专利名称：不对称的单-3-硝基双萘二甲酰亚胺抗癌剂的制作方法
本申请是1992年7月27日提出的美国专利申请S NO 7/919227的部分继续申请。
本发明涉及下式不对称的单-3-硝基双萘二甲酰亚胺 包括(R，R)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;涉及它们的制备方法;涉及包含它们的药用组合物以及用它们治疗哺乳动物的癌症、具体讲是固形癌肿的方法。
Harnisch等人在美国专利4841052(1989年6月20日发布)中描述了可用作电照相调色剂中的调节电荷的物质的萘二甲酰亚胺。
Brana等人在美国专利4874863(1989年10月17日发布)中公开了下式抗癌化合物及其与生理上可耐受的酸形成的盐
式中X1、X2、X3和X4相同或不同，各自为H、NO2、NH2、C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、OH、C1-C6烷氧基、卤素、三卤代甲基、C1-C6烷基、甲酰基、C1-C6烷基羰基、脲基(ureyl)、C1-C6烷基脲基，以及R是直链或支链的C4-C10亚烷基，所述亚烷基链有一处或两处被仲氨基基团或叔氨基基团所打断，2个氮原子可以通过亚烷基基团彼此相连。
Brana等人在美国专利4874863中没有具体公开本发明化合物。
与在美国专利4874863中具体公开的某些化合物相比，本发明化合物出人意料地增加了水溶性。这是个重要的改进，因为熔解性差的化合物在试图将这样的化合物配制成适宜于人服用的剂型时会产生严重的问题。
此外本发明化合物出人意料地显示出比Brana等人具体公开的化合物强的抗肿瘤活性。
本发明提供式(ⅰ)双萘二甲酰亚胺，或者其对映体或非对映体，或者其对映体或非对映体的混合物，或者其药学上可接受的盐，式(ⅰ)双萘二甲酰亚胺结构如下
式中R11、R12、R3、R4、R5和R6各自为H或CH3。
优选的本发明化合物包括式中R11和R6是CH3，以及R12、R3、R4和R5是H的那些式(ⅰ)化合物。
特别优选的本发明化合物为以下化合物以及其药学上可接的盐(R，R)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;
(S，S)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;
(外消旋体 内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;和(内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮。
本发明也提供式(ⅰ)化合物的制备方法、含式(ⅰ)化合物的药用组合物以及用这些化合物治疗哺乳动物的癌症的方法，具体来讲是治疗哺乳动物的固形癌肿的方法。
本发明包括式(ⅰ)化合物、或者其对映体或非对映体、或者其对映体或非对映体的混合物以及其药学上可接受的盐的制备方法;式(ⅰ)化合物的结构如下 式中R11、R12、R3、R4、R5和R6各为H或CH3;所述制备方法包括以下步骤(1)将下式多胺与式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐反应，得下式萘二甲酰亚胺
所述多胺的结构如下 式中R10是取代的芳基磺酰基保护基团;
所述式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐的结构如下 (2)从步骤(1)的萘二甲酰亚胺中除去保护基团R10，得去保护的萘二甲酰亚胺;
(3)将步骤(2)的去保护的萘二甲酰亚胺与式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐反应，得式(ⅰ)化合物。
R10是取代的芳基磺酰基保护基团例如芳基磺酰基基团，其中芳基基团被0-5个分别选自以下的基团所取代苯基、苄基、苯乙基、苯氧基、苄氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、C1-C5烷基、C3-C6环烷基、C3-C6环烷基甲基、C7-C10芳基烷基、C1-C4烷氧基、甲酰基、C3-C6环烷氧基、C2-C6烷氧基烷基、C1-C4羟基烷基、亚甲二氧基、亚乙二氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4烷氧基羰基、C1-C4烷基羰基氧基、C1-C4烷基羰基和C1-C4烷基羰基氨基。
优选的R10是均三甲苯磺酰基基团。
有关取代的芳基磺酰基保护基团的更多的例子在下述文献中给予了描述例如Greene和Wutz，“Protective Groups in Organic Synthesis”John Wiley & Sons，纽约(1991)和“The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology”，第3卷，Academic Press，纽约(1981)，兹将该内容引入本文作参考。
本文所说的“芳基”是指苯基或萘基。本文中所说的“烷基”是指包括具有给定的碳原子数的支链和直链的脂族烃基团;“烷氧基”代表通过氧桥相连的标明碳原子数目的烷基基团。
本文所说的“取代的”一词是指在指定的原子上的一个或一个以上氢被选自给定的基团中的基团取代，但条件是该指定的原子的化合价没超出常价而且取代后生成稳定的化合物。
本文所说的“稳定的化合物”或“稳定的结构”是指足够结实、能经受得住从反应混合物中分离成可用的纯度并能配制成有效的治疗剂的化合物。
尽管本发明化合物被包含在美国专利4874863的广泛的范围之内，但在该专利中没有对本发明化合物具体作出权利要求或具体给出实施例。Brana等人没有描述任何不对称的双萘二甲酰亚胺的合成。然而本发明化合物显示出比Brana等人在美国专利4874863中具体公开的化合物的显著增强的抗肿瘤活性。尽管本发明化合物在体内显示出非常有效的抗固形肿瘤的活性，但由Brana等人具体公开的结构上类似的化合物却没有显示出活性。
此外，本发明双萘二甲酰亚胺与由Brana等人具体公开的某些化合物相比水溶性增加。
本发明化合物可用下述方法以及在合成有机化学领域中公知的合成方法来合成。下文中引述的文献均引入本文作参考。
本发明化合物可按下述方法合成将大约等摩尔量的相应的式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐和式(ⅳ)多胺在适当的溶剂、即基本上不与原料和产物(即任何的式(ⅰ)、(ⅱ)、(ⅲ)或(ⅳ)化合物)反应的溶剂中，于室温至该溶剂的沸点这一温度范围内进行反应(合成路线A)。适当的溶剂包括例如乙醇、DMSO、二甲基甲酰胺或四氢呋喃，但并不只限于这几种。
得到的式(ⅰ)的游离碱可在例如乙醇或二氯甲烷中用适当的无机酸或有机酸酸化，生成药学上可接受的盐。一般来讲，本发明化合物的药学上可接受的盐可按下述方法制备将这些化合物的游离碱形式在有机溶剂或水或这两者的混合物中与化学计算量的适当的酸反应。一般优先选用非水性介质象乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。Remington's Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1985，第1418页中列出了适宜的盐，将该内容引入本文作参考。式(ⅰ)的游离碱在按以上所述制备其盐之前可能需要通过以下技术纯化例如柱层析、重结晶或蒸馏以及有机合成领域技术人员熟知的其它技术。
合成路线A 式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐可以买到。式(ⅳ)多胺可按以下所述的方法制备。
例如R11＝R6＝CH3且R12＝R3＝R4＝R5＝H的式Ⅰ化合物的合成(参见合成路线I)可由下述反应来完成在标准条件下，BOC-(D)-丙氨酸与1，1′-羰基二咪唑(CDI)反应，然后与乙二胺反应，得二酰胺Ⅱ。用酸水解BOC(N-叔丁氧基羰基)保护基团，随后在回流的四氢呋喃中用乙硼烷还原，然后用酸处理，得Ⅲ。Ⅲ可以被中和，得纯的游离碱Ⅳ。在四氢呋喃中于回流温度用Ⅳ处理等摩尔量的相应的式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐，经硅胶纯化后，得不对称的游离碱Ib。将得到的游离碱在二氯甲烷中用适当的无机酸或有机酸例如甲磺酸酸化，制成药学上可接受的盐Ia。
多胺连接剂Ⅳ的非对映体或对映体或者其对映体或非对映体的混合物的合成方法在共同转让、共同未决的专利申请US SN 07/805044(1991年12月11日申请)中有详细描述。
合成路线Ⅰ 式Ⅰ化合物也可以用另一种方法通过式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐在局部保护的连接剂上的逐步缩合来合成(参见合成路线Ⅱ)。该方法始于N-均三甲苯磺酰基-D-丙氨酸(V)(德国专利DE 2544859，1976)和N-叔丁氧基羰基-1，2-乙二胺(Krapcho，Syn.Comm.1990，20卷，16期，2559页)的CDI偶联，得酰胺Ⅵ。然后在酸性条件下将酰胺Ⅵ的BOC保护基团除去，并将得到的盐用碳酸钠处理，得游离碱Ⅶ。然后用CDI使该物质与N-BOC-D-丙氨酸偶联，用酸除去BOC基团，继之用碳酸钠处理，得二酰胺Ⅸ。将Ⅸ的酰胺键用BH3·THF还原，得关键的局部保护的连接剂X，然后将其与式(ⅱ)酐(或式(ⅲ)酐)缩合，得-萘二甲酰亚胺Ⅺ(或Ⅻ)。这时用30%HBr/乙酸除去均三甲苯磺酰基基团，得结晶性盐ⅩⅢ(或ⅩⅣ)，用碳酸钠处理，得游离碱，将其与适当的式(ⅲ)酐(或式(ⅱ)酐)缩合，得游离碱Ib。该游离碱可用上述的适当的无机酸或有机酸酸化，制成药学上可接受的盐。
