专利名称：沉淀法从动物血制取蛋白的方法
技术领域：
本发明涉及一种用动物血制取蛋白的方法。
白蛋白和丙种球蛋白是一类价格昂贵，功效独特的血液制品，目前仅有用人血生产的注射用的白蛋白和丙种球蛋白。
研究发现猪、牛、羊等动物血液与人类血液中白蛋白和丙种球蛋白的生理功能基本相同。由于动物血资源丰富，而且动物血中无人类的一些传染病毒，所以开发利用动物血液有重大意义。
现有生产人血白蛋白和丙种球蛋白的方法主要有低温乙醇法，利凡诺法等，这些生产方法工艺复杂，收得率低，成本高，不适用于从动物血生产蛋白。
本发明的目的是提供一种工艺简单，收得率高，成本低的动物血制取蛋白的方法。
本发明的方法可由以下措施来实现用动物血清(浆)，加入95%乙醇，搅拌，过滤，取滤液，在室温下加入沉淀剂和稳定剂，使上层白蛋白悬浮液和下层丙种球蛋白沉淀物分离，取上层悬浮液浓缩，离心，得白蛋白，分别用水洗至pH＝6～7，除去沉淀剂后，均转入pH＝7.2的Tris.Hcl缓冲溶液中，平衡透析6～8小时，滤干后，即收得白蛋白和丙种球蛋白。
本发明所述的沉淀剂为磺基水杨酸、三氯醋酸或高氯酸。用量为动物血清(浆)重量的0.7～2.5%。
本发明所述的稳定剂为白蛋白稳定剂辛酸钠和丙种球蛋白稳定剂甘氨酸，用量各为动物血清(浆)重量的0.1～0.2%。
本发明所述方法的白蛋白收得率为3.0～3.6%，丙种球蛋白收得率为2.95～3.3%，两种蛋白的白蛋白和丙种球蛋白的总含量均超过80%。
检验证明用这些动物血提取的白蛋白和丙种球蛋白在纸上电泳中的分子运动和分布与人的白蛋白和丙种球蛋白是一样的，其中动物血的丙种球蛋白，比人的丙种球蛋白有更多的优点。动物血制取的丙种球蛋白的分子量约为150000～170000之间，与人血丙种球蛋白的分子量160000相近。动物血生物半衰期为25天，与人血21天相近。
用两种不同来源的丙种球蛋白对口腔炎病毒(VSV)的抗病毒活性效价测定结果证明人血丙种球蛋白对口腔炎病毒相对抗病毒活性为100，牛血丙种球蛋白的抗病毒活性为2535，两者相差25倍。
选用40例乙型肝炎表面抗原阳性的门诊病人，随机分成两个组，各20例，临床观察猪血丙种球蛋白的抗病毒效果。猪血丙种球蛋白组每次口服丙种球蛋白5g，每天一次，连续2个月为一疗程;对照组用多抗甲素10mg，海尔乐100mg，每天三次，连续2个月，于疗程结束一周后复查肝功能和乙型肝炎表面抗原，结果表明口服猪血丙种球蛋白组20例病人中，其中8例乙型肝炎表面抗原阴性，有效率40%，对照组仅3例阴性，有效率15%。
本发明方法制得的蛋白可用于生产口服液、片剂、胶囊，服用后经胃酶作用可使蛋白解聚并释放出Fab片段，由大分子转变成小分子，易被肠胃吸收，达到抗菌、消炎，提高机体免疫力的医疗和保健作用。
实施例一取猪血清1000g，加入95%乙醇100ml，搅拌10分钟，用绸布过滤，取滤液，在室温下加入沉淀剂高氯酸7g，稳定剂辛酸钠1.0g和甘氨酸1.5g，搅拌均匀后，静置，上层为含有白蛋白的悬浮液，下层为丙种球蛋白沉淀物，用虹吸的方法将上、下层分离开来。浓缩上层悬浮液，过滤得到白蛋白。用蒸馏水分别洗涤白蛋白和丙种球蛋白，除去高氯酸，洗至蒸馏水的pH为6～7，然后分别用帆布包裹，置于0.1N，pH为7.2的Tris.Hcl缓冲透析6～8个小时，缓冲溶液的用量约为蛋白重量的50倍，取出滤干。得到白蛋白32.0g，丙种球蛋白30.9g。两种蛋白的白蛋白和丙种球蛋白的总含量均超过80%。
