钙磷灰石ca5(po4)3oh的自然矿化物。羟基磷灰石的理论组成为ca
10
(po4)6(oh)2，钙磷比(ca/p)约为1.67，但实际组成可以不是按照化学计量形成的。
51.羟磷灰石是人体骨骼组织的主要无机组成成分，植入体内后，钙和磷会游离出材料表面被身体组织吸收，并生长出新的组织。所以羟基磷灰石是一种性能优良的生物无机材料,具有良好的生物相容性和化学稳定性，不会对皮肤产生刺激和腐蚀作用。
52.本发明中，对所述羟基磷灰石的来源和结晶方法没有特别要求，可以使用各种来源各种形态的羟基磷灰石。如天然羟基磷灰石或合成的羟基磷灰石。所述羟基磷灰石的制备方法是本领域已知的。
53.优选地，所述羟基磷灰石选自下组：陶瓷类羟基磷灰石、非陶瓷类羟基磷灰石、非晶态羟基磷灰石、缺钙型羟基磷灰石、无定型羟基磷灰石、羟基磷灰石和磷酸钙的混合物，或其组合；较佳地，缺钙型羟基磷灰石。
54.优选地，所述羟基磷灰石为缺钙型磷灰石，例如，所述羟基磷灰石的钙磷摩尔比＜1.67，较佳地，1.5-1.67、1.53-1.65或1.55-1.62。
55.本发明中羟基磷灰石可以以任何合适的形态存在，如针状、棒状、球形。
56.羟基磷灰石的尺寸可以根据需求选择。如所述羟基磷灰石的尺寸为1nm-100μm、2nm-10μm、5nm-2μm或10nm-1μm、20nm-500nm，所述尺寸以其最大处长度计算。
57.胶原蛋白
58.如本文所用，术语“胶原蛋白”和“胶原蛋白肽”可互换使用，包括天然来源的胶原蛋白，也包括通过基因重组方法制备的胶原蛋白，包括完整的胶原蛋白以及胶原蛋白的水解产物。
59.典型的，所述胶原蛋白包括但并不限于：人胶原蛋白、牛胶原蛋白、猪胶原蛋白、鱼胶原蛋白、驴胶原蛋白，或其组合；较佳地，鱼胶原蛋白。
60.优选地，所述胶原蛋白为胶原蛋白肽，更优选地，为低聚肽。
61.优选地，例如所述胶原蛋白分子量≤6000da，较佳地，≤5000da、≤3000da、≤2000da或≤1000da，优选地，≥200da。
62.组合物
63.本发明提供了一种组合物，所述组合物包括：
64.(y1)第一活性成分：羟基磷灰石；
65.(y2)第二活性成分：胶原蛋白；和
66.(z)药学或化妆品学上可接受的载体。
67.在另一优选例中，所述第一活性成分和第二活性成分的质量比为1:10～10:1，较佳地，1：5-5:1，更佳地，1:2-2:1。
68.在另一优选例中，所述组合物中所述第一活性成分和第二活性成分之和占比为0.1～95wt％，较佳地0.5-80wt％、1-60wt％、2-50wt％、4-30wt％或5-25％。出于性价比考虑，所述组合物中，所述第一活性成分为3-6wt％且所述第二活性成分为3-6wt％时最佳。
69.应用
70.本发明提供了羟基磷灰石、羟基磷灰石与胶原蛋白的组合、以及上述组合物的用途，用于(a)祛痣和/或淡痣；(b)祛斑和/或淡斑；和/或(c)降低色素沉着和/或美白。
71.实验证明，羟基磷灰石、羟基磷灰石与胶原蛋白的组合可以降低细胞对黑色素的生成和沉积；在黑色素生成、沉积后，能够有效去除黑色素形成的痣、斑等皮肤问题，具有美白功效。
72.本发明中，术语“痣”是表皮、真皮内黑素细胞增多引起的皮肤表现，包括先天性黑素细胞痣、后天性黑素细胞痣、皮脂腺痣等各种类型的痣，尤其是色素痣。所述痣包括但并不限于：先天性黑素细胞痣、雀斑样痣、皮脂腺痣、痣细胞痣、色素痣、黑素细胞痣、获得性黑色素细胞痣，或其组合。