合成路线Ⅱ R11＝R3＝R4＝R6＝H且R12＝R5＝CH3的式ⅩⅥ双萘二甲酰亚胺可按合成路线(Ⅲ)所示制备。等摩尔量的相应的式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐在惰性溶剂如乙醇或二甲基甲酰胺或四氢呋喃中例如在室温至溶剂的沸点这个温度范围内与多胺XV(a-d)反应。得到的游离碱XV可以用适当的无机酸或有机酸酸化，制成药学上可接受的盐。多胺连接剂XV(a-d)的详细的合成步骤在共同转让、共同未决的专利申请US SN 07/805044(1991年12月11日申请)中有描述。
合成路线Ⅲ XVa，(S，S)XVIa，(S，S)XVb，(R，R)XVIb，(R，R)XVc，(外消旋 内消旋)XVIc，(外消旋 内消旋)XVd，(内消旋)XVId，(内消旋)R12 R5＝H、R11＝R6＝CH3以及R3或R4＝CH3的式XXV双萘二甲酰亚胺可按合成路线Ⅳ所示制备。如前，可将N-均三甲苯磺酰基丙氨酸V在标准条件下与氨反应，随后用BH3·THF还原，得胺XVII。用CDI使之与BOC-丙氨酸偶联，随后除去BOC保护基团，得酰胺XVIII。该连接剂通过另外的BOC-丙氨酸偶联/BOC去保护，结果得二酰胺XIX。然后将该物质在标准的甲硼烷条件下还原，得三胺XX。第一个萘二甲酰亚胺可用式(ⅱ)或式(ⅲ)缩合在该伯胺上，得-萘二甲酰亚胺XXI或XXII。用HBr/乙酸除去均三甲苯磺酰基保护基可以得到伯胺XXIII或XXIV。通过用式(ⅲ)或式(ⅱ)的第二次缩合可以完成该合成，得所需的不对称的双萘二甲酰亚胺XXV或XXVI。
合成路线IV R12＝R6＝H、R11＝R5＝CH3以及R3或R4＝CH3的式XXXIV双萘二甲酰亚胺可以N-均三甲苯磺酰基-丙氨酸(Ⅴ)为原料制得(合成路线V)。标准的BOC-丙氨酸和V的CDI偶联，随后除去BOC保护基团，得酰胺XXVII。与丙氨酰胺再次CDI偶联得三酰胺XXVIII。甲硼烷还原得局部保护的连接剂XXIX。随后通过萘二甲酸酐缩合-HBr/乙酸去保护-萘二甲酸酐缩合而将合成完成，结果得所需的不对称的双萘二甲酰亚胺XXXIV或XXXV。
合成路线Ⅴ R11＝R6＝H、R12＝R5＝CH3以及R3或R4＝CH3的式XXXXVI或XXXXVII双萘二甲酰亚胺可以按合成路线VI所示制备。将BOC保护的二胺XXXVI(PCT专利申请WO8504403Al)在标准条件下转化成均三甲苯磺酰基胺XXXVII。用Webb等人所述的化学方法(J.Org.Chem.，4706页(1991))乳酸XXXVIII可以被转化成叔丁酯triflate XXXIX并与XXXVII偶联，得胺XXXX。除去BOC的保护，随后与丙氨酸甲酯进行CDI偶联并用氨酰胺化，可得二酰胺XXXXII。用甲硼烷还原该二酰胺，得局部保护的多胺连接剂XXXXIII。然后使该物质进行下列反应萘二甲酸酐缩合-HBr/乙酸去保护-萘二甲酸酐缩合，结果得所需的不对称的双萘二甲酰亚胺XXXXVI或XXXXVII。
合成路线Ⅵ 本发明化合物及其制备由以下实施例来进一步解释。
实施例1(R，R)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮二甲磺酸盐(Ia)方法AA部分二-BOC保护的二酰胺(Ⅱ)的制备将89g(549mmol)1，1′-羰基二咪唑于0℃搅拌下加到100g(528mmol)叔-BOC-D-丙氨酸溶于1500ml二氯甲烷的溶液中。搅拌2.5小时后，滴加17.6ml(263mmol)乙二胺。搅拌15分钟后，将该悬浮液加热至室温并搅拌过夜。然后用饱和Na2CO3溶液、水洗涤该混合物，有机层用无水硫酸镁干燥。减压除去溶剂，得104g(98%)Ⅱ，为白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.83(宽 s，2H，NH)，5.18(d，2H，NH)，4.11(m，2H，CH)，3.48(m，2H，CH2)，3.30(m，2H，CH2)，1.44(s，18H，叔丁基)，1.35(d，6H，CH3);MS(CI，CH4)m/e 403(M 1)。
B部分还原Ⅱ制得多胺盐(Ⅲ)将200ml 4M HCl的1，4-二噁烷溶液搅拌下加到51g(127mmol)Ⅱ在100mll，4-二噁烷中的悬浮液中。搅拌4小时后，将该淤浆减压浓缩。将1450ml 1M BH3·THF的THF溶液加到得到的固体中并将该悬浮液回流过夜。然后将溶液冷却至室温，滴加300ml甲醇。将该溶液回流4小时，冷却至室温，减压浓缩并与500ml甲醇共沸。然后将得到的固体溶于500ml甲醇并加35ml 37% HCl水溶液。将得到的悬浮液在蒸气浴上加热15分钟，冷至室温，加入800ml乙醚。然后滤集得到的白色固体，得38g(93%)Ⅲ。
1H NMR(300 MHz，D2O)δ 3.63(m，2H，CH)，3.38(s，4H，)，3.24(m，4H，CH2)，1.28(d，6H，CH3);MS(CI，CH4)m/e 175(M 1)。
C部分中和Ⅲ制得游离碱(Ⅳ)将291g 21%的乙醇钠的乙醇溶液搅拌下加到72.3g(226mmol)Ⅲ的乙醇(1450ml)淤浆中。搅拌2小时后，将混合物用硅藻土过滤，滤液减压浓缩。在高真空条件下蒸馏该粗胺，得35.5g(90%)Ⅳ，为无色油。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.95(m，2H，CH)，2.70(m，4H，CH2)，2.55(m，2H，CH2)，2.33(m，2H，CH2)，1.37(宽，s，6H，NH2)，1.03(d，6H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 175(M 1)。
D部分Ⅳ与萘二甲酸酐缩合制得双萘二甲酰亚胺(Ⅰ)将500mg(2.87mmol)Ⅳ的THF(10ml)溶液加到697mg(2.87mmol)3-硝基-1，8-萘二甲酸酐和568mg(2.87mmol)1，8-萘二甲酸酐在20ml THF中的淤浆中。将该混合物回流过夜。将该深色悬浮液冷却至室温，减压去除溶剂，对残留物进行硅胶层析，用含5%甲醇的二氯甲烷液洗脱，得369mg(23%)游离碱Ib，为棕色固体。
1H NMR (300 MHz，CDCl3)δ9.20(s，1H，芳族)，9.06(s，1H，芳族)，8.68(d，1H，芳族)，8.50(d，2H，芳族)，8.34(d，1H，芳族)，8.16(d，2H，芳族)，7.91(t，1H，芳族)，7.72(t，2H，芳族)，5.25(m，2H，CH)，3.43(m，2H，CH2)，2.94(m，2H，CH2)，2.77(m，4H，CH2)，2.31(s，NH)，1.47(d，3H，CH3)，1.42(d，3H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 580(M 1)。
得到的游离碱经用78μl(1.2mmol)甲磺酸的二氯甲烷(20ml)溶液处理被转化成二甲磺酸盐。搅拌过夜后，滤集固体，得392mg(18%)Ia，为淡黄褐色粉末(mp194-199℃)。
式Ⅰ化合物也可以按下面所述的另一方法合成。
Ⅰ的合成，方法BA部分保护的二胺偶联制得酰胺(Ⅵ)将均三甲苯磺酰基-D-丙氨酸Ⅴ(39.7g，140mmol)溶于500ml二氯甲烷中。冷却至0℃后加入CDI(25.8g，160mmol)。于0℃、2小时后加入N-叔丁氧基羰基-1，2-乙二胺(21.3g，130mmol)的二氯甲烷(10ml)液。将该溶液加热至室温并搅拌12小时。然后将该溶液用饱和Na2CO3溶液、H2O和2%HCl洗涤。该二氯甲烷用无水硫酸镁干燥并减压浓缩，得43.3g(80%)酰胺Ⅵ，为白色泡沫状物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ6.96(s，2H，芳族)，6.90(宽s，1H，NH)，5.65(宽d，1H，NH)，5.05(宽s，1H，NH)，3.67(m，1H，CH)，3.22(m，4H，CH2)，2.63(s，6H，CH3)，2.30(s，3H，CH3)，1.43(s，9H，CH2)，1.26(d，3H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 414(M 1)。
B部分去保护并中和制得游离碱(VII)将酰胺Ⅵ(60.3g，146mmol)溶于150ml二噁烷中并在冰浴中冷却后加入210ml(840mmol)4M HCl的二噁烷溶液。将该溶液加热至室温并搅拌4小时。然后减压除去溶剂，得固体。将其溶于300ml饱和的Na2CO3溶液中并用二氯甲烷提取。该二氯甲烷用碳酸钠干燥并减压浓缩，得37.6g(89%)游离碱VII，为白色泡沫状物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.06(m，1H，1 NH)，6.95(s，2H，芳族)，3.68-3.57(m，1H)，3.26(m，2H，CH2)，2.79(t，2H，CH2)，2.62(s，6H，2 CH3)，2.30(s，3H，1 CH3)，1.22(d，3H，1 CH3);MS(CI，NH3)m/e 314(M 1)。
