一种全自动免疫组化染色机适用的DAB染色液试剂盒的制作方法

一种全自动免疫组化染色机适用的dab染色液试剂盒
技术领域
1.本实用新型属于生物医疗领域，具体的涉及到一种适用于全自动免疫组化染色机的dab染色液试剂盒。


背景技术：

2.免疫组织化学于上世纪40年代出现，在60年代建立酶标抗体技术(铁蛋白标记ab技术)，70年代建立了辣根过氧化物酶标记抗体技术(pap)，80年代建立了抗生物素
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生物素(abc)法之后使得免疫组织化学技术快速发展，广泛应用于生物学的多个领域，成为当今生物医学中形态、功能代谢综合研究的一项有力工具。
3.免疫组织化学是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原，对其进行定位、定性及相对定量的检测技术。免疫组织化学整个实验流程包括烤片、脱蜡、水化、抗原修复、过氧化物酶阻断、封闭、一抗孵育、二抗孵育、dab显色以及苏木素复染，完成整个免疫组化实验需要多种试剂配合使用。
4.常规的免疫组化都是通过手工操作来完成，重复性和稳定性较差，且手工操作一次完成的样本数受限。全自动免疫组化染色机的出现极大的提高了免疫组化染色效率和质量。目前市场上有一些全自动免疫组化染色机如罗氏、徕卡和dako均有相应配套的dab染色液系统，但进口试剂成本较高，不利于大规模的检测。而人工配置的dab染色液系统存在染色时间长，灵敏度底等问题，并不能直接适用于全自动免疫组化染色机。因此，需要提供一套适用全自动免疫组化染色机的dab染色液试剂盒。