实施例二同实施例一。沉淀剂为10%的磺基水杨酸水溶液160g，辛酸钠1.5g，甘氨酸2.0g。得白蛋白36.0g，丙种球蛋白30.5g。
实施例三同实施例一。取猪血浆1000g，沉淀剂为10%的三氯醋酸水溶液240g，辛酸钠2.0g，甘氨酸1.0g。得白蛋白35.6g，丙种球蛋白31.6g。
实施例四同实施例一。取牛血清1000g，沉淀剂为10%的三氯醋酸水溶液80g，辛酸钠1.0g，甘氨酸2.0g。得白蛋白36.0g，丙种球蛋白30.6g。
实施例五同实施例一。取牛血清1000g，沉淀剂为高氯酸14g，辛酸钠1.5g，甘氨酸1.0g。得白蛋白36.0g，丙种球蛋白30.5g。
实施例六同实施例一。取牛血浆1000g，沉淀剂为10%的磺基水杨酸水溶液250g，辛酸钠2.0g，甘氨酸1.5g。得白蛋白31.0g，丙种球蛋白29.6g。
实施例七同实施例一。取羊血清1000g，沉淀剂为10%的磺基水杨酸水溶液90g，辛酸钠1.0g，甘氨酸1.0g。得白蛋白32.0g，丙种球蛋白29.9g。
实施例八同实施例一。取羊血清1000g，沉淀剂为10%的三氯醋酸水溶液160g，辛酸钠1.5g，甘氨酸1.5g。得白蛋白35.0g，丙种球蛋白31.0g。
实施例九同实施例一。取羊血浆1000g，沉淀剂为高氯酸22g，辛酸钠2.0g甘氨酸2.0g。得白蛋白32.4g，丙种球蛋白31.0g。
权利要求
1.一种从动物血中制取蛋白的方法，其特征是用动物血清(浆)，加入95%乙醇，搅拌，过滤，取滤液，在室温下加入沉淀剂和稳定剂，使上层白蛋白悬浮液和下层丙种球蛋白沉淀物分离，取上层悬浮液浓缩，离心，得白蛋白，分别用水洗至pH=6～7，除去沉淀剂后，均转入pH=7.2的Tris.Hcl缓冲溶液，平衡透析6～8小时，滤干后，即收得白蛋白和丙种球蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的动物血清(浆)可以是猪、牛或羊血清(浆)。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的沉淀剂为磺基水杨酸、三氯醋酸或高氯酸。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的稳定剂为白蛋白稳定剂辛酸钠和丙种球蛋白稳定剂甘氨酸。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的沉淀剂的用量为动物血清(浆)重量的0.7～2.5%。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的稳定剂的用量各为动物血清(浆)重量的0.1～0.2%。
全文摘要
一种沉淀法从动物血制取蛋白的方法。用动物血清(浆)，加入95％乙醇，搅拌，过滤，取滤液，加入沉淀剂和稳定剂，分离白蛋白和丙种球蛋白，除去沉淀剂后，平衡透析，得到白蛋白和丙种球蛋白。本方法的白蛋白和丙种球蛋白收得率分别为3.0～3.6％和2.95～3.3％，两种蛋白的白蛋白和丙种球蛋白总含量均超过80％。用本发明方法制得的蛋白可用于生产口服液、片剂、胶囊。
文档编号C07K1/14GK1110279SQ9410410
公开日1995年10月18日 申请日期1994年4月11日 优先权日1994年4月11日
发明者余国华 申请人:余国华
技术领域：
本发明涉及一种用动物血制取蛋白的方法。
