一种测定原料药中哌啶残留的检测方法与流程

1.本发明属于药物分析技术领域，尤其涉及一种测定原料药中哌啶残留的检测方法。


背景技术：

2.哌啶，又称六氢吡啶，cas号为110
‑
89
‑
4，分子式为c5h
11
n，分子量为85.15，其化学结构式为：
[0003][0004]
常用作合成药品的中间体、橡胶促进剂的原料及环氧树脂固化剂等。其下游产品有：富马酸异哌丙吡胺、脑脉宁、氯哌斯汀、磷酸苯丙哌林、盐酸地芬尼多等。哌啶属于易燃液体。毒性分类为高级。急性毒性口服
‑
大鼠ld50:400毫克/公斤；口服
‑
小鼠ld50:30毫克/公斤。依据国际通用的ich(人用药品注册技术要求国际协调会议)指导原则q3c的界定，吡啶属于药品中第二类溶剂，限度要求为200ppm，这这便需要能够方便检测哌啶的方法。
[0005]
cn 107860828 a公开了一种测定原料药中哌啶残留量的高灵敏度的方法，采用液相色谱法使用紫外检测器测定样品中哌啶的残留量，方法中需进行衍生化反应，方法较复杂，不容易操作。因此，需要有一种方法去检测在合成工艺中使用或可能产生哌啶的原料药中的哌啶残留。常用的气相色谱法测定哌啶，操作复杂，峰型较差，远达不到要求，为进一步控制原料药产品的安全，开发一种高灵敏度的方法测定哌啶。


技术实现要素：

[0006]
本发明提供一种测定原料药中哌啶残留的检测方法，旨在解决现有技术中常用的色谱法测定哌啶，方法复杂，不易操作，峰型较差，灵敏度低，远达不到要求的技术问题。
[0007]
为了开发出高灵敏度的哌啶检测方法，发明人根据多年的经验，研发了一种使用与原料药的哌啶的检测方法，本发明是这样实现的，一种测定原料药中哌啶残留的检测方法，包括：
[0008]
将含哌啶的样品经气相色谱法检测，得到气相色谱图；
[0009]
通过采用外标法结合所述气相色谱图计算得到样品中哌啶的含量；
[0010]
所述气相色谱法使用氢火焰离子化检测器检测；
[0011]
所述气相色谱法检测中色谱升温程序为：初始温度60℃保持5min，以20℃/min的速率升温至230℃，保持10min。
[0012]
可选的，所述气相色谱法检测中色谱柱为5.8％苯基
‑
0.2％乙烯基
‑
94％甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管色谱柱，所述色谱柱为mega
‑
ps264 30m
×
0.32mm，5um。
[0013]
可选的，所述气相色谱法检测中检测器温度为250℃。
[0014]
可选的，所述气相色谱法检测中进样口温度为200℃。
[0015]
可选的，所述气相色谱法检测中载气为氮气，分流比为20:1，流速为2ml/min。
[0016]
可选的，所述样品采用溶剂溶解，所述样品为2g，所述溶剂为二甲基亚砜，所述二甲基亚砜为5ml。
[0017]
可选的，所述检测采用顶空进样的方式。
[0018]
可选的，所述顶空瓶平衡温度为80℃。
[0019]
可选的，所述顶空瓶平衡时间为30min。
[0020]
在本发明中，外标法计算残留量的公式为：
[0021][0022]
式中：au：供试品溶液中哌啶峰面积；cs：对照品溶液中哌啶浓度；as：对照品溶液中哌啶的峰面积；w1：供试品称样量；5：供试品的稀释倍数。
[0023]
本发明提供的一种测定原料药中哌啶残留的检测方法，采用气相色谱法检测，分别将空白溶液、供试品溶液、对照品溶液加热平衡后，采用顶空进样的方式，通过氢火焰离子化检测器检测，测试得到气相色谱图，按外标法以峰面积计算哌啶残留的含量。
[0024]
本发明技术效果：本发明提供一种测定原料药中哌啶残留的检测方法，本发明采用气相色谱法测定原料药中的哌啶残留，通过采用二甲基亚砜溶解样品，使用氢火焰离子化检测器测定哌啶的残留，通过采用外标法结合所述气相色谱图计算得到样品中哌啶的含量。本发明检测哌啶残留快速准确、灵敏度高，稳定性好，检测限达到12.045ppm，常用的液相色谱法操作复杂，峰型较差，达不到药物分析要求，本发明对照品溶液和供试品溶液配制过程简单，不需要进行衍生化；采用常用的氢火焰离子化检测器，操作过程简单，精密称取供试品2.0g，置顶空瓶中，精密加二甲基亚砜5.0ml溶解，密封，作为供试品溶液，能够满足大众化需求；色谱峰分离度达到11.9，无干扰；色谱条件要求较宽，顶空平衡温度
±
5％、平衡时间
±
10％对检测结果均无影响。
附图说明
[0025]
图1为本发明实施例中系统适用性特征图谱；
[0026]
图2为本发明实施例中定量限特征图谱；
[0027]
图3为本发明实施例中检测限特征图谱；
[0028]
图4为本发明实施例中分析重复性1特征图谱；
