专利名称：抗血栓剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种可以防止在温血动物中形成凝血块的凝血酶抑制剂。具体地说，本发明涉及L-氮杂环丁烷-2-羧酸和L-精氨酸醛的二肽的N-苯基丙氨酰和N-苯基甘氨酰的衍生物，以及涉及它们的衍生物及其盐类。
为了抑制凝血酶，目前的治疗方法是服用肝素和香豆素，例如苄丙酮香豆素。这些药剂的作用机理已经成为广泛的研究课题。肝素是通过胃肠外给药的药物，它的用量必须小心地加以控制，以便防止在病人体内出现不必要的出血现象。香豆素通过阻止或抑制凝血酶原的生成而起作用，通常需要经过一定时间才能见效。有一种治疗(例如静脉炎)方法是先使用肝素，接着再使用香豆素。虽然这两种药物都很有效，但是仍然需要凝血酶抑制剂，它们能迅速地防止血块的形成并且不会妨碍血纤维蛋白溶酶在溶解已存在的血块方面的作用，也不妨碍已服用的溶解血块药物如组织纤维蛋白溶酶原激活剂。
本发明提供的凝血酶抑制剂可用下列的通式1表示。
其中，A是1)一种如下面通式的基团
其中R是如下面通式的苯基
其中，a和a′任意地为氢、低级烷基、低级烷氧基、卤原子、三氟甲基、羟基、羟甲基、氨基、或氨甲基;而n是0或1;或者，R是噻吩基、呋喃基、萘基、或者被低级烷基、低级烷氧基、卤原子、氨基、一或二(低级烷基)氨基、或羟基进行一或二取代的萘基;或者，R是环己二烯基、环己烯基、环己基或环戊基;
R1是氢、甲基或乙基;
B是低级烷基、低级烷氧基、羟基或者一种如下列通式的氨基其中，R2和R3任意地是氢或低级烷基，或者R2是氢，而R3是C1-C6的烷酰基、卤代的C2-C6的烷酰基，或者一种如下列通式的氧羰基其中，R4是C1-C6的烷基、C2-C6的链烯基、C3-C7的环烷基、苄基、硝基苄基、二苯基甲基，或者如上面所定义的苯基;但前提条件是，当R1是甲基或乙基时，B不能是甲基或乙基;
2)由下列通式2所代表的双环基团
其中，Q是一个由
、-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由-CH2-CH2-、
或
所代表的含两个碳的基团;
Y是一个由-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由
所代表的含两个碳的基团;其假定条件是，在Q和Y中，只能有一个而不能两个都是
或
;另外还有一个前提条件是，Q和Y中只有一个是含两个碳的基团;
R5是氢或一个如上面所定义的氧羰基R4-OC(O)-;以及R6是氢、低级烷基、低级烷氧基、卤原子、羟基、三氟甲基、羧基、氧基甲酰基或氨基磺酰基;而六元环中的虚线表示它是一个芳环或全氢环;
以及涉及药物学上可接受的，无毒性的上述化合物的盐类。
由上述式1代表的肽类是有用的抗血栓剂，并且它们还可用作组织纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)、链激酶或尿激酶中的添加剂。
本发明还包含由下列通式所代表的通式1的化合物的中间体
其中，A的定义与上述通式1所给的定义相同，而P是一种氨基保护基团，例如碳酸苄酯基、碳酸叔丁酯基、对甲苯磺酰基等类似基团。
上述的化合物可用常规的偶合方法来制备。例如，使Boc-D-苯基精氨酸与一种由L-氮杂环丁烷-2-羧酸和精氨酸的环状内酰胺形成的二肽进行偶合反应，以形成一种具有氨基保护基团的Boc-D-Phg-Azt-Arg内酰胺。其中的Arg内酰胺环可以通过还原作用来打开，而精氨酸上的氨基保护基团也可以除去，以生成一种Boc-D-Phg-Arg醛。上述的肽类可以转化成合适的盐类，例如乙酸盐、盐酸化物和硫酸盐。
本发明还提供了一种用于防止在人类和动物体内形成凝血块的方法以及在该方法中所用的药物制剂。
由通式1所代表的本发明的化合物是三肽类化合物，当AC(O)-是一个诸如D-苯基甘胺酰或D-苯基丙胺酰之类的氨基酸残基时，以及当A是一个氨基酸残基以外的基团，例如，当B是一个氨基或烷基氨基以外的基团时，该化合物就是氮杂环丁烷-2-羧酸和精氨酸醛(Azt-Arg-H)所生成二肽的N-酰基衍生物。在通式1中的A(C＝O)部分的不对称中心最好是R或RS，而氮杂环丁烷和精氨酸醛部分的不对称中心是L;但是，A(C＝O)的不对称中心也可以是S。
在通式1中所使用的符号的定义如下Arg是精氨酸，Pro是脯氨酸，Phe是苯基丙氨酸，Phg是苯基甘氨酸，以及Azt是氮杂环丁烷-2-羧酸。
低级烷基是指直链或支链的C1-C4烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基等。
低级烷氧基是指C1-C4的烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基等。
卤原子是指氟、氯、溴或碘。
一或二(低级烷基)氨基是指诸如甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、甲基乙基氨基、二乙基氨基、正丁基氨基、正丙基氨基之类的基团。