白蛋白和丙种球蛋白是一类价格昂贵，功效独特的血液制品，目前仅有用人血生产的注射用的白蛋白和丙种球蛋白。
研究发现猪、牛、羊等动物血液与人类血液中白蛋白和丙种球蛋白的生理功能基本相同。由于动物血资源丰富，而且动物血中无人类的一些传染病毒，所以开发利用动物血液有重大意义。
现有生产人血白蛋白和丙种球蛋白的方法主要有低温乙醇法，利凡诺法等，这些生产方法工艺复杂，收得率低，成本高，不适用于从动物血生产蛋白。
本发明的目的是提供一种工艺简单，收得率高，成本低的动物血制取蛋白的方法。
本发明的方法可由以下措施来实现用动物血清(浆)，加入95%乙醇，搅拌，过滤，取滤液，在室温下加入沉淀剂和稳定剂，使上层白蛋白悬浮液和下层丙种球蛋白沉淀物分离，取上层悬浮液浓缩，离心，得白蛋白，分别用水洗至pH＝6～7，除去沉淀剂后，均转入pH＝7.2的Tris.Hcl缓冲溶液中，平衡透析6～8小时，滤干后，即收得白蛋白和丙种球蛋白。
本发明所述的沉淀剂为磺基水杨酸、三氯醋酸或高氯酸。用量为动物血清(浆)重量的0.7～2.5%。
本发明所述的稳定剂为白蛋白稳定剂辛酸钠和丙种球蛋白稳定剂甘氨酸，用量各为动物血清(浆)重量的0.1～0.2%。
本发明所述方法的白蛋白收得率为3.0～3.6%，丙种球蛋白收得率为2.95～3.3%，两种蛋白的白蛋白和丙种球蛋白的总含量均超过80%。
检验证明用这些动物血提取的白蛋白和丙种球蛋白在纸上电泳中的分子运动和分布与人的白蛋白和丙种球蛋白是一样的，其中动物血的丙种球蛋白，比人的丙种球蛋白有更多的优点。动物血制取的丙种球蛋白的分子量约为150000～170000之间，与人血丙种球蛋白的分子量160000相近。动物血生物半衰期为25天，与人血21天相近。
用两种不同来源的丙种球蛋白对口腔炎病毒(VSV)的抗病毒活性效价测定结果证明人血丙种球蛋白对口腔炎病毒相对抗病毒活性为100，牛血丙种球蛋白的抗病毒活性为2535，两者相差25倍。
选用40例乙型肝炎表面抗原阳性的门诊病人，随机分成两个组，各20例，临床观察猪血丙种球蛋白的抗病毒效果。猪血丙种球蛋白组每次口服丙种球蛋白5g，每天一次，连续2个月为一疗程;对照组用多抗甲素10mg，海尔乐100mg，每天三次，连续2个月，于疗程结束一周后复查肝功能和乙型肝炎表面抗原，结果表明口服猪血丙种球蛋白组20例病人中，其中8例乙型肝炎表面抗原阴性，有效率40%，对照组仅3例阴性，有效率15%。
本发明方法制得的蛋白可用于生产口服液、片剂、胶囊，服用后经胃酶作用可使蛋白解聚并释放出Fab片段，由大分子转变成小分子，易被肠胃吸收，达到抗菌、消炎，提高机体免疫力的医疗和保健作用。
实施例一取猪血清1000g，加入95%乙醇100ml，搅拌10分钟，用绸布过滤，取滤液，在室温下加入沉淀剂高氯酸7g，稳定剂辛酸钠1.0g和甘氨酸1.5g，搅拌均匀后，静置，上层为含有白蛋白的悬浮液，下层为丙种球蛋白沉淀物，用虹吸的方法将上、下层分离开来。浓缩上层悬浮液，过滤得到白蛋白。用蒸馏水分别洗涤白蛋白和丙种球蛋白，除去高氯酸，洗至蒸馏水的pH为6～7，然后分别用帆布包裹，置于0.1N，pH为7.2的Tris.Hcl缓冲透析6～8个小时，缓冲溶液的用量约为蛋白重量的50倍，取出滤干。得到白蛋白32.0g，丙种球蛋白30.9g。两种蛋白的白蛋白和丙种球蛋白的总含量均超过80%。