[0029]
图5为本发明实施例中分析重复性2特征图谱；
[0030]
图6为本发明实施例中线性(150％)特征图谱；
[0031]
图7为本发明实施例中线性(50％)特征图谱；
[0032]
图8为本发明实施例中专属性
‑
空白图谱；
[0033]
图9为本发明实施例中专属性
‑
对照图谱；
[0034]
图10为本发明实施例中专属性
‑
硝苯地平中哌啶对照图谱
[0035]
图11为本发明实施例中专属性
‑
硝苯地平样品图谱
[0036]
图12为本发明实施例中专属性
‑
硝苯地平混合溶液图谱
[0037]
图13为本发明实施例中准确度80％
‑
1特征图谱；
[0038]
图14为本发明实施例中准确度80％
‑
2特征图谱；
[0039]
图15为本发明实施例中准确度80％
‑
3特征图谱；
[0040]
图16为本发明实施例中准确度100％
‑
1特征图谱；
[0041]
图17为本发明实施例中准确度100％
‑
2特征图谱；
[0042]
图18为本发明实施例中准确度100％
‑
3特征图谱；
[0043]
图19为本发明实施例中准确度120％
‑
1特征图谱；
[0044]
图20为本发明实施例中准确度120％
‑
2特征图谱；
[0045]
图21为本发明实施例中准确度120％
‑
3特征图谱；
[0046]
图22为本发明实施例中耐用性考察中平衡温度76℃特征图谱；
[0047]
图23为本发明实施例中耐用性考察中平衡温度84℃特征图谱；
[0048]
图24为本发明实施例中耐用性考察中平衡时间27min特征图谱；
[0049]
图25为本发明实施例中耐用性考察中平衡时间33min特征图谱。
具体实施方式
[0050]
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0051]
请参阅图1至图25，在本发明的一个实施方式中，提供一种测定原料药中哌啶残留的检测方法，包括:将含哌啶的样品经气相色谱法检测，得到气相色谱图；通过采用外标法结合所述气相色谱图计算得到样品中哌啶的含量；所述气相色谱法使用氢火焰离子化检测器测定样品中哌啶；所述气相色谱法检测中色谱升温程序为：初始温度60℃保持5min，以20℃/min的速率升温至230℃，保持10min。
[0052]
本发明通过气相色谱法对原料中的哌啶残留进行检测。在气相色谱法检测时，配有氢火焰离子化检测器，氢火焰离子化检测器的灵敏度高，线性范围宽，易于掌握，应用范围广，特别适合毛细管气相色谱使用，同时附有色谱工作站，启动气相色谱仪后，按照本发明规定的条件进行调试，基线稳定后进行色谱分析。
[0053]
作为本发明的一种实施方式，所述气相色谱法检测中色谱柱为5.8％苯基
‑
0.2％乙烯基
‑
94％甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管色谱柱，所述色谱柱为mega
‑
ps264 30m
×
0.32mm，5um。
[0054]
在气相色谱法检测过程中，色谱柱的选择对检测结果影响很大，当含有混合物样品的流动相经过固定相时，与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，固体吸附剂对样品中各组分的吸附能力不同，按照先后次序从固定相中流出，对哌啶残留可进行定性、定量分析。
[0055]
作为本发明的一种实施方式，所述气相色谱法检测中检测器温度为250℃。
[0056]
当然，检测时需要对载气系统、进样系统、温控系统、检测系统进行设定。温度是色谱分离条件的重要选择参数，气化室、分离室和检测器三个部分在色谱仪操作时均需严格控制温度，分离室的温度需要按照一定的程序控制变化，使各组分在最佳温度下分离，通过
使用程序升温，分离效果好，并且分析时间短。
[0057]
作为本发明的一种实施方式，所述气相色谱法检测中进样口温度为200℃。同样的，进样口温度也需要准确设定，以保障检测的准确与效率。
[0058]
作为本发明的一种实施方式，所述气相色谱法检测中载气为氮气，分流比为20:1，流速为2ml/min。
[0059]
载气系统中，载气需要为化学惰性，不与有关物质反应，常见的载气为氢气、氮气和氦气，根据检测哌啶残留的色谱柱系统及检测器等条件，本发明选择安全性高、相对分子质量较大、扩散系数小、柱效相对较高、价格便宜的氮气，使本发明应用更为安全、高效。载气系统中包括有压力计、流量计和气体净化装置，从而获得纯净、流量稳定的载气。
[0060]
作为本发明的一种实施方式，所述样品采用溶剂溶解，所述样品为2g，所述溶剂为二甲基亚砜，所述二甲基亚砜为5ml。
[0061]