术语“C1-C6烷酰基”是指C1-C6羧酸的酰基部分，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、己酰基之类的基团。“卤原子取代的C2-C6烷酰基”是指至多由三个卤原子取代的上述的C2-C6烷酰基、氟乙酰基、4-溴丁酰基、3，3，3-三氟丙酰基、3，4-二氯丁酰基、3，3-二氯己酰基之类由氟、氯或溴取代的C1-C6烷酰基。“C1-C6烷基”是指直链和支链的烷基，例如前面所定义的C1-C4烷基，以及正戊基、异戊基、正己基、异己基等。“C2-C6链烯基”是指诸如乙烯基、烯丙基、丁烯基、异戊烯基和己烯基之类的烯烃基因。“C3-C7环烷基”是指具有3至7个碳原子环的环状烃类基团，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
按照在通式1中的定义，当A是一种(R)(R1)(B)C-基团时，R可以是一或二取代的苯基或苄基(n＝1)。这类基团的例子有苯基(a和a′＝H)、苄基(a和a′＝H，n＝1)、4-甲基苯基、3-乙基苯基、4-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、3-乙氧基苯基、2-甲氧基苯基、3-异丙氧基苯基、4-羟基苯基、4-羟基苄基、4-氯苯基、4-氯苄基、3-氯苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、3-溴苯基、4-氟苯基、3-三氟甲基苯基、4-三氟甲基苯基、3-三氟甲基苄基、4-羟甲基苯基、2-羟甲基苯基、3-氨基苯基、4-氨基苯基、3-氨基-4-氯苯基、2，4-二甲基苄基、3，4-二氯苯基、3-羟基-4-氟苯基、3-羟基-4-甲基苯基、3-甲氧基-4-羟基苯基、3-氯-4-乙氧基苯基之类的一或二取代的苯基。
当R是萘基或一或二取代的萘基时，R基的例子有1-萘基、2-萘基、6-甲氧基-2-萘基、8-羟基-1-萘基、8-氨基-2-萘基、4-甲基-1-萘基、6-氯-2-萘基、4-羟基-6-乙氧基-2-萘基、8-甲氧基-4-氯-2-萘基、6，8-二甲氧基-2-萘基、6-乙基-1-萘基、4-羟基-1-萘基、3-甲氧基-1-萘基等类似的萘基基团。
当B是一个氨基-N(R2)(R3)时，通式1所代表的基团的例子有氨基(R2＝R3＝H)、甲氨基、乙氨基、异丙氨基、二甲氨基之类的氨基;当R2是氢而R3是C1-C6的烷酰基或卤原子取代的C2-C6烷酰基时，这类基团的例子有乙酰基、丙酰基、己酰基、2-甲基丙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、2，3-二溴丙酰基等类似基团;当R2是氢，R3是一种氧羰基R4-O-C(O)-时，这类基团的例子有C1-C6烷氧羰基氨基，例如甲氧基羰基氨基、乙氧基羰基氨基、叔丁氧基羰基氨基、异戊氧基羰基氨基等;C2-C6链烯基氧羰基氨基，例如乙烯基氧羰基氨基、烯丙基氧羰基氨基、2-丁烯基氧羰基氨基等;C3-C7环烷基氧羰基氨基，例如环丙基氧羰基氨基、环戊基氧羰基氨基、环乙基氧羰基氨基等。由符号B所代表的氧羰基氨基还包括，例如苄氧基羰基氨基、4-硝基苄氧基羰基氨基、二苯基甲氧基羰基氨基、苯氧基羰基氨基，或者是一种取代的苯氧基羰基氨基，其中取代的苯基部分是如上所定义的苯基，等等。
在通式1中，当A是一种通式为(R)(R1)BC-的基团(基团1)时，基团A(C＝O)的例子有苯基甘氨酰基、苯基丙氨酰基、3-甲氧基苯基甘氨酰基、4-甲氧基苯基甘氨酰基、4-氯苯基甘氨酰基、3，4-二氯苯基甘氨酰基、4-氯苯基丙氨酰基、3-三氟甲基苯基甘氨酰基、N-(叔丁基氧羰基)苯基甘氨酰基、α-甲基苯乙酰基、α-乙基苯乙酰基、α-甲氧基苯乙酰基、异丙氧基苯乙酰基、1-萘基甘氨酰基、2-萘基甘氨酰基、N-(叔丁氧基羰基)-2-萘基甘氨酰基、2-噻吩基甘氨酰基、3-噻吩基甘氨酰基、N-(环戊基氧羰基)-2-噻吩基甘氨酰基、2-呋喃基甘氨酰基、N-乙基-2-呋喃基甘氨酰基、扁桃酰基、4-氯扁桃酰基、3-甲氧基扁桃酰基、α-羟基-α-(2-萘基)乙酰基、α-羟基-α-(2-噻吩基)乙酰基、1，4-环己二烯基甘氨酰基、1-环己烯基甘氨酰基、N-(叔丁氧基羰基)-1，4-环己二烯基甘氨酰基、环己基甘氨酰基之类的A(CO)基团。
当A是一种由上面通式2所代表的双环基团时，这时由通式1所代表的肽类的例子有D-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基羰基(D-1-Tiq-Azt-Arg-H)，D-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-基羰基、D-全氢异喹啉-1-基羰基，以及如下式所示的Azt-Arg-H的D-全氢异喹啉-3-基羰基衍生物、
2，3-二氢吲哚-3-基羰基、二氢异吲哚-1-基羰基(异吲哚-1-羰基)和六氢异吲哚-1-羰基以及如下式所示的Azt-Arg-H类的六氢异吲哚-3-羰基衍生物
符号R6和R5定义同上。R5最好是氢，而R6最好是氢、甲氧基、乙氧基、氯或甲基。