73.本发明中，术语“斑”是指与周围皮肤颜色不同的斑点，尤其是色素斑。所述斑包括但不限于：黄褐斑、黑斑、雀斑、老年斑，或其组合。
74.优选地，所述色素沉着选自下组：日晒后黑色色素沉着(光老化)、瘢痕造成黑色素沉着、痤疮后色素沉着，或其组合。
75.本发明中，术语“美白”包括提高皮肤亮度、改善肤色不均。
76.本发明中，羟基磷灰石或羟基磷灰石与胶原蛋白的组合可以制成药物组合物或化妆品组合物。
77.有可能的药物组合物，诸如粉剂、微粒剂、溶液剂、胶冻、乳膏、悬液、泥敷剂、搽剂、洗剂等剂型。药物能够由通常已知的制备技术来制备，并且合适的药学上可接受的载体能够被添加到该药物中。
78.药物上可接受的载体的例子包括赋形剂、粘结剂、分解剂、润滑剂、流动助剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂、保温(润湿)剂、防腐剂、溶剂、增溶剂、防腐剂、调味剂、增甜剂、染料、香料、推进剂等，这些载体可以进行选择并以在不影响本发明的效果的范围内的合适量添加。
79.有可能将羟基磷灰石或羟基磷灰石与胶原蛋白的组合制备成化妆品组合物，如乳剂、液体、膏剂、霜剂、糊剂、饼、粉剂等的剂型。
80.在不防碍本发明的效果的范围内，本发明的化妆品中可以添加通常的化妆品中使用的其它成分，例如成膜剂、油溶性凝胶化剂、有机改性粘土矿物、树脂、保湿剂、防腐剂、抗菌剂、香精、盐类、抗氧化剂、ph调节剂、螯合剂、清凉剂、抗炎剂、皮肤美化用成分(美白剂、细胞活性剂、皮肤粗糙改善剂、血液循环促进剂、皮肤收敛剂、抗脂漏剂等)、维生素类、氨基酸类、核酸、激素、包合化合物等。
81.油溶性凝胶化剂是选自硬脂酸铝、硬脂酸镁、肉豆蔻酸锌等金属皂；n-月桂酰基-l-谷氨酸、α，γ-二-正丁基胺等氨基酸衍生物；环糊精棕榈酸酯、环糊精硬脂酸酯、环糊精2-乙基己酸棕榈酸酯等环糊精脂肪酸酯；蔗糖棕榈酸酯、蔗糖硬脂酸酯等蔗糖脂肪酸酯；一亚苄基山梨醇、二亚苄基山梨醇等山梨醇的亚苄基衍生物；二甲基苄基十二烷基铵蒙脱石粘土、二甲基二十八烷基铵蒙脱石粘土等有机改性粘土矿物等的凝胶化剂，可以根据需要使用一种，或者使用二种或以上。
82.保湿剂有：甘油、山梨醇、丙二醇、双丙甘醇、1，3-丁二醇、葡萄糖、木糖醇、麦芽糖醇、聚乙二醇、透明质酸、硫酸软骨素、吡咯烷酮羧酸盐、聚氧乙烯甲基葡糖苷、聚氧丙烯甲基葡糖苷等。
83.抗菌防腐剂有：对羟基苯甲酸烷基酯、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、苯氧基乙醇等，抗菌剂有：苯甲酸、水杨酸、石炭酸、山梨酸、对羟基苯甲酸烷基酯、对氯间甲酚、六氯酚、苯扎氯铵、氯化洗必泰、三氯-n-碳酰苯胺、三氯生、感光素、苯氧基乙醇等。
84.抗氧化剂有：生育酚、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、植酸等，ph调节剂有：乳酸、柠檬酸、乙醇酸、琥珀酸、酒石酸、dl-苹果酸、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢铵等，螯合剂有丙氨酸、乙二胺四乙酸钠盐、多磷酸钠、偏磷酸钠、磷酸等，清凉剂有：l-薄荷醇、樟脑等，抗炎剂有：尿囊素、甘草亭酸、甘草酸、凝血酸、甘葡环烃(azulene)等。
