一种甲基化电化学免疫分析方法、电极、电化学传感器与流程

技术特征：
1.一种甲基化电化学免疫分析方法，其特征在于，所述甲基化电化学免疫分析方法包括：制备纳米金修饰金电极；制备电化学传感器；抗5
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mc抗体和酶标二抗的固定；电化学测定。2.如权利要求1所述的甲基化电化学免疫分析方法，其特征在于，所述纳米金修饰金电极的制备具体过程为：将直径为2mm的金电极用0.05μm的al2o3粉打磨成镜面，然后分别在超纯水、无水乙醇、超纯水中超声清洗5min；室温晾干后，将电极放入现配的piranha溶液中活化15min以上，然后用超纯水彻底清洗干净，氮气吹干；将上述处理好的金电极浸入haucl4·
3h2o溶液中，最后用超纯水充分淋洗干净，制得修饰的金电极。3.如权利要求2所述的甲基化电化学免疫分析方法，其特征在于，所述piranha溶液为98％h2so4与30％h2o2按3∶1的体积混合。4.如权利要求2所述的甲基化电化学免疫分析方法，其特征在于，所述haucl4·
3h2o为3mmol/l，含0.1mol/lkno3，于－0.2v电位下沉积120s。5.如权利要求1所述的甲基化电化学免疫分析方法，其特征在于，所述电化学传感器的制备具体过程为：向修饰的金电极表面滴加10μl1
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te缓冲液，于4℃孵育过夜，使末端巯基化的dna探针通过au
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s键固定在电极表面；取出电极，用pbs充分淋洗去除多余吸附的dna，即制得单链dna修饰的金电极；然后滴加1mmol/lmch10μl，室温放置1h，以封闭电极表面的空白位点，pbs淋洗电极后氮气吹干；继续滴加10μl含0.1μmol/l靶dna、50mmol/lnacl和10mmol/lmgcl2的1
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te缓冲液，于37℃水浴箱杂交90min；杂交完成后，电极用pbs重复冲洗3次，得到双链dna修饰的金电极，制得实验所用电化学传感器。6.如权利要求5所述的甲基化电化学免疫分析方法，其特征在于，所述1
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te缓冲液ph7.4，含有0.1μmol/l探针dna、50mmol/lnacl和1.0mmol/ltcep。7.如权利要求1所述的甲基化电化学免疫分析方法，其特征在于，所述抗5
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mc抗体和酶标二抗的固定具体过程为：将制备的电极用5％bsa室温封闭30min以防止后续加入抗体的非特异性吸附；向电极表面滴加10mg/l抗5
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mc抗体10μl，37℃孵育1h后，再次淋洗电极，继续滴加80mg/l酶标二抗10μl，于室温孵育30min；以上两步反应每一步后均用pbs重复淋洗3次后再进行下一步操作。8.如权利要求1所述的甲基化电化学免疫分析方法，其特征在于，所述电化学测定具体过程为：在含1mmol/lh2o2和1mmol/l对苯二酚的pbs溶液中，采用差分脉冲伏安法进行电化学测定；测定参数：电位扫描范围－0.3～0.1v、采样间隔0.0167s、脉冲宽度0.05s、脉冲周期0.2s、静止时间2s。9.一种如权利要求1～8任意一项所述甲基化电化学免疫分析方法在纳米金修饰金电极检测dna甲基化中的应用。
10.一种如权利要求1～8任意一项所述甲基化电化学免疫分析方法在电化学传感器检测dna甲基化中的应用。

技术总结
本发明属于免疫分析技术领域，公开了一种甲基化电化学免疫分析方法、电极、电化学传感器，包括：制备纳米金修饰金电极，制备电化学传感器；抗5


技术研发人员：郑峻松 粟莎莎 朱全敬 李艳 黄辉 汪莉娜 朱垂雨 方立超 邓均 刘华敏 李承红 刘飞雪 吴春梅
受保护的技术使用者：中国人民解放军陆军军医大学
技术研发日：2021.08.13
技术公布日：2021/10/23