通式1所代表的化合物以酸加成盐的形式制备和使用，这是由于盐类具有较高的稳定性。较理想的应该是药物学上可接受的无毒性的盐类。
本发明中，肽类的药物学上可接受的盐包括那些使用无机酸和羧酸制得的酸加成盐。用于形成盐的无机酸有属于氢卤酸的盐酸和氢溴酸;以及磷酸和硫酸。羧酸盐由乙酸、丙酸、丙二酸、马来酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、苯甲酸、富马酸之类的羧酸制备。这些酸加成盐可按常规的方法来制备，例如可用酸来中和化合物1的游离碱来制备。较佳的酸加成盐是硫酸盐和盐酸盐。
本发明的较佳实施方案是由通式1所代表的化合物。其中，A是
其中的R是如下式所示的苯基
R1是氢，B是一个氨基-N(R2)(R3)。更理想的化合物是，其中的R2是氢而R3是一个氧羰基。R4O-C(O)-，还有一些较佳的化合物是，其中的R是萘基或取代的萘基，并且B和R1是如上所述的较佳基团。再有一些公式1所代表的较佳的化合物是，其中的B是氨基-N(R2)(R3)，R2是氢，R3是低级烷基，特别是甲基;R2是氢，R3是二氟乙酰基;R1是氢，R是一个如上所示的苯基，其中的n是0或1。
本发明的特别理想的实施方案包括当其中的A是一个双环基团(2)时的通式1的化合物。该实施方案的较佳的化合物是那些由通式1所代表的并且具有如下特征的化合物，即通式1中的A(C＝O)是1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基羰基和1，2，3，4-四氢异喹啉-3-基羰基。另外一个特别理想的实施方案包括由通式1所代表的并且具有如下特征的化合物，即其中的A是(R)(R1)(B)-C-，其中的R是如上所定义的，其中的n＝0或1的苯基;R1是甲基或乙基，B是一个氨基-N(R2)(R3)。
由通式1所代表的化合物可按肽偶合的现有方法来制备。根据这种方法，先制备出一种环状丙酰胺形式的精氨酸(b)，然后将它与一个在下式中示出的有氨基保护的氮杂环丁烷-2-羧酸(a)进行偶合反应，以获得一种二肽化合物(C)
其中的R代表一个氨基保护基团，如氨基甲酸苄酯(Cbz)基、氨基甲酸叔丁酯(BOC)基、对甲苯磺酸基等。所使用的氨保护基团最好是可以通过氢化作用或通过以中等强度的酸(例如三氟乙酸)或强酸(例如HF)来处理而除去的基团。不稳定的碱性保护基是不理想的。其他适用的氨基保护基团的例子记载于“Protective Groups In Organic Synthesis”，Second Edition，by Theodore W.Greene and Peter G.M.Wuts，第7章，第309-405页(1991)，John Wiley & Sons，Inc.，出版，此处将其列为参考。将Boc，或其他合适的保护基团从氮杂环丁烷环上的氮原子处除去，然后用一种所需的酰基或一种在通式1中以A(C＝O)表示的氨基酸酰基将所说的氮原子酰化，以获得如下所示的三肽(d)
用氢化锂铝在一种隋性溶剂中将偶合的Arg(P)内酰胺产品(d)还原，以除去内酰胺环并获得一种由通式表示的精氨酸醛形式的三肽，式中的Arg(P)-H表示一个氨基保护的精氨酸醛。
内酰胺形式的精氨酸可以通过氨基保护的精氨酸[Arg-OH]在分子内的偶合来获得。例如，首先用一种氯甲酸酯，例如氯甲酸乙酯或氯甲酸异丁酯将一种由下式所代表的Boc-Arg(Cbz)OH
转变成一种活泼的酯，例如一种活泼的混合酐。生成酯的反应是在有叔胺，例如N-甲基吗啉，存在下进行的。加入一种较强的叔胺，例如三乙胺，来进行内酰化反应，以获得一种如下式所示的内酰胺形式的二氨基保护的精氨酸
在使用如上图所示的氮杂环丁烷-2-羧酸来进行偶合反应之前，首先用三氟乙酸将Bco保护基选择性地除去，以获得所需的自由氨基。
另一种可供选择的用于制备本发明化合物的方法是用2-氮杂环丁烷羧酸来偶合ACOOH酸。然后用一种按上述的方法制备的，内酰胺形式的氨基保护的精氨酸来与所获的二肽偶合。再将所获的三肽还原，以打开内酰胺环得到一种如上所述的氨基保护的精氨酸的三肽。这一系列的偶合反应的具体例子列入下面的实施例3中。
当A是一个氨基酸的残基时，为了进行ACOOH化合物的偶合反应，必须首先将氨基酸上的氨基保护起来。可以使用一般用作临时性保护的或掩蔽氨基的常见氨基保护基。这类保护基的例子包括烷氧基、链烯氧基、环烷氧基、芳烷氧基和芳氧基羰基，例如乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、环己氧基羰基、金刚烷氧基羰基、三氯乙氧基羰基、苄氧基羰基、二苯基甲氧基羰基等。