C部分偶联制得二酰胺(VIII)将保护的氨基酸N-BOC-D丙氨酸(22.9g，120mmol)溶于400ml二氯甲烷中并在冷却至0℃后加入CDI(19.6g，120mmol)。将得到的混合物于0℃搅拌2小时后，滴加胺VII(35.4g，110mmol)的二氯甲烷(200ml)悬浮液。然后将该混合物加热至室温搅拌15小时。然后将该溶液用饱和Na2CO3溶液、H2O和2%HCl洗涤。该二氯甲烷用无水硫酸镁干燥并减压浓缩，得41.2g二酰胺VIII，为白色泡沫状物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.14(宽s，1H，NH)，6.96(s，2H，芳族)，6.83(宽s，1H，NH)，5.92(宽s，1H，NH)，5.31(宽s，1H，NH)，4.10(m，1H，CH)，3.71(m，1H，CH)，3.4-3.2(m，2H，CH2)，2.63(s，6H，CH3)，2.30(s，3H，CH3)，1.43(s，9H，CH3)，1.22(d，3H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 485(M 1)。
D部分去保护及中和BOC保护的胺制得Ⅸ将二酰胺VIII(41.2g，85mmol)溶于10ml二噁烷中并在冰浴中冷却后加入129ml(510mmol)4M HCl的二噁烷溶液，将该溶液加热至室温并搅拌4小时。然后除去溶剂，得固体。将其溶于300ml饱和的Na2CO3溶液中并用二氯甲烷提取。该二氯甲烷用碳酸钠干燥并减压浓缩，得22.8g(70%)游离碱Ⅸ，为白色固体。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.68(宽m，1H，NH)，7.18(宽m，1H，NH)，6.96(s，2H，芳族)，3.66(m，1H)，3.50-3.25(m，5H)，2.63(s，6H，CH3)，2.3(s，3H，CH3)，1.31(d，3H，CH3)，1.23(d，3H，CH3);MS(CI，NH3);m/e 385(M 1)。
E部分还原制得多胺(Ⅹ)将游离胺Ⅸ(22.8g，59.4mmol)溶于200ml THF中后加入1M BH3·THF(594ml，594mmol)。将该溶液回流15小时，冷却后加入200ml甲醇并将该溶液再回流4小时。然后将溶液冷却并减压浓缩。将得到的残留物溶于150ml MeOH中，冷却至0℃后加入6ml浓HCl。将该溶液减压浓缩得白色固体，将其溶于饱和的Na2CO3溶液中并用二氯甲烷提取。将该二氯甲烷用碳酸钠干燥并减压浓缩，得22.1g(93%)游离碱X，为白色泡沫状物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ 6.94(s，2H，芳族)，3.63(t，1H)，3.23-3.17(m，1H)，2.99-2.93(m，1H)，2.68-2.3(m，8H)，2.66(s，6H，CH3)，2.29(s，3H，CH3)，1.6-1.5(m，1H)，1.43-1.3(m，1H)，1.06(t，6H，CH3)，0.92(t，1H);MS(CI，NH3)m/e 357(M 1)。
F部分缩合制得-酰亚胺(Ⅺ)将胺X(22.1g，55.4mmol)溶于500ml THF中，然后加入3-硝基萘二甲酸酐(12.0g，49.5mmol)。将得到的溶液回流17小时。冷却后减压浓缩该溶液至成油状物，经硅胶闪层析得19.3g(66%)酰亚胺Ⅺ，为泡沫状物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ9.24(d，1H，芳族)，9.06(d，1H，芳族)，8.73(d，1H，芳族)，8.38(d，1H，芳族)，7.91(t，1H，芳族)，6.88(s，2H，芳族)，5.4(m，1H，CH)，3.59(m，1H，CH)，3.12(m，1H，CH)，3.01(m，1H，CH)，2.82(m，1H，CH)，2.70(m，1H，CH)，2.56-2.45(m，4H，CH2)，2.52(s，6H，CH3)，2.27(d，3H，CH3)，1.58(d，3H，CH3)，0.92(d，3H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 582(M 1)。
G部分去除均三甲苯磺酰基保护基团制得胺XIII将酰亚胺Ⅺ(13.2g，22.7mmol)溶于250ml 30%HBr/乙酸后加入苯酚(10.7g，113.5mmol)。将该溶液加热回流4小时后于室温搅拌12小时。将该溶液冷却至0℃并加入300ml乙醚，将得到的固体滤出并用乙醚洗涤，得12.3g(84%)三氢溴酸盐XIII，为固体。m.p.253-254℃;
1H-NMR(D2O)δ8.90(d，1H，1 芳族)，8.78(d，1H，芳族)，8.50(d，1H，芳族)，8.28(d，1H，芳族)，7.76(t，1H，芳族)，5.46(m，1H，CH)，3.90(m，1H)，3.64(m，1H)，3.5-3.18(m，7H)，1.56(d，3H，CH3)and 1.27(d，3H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 400(游离碱)(M 1)。
H部分缩合制得双萘二甲酰亚胺(Ⅰ)将三氢溴酸盐XIII(74.1mg，0.1mmol)溶于5ml饱和的Na2CO3溶液中并用二氯甲烷提取。该二氯甲烷用碳酸钠干燥、过滤并真空浓缩，得游离碱。将该游离碱溶于2ml THF后加入1，8-萘二甲酸酐(19.8mg，0.1mmol)并将得到的溶液回流15小时。冷却后，将该溶液浓缩成油状粗品，经硅胶闪层析后得40.3mg(62%)游离碱Ib。该游离碱可参考上述合成路线A转化成标题化合物(Ia)。
应用在体外生长抑制的活性将L1210细胞保存在RPMI-1640培养基中，该培养基含有10%加热灭活的胎牛血清和50ml巯基乙醇/1培养基(RPMI-L)。B16细胞保存在含有15%加热灭活的胎牛血清和抗菌素(RPMI-C)的RPMI-1640培养基中。
将在0.1ml培养基中按指数律生长的老鼠白血病L1210细胞(1×103细胞)在第0天接种在96孔微滴(microtiter)盘中。在第1天，将含梯度浓度试验类似物的0.1μ1等分培养基加至初体积中。将该盘于37℃在湿润的培养箱中培养3天后简单地离心并将100ml生长培养基除去。
将在0.1ml培养基中按指数律生长的人结肠无性繁殖系A细胞(8×102)在第0天接种在96孔微滴盘中。在第1天，将含梯度浓度试验类似物的0.1ml培养基加至初体积中。将该盘于37℃在湿润的培养箱中培养6天后简单地离心并将0.1ml生长培养基除去。
然后将该细胞培养物(上述)于37℃用50μ1溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓(MTT;1mg/ml在Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水中)培养4小时。将得到的红紫色甲 沉淀在异丙醇中用200μ1 0.04N HCl增溶。在Titertek Multiskan MCC扫描井式(well)分光光度计(流动实验室)上读出吸收度，其试验波长为570nm，参比波长为630nm。
ID50值由计算机程序测定，该程序使所有的数据(每个浓度测定8次以及每个试验类似物12个浓度)适合于以下等式Y＝((Am-Ao)/(1 (X/ID50)n)) Ao式中Am＝对照细胞的吸收度;Ao＝在最大药物浓度存在下的细胞的吸收度;Y＝测量到的吸收度;X＝药物浓度;ID50＝抑制细胞生长达到对照组细胞生长的一半时的药物剂量。
在体外L1210白血病和无性繁殖系A结肠癌生长抑制试验的结果表明本发明的代表性化合物-实施例1化合物其ID50分别为0.1μg/ml和0.0036μg/ml。
体内肿瘤模型实施例1化合物-本发明代表化合物已进行了抗癌活性的临床前试验，显示出临床实用性。对L1210白血病和无性繁殖系A结肠癌细胞系强有力的(＜0.1μg/ml)生长抑制的活性提示本发明化合物具有在体内模型中将是活性化合物的潜力。这由于现在所述的化合物在体内显示出对异种移植于裸鼠的人肿瘤具有显效而得到进一步证实。
在体内人肿瘤异种移植模型中试验化合物所用的方法描述如下。
体内人肿瘤异种移植模型MX-1人乳房癌和DLD-2人结肠癌最初分别得自手术摘除的原发的乳房肿瘤和结肠癌。将该人肿瘤器系通过连续继代移种保存在无胸腺的裸鼠中。MX-1人乳房癌是通过NCI形成的肿瘤。MX-1和DLD-2肿瘤模型已经充分鉴定。
用在这些试验中的小鼠是远系繁殖的带有光秃(nude)(nu/nu)基因的瑞士小鼠或BALB/c小鼠。在第0天，将重量在22-30g的雄性和雌性小鼠用0.2ml 25%肿瘤绞碎物接种，该绞碎物通过将皮下生长在继代移种小鼠中的新鲜的肿瘤组织在灭菌的生理盐水中绞碎来制备。接种后的7-10天内，小鼠出现大约重50mg可触知的肿瘤。将小鼠按肿瘤重量和性别配对，配成每10只一组并将试验化合物和溶媒对照静脉内给药(i.v)，每天一次，连续给药9天。给试验化合物后第5天，体重减少20%被认为是毒性的表现。肿瘤测量和体重每周记录一次。在第一次注射给药后的15-18天，将小鼠称重、处死，并切下肿瘤称重。
该试验化合物的效力据化合物处理的小鼠与溶媒处理的对照小鼠相比肿瘤生长抑制的程度来定。最初肿瘤的重量(mg)由经测径器测量的肿瘤尺寸(mm)用长椭球公式(肿瘤重量(mg)＝(长度×宽度2)/2)来计算。对于每个处理组和溶媒处理对照组来说，肿瘤的净重按照从第15天的最终肿瘤重量中减去最初的肿瘤重量来计算。结果用相对于对照的溶媒处理组的平均肿瘤重量减少的百分数来表示。