技术实现要素：

5.本实用新型的目的在于提供一种适用于全自动免疫组化机的dab染色液试剂盒，可用于全自动免疫组化染色机对组织切片或富集细胞样本进行免疫组化染色。
6.为达到前述目的，本实用新型提供一种全自动免疫组化染色机适用的dab染色液试剂盒，包括盒体和装载试剂的容器，所述容器由多个试剂瓶组成，所述多个试剂瓶分别为：
7.过氧化物酶阻断剂试剂瓶，用于装载过氧化物酶阻断剂，优选地，过氧化物酶阻断剂为所述过氧化氢；
8.第一免疫显色剂试剂瓶，用于装载用于与一抗特异性结合的抗鼠、抗兔混合抗体；
9.第二免疫显色剂试剂瓶，用于装载与所述混合抗体特异性结合的多聚体hrp偶联抗体；
10.dab染色液试剂瓶，用于装载dab色原，例如3,3
’‑
二氨基联苯胺；
11.dab底物缓冲液试剂瓶，用于装载dab底物缓冲液；
12.复染试剂瓶，用于装载复染染色剂溶液，例如苏木素染色液；
13.所述多个试剂瓶为形状、大小规格均一致的避光试剂瓶，每个所述试剂瓶的瓶体
上端具有开孔，用于放置加样针，使加样针能够由此伸入探测液位、抽取试剂；
14.所述多个试剂瓶均置于所述盒体内，所述盒体具有试剂盒信息标签，所述试剂盒信息标签上有试剂盒信息码，所述多个试剂瓶具有试剂信息标签，所述试剂信息标签上有试剂信息码，所述试剂盒信息码和所述试剂信息码均能被全自动免疫组化染色机识别。
15.作为一个具体的实例，所述试剂盒还包括可开启/关闭的盒盖，所述盒盖与盒体是相连接的或相互独立的。
16.作为一个具体的实例，所述盒体内设置有内衬，所述内衬设置多个试剂瓶固定位；所述内衬为纸板、海绵块、泡沫块或塑料块。
17.作为一个具体的实例，所述多个试剂瓶均为容量15ml的长立方体瓶体，还包括与所述瓶体相连接或相互独立的瓶盖，对应地，所述试剂瓶固定位配合所述试剂瓶呈矩形凹陷。
18.作为一个优选的实例，所述开孔为孔径的取值范围为5mm～10mm的圆孔，以避免孔径过小导致吸液针定位困难，以及孔径过大而导致试剂瓶的内容物试剂暴露范围过大。
19.作为一个优选的实例，所述试剂瓶为聚丙烯(pp)材质。
20.作为一个具体的实例，所述试剂信息标签位于各试剂瓶的瓶体侧面和顶部，面积规格为20～25mm
×
5～10mm，所述试剂信息码为一维码；通过各所述试剂信息码获得的信息包括：各试剂瓶内容物的组分、生产日期、失效日期、装量。
21.作为一个具体的实例，所述试剂盒信息标签位于所述盒体外表面，面积规格为≥38mm
×
38mm，所述试剂盒信息码为二维码；通过所述试剂盒信息码获得的信息包括：所述试剂盒内各组分，生产日期，失效日期，装量。
22.作为一个具体的实例，所述试剂盒还包括说明书，所述说明书记载有所述试剂盒的组成信息和使用方法。
23.与现有技术相比，本实用新型的有益效果是：
24.1.本实用新型的试剂盒提供全自动免疫组化染色机在对组织切片或富集细胞样本进行免疫组化染色所需的试剂，通过全自动免疫组化染色机上的软件扫描识别所述试剂盒信息码即可获取试剂盒组分信息，与软件设定的程式配对后，将试剂瓶置于仪器的试剂位即可实现免疫组织化学染色的自动化操作，提高效率的同时，避免了接触dab有毒试剂，有利于操作人员的安全。
25.2.本实用新型的试剂盒的第一免疫显色剂试剂瓶内装抗鼠、抗兔的混合抗体，能够结合一抗并被第二免疫显色试剂瓶内的多聚体hrp偶联抗体识别以形成三者的复合物，从而起到增强一抗信号的作用；且所述混合抗体可识别所有的鼠源一抗和兔源一抗，极大的覆盖了实验需求。
26.3.本实用新型的试剂盒按照统一标准生产，较人员手工配置而言具有较高的稳定性，可重复性高，在用于大通量的检测时有利于数据的准确性。
27.4.本实用新型的试剂盒包含了除一抗以外的所有免疫组化染色实验所需试剂，且无需稀释、配置，随拿随用，操作简便。
28.5.本实用新型的试剂盒适用于市场上的大多数品牌如罗氏、徕卡、dako等公司的全自动免疫组化染色机，价格较各品牌相应配套的进口dab染色液试剂而言较低，节约实验成本。
附图说明
29.图1为本实用新型的试剂盒的结构示意图；
30.图2为本实用新型的试剂瓶的结构示意图；
31.附图中符号标记说明：
32.1盒体；
33.2盒盖；
34.3内衬；
35.4试剂瓶固定位；
36.5过氧化物酶阻断剂试剂瓶；
37.6第一免疫显色剂试剂瓶；
38.7第二免疫显色剂试剂瓶；
39.8dab染色液试剂瓶；
40.9dab底物缓冲液试剂瓶；
41.10复染试剂瓶；
42.11试剂盒信息标签；
43.12试剂信息标签；
44.13开孔
45.14瓶盖
具体实施方式
46.下面将对本实用新型的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本实用新型的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。
47.本实用新型的dab染色液试剂盒可适用于全自动免疫组化染色机对组织切片或富集细胞样本进行免疫组化染色的操作。全自动免疫组化染色机属于现有技术，可用于病理分析前样本处理(如：脱蜡、染色、抗原修复和原位杂交(ish)检测预处理、杂交后清洗等)。通过全自动免疫组化染色机上的软件识别dab染色液试剂盒并与设定的程式配对后即可通过将各试剂瓶置于仪器以完成免疫组织化学染色。
48.如图1、图2所示，本实用新型实施例提供一种dab染色液试剂盒，包括盒体1和多个试剂瓶，盒体1侧面有试剂盒信息标签11，试剂盒信息标签11上印有可被全自动免疫组化染色机识别的试剂盒信息码，本实施例中，试剂盒信息标签11的面积规格≥38mm