当A是基团(R)(R1)(B)C-，而B是一个氨基-N(R2)(R3)，并且其中的R2是氢而R3是低级烷基时，由通式1所代表的化合物就可以使用一种其中的B是氨基的相应化合物，通过已知的烷基化的方法来制备。例如，N-甲基-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁烷基-L-精氨酸醛可以用甲醛通过还原烷基化反应来制备。如果用乙醛、丙醛或丁醛来代替甲醛，就可以获得N-乙基、N-正丙基和N-正丁基的烷基衍生物。还原烷基化反应是在惰性溶剂中和在有氢化催化剂，例如5%Pd/C，存在的条件下进行的，并且最好是在比较适中的温度与压力的条件下进行。还原烷基化反应可以按下述的方式进行，即将一种L-氮杂环丁烷基-L-精氨酸内酰胺，或者将L-氮杂环丁烷-2-羧酸偶合到氨基酸A(C＝O)-OH，例如，苯基甘氨酸或苯基丙氨酸的以及N-烷基衍生物分子上，然后再将所获的二肽与Arg(内酰胺)进行偶合。
当A是(R)(R1)(B)C-，而其中的R是环己二丁烯基或环己基，B是烷基氨基-N(R2)(R3)时，由通式1所代表的化合物就可以用氢氰硼化钠来还原一种由低级烷基醛形成的亚胺的方法来制备。同样，这类N-烷基化反应可以使用一种低级烷基碘和氢化钠来进行。
当A是一个双环的基团(2)时，通式1的化合物可以使用与上述相同的偶合方法来制备。例如，当A代表1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基(通式2，其中的Q＝-CH2CH2-，Y＝-CH-，R5＝R6＝H)时，通式1的肽可通过使用L-Arg(内酰胺)来酰化二肽D-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-酰基-L-氮杂环丁烷-2-羧酸的方法来制备。适用于偶合反应的较佳羧基衍生物是活泼的酯类，例如那些按常规的方法，用羟基苯并三唑或2，4，5-三氯苯酚来制得的酯类。其他可供使用的活泼衍生物包括一些酰基卤例如氯化物或溴化物，以及酰基叠氮。在酰化偶合反应中，四氢异喹啉(通式2，R5＝H)环上的氮要保护起来。例如，一种用氯甲酸异丁酯制得的N-Boc-1，2，3，4-四氢-1-羧基异喹啉的活泼酯可用于L-氮杂环丁烷-2-羧酸的酰化反应。然后将所获产品上的内酰胺基团转化成如上所述的醛的形式，以获得通式1的化合物，即Boc-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基羰基-Azt-Arg-H。
上述的偶合反应在冷的环境中进行，较佳温度范围在约-20℃至约15℃之间。偶合反应是在诸如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、四氢呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷等普通的惰性有机溶剂中进行。当使用一种酰化酸的活泼酯时，偶合反应通常要在无水的条件下进行。
当A是基团(R)(R1)(B)C-，而R1是甲基或乙基时，由通式1所代表的化合物就可使用一种二苯酮亚胺衍生物(其中的B是氨基)在有一种18-冠醚化合物存在的情况下与甲基碘或乙基碘和氢化钾一起进行反应的方法来制备。例如，将苯基甘氨酸甲酯与二苯酮亚胺反应，生成一种由(C6H5)(H)([C6H5]2C＝N-)C-COOCH3所代表的甘氨酸酯的二苯基甲基亚胺。然后在一种惰性溶剂中，在18-冠-6醚存在的情况下，使用一种至少为一当量的甲基碘或乙基碘和氨基钾来将所获的酯烷基化。然后将这种由(C6H5-)(CH3-)([C6H5]2C＝N-)C-COOCH3所代表的烷基化产物在6N HCl中水解，得到D-α-甲基或α-乙基-甘氨酸。
将本发明的化合物以酸加成盐的形式分离出来由上述酸制得的通式1化合物的盐类可作为药物上可接受的盐使用，以用于抗血栓剂的给药以及用来制成这类药物的制剂。可以制备出其他酸的加成盐并将其用于肽类化合物的分离与纯化过程中。例如，与诸如甲磺酸、正丁磺酸、对甲苯磺酸与萘磺酸等磺酸类形成的盐就可以这样使用。
用于纯化通式1所代表的化合物并同时用于制备一种所需稳定盐类的较佳方法记载于共同申请的，申请号为no.790884，申请日为1991年11月12日的申请文件中。根据该方法，采用C18反相色谱法来初步纯化所获的稳定的硫酸盐和盐酸合物，在该反相色谱法中，采用pH2.5的含硫酸或盐酸的水溶液作为水相，而以乙腈作为有机相。使用一种羟基型阴离子交换树脂(例如Bio-RadAG-IX8)来将酸性洗脱液的pH值调节到约为4-6之间。在调节好pH值之后，将硫酸三肽或盐酸三肽的溶液冷冻干燥，以获得一种干燥粉末形式的纯盐。在该操作过程的一个实施例中，将粗的D-Phg-L-Azt-L-Arg-H的硫酸盐溶于水中，再将此水溶液装载于一个Vydac C18RP-HPLC50cm×50cm的色谱柱中。A相对于B的浓度梯度为2-10%(A＝0.01%H2SO4;B＝乙腈)操作10小时。多级收集馏分并将含有产品的馏分汇集起来，用一种分析用RP-HPLC仪来测定。用一种羟基型的AG-1×8树脂(Bio-Rad，3300Ragatta Blvd.，Richmond，CA94804)来将汇集的馏分的pH值调节到pH4.0-4.5。将溶液过滤，然后将滤液冻干以获得一种硫酸盐形式的纯D-，L-，L-，三肽。