肿瘤生长抑制%＝[1- (处理的平均肿瘤重量)/(对照的平均肿瘤重量) ]×100活性判定使用国产肿瘤研究所(NCI)关于体内癌症模型中的活性的判断标准。实际的肿瘤回归(IR＝不完全回归;FR＝完全回归)显示出极好-显著的活性。在DLD-2测定中肿瘤生长抑制为≥90%被认为是好-极好，抑制达58-89%被认为是中等。证实为＜58%生长抑制的化合物被认为是无活性的。
实施例1化合物在MX-1人乳房肿瘤模型中显示出极好-显著的活性。此外，实施例1化合物在DLD-2人结肠肿瘤模型中显示出极好-显著的活性。预计本发明所有化合物均会显示出相似的活性。
本发明化合物在人乳房及结肠肿瘤的异种移植模型中所证实的有效性表明本发明化合物可用于治疗人身体上的固形肿瘤、具体讲是乳房肿瘤和结肠肿瘤，该结论得到了已发表的使临床前的试验结果与临床有效的抗癌药剂发生联系的分析结果的进一步支持。例如，参见Goldin和Venditti(1980)Recent Results Cancer Research 76176-191页;Goldin等人(1981)Eur.J.Cancer 17129-142页;Mattern等人(1988)Cancer and Metastasis Review 7263-284页;Jackson等人(1990)Cancer Investigations 839-47页。根据这些已发表的分析结果，本发明化合物显示出来的格外高的抗肿瘤活性提供了强有力的证据本发明所述的化合物在治疗人类癌症方面可能具有重要的治疗效用。
剂量和制剂本发明抗肿瘤化合物(活性成分)可通过任何能使活性成分与药剂的在哺乳动物体内的作用部位相接触的途径用以抑制肿瘤。它们可通过任何常规的可与药品一同使用的方法来服用，所述药品或者是单独的治疗活性成分，或者是存在于治疗活性成分的组合物中。它们可被单独服用，但一般与根据所选择的给药途径和标准的药用习惯所选择的药用载体一同使用。
所服用剂量应是活性成分的抑制肿瘤的剂量，当然应根据下述已知的因素来变动例如具体活性成分的药剂学特征及其给药方式和途径;病人的年令、健康状况及体重;症状的性质和程度;并行治疗的种类，治疗的频率以及期望的效果。活性成分的日剂量通常可以约为每公斤体重1-400毫克。一般来说，每公斤体重每天10-200毫克且最好是10-50毫克按每日分2-4次给药或以缓释的形式给药可有效地获得期望的效果。
适宜于体内使用的剂型(组合物)每单元含有约1.0-500毫克活性成分。在这些药用组合物中，活性成分的含量一般应约为组合物总重量的0.5-95重量%。
该活性成分可以固体剂型如胶囊、片剂和粉剂或液体剂型如酏剂、糖浆和悬浮剂口服给药，也可以灭菌液体剂型肠道外给药。
明胶胶囊含有活性成分和粉末状载体如乳糖、蔗糖、甘露糖醇、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。类似的稀释剂可用来制备压制片剂。片剂和胶囊都可制成缓释产品以保证药剂在几小时时间内连续释放。压制片剂可以用糖包衣或薄膜包衣以掩盖任何令人不愉快的味道和防止该片与空气接触，或者可将片剂制成肠溶包衣片以选择性地在胃肠道内崩解。
口服液体剂型可以含着色剂和矫味剂以使病人更容易接受。
一般来说，水、适当的油、盐水、葡萄糖水和相关的糖溶液以及脂肪族二元醇类如丙二醇或聚乙二醇类是肠道外用溶液的适宜的载体。用于肠道外给药的溶液最好含活性成分的水溶性盐、适宜的稳定剂，以及如果需要还含缓冲物质。抗氧剂如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸是适宜的稳定剂，它们可以单独使用或者结合起来使用。还使用柠檬酸及其盐和EDTA钠。此外，肠道外用溶液可以含防腐剂如氯化苯甲烃铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和氯丁醇。
在“Remington's Pharmaceutical Sciences”，(Mack出版公司)中描述了适宜的药用载体，该书为本领域标准的参考书。
用以使用本发明化合物的可用药用剂型可举例说明如下胶囊通过将100毫克粉末状活性成分、175毫克乳糖、24毫克滑石粉以及6毫克硬脂酸镁装入每个标准的由两部分组成的硬的明胶胶囊中而制成胶囊。
软明胶胶囊制备活性成分在豆油中的混合物并将该混合物用正位移泵注入明胶中形成含100毫克活性成分的软明胶胶囊。该胶囊被洗涤并干燥。
片剂片剂按常规方法制备，使剂量单元含100毫克活性成分、0.2毫克胶体二氧化硅、5毫克硬脂酸镁、275毫克微晶纤维素、11毫克玉米淀粉和98毫克乳糖。可以使用适当的包衣以增加可口性或延缓吸收。
注射剂适宜注射给药的肠道外用组合物通过将1.5%(重量)的活性成分在10%(体积)丙二醇的水溶液中搅拌来制备，该溶液用氯化钠制成等渗溶液并灭菌。
悬浮液将口服用水性悬浮液制成每5毫升中含100毫克活性成分细粉、200毫克羧甲基纤维素钠、5毫克苯甲酸钠、1.0克山梨醇溶液、U.S.P.以及0.025毫升香荚兰醛的制剂。
应当明白，在本公开中，指定的物质和条件在实施本发明时是重要的，但只要不妨碍本发明利益的实现，不排除未指定的物质和条件。
权利要求
1.式(i)化合物，或者其对映体或非对映体，或者其对映体或非对映体的混合物，以及其药学上可接受的盐；式(i)化合物结构如下 式中R11、R12、R3、R4、R5、和R6分别为H或CH3。
2.权利要求1的化合物，其中R11和R6是CH3;以及R12、R3、R4和R5是H。
3.按照权利要求2的并选自以下化合物的化合物及其药学上可接受的盐(R，R)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;(S，S)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;(外消旋体 内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;和(内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮。
4.权利要求2的并选自下组中的化合物(R，R)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮二甲磺酸盐;(S，S)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮二甲磺酸盐;(外消旋体 内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮二甲磺酸盐;和(内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮二甲磺酸盐。
5.含治疗有效量的权利要求1化合物和药用载体的药用组合物。
6.含治疗有效量的权利要求2化合物和药用载体的药用组合物。
7.含治疗有效量的权利要求3化合物和药用载体的药用组合物。
8.含治疗有效量的权利要求4化合物和药用载体的药用组合物。
9.哺乳动物结肠肿瘤的治疗方法，它包括给有这样的肿瘤的哺乳动物服用抑制肿瘤量的权利要求1化合物。
10.哺乳动物乳房肿瘤的治疗方法，它包括给有这样的肿瘤的哺乳动物服用抑制肿瘤量的权利要求1化合物。
11.式(ⅰ)化合物，或者其对映体或非对映体，或者其对映体或非对映体的混合物，以及其药学上可接受的盐的制备方法;式(ⅰ)化合物结构如下 式中R11、R12、R3、R4、R5、和R6分别为H或CH3;所述制备方法包括使等摩尔量的式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐和式(ⅳ)多胺在适当的溶剂、即基本上不与式(ⅰ)、(ⅱ)、(ⅲ)或(ⅳ)化合物反应的溶剂中，于室温至该溶剂的沸点这一温度范围内接触足够的时间以获得式(ⅰ)化合物;所述式(ⅱ)酐、式(ⅲ)酐和式(ⅳ)多胺的结构分别如下
12.式(ⅰ)化合物，或者其对映体或非对映体，或者其对映体或非对映体的混合物，以及其药学上可接受的盐的制备方法;式(ⅰ)化合物结构如下 式中R11、R12、R3、R4、R5、和R6分别为H或CH3;所述方法包括以下步骤(1)将下式多胺与式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐反应，得下式萘二甲酰亚胺 所述多胺的结构如下 式中R10是取代的芳基磺酰基保护基团;所述式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐的结构如下 (2)从步骤(1)的萘二甲酰亚胺中除去保护基团R10，得去保护的萘二甲酰亚胺;(3)将步骤(2)的去保护的萘二甲酰亚胺与式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐反应，得式(ⅰ)化合物。
全文摘要
本发明涉及上式不对称的单-3-硝基双萘二甲酰亚胺包括(R，R)-2-{2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基}-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮；涉及它们的制备方法；涉及包含它们的药用组合物以及用它们治疗哺乳动物的癌症、具体讲是固形癌肿的方法。
文档编号C07D221/14GK1101037SQ93109370
公开日1995年4月5日 申请日期1993年7月27日 优先权日1992年7月27日
发明者R·F·卡尔滕巴哈, J·-H·孙, R·J·切尔尼, S·P·塞兹 申请人:杜邦麦克制药有限公司