实施例二同实施例一。沉淀剂为10%的磺基水杨酸水溶液160g，辛酸钠1.5g，甘氨酸2.0g。得白蛋白36.0g，丙种球蛋白30.5g。
实施例三同实施例一。取猪血浆1000g，沉淀剂为10%的三氯醋酸水溶液240g，辛酸钠2.0g，甘氨酸1.0g。得白蛋白35.6g，丙种球蛋白31.6g。
实施例四同实施例一。取牛血清1000g，沉淀剂为10%的三氯醋酸水溶液80g，辛酸钠1.0g，甘氨酸2.0g。得白蛋白36.0g，丙种球蛋白30.6g。
实施例五同实施例一。取牛血清1000g，沉淀剂为高氯酸14g，辛酸钠1.5g，甘氨酸1.0g。得白蛋白36.0g，丙种球蛋白30.5g。
实施例六同实施例一。取牛血浆1000g，沉淀剂为10%的磺基水杨酸水溶液250g，辛酸钠2.0g，甘氨酸1.5g。得白蛋白31.0g，丙种球蛋白29.6g。
实施例七同实施例一。取羊血清1000g，沉淀剂为10%的磺基水杨酸水溶液90g，辛酸钠1.0g，甘氨酸1.0g。得白蛋白32.0g，丙种球蛋白29.9g。
实施例八同实施例一。取羊血清1000g，沉淀剂为10%的三氯醋酸水溶液160g，辛酸钠1.5g，甘氨酸1.5g。得白蛋白35.0g，丙种球蛋白31.0g。
实施例九同实施例一。取羊血浆1000g，沉淀剂为高氯酸22g，辛酸钠2.0g甘氨酸2.0g。得白蛋白32.4g，丙种球蛋白31.0g。
权利要求
1.一种从动物血中制取蛋白的方法，其特征是用动物血清(浆)，加入95%乙醇，搅拌，过滤，取滤液，在室温下加入沉淀剂和稳定剂，使上层白蛋白悬浮液和下层丙种球蛋白沉淀物分离，取上层悬浮液浓缩，离心，得白蛋白，分别用水洗至pH=6～7，除去沉淀剂后，均转入pH=7.2的Tris.Hcl缓冲溶液，平衡透析6～8小时，滤干后，即收得白蛋白和丙种球蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的动物血清(浆)可以是猪、牛或羊血清(浆)。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的沉淀剂为磺基水杨酸、三氯醋酸或高氯酸。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的稳定剂为白蛋白稳定剂辛酸钠和丙种球蛋白稳定剂甘氨酸。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的沉淀剂的用量为动物血清(浆)重量的0.7～2.5%。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的稳定剂的用量各为动物血清(浆)重量的0.1～0.2%。
全文摘要
一种沉淀法从动物血制取蛋白的方法。用动物血清(浆)，加入95％乙醇，搅拌，过滤，取滤液，加入沉淀剂和稳定剂，分离白蛋白和丙种球蛋白，除去沉淀剂后，平衡透析，得到白蛋白和丙种球蛋白。本方法的白蛋白和丙种球蛋白收得率分别为3.0～3.6％和2.95～3.3％，两种蛋白的白蛋白和丙种球蛋白总含量均超过80％。用本发明方法制得的蛋白可用于生产口服液、片剂、胶囊。
文档编号C07K1/14GK1110279SQ9410410
公开日1995年10月18日 申请日期1994年4月11日 优先权日1994年4月11日
发明者余国华 申请人:余国华
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