由本发明所提供的化合物(通式1)能抑制人体和动物体内的凝血酶的作用。对凝血酶的这种抑制作用可用在试管测试的方法来证明，在此测试程序中，将凝血酶水解成一种显色的基质，N-苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-异戊氨酰基-L-精氨酰基-对硝基酰苯胺，结果表明，凝血酶的酰胺酶活性受到抑制。
测试是在50μl的缓冲液(0.03MTris，0.15MNaCl，pH7.4)和25μl的凝血酶溶液(由0.21mg/ml的凝血酶粉末溶解于0.06MTris和0.3MNaCl的溶液中，pH7.4)以及150μl的一种浓度为0.25mg/ml的显色基质的水溶液。按不同的浓度加入这些被测试化合物的溶液(25μl)。通过在405nm处监测释放对硝基苯酰氨的反应来测定该基质的水解速率。将自由的凝血酶浓度对水解速率作图，绘制标准曲线。在具体的分析步骤中，借助于标准曲线将被测试化合物的水解速率转换成“自由凝血酶”的浓度。从每一次分析中所用的凝血酶的已知初始含量减去在该次分析中所测得的自由凝血酶(结合到被测试的化合物上)的数量。从加入的抑制剂(被试验的化合物)的摩尔数中减去被结合的凝血酶的摩尔数，于是求得在每次分析中的自由抑制剂的数量。Kass值是在凝血酶与被试验化合物(Ⅰ)之间的反应的一个假想平衡常数。
Kass＝ ([凝血酶I])/([(凝血酶)x(I)])Kass值是针对被试验化合物的某一个浓度范围求得的，而求得的平均值的单位为L/mol。
在上述的分别使用Boc-D-Phe-L-Azt-L-Arg-H和Boc-D-Phg-L-Azt-L-Arg-H的分析方法中，所测得的本发明化合物的凝血酶抑制活性以Kass值来表示时分别为6.5×107和14.9×107(L/mol)。
下面的表1列出了由通式1所代表的具体化合物所测得的Kass值表1凝血酶抑制水平化合物1Kass×106(L/mol)TFA-D-Phg(α-Et)-Azt-Arg-H 226Boc-D-Phg-Azt-Arg-H 149TFA-D-Phg(α-Me)-Azt-Arg-H 127Boc-D-Phe-Azt-Arg-H 65Ac-D-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 70Boc-D-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 61D-3-Tiq-Azt-Arg-H 35DL-1-Tiq-Azt-Arg-H 27Ac-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 15Boc-DL-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 11D-Phg＝苯基甘氨酰基Azt＝氮杂环丁基3-Tiq＝1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羰基1-Tiq＝1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羰基AC＝乙酰基TFA＝三氟乙酰基本发明的化合物能抑制凝血块的形成，但不含明显地影响机体原有的溶解凝血块的能力，例如，该化合物仅轻微抑制血纤维蛋白溶解作用。
在某一方面，本发明提供了一种用于抑制在人体内和动物体内形成凝血块的方法，该方法包括按能够有效地抑制凝血块的形成但不会产生毒性的剂量给所说的人或动物服用由通式1所代表的化合物。这种抗凝血化合物可以通过口服、胃肠外的方法给药，例如可以通过静脉输液(iv)、肌肉注射(im)或皮下注射(sc)的方式给药。根据具体的情况，例如根据患者的条件，看患者是需要紧急的处理或者是需要长期的治疗，可以决定给药方式是采用P.O或者i.V.。
抑制凝血块的一次有效剂量在约5-1000mg之间。这种剂量制度是可以变化的，例如，对于预防的目的来说，可以将一日的剂量作为一次服用，也可以将日剂量分成多次，例如分成3次或5次服用。在需要进行紧急治疗的情况下，可以将本发明的一种化合物以约0.1mg/Kg/h至约50mg/Kg/h，最好以约1.0mg/Kg/h至约20mg/Kg/h的速率进行静脉输液。
本发明的方法也可以与一些血块溶解剂，例如与组织纤维蛋白溶解酶原激活剂(tPA)、改进的tPA、链激素或尿激素结合使用。在已经形成了凝血块并且已经堵塞了动脉或静脉的情况下，不管是部分地堵塞或者全部堵塞，通常都必须使用凝血块溶解剂。本发明的一种化合物可以与血块溶解剂一起服用，也可以在服用血块溶解剂之后服用，以防止凝血块再生。
在实施该方法时，最好使用本发明较佳的一种化合物。例如可以使用如上所述的一种较佳化合物。特别理想的是N-Boc-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛。
本发明还提供了一种用于上述治疗方法的药物制剂。本发明的药物制剂包含抑制血块有效量的由通式1所代表的化合物以及一种药物学可接受的载体。对于口服药，可将抗凝血酶化合物制成胶囊或片剂，其中可能含有赋形剂(例如粘结剂)、润滑剂、雾化剂等。对于胃肠外给药来说，可将抗凝血酶化合物配在一种药物学上可接受的稀释剂中，例如配制在重量盐水(0.9%)、5%葡萄糖、Ringer′s溶液等稀释剂中。