本申请是1992年7月27日提出的美国专利申请S NO 7/919227的部分继续申请。
本发明涉及下式不对称的单-3-硝基双萘二甲酰亚胺 包括(R，R)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;涉及它们的制备方法;涉及包含它们的药用组合物以及用它们治疗哺乳动物的癌症、具体讲是固形癌肿的方法。
Harnisch等人在美国专利4841052(1989年6月20日发布)中描述了可用作电照相调色剂中的调节电荷的物质的萘二甲酰亚胺。
Brana等人在美国专利4874863(1989年10月17日发布)中公开了下式抗癌化合物及其与生理上可耐受的酸形成的盐
式中X1、X2、X3和X4相同或不同，各自为H、NO2、NH2、C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、OH、C1-C6烷氧基、卤素、三卤代甲基、C1-C6烷基、甲酰基、C1-C6烷基羰基、脲基(ureyl)、C1-C6烷基脲基，以及R是直链或支链的C4-C10亚烷基，所述亚烷基链有一处或两处被仲氨基基团或叔氨基基团所打断，2个氮原子可以通过亚烷基基团彼此相连。
Brana等人在美国专利4874863中没有具体公开本发明化合物。
与在美国专利4874863中具体公开的某些化合物相比，本发明化合物出人意料地增加了水溶性。这是个重要的改进，因为熔解性差的化合物在试图将这样的化合物配制成适宜于人服用的剂型时会产生严重的问题。
此外本发明化合物出人意料地显示出比Brana等人具体公开的化合物强的抗肿瘤活性。
本发明提供式(ⅰ)双萘二甲酰亚胺，或者其对映体或非对映体，或者其对映体或非对映体的混合物，或者其药学上可接受的盐，式(ⅰ)双萘二甲酰亚胺结构如下
式中R11、R12、R3、R4、R5和R6各自为H或CH3。
优选的本发明化合物包括式中R11和R6是CH3，以及R12、R3、R4和R5是H的那些式(ⅰ)化合物。
特别优选的本发明化合物为以下化合物以及其药学上可接的盐(R，R)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;
(S，S)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;
(外消旋体 内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;和(内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮。
本发明也提供式(ⅰ)化合物的制备方法、含式(ⅰ)化合物的药用组合物以及用这些化合物治疗哺乳动物的癌症的方法，具体来讲是治疗哺乳动物的固形癌肿的方法。
本发明包括式(ⅰ)化合物、或者其对映体或非对映体、或者其对映体或非对映体的混合物以及其药学上可接受的盐的制备方法;式(ⅰ)化合物的结构如下 式中R11、R12、R3、R4、R5和R6各为H或CH3;所述制备方法包括以下步骤(1)将下式多胺与式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐反应，得下式萘二甲酰亚胺
所述多胺的结构如下 式中R10是取代的芳基磺酰基保护基团;
所述式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐的结构如下 (2)从步骤(1)的萘二甲酰亚胺中除去保护基团R10，得去保护的萘二甲酰亚胺;
(3)将步骤(2)的去保护的萘二甲酰亚胺与式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐反应，得式(ⅰ)化合物。
R10是取代的芳基磺酰基保护基团例如芳基磺酰基基团，其中芳基基团被0-5个分别选自以下的基团所取代苯基、苄基、苯乙基、苯氧基、苄氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、C1-C5烷基、C3-C6环烷基、C3-C6环烷基甲基、C7-C10芳基烷基、C1-C4烷氧基、甲酰基、C3-C6环烷氧基、C2-C6烷氧基烷基、C1-C4羟基烷基、亚甲二氧基、亚乙二氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4烷氧基羰基、C1-C4烷基羰基氧基、C1-C4烷基羰基和C1-C4烷基羰基氨基。
优选的R10是均三甲苯磺酰基基团。
有关取代的芳基磺酰基保护基团的更多的例子在下述文献中给予了描述例如Greene和Wutz，“Protective Groups in Organic Synthesis”John Wiley & Sons，纽约(1991)和“The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology”，第3卷，Academic Press，纽约(1981)，兹将该内容引入本文作参考。
本文所说的“芳基”是指苯基或萘基。本文中所说的“烷基”是指包括具有给定的碳原子数的支链和直链的脂族烃基团;“烷氧基”代表通过氧桥相连的标明碳原子数目的烷基基团。
本文所说的“取代的”一词是指在指定的原子上的一个或一个以上氢被选自给定的基团中的基团取代，但条件是该指定的原子的化合价没超出常价而且取代后生成稳定的化合物。
本文所说的“稳定的化合物”或“稳定的结构”是指足够结实、能经受得住从反应混合物中分离成可用的纯度并能配制成有效的治疗剂的化合物。
尽管本发明化合物被包含在美国专利4874863的广泛的范围之内，但在该专利中没有对本发明化合物具体作出权利要求或具体给出实施例。Brana等人没有描述任何不对称的双萘二甲酰亚胺的合成。然而本发明化合物显示出比Brana等人在美国专利4874863中具体公开的化合物的显著增强的抗肿瘤活性。尽管本发明化合物在体内显示出非常有效的抗固形肿瘤的活性，但由Brana等人具体公开的结构上类似的化合物却没有显示出活性。
此外，本发明双萘二甲酰亚胺与由Brana等人具体公开的某些化合物相比水溶性增加。
本发明化合物可用下述方法以及在合成有机化学领域中公知的合成方法来合成。下文中引述的文献均引入本文作参考。
本发明化合物可按下述方法合成将大约等摩尔量的相应的式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐和式(ⅳ)多胺在适当的溶剂、即基本上不与原料和产物(即任何的式(ⅰ)、(ⅱ)、(ⅲ)或(ⅳ)化合物)反应的溶剂中，于室温至该溶剂的沸点这一温度范围内进行反应(合成路线A)。适当的溶剂包括例如乙醇、DMSO、二甲基甲酰胺或四氢呋喃，但并不只限于这几种。
得到的式(ⅰ)的游离碱可在例如乙醇或二氯甲烷中用适当的无机酸或有机酸酸化，生成药学上可接受的盐。一般来讲，本发明化合物的药学上可接受的盐可按下述方法制备将这些化合物的游离碱形式在有机溶剂或水或这两者的混合物中与化学计算量的适当的酸反应。一般优先选用非水性介质象乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。Remington's Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1985，第1418页中列出了适宜的盐，将该内容引入本文作参考。式(ⅰ)的游离碱在按以上所述制备其盐之前可能需要通过以下技术纯化例如柱层析、重结晶或蒸馏以及有机合成领域技术人员熟知的其它技术。
合成路线A 式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐可以买到。式(ⅳ)多胺可按以下所述的方法制备。
例如R11＝R6＝CH3且R12＝R3＝R4＝R5＝H的式Ⅰ化合物的合成(参见合成路线I)可由下述反应来完成在标准条件下，BOC-(D)-丙氨酸与1，1′-羰基二咪唑(CDI)反应，然后与乙二胺反应，得二酰胺Ⅱ。用酸水解BOC(N-叔丁氧基羰基)保护基团，随后在回流的四氢呋喃中用乙硼烷还原，然后用酸处理，得Ⅲ。Ⅲ可以被中和，得纯的游离碱Ⅳ。在四氢呋喃中于回流温度用Ⅳ处理等摩尔量的相应的式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐，经硅胶纯化后，得不对称的游离碱Ib。将得到的游离碱在二氯甲烷中用适当的无机酸或有机酸例如甲磺酸酸化，制成药学上可接受的盐Ia。
多胺连接剂Ⅳ的非对映体或对映体或者其对映体或非对映体的混合物的合成方法在共同转让、共同未决的专利申请US SN 07/805044(1991年12月11日申请)中有详细描述。
合成路线Ⅰ 式Ⅰ化合物也可以用另一种方法通过式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐在局部保护的连接剂上的逐步缩合来合成(参见合成路线Ⅱ)。该方法始于N-均三甲苯磺酰基-D-丙氨酸(V)(德国专利DE 2544859，1976)和N-叔丁氧基羰基-1，2-乙二胺(Krapcho，Syn.Comm.1990，20卷，16期，2559页)的CDI偶联，得酰胺Ⅵ。然后在酸性条件下将酰胺Ⅵ的BOC保护基团除去，并将得到的盐用碳酸钠处理，得游离碱Ⅶ。然后用CDI使该物质与N-BOC-D-丙氨酸偶联，用酸除去BOC基团，继之用碳酸钠处理，得二酰胺Ⅸ。将Ⅸ的酰胺键用BH3·THF还原，得关键的局部保护的连接剂X，然后将其与式(ⅱ)酐(或式(ⅲ)酐)缩合，得-萘二甲酰亚胺Ⅺ(或Ⅻ)。这时用30%HBr/乙酸除去均三甲苯磺酰基基团，得结晶性盐ⅩⅢ(或ⅩⅣ)，用碳酸钠处理，得游离碱，将其与适当的式(ⅲ)酐(或式(ⅱ)酐)缩合，得游离碱Ib。该游离碱可用上述的适当的无机酸或有机酸酸化，制成药学上可接受的盐。