×
38mm，所述试剂盒信息码为二维码，通过所述试剂盒信息码获得的信息包括：所述试剂盒各试剂组分，生产日期，失效日期，装量。
49.盒体1内具有内衬3，内衬3上设置多个试剂瓶固定位4，用于固定所述多个试剂瓶，所述内衬的材质可为纸板、海绵块、泡沫块或塑料块。在本实施例中，内衬3设置12个试剂瓶固定位4。在本实施例中，所述多个试剂瓶为形状、大小规格均一致的容量为15ml的长方体瓶体，试剂瓶固定位4也对应地呈矩形凹陷，在本实用新型的其他实施例中，所述试剂瓶的容量可根据实际需要进行调整，形状也可根据实际需要设计为圆柱型等形状，同时试剂瓶
固定位4也对应变化以配合。
50.所述多个试剂瓶均为避光试剂瓶，在本实施例中，采用避光的聚丙烯(pp)材质。每个所述试剂瓶的瓶体上端具有开孔13，用于放置加样针；在本实施例中，所述开孔为孔径的取值范围为5mm～10mm的圆孔，以避免孔径过小导致吸液针定位困难，以及孔径过大而导致试剂瓶的内容物试剂暴露范围过大，在本实用新型的其他实施例中，开孔13的也可为大小适宜的方形或其他形状。
51.所述试剂瓶还包括瓶盖14，瓶盖14与瓶体配合开启/关闭，在本实施例中，瓶盖14与瓶体是相连接的；在其他的实施例中，瓶盖14与瓶体也可以是相互独立的。
52.所述多个试剂瓶瓶体具有试剂信息标签12，试剂信息标签12上印有可被全自动免疫组化染色机识别的试剂信息码。其中，所述试剂信息码为一维码，则试剂信息标签12位于试剂瓶的瓶身侧面和顶部，面积规格为20～25mm
×
5～10mm。通过所述试剂信息码获得的信息包括：各试剂瓶内容物的组分、生产日期、失效日期、装量。
53.所述多个试剂瓶包括：
54.过氧化物酶阻断剂试剂瓶5，用于装载过氧化物酶阻断剂，本实施例中为过氧化氢；
55.第一免疫显色剂试剂瓶6，用于装载用于与一抗特异性结合的抗鼠、抗兔混合抗体；
56.第二免疫显色剂试剂瓶7，用于装载能与第一免疫显色剂试剂瓶6的所述混合抗体特异性结合的多聚体hrp偶联抗体；
57.dab染色液试剂瓶8，用于装载dab色原；
58.dab底物缓冲液试剂瓶9，用于装载dab底物缓冲液；
59.复染试剂瓶10，用于装载复染染色剂溶液，本实施例中为苏木素染色液。
60.如图1所示，在本实施例的试剂盒中，过氧化物酶阻断剂试剂瓶5、第一免疫显色剂试剂瓶6、第二免疫显色剂试剂瓶7、dab底物缓冲液试剂瓶9、复染试剂瓶10的数量均为两个，dab染色液试剂瓶8的数量为一个。在本实用新型的其他实施例中，上述试剂瓶的数量比例可根据实际需要进行调整。
61.所述试剂盒还包括盒盖2，盒盖2与盒体1配合可开启/关闭试剂盒，在本实施例中，盒盖2与盒体1是相连接的；在其他的实施例中，盒盖2与盒体1也可以是相互独立的。
62.所述试剂盒还包括说明书，说明书记载有试剂盒的组成信息和如下使用步骤：
63.1.样本准备：将福尔马林固定石蜡包埋切片于60℃恒温箱中烤片1～2小时，室温保存备用。
64.2.试剂注册：用全自动免疫组化染色机配套扫描器扫描本实用新型的试剂盒的试剂盒信息码注册试剂盒信息，以将试剂盒中所有组分的详细信息录入全自动免疫组化染色机，首次注册成功后后续使用即无需重复注册。
65.3.将本试剂盒中的各试剂瓶安装于全自动免疫组化染色机的试剂位，仪器的机械臂上的扫描系统可通过试剂瓶身的试剂信息标签12上的一维码进行信息识别和定位，因此各试剂瓶可在全自动免疫组化染色机的试剂位上随机摆放，无需按照特定顺序摆放也可通过机械臂上的加样针按照正确顺序自所述试剂瓶的开孔13处抽取试剂并添加至样本，或者是进行混合(如dab染色液和dab底物缓冲液在染色过程中需要进行混合)。
66.4.随后启动全自动免疫组化染色机完成以下样本切片处理步骤：
67.1)脱蜡：将样本切片置于全自动免疫组化染色机上，设置脱蜡液孵育72℃6分钟，酒精清洗3次，清洗液清洗3次；
68.2)抗原修复：全自动免疫组化染色机设置100℃高温修复25min，清洗液清洗3次；
69.3)内源性过氧化物酶灭活：设置过氧化物酶阻断剂室温孵育10分钟，清洗液清洗3次；
70.4)一抗及空白对照抗体孵育：一抗抗体(不包含于本试剂盒)设置常温孵育30～60分钟，清洗液清洗5次；
71.5)第一免疫显色剂孵育：设置第一免疫显色剂室(即第一免疫显色剂试剂瓶内的抗鼠、抗兔混合抗体)温孵育10分钟，清洗液清洗4次；
72.6)第二免疫显色剂孵育：设置第二免疫显色剂(即第二免疫显色试剂瓶内的多聚体hrp偶联抗体)室温孵育15～30分钟，清洗液清洗5次，纯化水清洗2次；
73.7)dab显色：全自动免疫组化染色机将dab色原和dab底物缓冲液按1：10～1:15的比例配制dab工作液，设置dab工作液室温孵育3～6分钟，依据颜色变化终止染色，纯化水清洗4次；
74.8)苏木素衬染：设置苏木素室温孵育3～6分钟对细胞核进行检测，清洗液清洗4次；
75.5.样本切片风干，封片：将切片从仪器中取出，风干，用中性树胶对样品进行封片。
76.综上所述，上述各实施例仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限定本实用新型的保护范围，凡在本实用新型的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，皆应包含在本实用新型的保护范围内。