本发明的抗凝血酶化合物可以制成单位剂量的制剂，所含的剂量可在约1mg至约1000mg之间。最好该化合物是以药物学上可接受的盐的形式使用，例如它可以是硫酸盐、乙酸盐或磷酸盐。一单位剂量制剂的一个例子是在一个10ml的无菌玻璃安瓿瓶中含有5mg的N-Boc-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的硫酸盐。一单位剂量制剂的另一个例子是在一个无菌安瓿瓶内的20ml等渗盐水中含有约10mg的N-甲基-D-苯丙氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的硫酸盐。
下面的实施例可用来进一步解释本发明，但不能认为是对本发明的限定。
在下列实施例中，所有的Rf值皆是用硅胶薄层色谱法来测定的，测定时使用Kieselgel60F-254(Merck，Darmstadt)在下列的溶剂体系中(A)三氯甲烷-甲醇-乙酸，135∶15∶1，V∶V∶V(B)乙酸乙酯-乙酸-无水乙醇，90∶90∶10，V∶V∶V(C)三氯甲烷-甲醇-乙酸，90∶30∶5，V∶V∶V在各实施例中，使用分析用的HPLC来监测色谱馏分、测定停留时间以及产品的纯度。测定方法如下使用一种Vydar C18反相色谱柱(0.46cm×10cm)的Water600E。采用A＝0.01M乙酸铵或者B＝乙腈的浓度梯度，在一台Pharmacia UV-M仪于214nm处进行监测。Pharmacia公司的地址为800Centennial Ave.，Piscataway，N.J.08854。
在各实施例中使用的缩写符号具有下列意义。
氨基酸Arg＝精氨酸;Azt＝氮杂环丁烷;Pro＝脯氨酸;Phg＝苯基甘氨酸;1-Tiq＝1，2，3，4-异喹啉-1-羰基Boc＝叔丁氧基羰基Bzl＝苄基Cbz＝苄氧基羰基DCC＝二环己基碳化二酰亚胺DMF＝二甲基甲酰胺DMSO＝二甲基亚砜FAB-MS＝快原子轰击质谱FD-MS＝场解吸质谱THF＝四氢呋喃TLC＝薄层色谱EtOAc＝乙酸乙酯n-BuOH＝正丁基乙醇实施例1N-(N-叔丁氧基羰基-D-苯基甘氨酰基)-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的二乙酸盐1)t-Boc和Cbz双保护基的精氨酸将N-(叔丁氧基羰基)精氨酸的盐酸合物[Boc-Arg(HCl)-OH]，(82.1g，250mmole)溶解于在一个三颈圆底烧瓶内的5NNaOH(240ml)中。将溶液冷却至-5℃，然后在55分钟内往其中滴加氯甲酸苄酯(143ml，1.0mole，4eq)。同时用5NNaOH(25ml)调节PH值在13.2-13.5之间。在滴加操作结束后以100ml水将其稀释，然后将反应混合物在-5℃下搅拌1小时。往其中加入乙醚(500ml)进行萃取，然后分离出水层，再用500ml一份的乙醚将水相萃取两次。用3N硫酸(560ml)将水层酸化至pH3.0，然后用550ml乙酸乙酯萃取。将水层再用乙酸乙酯萃取，然后将各次萃取液合并，用水洗涤，用硫酸镁将其干燥，然后在真空中将其蒸发至干，获得66.1g的双保护基精氨酸，Boc-Arg(Cbz)-OH(1)。
TLC Rf(C)0.43FD-MS408(M )1HNMR(CDCl3)δ1.42(s，9H)，1.61-1.91(m，4H)，3.23-3.41(m，2H)，4.17(d，1H)，5.21(s，2H)，5.62(d，1H)，7.30-7.42(m，6H)，8.37(m，1H)。
2)Boc-Arg(Z)-内酰胺将在上述步骤中制得的双保护基精氨酸(66.0g，0.162mole)溶解于230ml无水THF中，然后将此溶液在冰-丙酮浴中冷却至-10℃。往此溶液中加入三乙胺(23.5ml，1.05eq)，接着加入氯甲酸异丁酯(22.5ml，1.05eq)，然后将此混合物在-10℃下搅拌5分钟。接着加入N-甲基吗啉(18.7ml，1.05eq)并将反应混合物在-10℃下搅拌1小时，再在室温下搅拌1小时。将反应混合物倒入1升的冰水中并滤出生成的沉淀物，将沉淀物用冷水洗涤然后在真空中干燥。将所获产品，Boc-Arg(Z)-内酰胺(2)置于乙酸乙酯中重结晶，得到38.05g产品(60%产率)TLC Rf(A)0.77FD-MS391(MH )1HNMR(CDCl3)δ1.48(s，9H)，1.78-1.98(m，2H)，2.50(m，1H)，3.41(m，1H)，4.43(m，1H)，4.90(m，1H)，5.16(s，2H)，5.27(m，1H)，7.28-7.45(m，6H)，9.41(m，1H)，9.68(m，1H)。
3)Arg(Z)-内酰胺三氟乙酸盐将按上述步骤制得的Boc保护的Arg内酰胺(2)(38.0g，0.097mole)用三氟乙酸(200ml)和20ml的苯甲醚处理并在0℃下搅拌1小时。将反应混合物在不加热的情况下真空浓缩，然后往浓缩液中加入400ml乙醚。将固体滤出，再用乙醚洗涤，然后在真空中干燥，获得40.5g的产品3。