合成路线Ⅱ R11＝R3＝R4＝R6＝H且R12＝R5＝CH3的式ⅩⅥ双萘二甲酰亚胺可按合成路线(Ⅲ)所示制备。等摩尔量的相应的式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐在惰性溶剂如乙醇或二甲基甲酰胺或四氢呋喃中例如在室温至溶剂的沸点这个温度范围内与多胺XV(a-d)反应。得到的游离碱XV可以用适当的无机酸或有机酸酸化，制成药学上可接受的盐。多胺连接剂XV(a-d)的详细的合成步骤在共同转让、共同未决的专利申请US SN 07/805044(1991年12月11日申请)中有描述。
合成路线Ⅲ XVa，(S，S)XVIa，(S，S)XVb，(R，R)XVIb，(R，R)XVc，(外消旋 内消旋)XVIc，(外消旋 内消旋)XVd，(内消旋)XVId，(内消旋)R12 R5＝H、R11＝R6＝CH3以及R3或R4＝CH3的式XXV双萘二甲酰亚胺可按合成路线Ⅳ所示制备。如前，可将N-均三甲苯磺酰基丙氨酸V在标准条件下与氨反应，随后用BH3·THF还原，得胺XVII。用CDI使之与BOC-丙氨酸偶联，随后除去BOC保护基团，得酰胺XVIII。该连接剂通过另外的BOC-丙氨酸偶联/BOC去保护，结果得二酰胺XIX。然后将该物质在标准的甲硼烷条件下还原，得三胺XX。第一个萘二甲酰亚胺可用式(ⅱ)或式(ⅲ)缩合在该伯胺上，得-萘二甲酰亚胺XXI或XXII。用HBr/乙酸除去均三甲苯磺酰基保护基可以得到伯胺XXIII或XXIV。通过用式(ⅲ)或式(ⅱ)的第二次缩合可以完成该合成，得所需的不对称的双萘二甲酰亚胺XXV或XXVI。
合成路线IV R12＝R6＝H、R11＝R5＝CH3以及R3或R4＝CH3的式XXXIV双萘二甲酰亚胺可以N-均三甲苯磺酰基-丙氨酸(Ⅴ)为原料制得(合成路线V)。标准的BOC-丙氨酸和V的CDI偶联，随后除去BOC保护基团，得酰胺XXVII。与丙氨酰胺再次CDI偶联得三酰胺XXVIII。甲硼烷还原得局部保护的连接剂XXIX。随后通过萘二甲酸酐缩合-HBr/乙酸去保护-萘二甲酸酐缩合而将合成完成，结果得所需的不对称的双萘二甲酰亚胺XXXIV或XXXV。
合成路线Ⅴ R11＝R6＝H、R12＝R5＝CH3以及R3或R4＝CH3的式XXXXVI或XXXXVII双萘二甲酰亚胺可以按合成路线VI所示制备。将BOC保护的二胺XXXVI(PCT专利申请WO8504403Al)在标准条件下转化成均三甲苯磺酰基胺XXXVII。用Webb等人所述的化学方法(J.Org.Chem.，4706页(1991))乳酸XXXVIII可以被转化成叔丁酯triflate XXXIX并与XXXVII偶联，得胺XXXX。除去BOC的保护，随后与丙氨酸甲酯进行CDI偶联并用氨酰胺化，可得二酰胺XXXXII。用甲硼烷还原该二酰胺，得局部保护的多胺连接剂XXXXIII。然后使该物质进行下列反应萘二甲酸酐缩合-HBr/乙酸去保护-萘二甲酸酐缩合，结果得所需的不对称的双萘二甲酰亚胺XXXXVI或XXXXVII。
合成路线Ⅵ 本发明化合物及其制备由以下实施例来进一步解释。
实施例1(R，R)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮二甲磺酸盐(Ia)方法AA部分二-BOC保护的二酰胺(Ⅱ)的制备将89g(549mmol)1，1′-羰基二咪唑于0℃搅拌下加到100g(528mmol)叔-BOC-D-丙氨酸溶于1500ml二氯甲烷的溶液中。搅拌2.5小时后，滴加17.6ml(263mmol)乙二胺。搅拌15分钟后，将该悬浮液加热至室温并搅拌过夜。然后用饱和Na2CO3溶液、水洗涤该混合物，有机层用无水硫酸镁干燥。减压除去溶剂，得104g(98%)Ⅱ，为白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.83(宽 s，2H，NH)，5.18(d，2H，NH)，4.11(m，2H，CH)，3.48(m，2H，CH2)，3.30(m，2H，CH2)，1.44(s，18H，叔丁基)，1.35(d，6H，CH3);MS(CI，CH4)m/e 403(M 1)。
B部分还原Ⅱ制得多胺盐(Ⅲ)将200ml 4M HCl的1，4-二噁烷溶液搅拌下加到51g(127mmol)Ⅱ在100mll，4-二噁烷中的悬浮液中。搅拌4小时后，将该淤浆减压浓缩。将1450ml 1M BH3·THF的THF溶液加到得到的固体中并将该悬浮液回流过夜。然后将溶液冷却至室温，滴加300ml甲醇。将该溶液回流4小时，冷却至室温，减压浓缩并与500ml甲醇共沸。然后将得到的固体溶于500ml甲醇并加35ml 37% HCl水溶液。将得到的悬浮液在蒸气浴上加热15分钟，冷至室温，加入800ml乙醚。然后滤集得到的白色固体，得38g(93%)Ⅲ。
1H NMR(300 MHz，D2O)δ 3.63(m，2H，CH)，3.38(s，4H，)，3.24(m，4H，CH2)，1.28(d，6H，CH3);MS(CI，CH4)m/e 175(M 1)。
C部分中和Ⅲ制得游离碱(Ⅳ)将291g 21%的乙醇钠的乙醇溶液搅拌下加到72.3g(226mmol)Ⅲ的乙醇(1450ml)淤浆中。搅拌2小时后，将混合物用硅藻土过滤，滤液减压浓缩。在高真空条件下蒸馏该粗胺，得35.5g(90%)Ⅳ，为无色油。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.95(m，2H，CH)，2.70(m，4H，CH2)，2.55(m，2H，CH2)，2.33(m，2H，CH2)，1.37(宽，s，6H，NH2)，1.03(d，6H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 175(M 1)。
D部分Ⅳ与萘二甲酸酐缩合制得双萘二甲酰亚胺(Ⅰ)将500mg(2.87mmol)Ⅳ的THF(10ml)溶液加到697mg(2.87mmol)3-硝基-1，8-萘二甲酸酐和568mg(2.87mmol)1，8-萘二甲酸酐在20ml THF中的淤浆中。将该混合物回流过夜。将该深色悬浮液冷却至室温，减压去除溶剂，对残留物进行硅胶层析，用含5%甲醇的二氯甲烷液洗脱，得369mg(23%)游离碱Ib，为棕色固体。
1H NMR (300 MHz，CDCl3)δ9.20(s，1H，芳族)，9.06(s，1H，芳族)，8.68(d，1H，芳族)，8.50(d，2H，芳族)，8.34(d，1H，芳族)，8.16(d，2H，芳族)，7.91(t，1H，芳族)，7.72(t，2H，芳族)，5.25(m，2H，CH)，3.43(m，2H，CH2)，2.94(m，2H，CH2)，2.77(m，4H，CH2)，2.31(s，NH)，1.47(d，3H，CH3)，1.42(d，3H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 580(M 1)。
得到的游离碱经用78μl(1.2mmol)甲磺酸的二氯甲烷(20ml)溶液处理被转化成二甲磺酸盐。搅拌过夜后，滤集固体，得392mg(18%)Ia，为淡黄褐色粉末(mp194-199℃)。
式Ⅰ化合物也可以按下面所述的另一方法合成。
Ⅰ的合成，方法BA部分保护的二胺偶联制得酰胺(Ⅵ)将均三甲苯磺酰基-D-丙氨酸Ⅴ(39.7g，140mmol)溶于500ml二氯甲烷中。冷却至0℃后加入CDI(25.8g，160mmol)。于0℃、2小时后加入N-叔丁氧基羰基-1，2-乙二胺(21.3g，130mmol)的二氯甲烷(10ml)液。将该溶液加热至室温并搅拌12小时。然后将该溶液用饱和Na2CO3溶液、H2O和2%HCl洗涤。该二氯甲烷用无水硫酸镁干燥并减压浓缩，得43.3g(80%)酰胺Ⅵ，为白色泡沫状物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ6.96(s，2H，芳族)，6.90(宽s，1H，NH)，5.65(宽d，1H，NH)，5.05(宽s，1H，NH)，3.67(m，1H，CH)，3.22(m，4H，CH2)，2.63(s，6H，CH3)，2.30(s，3H，CH3)，1.43(s，9H，CH2)，1.26(d，3H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 414(M 1)。
B部分去保护并中和制得游离碱(VII)将酰胺Ⅵ(60.3g，146mmol)溶于150ml二噁烷中并在冰浴中冷却后加入210ml(840mmol)4M HCl的二噁烷溶液。将该溶液加热至室温并搅拌4小时。然后减压除去溶剂，得固体。将其溶于300ml饱和的Na2CO3溶液中并用二氯甲烷提取。该二氯甲烷用碳酸钠干燥并减压浓缩，得37.6g(89%)游离碱VII，为白色泡沫状物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.06(m，1H，1 NH)，6.95(s，2H，芳族)，3.68-3.57(m，1H)，3.26(m，2H，CH2)，2.79(t，2H，CH2)，2.62(s，6H，2 CH3)，2.30(s，3H，1 CH3)，1.22(d，3H，1 CH3);MS(CI，NH3)m/e 314(M 1)。