85.皮肤美化用成分有：胎盘提取液、熊果苷、谷胱甘肽、虎耳草提取物等美白剂；蜂王浆、感光素、胆甾醇衍生物、小牛血液提取液等细胞活性剂；皮肤粗糙改善剂；壬酸缬草酰胺、烟酸苄酯、烟酸β-丁氧基乙酯、辣椒素、姜油酮、斑蝥酊、鱼石脂、咖啡因、鞣酸、α-冰片、烟酸生育酚、六烟酸肌醇脂、环扁桃酯、桂利嗪、妥拉唑啉、乙酰胆碱、维拉帕米、千金藤素、γ-谷维醇等血液循环促进剂；氧化锌、鞣酸等皮肤收敛剂；硫、等抗脂漏剂等，维生素类有：维生素a油、松香油、乙酸松香油、棕榈酸松香油等维生素a类；核黄素、丁酸核黄素、黄素腺嘌呤核苷酸等维生素b2类；吡多辛盐酸盐、吡多辛二辛酸酯、吡多辛三棕榈酸酯等维生素b6类，维生素b12及其衍生物，维生素b15及其衍生物等维生素b类；l-抗坏血酸、l-抗坏血酸二
棕榈酸酯、l-抗坏血酸-2-硫酸钠、l-抗坏血酸磷酸二酯二钾等维生素c类；麦角钙化醇、胆钙化醇等维生素d类；α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、乙酸dl-α-生育酚、烟酸dl-α-生育酚、琥珀酸dl-α-生育酚等维生素e类；维生素h；维生素p；烟酸、烟酸苄酯、烟酰胺等烟酸类；泛酸钙、d-泛醇、泛酰基乙基醚、乙酰基泛酰基乙基醚等泛酸类；生物素等。
86.氨基酸类有：甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、色氨酸等，核酸有脱氧核糖核酸等，激素有雌二醇、乙烯基雌二醇等。
87.本发明的化妆品的优选例子包括：皮肤护理化妆品、彩妆化妆品、防紫外线化妆品。例如有乳液、霜、露、防晒剂、面膜材料、洗面奶、精华液等基础化妆品；粉底、白粉、腮红等彩妆化妆品等。
88.对于产品的形态没有特别限定，可以是液状、乳液状、霜状、固体状、糊状、凝胶状、粉末状、多层状、摩丝状(mousse)、喷雾状等。
89.本发明还提供了一种皮肤护理方法，所述方法包括步骤：对需要的个体施用羟基磷灰石、或羟基磷灰石与胶原蛋白的组合、或本发明的组合物。
90.在另一优选例中，所述方法为(a)祛痣和/或淡痣；(b)祛斑和/或淡斑；和/或(c)降低色素沉着和/或美白等方法。
91.在本发明中，所述降低色素沉着、美白等应用，既包括预防性的应用，也包括事后改善性的应用。例如，对于痤疮后色素沉着，包括在出现痤疮之前、之中、和/或之后施用本发明的活性成分或组合物，以降低色素沉着。
92.本发明的主要优点包括：
93.1、本发明首次发现羟基磷灰石具有祛痣和/或淡痣、祛斑和/或淡斑、降低色素沉着和/或美白等减轻皮肤表面色素堆积方面的功效。
94.2.本发明还发现羟基磷灰石与胶原蛋白在祛痣和/或淡痣、祛斑和/或淡斑、降低色素沉着和/或美白等方面具有显著的协同效果。
95.3.本发明提供了一种有效单安全、无创的具有祛痣和/或淡痣、祛斑和/或淡斑、降低色素沉着和/或美白功效的组合物。
96.4.本发明的组合物对痣、斑具有显著提高的治愈效果。
97.下面结合具体实施，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
98.hap：缺钙型羟基磷灰石(钙磷比：1.59)；非陶瓷型棒状hap，直径2～5nm，长度100～500nm；
99.胶原蛋白：鱼胶原蛋白肽，由武汉远成共创科技有限公司提供，符合q/hrb003s标准。分子量(dal)≤1000，ph值：6.52，灰分：0.67％，蛋白质(换算系数5.79)：99.2％(dry basis)。