TLC Rf(C)0.29FD-MS291(MH )4)N-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-2-羧酸Boc-Azt-OH将L-氮杂环丁烷-2-羧酸(5g，0.0495mole)溶解于一种含有50ml2NNaOH(0.099mole)的50ml叔丁醇中。往所获溶液中加入碳酸氢二叔丁酯(12.9g，0.0594mole)，然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水和乙醚稀释并分离出水层。将水层用3NHCl酸化至pH2.3，然后用乙酸乙酯萃取。将萃取液用MgSO4干燥，然后在真空中蒸发浓缩，得到一种油状物。将此油状物置于乙醚/石油醚中结晶，得到8.6g的产品4(产率87%)。
FAB-MS202(MH )[α]D＝-120°(C＝0.5CH3OH)对C9H15NO4的元素分析理论值C，53.72;H，7.51;N，6.96实测值C，53.62;H，7.63;N，6.835)Boc-Azt-Arg(Z)-内酰胺将Boc-Azt-OH(4)(1.51g，7.5mmole)溶解于20mlDMF中，将此溶液冷却至-15℃，先加入0.83ml(7.5mmol)的N-甲基吗啉，接着再加入氯甲酸异丁酯(0.93ml，7.5mmol)。将此溶液在-15℃下搅拌2分钟。
在另一个容器中，将Arg(Z)-内酰胺三氟乙酸盐(3)(3.03g，7.5mmol)溶解于10mlDMF中，将此溶液冷却至0℃，然后往此溶液中加入N-甲基吗啉(0.83ml，7.5mmol)。将此溶液在0℃下搅拌2分钟，然后将其与上述所获的溶液混合。将反应混合物在-15℃下搅拌2小时，然后放置过夜使其慢慢升温至室温。往其中加入5%的碳酸氢钠溶液(5ml)并用175ml乙醚和150ml水稀释该反应混合物。分出有机层，先后用5%NaHCO3、水、1.5N柠檬酸和水洗涤该有机相。将洗涤过的有机层用MgSO4干燥并在真空中蒸发浓缩，得到3.5g的一种非晶形固体产品5(产率99%)TLC Rf(A)0.71FD-MS474(MH )
1HNMR(CDCl3)δ1.45(s，9H)，1.55-1.65(m，2H)，1.80-2.00(m，2H)，2.40-2.60(m，3H)，3.45(m，1H)，3.80(q，1H)，3.95(q，1H)，4.68(m，1H)，4.90(m，1H)，5.15(s，2H)，7.30-7.42(m，5H)6)Azt-Arg(Z)内酰胺三氟乙酸盐将Boc-Azt-Arg(Z)-内酰胺(5)(3.4g，7.2mmole)用25ml三氟乙酸和5ml苯甲醚处理(在0℃下搅拌30分钟)。在不加热的情况下将该反应混和物在真空中蒸发浓缩，然后用100ml乙醚处理该浓缩物。过滤出固体并用乙醚洗涤，然后将其在真空中干燥，得到3.5g的产品6(100%产率)。
FD-MS374(MH )7)Boc-D-Phg-Azt-Arg(Z)内酰胺将Boc-D-苯基甘氨酸(0.88g，3.5mmole)和Azt-Arg(Z)内酰胺三氟乙酸盐(6)(1.71g，3.5mmole)溶解于10ml DMF中并将此溶液冷却至0℃。往该溶液中加入N，N-二异丙基乙基胺(0.73mL，4.2mmol)，接着再加入1-羟苯三唑水合物(0.47g，3.5mmol)和二环己基碳化二亚胺(0.72g，3.5mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌4小时，再在室温下搅拌3天。将混合物过滤，然后将滤液溶解于200ml乙酸乙酯和100ml的5%NaHCO3中。分出有机层并先后用水、1.5N柠檬酸(100ml)、H2O(150ml)洗涤，然后用MgSO4干燥。将该有机相在真空中蒸发浓缩至干，获得1.2g固体状的产品7(产率57%)。
TLC Rf(A)0.65
FAB-MS607(MH )8)Boc-D-Phg-L-Azt-L-Arg-(Z)-H将Boc-D-Phg-L-Azt-L-Arg(Z)-内酰胺(7)(1.16g，1.9mmole)溶解于100ml无水THF中。将此溶液在N2气氛中冷却至-15℃，然后在3分钟内往其中滴加1M氢化锂铝的THF(1.9ml，1.9mmole)溶液。将反应混合物升温至0℃并搅拌1小时。在10分钟内慢慢地滴加5mlTHF和5ml的0.5NH2SO4。将反应混合物用100ml乙酸乙酯和50ml水稀释，然后将有机层分出并用MgSO4干燥。将干燥的有机层在真空中浓缩，得到0.97g产品(产率84%)FAB-MS609(MH )按下述的方法用化合物8来制备标题化合物。往含有化合物8(0.95g，1.56mmol)的120mlTHF和30ml水的溶液中加入乙酸(0.19ml，2eq)和0.5g的10%Pd/C催化剂。经由一根通气管将氮气通过悬浮液鼓泡5分钟，接着通入氢气鼓泡4小时，再通氮鼓泡5分钟。用滤垫将催化剂滤去。将滤液在真空中浓缩至体积为20ml并将此浓缩物冷冻干燥，获得0.822g固体状态的粗标题化合物肽。