C部分偶联制得二酰胺(VIII)将保护的氨基酸N-BOC-D丙氨酸(22.9g，120mmol)溶于400ml二氯甲烷中并在冷却至0℃后加入CDI(19.6g，120mmol)。将得到的混合物于0℃搅拌2小时后，滴加胺VII(35.4g，110mmol)的二氯甲烷(200ml)悬浮液。然后将该混合物加热至室温搅拌15小时。然后将该溶液用饱和Na2CO3溶液、H2O和2%HCl洗涤。该二氯甲烷用无水硫酸镁干燥并减压浓缩，得41.2g二酰胺VIII，为白色泡沫状物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.14(宽s，1H，NH)，6.96(s，2H，芳族)，6.83(宽s，1H，NH)，5.92(宽s，1H，NH)，5.31(宽s，1H，NH)，4.10(m，1H，CH)，3.71(m，1H，CH)，3.4-3.2(m，2H，CH2)，2.63(s，6H，CH3)，2.30(s，3H，CH3)，1.43(s，9H，CH3)，1.22(d，3H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 485(M 1)。
D部分去保护及中和BOC保护的胺制得Ⅸ将二酰胺VIII(41.2g，85mmol)溶于10ml二噁烷中并在冰浴中冷却后加入129ml(510mmol)4M HCl的二噁烷溶液，将该溶液加热至室温并搅拌4小时。然后除去溶剂，得固体。将其溶于300ml饱和的Na2CO3溶液中并用二氯甲烷提取。该二氯甲烷用碳酸钠干燥并减压浓缩，得22.8g(70%)游离碱Ⅸ，为白色固体。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.68(宽m，1H，NH)，7.18(宽m，1H，NH)，6.96(s，2H，芳族)，3.66(m，1H)，3.50-3.25(m，5H)，2.63(s，6H，CH3)，2.3(s，3H，CH3)，1.31(d，3H，CH3)，1.23(d，3H，CH3);MS(CI，NH3);m/e 385(M 1)。
E部分还原制得多胺(Ⅹ)将游离胺Ⅸ(22.8g，59.4mmol)溶于200ml THF中后加入1M BH3·THF(594ml，594mmol)。将该溶液回流15小时，冷却后加入200ml甲醇并将该溶液再回流4小时。然后将溶液冷却并减压浓缩。将得到的残留物溶于150ml MeOH中，冷却至0℃后加入6ml浓HCl。将该溶液减压浓缩得白色固体，将其溶于饱和的Na2CO3溶液中并用二氯甲烷提取。将该二氯甲烷用碳酸钠干燥并减压浓缩，得22.1g(93%)游离碱X，为白色泡沫状物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ 6.94(s，2H，芳族)，3.63(t，1H)，3.23-3.17(m，1H)，2.99-2.93(m，1H)，2.68-2.3(m，8H)，2.66(s，6H，CH3)，2.29(s，3H，CH3)，1.6-1.5(m，1H)，1.43-1.3(m，1H)，1.06(t，6H，CH3)，0.92(t，1H);MS(CI，NH3)m/e 357(M 1)。
F部分缩合制得-酰亚胺(Ⅺ)将胺X(22.1g，55.4mmol)溶于500ml THF中，然后加入3-硝基萘二甲酸酐(12.0g，49.5mmol)。将得到的溶液回流17小时。冷却后减压浓缩该溶液至成油状物，经硅胶闪层析得19.3g(66%)酰亚胺Ⅺ，为泡沫状物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ9.24(d，1H，芳族)，9.06(d，1H，芳族)，8.73(d，1H，芳族)，8.38(d，1H，芳族)，7.91(t，1H，芳族)，6.88(s，2H，芳族)，5.4(m，1H，CH)，3.59(m，1H，CH)，3.12(m，1H，CH)，3.01(m，1H，CH)，2.82(m，1H，CH)，2.70(m，1H，CH)，2.56-2.45(m，4H，CH2)，2.52(s，6H，CH3)，2.27(d，3H，CH3)，1.58(d，3H，CH3)，0.92(d，3H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 582(M 1)。
G部分去除均三甲苯磺酰基保护基团制得胺XIII将酰亚胺Ⅺ(13.2g，22.7mmol)溶于250ml 30%HBr/乙酸后加入苯酚(10.7g，113.5mmol)。将该溶液加热回流4小时后于室温搅拌12小时。将该溶液冷却至0℃并加入300ml乙醚，将得到的固体滤出并用乙醚洗涤，得12.3g(84%)三氢溴酸盐XIII，为固体。m.p.253-254℃;
1H-NMR(D2O)δ8.90(d，1H，1 芳族)，8.78(d，1H，芳族)，8.50(d，1H，芳族)，8.28(d，1H，芳族)，7.76(t，1H，芳族)，5.46(m，1H，CH)，3.90(m，1H)，3.64(m，1H)，3.5-3.18(m，7H)，1.56(d，3H，CH3)and 1.27(d，3H，CH3);MS(CI，NH3)m/e 400(游离碱)(M 1)。
H部分缩合制得双萘二甲酰亚胺(Ⅰ)将三氢溴酸盐XIII(74.1mg，0.1mmol)溶于5ml饱和的Na2CO3溶液中并用二氯甲烷提取。该二氯甲烷用碳酸钠干燥、过滤并真空浓缩，得游离碱。将该游离碱溶于2ml THF后加入1，8-萘二甲酸酐(19.8mg，0.1mmol)并将得到的溶液回流15小时。冷却后，将该溶液浓缩成油状粗品，经硅胶闪层析后得40.3mg(62%)游离碱Ib。该游离碱可参考上述合成路线A转化成标题化合物(Ia)。
应用在体外生长抑制的活性将L1210细胞保存在RPMI-1640培养基中，该培养基含有10%加热灭活的胎牛血清和50ml巯基乙醇/1培养基(RPMI-L)。B16细胞保存在含有15%加热灭活的胎牛血清和抗菌素(RPMI-C)的RPMI-1640培养基中。
将在0.1ml培养基中按指数律生长的老鼠白血病L1210细胞(1×103细胞)在第0天接种在96孔微滴(microtiter)盘中。在第1天，将含梯度浓度试验类似物的0.1μ1等分培养基加至初体积中。将该盘于37℃在湿润的培养箱中培养3天后简单地离心并将100ml生长培养基除去。
将在0.1ml培养基中按指数律生长的人结肠无性繁殖系A细胞(8×102)在第0天接种在96孔微滴盘中。在第1天，将含梯度浓度试验类似物的0.1ml培养基加至初体积中。将该盘于37℃在湿润的培养箱中培养6天后简单地离心并将0.1ml生长培养基除去。
然后将该细胞培养物(上述)于37℃用50μ1溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓(MTT;1mg/ml在Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水中)培养4小时。将得到的红紫色甲 沉淀在异丙醇中用200μ1 0.04N HCl增溶。在Titertek Multiskan MCC扫描井式(well)分光光度计(流动实验室)上读出吸收度，其试验波长为570nm，参比波长为630nm。
ID50值由计算机程序测定，该程序使所有的数据(每个浓度测定8次以及每个试验类似物12个浓度)适合于以下等式Y＝((Am-Ao)/(1 (X/ID50)n)) Ao式中Am＝对照细胞的吸收度;Ao＝在最大药物浓度存在下的细胞的吸收度;Y＝测量到的吸收度;X＝药物浓度;ID50＝抑制细胞生长达到对照组细胞生长的一半时的药物剂量。
在体外L1210白血病和无性繁殖系A结肠癌生长抑制试验的结果表明本发明的代表性化合物-实施例1化合物其ID50分别为0.1μg/ml和0.0036μg/ml。
体内肿瘤模型实施例1化合物-本发明代表化合物已进行了抗癌活性的临床前试验，显示出临床实用性。对L1210白血病和无性繁殖系A结肠癌细胞系强有力的(＜0.1μg/ml)生长抑制的活性提示本发明化合物具有在体内模型中将是活性化合物的潜力。这由于现在所述的化合物在体内显示出对异种移植于裸鼠的人肿瘤具有显效而得到进一步证实。
在体内人肿瘤异种移植模型中试验化合物所用的方法描述如下。
体内人肿瘤异种移植模型MX-1人乳房癌和DLD-2人结肠癌最初分别得自手术摘除的原发的乳房肿瘤和结肠癌。将该人肿瘤器系通过连续继代移种保存在无胸腺的裸鼠中。MX-1人乳房癌是通过NCI形成的肿瘤。MX-1和DLD-2肿瘤模型已经充分鉴定。
用在这些试验中的小鼠是远系繁殖的带有光秃(nude)(nu/nu)基因的瑞士小鼠或BALB/c小鼠。在第0天，将重量在22-30g的雄性和雌性小鼠用0.2ml 25%肿瘤绞碎物接种，该绞碎物通过将皮下生长在继代移种小鼠中的新鲜的肿瘤组织在灭菌的生理盐水中绞碎来制备。接种后的7-10天内，小鼠出现大约重50mg可触知的肿瘤。将小鼠按肿瘤重量和性别配对，配成每10只一组并将试验化合物和溶媒对照静脉内给药(i.v)，每天一次，连续给药9天。给试验化合物后第5天，体重减少20%被认为是毒性的表现。肿瘤测量和体重每周记录一次。在第一次注射给药后的15-18天，将小鼠称重、处死，并切下肿瘤称重。
该试验化合物的效力据化合物处理的小鼠与溶媒处理的对照小鼠相比肿瘤生长抑制的程度来定。最初肿瘤的重量(mg)由经测径器测量的肿瘤尺寸(mm)用长椭球公式(肿瘤重量(mg)＝(长度×宽度2)/2)来计算。对于每个处理组和溶媒处理对照组来说，肿瘤的净重按照从第15天的最终肿瘤重量中减去最初的肿瘤重量来计算。结果用相对于对照的溶媒处理组的平均肿瘤重量减少的百分数来表示。