100.小鼠b16黑素瘤细胞株：于rpmi1640培养液(含10％小牛血清，105u/l青霉素，105u/l链霉素)、37℃、5％co2培养箱中培养，每3天传代一次。
101.统计处理：spss11.0软件
102.实施例1
103.探讨不同比例的hap和胶原蛋白联合使用时，对b16黑素瘤细胞黑色素合成的影响。
104.黑色素含量的测定：取对数生长期的b16细胞，经0.25％胰酶消化，调整细胞浓度为5
×
105/ml，接种于6孔培养板中，每孔加入细胞悬液2ml，置于37℃、5％co2培养箱中培养。待细胞贴壁24h后，弃培养液。实验组按照表1所示的浓度加入含有hap和胶原蛋白的全培养液2ml，共81组。
105.表1
[0106][0107]
空白组加入等量的完全培养基。每组处理重复6个孔。加入含有10％dmso的1mol/lnaoh，超声破碎30min，置于90℃水浴2h，450nm处测定吸光度(a)。
[0108]
黑色素合成相对含量％＝[(实验组a/实验组细胞数)/(空白组a/空白组细胞数)]
×
100％
[0109]
表2黑色素相对含量(％)
[0110][0111]
结果如图1和表2所示，可以看出hap和胶原蛋白联合使用可以显著降低黑色素的含量；且当hap或胶原蛋白中的一种固定时，另一种的添加可显著降低黑色素，这说明两者在降低黑色素方面具有明显的协同作用。
[0112]
效果评价
[0113]
以功效成分总计：8％制备成乳剂，进行人体实验考查效果。
[0114]
组别：
[0115]
实验组：功效成分组合为hap的比例为4％，胶原蛋白的比例为4％；
[0116]
对照组1：单独使用8％的hap的产品；
[0117]
对照组2：单独使用8％的胶原蛋白的产品；
[0118]
实施例2
[0119]
淡痣/祛痣
[0120]
1、评价方法：
[0121]
选择健康成人，有黑色素痣生长的部位，选取2cm*2cm受试区域，清点该受试区域的黑色素痣的数量。
[0122]
发放受试产品，每天使用两次，早、晚各一次，洁面后使用。实验期间停止使用其他的淡痣、祛痣类产品。
[0123]
连续使用后进行评估。采用自身前后对比，由医生和患者共同按照以下分级标准进行分级评价。
[0124]
0：黑色素痣遗留，凸出皮肤表面，颜色未发生变化；
[0125]
1：黑色素痣缩小，凸出皮肤表面(或黑色素痣未变小，凸起减少)，颜色未变；
[0126]
2：黑色素痣颜色变浅或由黑色向黄褐色转变；
[0127]
3：黑色素痣缩小，凸起减少，颜色变浅或由黑色向黄褐色转变；
[0128]
4：黑色素痣缩小，皮肤光滑，颜色变浅；
[0129]
5：痣被完全去除，无凸起、皮肤光滑，未遗留色素、与周围肤色一致，难以辨别原黑色素痣的所在在部位。
[0130]
其中：1、2级为有效；3、4级为显效；5级为治愈。
[0131]
表3 90天实验结果
[0132][0133]
结果如图2和表3所示，可以看出hap和胶原蛋白同时存在时，对淡痣的有效率明显好于单独使用hap和单独使用胶原蛋白的情况，甚至可以达到祛痣(治愈)效果。
[0134]
实施例3
[0135]
淡斑/祛斑、降低色素沉着
[0136]
1、评价方法：
[0137]
选择有斑或色素沉着的健康成人，取2cm*2cm区域为受试部位，发放受试产品，每天使用两次，早、晚各一次，洁面后使用。实验期间停止使用其他的淡斑、降低色素沉着类产品。根据皮肤色度减退程度进行评价。
[0138]