在溶剂选择方面，分别采用不同的常用溶剂溶解样品，溶剂采用乙腈、甲醇、dmso、dmf、dma、乙醇、丙酮、三氯甲烷中的任意一种，采用溶剂为二甲基亚砜时，二甲基亚砜为用量为5ml，哌啶在二甲基亚砜中的溶解性较好，且二甲基亚砜沸点较高，在本发明色谱条件下不干扰待测组分的测定，试验证明回收率良好，故采用二甲基亚砜为溶剂。
[0062]
作为本发明的一种实施方式，所述检测采用顶空进样的方式。
[0063]
气相色谱仪进样装置包括进样器和气化室，进样器为旋转式，试样首先充满定环，切入后，载气携带定量环中的试样气体进入色谱柱，顶空进样时，采用顶空进样器或微量注射器将样品注入气化室，进行检测。
[0064]
作为本发明的一种实施方式，所述顶空瓶平衡温度为80℃。
[0065]
作为本发明的一种实施方式，所述顶空瓶平衡时间为30min。
[0066]
气相色谱顶空技术用于分析挥发性有机物固体、液体样品气化后的实验，本发明用来检测原料药中的哌啶残留。哌啶的沸点为106℃，沸点比较高，采用顶部气相色谱法，加热后使物质气化在顶部，在这一过程中，由于样品液体处于底部位置，所以最终可以在不触碰样品瓶内液体的情况下测量到顶部气体中的物质。顶空气相色谱根据进样方式不同，可分动态顶空和静态顶空，本发明采用静态顶空气相色谱法，静态顶空就是将样品密封于顶空瓶中，在一定温度下放置一段时间使气液两相达到平衡，取气相部分带入gc分析。在气相色谱分析中也可采用动态顶空，在样品中连续通入惰性气体，例如，可以通入氦气，挥发性成分即随该萃取气体从样品中逸出，再通过吸附装置将样品浓缩，然后将样品解析进入gc进行分析。
[0067]
以下对本发明的优选实施例进行详细说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0068]
以下各实施例是本技术发明人按照本发明的制备方法和使用方法进行具体实验。
[0069]
以下实施例中，所涉及的主要原料、主要试剂均市售，下面结合实施例，进一步阐述本发明:
[0070]
实施例1
[0071]
仪器与条件：
[0072]
1.仪器试剂
[0073]
主要仪器：安捷伦7890a气相色谱仪、安捷伦7890b气相色谱仪、梅特勒电子分析天
平xse105、氢火焰离子化检测器。
[0074]
主要试液：哌啶：分析纯级，吉友联有机合成化学有限公司；二甲基亚砜：分析纯级，天津市科密欧化学试剂有限公司。
[0075]
2.色谱条件
[0076]
模式：gc；检测器：氢火焰离子化检测器；色谱柱：5.8％苯基，0.2％乙烯基，94％甲基聚硅氧烷(或极性相近)为固定相的毛细管柱为色谱柱(mega
‑
ps264 30m
×
0.32mm，5μm)；序列号：c
‑
ps264
‑
032
‑
500
‑
30；柱温：60℃(5min)，20℃/min，230℃(10min)；进样口：200℃；检测器：250℃；载气：氮气；分流比：20:1；流速：2.0ml/min；顶空瓶平衡温度：80℃，平衡时间：30分钟。
[0077]
3.试验结果
[0078]
试验过程中，空白溶液、对照品溶液和供试品溶液采用顶空进样的方式，注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。计算公式如下：
[0079][0080]
式中：au：供试品溶液中哌啶峰面积；cs：对照品溶液中哌啶浓度；as：对照品溶液中哌啶的峰面积；w1：供试品称样量；5：供试品的稀释倍数。
[0081]
试验结果如图1至图25所示，试验结果显示，空白无干扰，样品检测结果符合标准。
[0082]
试验例1系统适用性
[0083]
溶液的配制
[0084]
空白溶液：加5.0ml二甲基亚砜于顶空瓶中，密封。
[0085]
供试品溶液：精密称取供试品2.0g，置顶空瓶中，精密加二甲基亚砜5ml溶解，密封，作为供试品溶液。
[0086]
对照品溶液：精密称取哌啶0.24g，置已加入适量二甲基亚砜的100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释定容至刻度，摇匀；精密量取5.0ml，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。
[0087]
取对照品溶液直接进样，哌啶峰5次进样峰面积的rsd≤10.0％，检测图谱如图1，结果如表1所示：
[0088]
表1
[0089]
进样次数12345平均峰面积rsd(％)哌啶峰面积25.5528.6329.0430.1124.9027.6468.3
[0090]
结果显示所得待测物峰面积的rsd为8.3％，不大于10％，符合系统适用性的要求。
[0091]
试验例2定量限