肿瘤生长抑制%＝[1- (处理的平均肿瘤重量)/(对照的平均肿瘤重量) ]×100活性判定使用国产肿瘤研究所(NCI)关于体内癌症模型中的活性的判断标准。实际的肿瘤回归(IR＝不完全回归;FR＝完全回归)显示出极好-显著的活性。在DLD-2测定中肿瘤生长抑制为≥90%被认为是好-极好，抑制达58-89%被认为是中等。证实为＜58%生长抑制的化合物被认为是无活性的。
实施例1化合物在MX-1人乳房肿瘤模型中显示出极好-显著的活性。此外，实施例1化合物在DLD-2人结肠肿瘤模型中显示出极好-显著的活性。预计本发明所有化合物均会显示出相似的活性。
本发明化合物在人乳房及结肠肿瘤的异种移植模型中所证实的有效性表明本发明化合物可用于治疗人身体上的固形肿瘤、具体讲是乳房肿瘤和结肠肿瘤，该结论得到了已发表的使临床前的试验结果与临床有效的抗癌药剂发生联系的分析结果的进一步支持。例如，参见Goldin和Venditti(1980)Recent Results Cancer Research 76176-191页;Goldin等人(1981)Eur.J.Cancer 17129-142页;Mattern等人(1988)Cancer and Metastasis Review 7263-284页;Jackson等人(1990)Cancer Investigations 839-47页。根据这些已发表的分析结果，本发明化合物显示出来的格外高的抗肿瘤活性提供了强有力的证据本发明所述的化合物在治疗人类癌症方面可能具有重要的治疗效用。
剂量和制剂本发明抗肿瘤化合物(活性成分)可通过任何能使活性成分与药剂的在哺乳动物体内的作用部位相接触的途径用以抑制肿瘤。它们可通过任何常规的可与药品一同使用的方法来服用，所述药品或者是单独的治疗活性成分，或者是存在于治疗活性成分的组合物中。它们可被单独服用，但一般与根据所选择的给药途径和标准的药用习惯所选择的药用载体一同使用。
所服用剂量应是活性成分的抑制肿瘤的剂量，当然应根据下述已知的因素来变动例如具体活性成分的药剂学特征及其给药方式和途径;病人的年令、健康状况及体重;症状的性质和程度;并行治疗的种类，治疗的频率以及期望的效果。活性成分的日剂量通常可以约为每公斤体重1-400毫克。一般来说，每公斤体重每天10-200毫克且最好是10-50毫克按每日分2-4次给药或以缓释的形式给药可有效地获得期望的效果。
适宜于体内使用的剂型(组合物)每单元含有约1.0-500毫克活性成分。在这些药用组合物中，活性成分的含量一般应约为组合物总重量的0.5-95重量%。
该活性成分可以固体剂型如胶囊、片剂和粉剂或液体剂型如酏剂、糖浆和悬浮剂口服给药，也可以灭菌液体剂型肠道外给药。
明胶胶囊含有活性成分和粉末状载体如乳糖、蔗糖、甘露糖醇、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。类似的稀释剂可用来制备压制片剂。片剂和胶囊都可制成缓释产品以保证药剂在几小时时间内连续释放。压制片剂可以用糖包衣或薄膜包衣以掩盖任何令人不愉快的味道和防止该片与空气接触，或者可将片剂制成肠溶包衣片以选择性地在胃肠道内崩解。
口服液体剂型可以含着色剂和矫味剂以使病人更容易接受。
一般来说，水、适当的油、盐水、葡萄糖水和相关的糖溶液以及脂肪族二元醇类如丙二醇或聚乙二醇类是肠道外用溶液的适宜的载体。用于肠道外给药的溶液最好含活性成分的水溶性盐、适宜的稳定剂，以及如果需要还含缓冲物质。抗氧剂如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸是适宜的稳定剂，它们可以单独使用或者结合起来使用。还使用柠檬酸及其盐和EDTA钠。此外，肠道外用溶液可以含防腐剂如氯化苯甲烃铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和氯丁醇。
在“Remington's Pharmaceutical Sciences”，(Mack出版公司)中描述了适宜的药用载体，该书为本领域标准的参考书。
用以使用本发明化合物的可用药用剂型可举例说明如下胶囊通过将100毫克粉末状活性成分、175毫克乳糖、24毫克滑石粉以及6毫克硬脂酸镁装入每个标准的由两部分组成的硬的明胶胶囊中而制成胶囊。
软明胶胶囊制备活性成分在豆油中的混合物并将该混合物用正位移泵注入明胶中形成含100毫克活性成分的软明胶胶囊。该胶囊被洗涤并干燥。
片剂片剂按常规方法制备，使剂量单元含100毫克活性成分、0.2毫克胶体二氧化硅、5毫克硬脂酸镁、275毫克微晶纤维素、11毫克玉米淀粉和98毫克乳糖。可以使用适当的包衣以增加可口性或延缓吸收。
注射剂适宜注射给药的肠道外用组合物通过将1.5%(重量)的活性成分在10%(体积)丙二醇的水溶液中搅拌来制备，该溶液用氯化钠制成等渗溶液并灭菌。
悬浮液将口服用水性悬浮液制成每5毫升中含100毫克活性成分细粉、200毫克羧甲基纤维素钠、5毫克苯甲酸钠、1.0克山梨醇溶液、U.S.P.以及0.025毫升香荚兰醛的制剂。
应当明白，在本公开中，指定的物质和条件在实施本发明时是重要的，但只要不妨碍本发明利益的实现，不排除未指定的物质和条件。
权利要求
1.式(i)化合物，或者其对映体或非对映体，或者其对映体或非对映体的混合物，以及其药学上可接受的盐；式(i)化合物结构如下 式中R11、R12、R3、R4、R5、和R6分别为H或CH3。
2.权利要求1的化合物，其中R11和R6是CH3;以及R12、R3、R4和R5是H。
3.按照权利要求2的并选自以下化合物的化合物及其药学上可接受的盐(R，R)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;(S，S)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;(外消旋体 内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮;和(内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮。
4.权利要求2的并选自下组中的化合物(R，R)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮二甲磺酸盐;(S，S)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮二甲磺酸盐;(外消旋体 内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮二甲磺酸盐;和(内消旋)-2-｛2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]-异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基｝-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮二甲磺酸盐。
5.含治疗有效量的权利要求1化合物和药用载体的药用组合物。
6.含治疗有效量的权利要求2化合物和药用载体的药用组合物。
7.含治疗有效量的权利要求3化合物和药用载体的药用组合物。
8.含治疗有效量的权利要求4化合物和药用载体的药用组合物。
9.哺乳动物结肠肿瘤的治疗方法，它包括给有这样的肿瘤的哺乳动物服用抑制肿瘤量的权利要求1化合物。
10.哺乳动物乳房肿瘤的治疗方法，它包括给有这样的肿瘤的哺乳动物服用抑制肿瘤量的权利要求1化合物。
11.式(ⅰ)化合物，或者其对映体或非对映体，或者其对映体或非对映体的混合物，以及其药学上可接受的盐的制备方法;式(ⅰ)化合物结构如下 式中R11、R12、R3、R4、R5、和R6分别为H或CH3;所述制备方法包括使等摩尔量的式(ⅱ)酐和式(ⅲ)酐和式(ⅳ)多胺在适当的溶剂、即基本上不与式(ⅰ)、(ⅱ)、(ⅲ)或(ⅳ)化合物反应的溶剂中，于室温至该溶剂的沸点这一温度范围内接触足够的时间以获得式(ⅰ)化合物;所述式(ⅱ)酐、式(ⅲ)酐和式(ⅳ)多胺的结构分别如下
12.式(ⅰ)化合物，或者其对映体或非对映体，或者其对映体或非对映体的混合物，以及其药学上可接受的盐的制备方法;式(ⅰ)化合物结构如下 式中R11、R12、R3、R4、R5、和R6分别为H或CH3;所述方法包括以下步骤(1)将下式多胺与式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐反应，得下式萘二甲酰亚胺 所述多胺的结构如下 式中R10是取代的芳基磺酰基保护基团;所述式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐的结构如下 (2)从步骤(1)的萘二甲酰亚胺中除去保护基团R10，得去保护的萘二甲酰亚胺;(3)将步骤(2)的去保护的萘二甲酰亚胺与式(ⅱ)酐或式(ⅲ)酐反应，得式(ⅰ)化合物。
全文摘要
本发明涉及上式不对称的单-3-硝基双萘二甲酰亚胺包括(R，R)-2-{2-[2-((2-(1，3-二氧代-1H-苯并[de]异喹啉-2-(3H)-基)-丙氨基))乙氨基]-1-甲基乙基}-5-硝基-1H-苯并[de]异喹啉-1，3-(2H)-二酮；涉及它们的制备方法；涉及包含它们的药用组合物以及用它们治疗哺乳动物的癌症、具体讲是固形癌肿的方法。
文档编号C07D221/14GK1101037SQ93109370
公开日1995年4月5日 申请日期1993年7月27日 优先权日1992年7月27日
发明者R·F·卡尔滕巴哈, J·-H·孙, R·J·切尔尼, S·P·塞兹 申请人:杜邦麦克制药有限公司
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