连续使用后进行评估。采用自身前后对比，由医生和患者共同按照以下分级标准进行分级评价。
[0139]
0：色斑、色素沉着面积未发生变化，颜色未发生变化；
[0140]
1：色斑、色素沉着面积缩小，颜色未发生变化；
[0141]
2：色斑、色素沉着面积未发生明显变化，颜色变浅或由黑色向黄褐色转变；
[0142]
3：色斑、色素沉着面积缩小，颜色变浅或由黑色向黄褐色转变；
[0143]
4：色斑、色素沉着面积明显缩小，颜色明显变浅、与周围皮肤颜色接近；
[0144]
5：色斑、色素沉着消失，与周围肤色一致，难以辨别原色斑、色素沉着的所在在部位。
[0145]
其中：1、2级为有效；3、4级为显效；5级为治愈。
[0146]
表4 90天实验结果
[0147][0148]
结果如图3和表4所示，可以看出hap和胶原蛋白同时存在时，淡斑、降低色素沉着效果明显好于单独使用hap和单独使用胶原蛋白的情况，且具有显著的祛斑效果；其中单独使用hap的效果也显著优于单独使用胶原蛋白。
[0149]
实施例4
[0150]
美白
[0151]
1、评价方法：
[0152]
选择健康成人，选取健康成人前臂内侧2cm*2cm区域为授试部位。
[0153]
发放受试产品，每天使用两次，清洁后，取0.3g授试产品均匀涂在试验区，早、晚各一次。实验期间停止使用其他的亮肤美白类产品。
[0154]
连续使用后，采用lab色度系统光谱光度计测量授试部位的色度差，进行评估。
[0155]
2、仪器：chromameter cr-400颜色仪，由日本konica minolta sensing,inc.公司生产。
[0156]
3、测试指标：
[0157]
l为亮度，值越大越偏向白色；a为红、绿色品；b为黄、蓝色品。在lab色度系统中，以坐标之差δl、δa、δb代表色差；
[0158]
色差的综合指数δe
ab
＝[(δl)2 (δa)2 (δb)2]
1/2
。
[0159]
通过对比δe
ab
指标来判定授试产品的美白效果。
[0160]
4、采用statistica统计软件对皮肤颜色参数进行统计分析和显著性分析。配对t检验，分析产品应用前后的参数初始值和终末值是否存在差异的显著性，当p＜0.05时，具有显著意义。
[0161]
5、实验结果：
[0162]
表7色差δe
ab
比较(x
±
s)
[0163] 30d60d90d实验组(4％hap 4％胶原)4.69
±
1.715.21
±
2.326.84
±
2.01
*
对照组1(8％hap)3.49
±
2.064.22
±
1.264.86
±
1.55对照组2(8％胶原)2.98
±
1.233.10
±
1.003.56
±
1.23
[0164]
与使用前比较，*组p＜0.05
[0165]
结果如表7，可以看出实验组hap和胶原蛋白复合的产品功效果明显，使用至90d时，色差变化具有显著性(t＝2.721，p＜0.05)，而单独使用hap也比单独使用胶原蛋白美白效果好。
[0166]
讨论
[0167]
综上可以看出，在同浓度下，在淡化痣、淡化斑、降低黑色素沉着和皮肤的美白领域，单独使用hap具有明显的功效，且hap和胶原蛋白的组合具有明显的协同作用，能够达到彻底去除痣和斑的效果，治愈率比单独使用hap提高5～6倍，效果优异。
[0168]
在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。