[0092]
精密称取哌啶0.2409g置已加入适量二甲基亚砜的100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液1，精密量取1ml至100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液2；精密量取40ml至100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为定量限溶液。在该溶剂峰的前面和后面各选一段比较平直的基线检测基线噪音，查看其信噪比。检测获得特征图谱如图2所示，结果如表2所示：
[0093]
表2
[0094][0095]
试验例3检测限
[0096]
精密量取20ml试验例2中对照储备液2至100ml容量瓶中用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为检测限溶液。在该溶剂峰的前面和后面各选一段比较平直的基线检测基线噪音，查看其信噪比。
[0097]
检测获得特征图谱如图3所示，结果如表3所示：
[0098]
表3
[0099][0100][0101]
结果表明，采用本方法的检测限可达到12.045ppm，检测灵敏度高，结果准确可靠。
[0102]
试验例4分析重复性
[0103]
分析重复性(1)：
[0104]
精密称取供试品2.0g，称取6份，置顶空瓶中，精密加二甲基亚砜5.0ml溶解，密封，作为供试品溶液，依次进样，计算相对标准偏差。
[0105]
分析重复性(2)：
[0106]
添加100％限度溶液：精密称取供试品2.0g，称取6份，置顶空瓶中，精密加100％线性溶液5.0ml溶解，密封，作为供试品溶液，依次进样，计算相对标准偏差。
[0107]
检测获得特征图谱如图4和图5所示，测试结果如下：
[0108]
表4分析重复性(1)
[0109][0110]
表5分析重复性(2)
[0111][0112]
结果显示，本方法检测哌啶残留系统精密度良好。
[0113]
试验例5线性测试
[0114]
测试方法：
[0115]
哌啶线性储备液(6000ppm)：精密称取哌啶0.24g，置已加入适量二甲基亚砜的100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀。
[0116]
90ppm(限度的150％)线性溶液：将哌啶的线性储备液取1.5ml到100ml容量瓶中，用二甲基亚砜定容至刻度。
[0117]
72ppm(限度的120％)线性溶液：将哌啶的线性储备液取1.2ml到100ml容量瓶中，用二甲基亚砜定容至刻度。
[0118]
60ppm(限度的100％)线性溶液：将哌啶的线性储备液取1.0ml到100ml容量瓶中，用二甲基亚砜定容至刻度。
[0119]
48ppm(限度的80％)线性溶液：将哌啶的线性储备液取0.8ml到100ml容量瓶中，用二甲基亚砜定容至刻度。
[0120]
30ppm(限度的50％)线性溶液：将哌啶的线性储备液取0.5ml到100ml容量瓶中，用二甲基亚砜定容至刻度。
[0121]
定量限溶液：精密称取哌啶0.2409g置已加入适量二甲基亚砜的100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液1，精密量取1ml至100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液2；精密量取40ml至100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为定量限溶液。
[0122]
结合图6和图7，测试结果如表6所示：
[0123]
表6
[0124]
[0125]
结果显示线性相关系数r≥0.990，表明该方法检测结果的线性良好。
[0126]
试验例6专属性考察：
[0127]
1.空白溶液：加5.0ml二甲基亚砜于顶空瓶中，密封，顶空进样。
[0128]
2.哌啶对照溶液：精密称取哌啶0.24g，置已加入适量二甲基亚砜的100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，精密量取5.0ml，置50ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释定容至刻度，摇匀；精密量取5.0ml，置顶空瓶中，密封，作为哌啶对照溶液。
[0129]
3.对照溶液：精密称取哌啶0.24g，置已加入适量二甲基亚砜的100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为对照贮备液；精密量取1.0ml，置100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释定容至刻度，摇匀；精密量取5.0ml，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。
[0130]
4.样品溶液：精密称取样品2.0g，这里使用的样品为硝基地平，置顶空瓶中，精密加二甲基亚砜5.0ml溶解，密封，作为供试品溶液。
[0131]
5.混合溶液：精密称取样品2.0g，置顶空瓶中，精密加入对照品溶液5.0ml，密封。
[0132]
6.接受标准：空白对照应无干扰。各峰应完全分离，分离度应大于1.5。
[0133]
表7
[0134][0135]
结合图8
‑
图12，结果如表7所示，检测过程对照品无干扰。
[0136]
试验例7准确度考察
[0137]
准确度80％溶液：精密称取本品2.0g，置顶空瓶中，加入80％线性溶液5ml，密封，摇匀。制备3份。
[0138]
准确度100％溶液：精密称取本品2.0g，置顶空瓶中，加入100％线性溶液5ml，密封，摇匀。制备3份。
[0139]
准确度120％溶液：精密称取本品2.0g，置顶空瓶中，加入120％线性溶液5ml，密封，摇匀。制备3份。
[0140]
表8
[0141][0142]
检测如图13
‑
图21所示，表8中回收率实验结果显示，本发明方法检测结果准确度良好。
[0143]
试验例8耐用性考察
[0144]
1.平衡时间(
±
10％)
[0145]
顶空平衡时间分别为27min、30min、33min，分别对空白、对照及样品进行测定。结果如表9所示。
[0146]
表9
[0147][0148]
2.平衡温度(
±
5％)
[0149]
按平衡温度分别为76℃、80℃和84℃，分别对空白、对照及样品进行测定。结果如表10所示。
[0150]
表10
[0151][0152]
结合图22
‑
图25，结果表明，顶空平衡温度
±
5％，平衡时间
±
10％对检测结果均无
影响。
[0153]
综上所述，本发明实施例表明：
[0154]
(1)本发明通过气相色谱法检测原料药中的哌啶，采用顶空进样方式，检出限较低，灵敏度高，哌啶的检测限达到12.045ppm。
[0155]
(2)本发明对照和样品溶液配制过程简单，不需要进行衍生化，使用的气相色谱仪检测器是较常用的氢火焰离子化检测器，能够满足大众化需求，色谱峰分离度达到11.9，无干扰；色谱条件要求较宽，顶空平衡温度
±
5％，平衡时间
±
10％对检测结果均无影响。
[0156]
(3)本发明方法适用范围广泛，不仅可用于原料药中哌啶的检测，通过采用较为大众化的氢火焰离子化检测器，该方法检测可靠准确。
[0157]
本发明技术原理：本发明提供一种测定原料药中哌啶残留的检测方法，本发明采用气相色谱法测定原料药中的哌啶残留，分别将空白溶液、对照品溶液和供试品溶液加热平衡后，采用顶空进样注入到气相色谱仪中，使用氢火焰离子化检测器检测，通过采用外标法结合气相色谱图计算得到样品中哌啶的含量。本发明检测哌啶残留快速准确、灵敏度高，稳定性好，检测限达到12.045ppm，常用的液相色谱法操作复杂，峰型较差，达不到药物分析要求，本发明对照品溶液和供试品溶液配制过程简单，不需要进行衍生化；采用常用的氢火焰离子化检测器，灵敏度高，精密称取供试品2.0g，置顶空瓶中，精密加二甲基亚砜5.0ml溶解，密封，作为供试品溶液，能够满足大众化需求；色谱峰分离度达到11.9，无干扰；色谱条件要求较宽，顶空平衡温度
±
5％、平衡时间
±
10％对检测结果均无影响。
[0158]
本发明技术效果：本发明提供一种测定原料药中哌啶残留的检测方法，本发明采用气相色谱法测定原料药中的哌啶残留，通过采用二甲基亚砜溶解样品，再通过气相色谱法，使用氢火焰离子化检测器测定哌啶的残留，通过采用外标法结合所述气相色谱图计算得到样品中哌啶的含量。本发明检测哌啶残留快速准确、灵敏度高，稳定性好，检测限达到12.045ppm，常用的液相色谱法操作复杂，峰型较差，达不到药物分析要求，本发明对照品溶液和供试品溶液配制过程简单，不需要进行衍生化；采用常用的氢火焰离子化检测器，灵敏度高，精密称取供试品2.0g，置顶空瓶中，精密加二甲基亚砜5.0ml溶解，密封，作为供试品溶液，能够满足大众化需求；色谱峰分离度达到11.9，无干扰；色谱条件要求较宽，顶空平衡温度
±
5％、平衡时间
±
10％对检测结果均无影响。
[0159]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。