将此标题化合物在一个5×25cm的C-18反相HPLC柱上(Vydac C-18，Separation Group，17434Mojave St.，Hesperia，CA92345)进行色谱分离，使用浓度梯度为10-50%乙腈/0.01M乙酸铵混合溶液分离9小时。将流出液分成多级收集并根据反相HPLC的分析曲线汇集所需的级分。将汇集的级分冻干，得到0.303g(41%产率)的纯标题化合物。
FAB-MS475(MH )[α]D＝-146.2°(C＝0.5，在1M乙酸中)停留时间RP-HPLC在5-50%乙腈的60分钟内＝48.5分钟实施例2N-(N-叔丁氧基羰基)-D-苯丙氨酰基-L-氮杂环丁基-4-精氨酸醛二乙酸盐采用在实施例1中所用的操作步骤、反应条件以及试剂，并用D-苯基丙氨酸代替实施例1中的D-苯基甘氨酸。可获得标题化合物。
FAB-MS489(MH )停留时间40.9分钟实施例3DL-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛硫酸盐1)DL-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羧酸。
将异喹啉-1-羧酸(12.5g，0.072mmol)在185ml冰乙酸中的溶液在一个Parr氢化装置中在室温下氢化24小时，在氢化时使用2g氧化铂催化剂和60磅/英寸2的氢气压力。将反应混合物通过一个过滤垫(硅藻土)过滤，将滤液在真空中蒸发至干。将固体的产品残渣用水研碎，过滤并干燥，获得8g(63%产率)的纯产品1。
FD-MS178(MH )1HNMR(DMSO)δ2.80-3.00(m，3H)，3.10-3.20(m，1H)，3.30-3.40(m，2H)，7.05-7.25(m，4H)，7.65-7.75(m，1H)。
2)叔丁氧基羰基-DL-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羧酸二环己基氨盐(Boc-DL-Tiq DCHA)往1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羧酸(1)(7.08g，0.040mole)的2NNaOH(40ml，0.080mole)溶液中加入40ml叔丁醇和碳酸氢二叔丁酯(10.5g，0.048mole)。在室温下约24小时后大部分的叔丁醇已从反应混合物中蒸发掉，将所获的水相用乙醚洗涤一次。将水层用2NHCl酸化至pH2.0，然后用乙酸乙酯萃取。将萃取液用MgSO4干燥并在真空中蒸发至干。将残渣(油状)溶解于乙醚中并向所获溶液中加入二环己基胺，DCHA，(7.9ml，0.040mole)。将溶液在4℃下放置4小时，将沉淀出来的盐过滤出来，用乙醚洗涤并在真空中干燥，获得15.7g(86%产率)的纯DCHA盐2。
FD-MS459(MH )对C27H42N2O4作元素分析理论值C，70.71;H，9.23;N，6.11实测值C，71.07;H，9.37;N，5.873)叔丁氧基羰基-DL-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-酰基-氮杂环丁烷-2-羧酸。(Boc-DL-1-Tiq-AztOH)。
将DCHA盐(2)(13.7g，30mmol)悬浮于200ml乙酸乙酯中，先后用1.5N柠檬酸和水洗涤该悬浮液，然后用MgSO4干燥。在真空中将该悬浮液蒸发至干并将油状残渣溶解于100ml乙酸乙酯中。将此溶液冷却至0℃，加入2，4，5-三氯苯酚(5.91g，30mmol)，随后再加入DCC(6.18g，30mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌5分钟，然后升温至室温再搅拌1.5小时。将反应混合物冷却至0℃，滤去沉淀并将母液在真空中蒸发至干。将油状残渣溶解于80ml吡啶中并往此溶液中加入2-氮杂环丁烷-2-羧酸(3.0g，30mmole)和4.2ml(30mmole)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌48小时并在真空中蒸发至干。将残渣溶解于乙酸乙酯/水中并用2NNaOH将溶液的pH值调节至9.5。分离出水层，用2NHCl将其酸化至pH2.0，然后用乙酸乙酯萃取。萃取液用MgSO4干燥并在真空中蒸发至干，获得10g的产品3。
将产品(3)溶解于三氯甲烷∶己烷(1∶1，V∶V)混和溶剂中，然后将此溶液加入Water′s Prep500A仪中已预先用己烷平衡过的硅胶柱中。用增加乙酸乙酯浓度梯度的方法洗脱产品(3)。收集各个流出液级分并根据TLC曲线分离出产品。将各级分合并，蒸发至干，获得4.8g(44%产率)的纯产品3。
TLC Rf(A)0.35FAB-MS361(MH )[α]D＝-20.6°(C＝0.5CH3OH)4)叔丁氧基羰基-DL-1，2，3，4-四氢-1-异喹啉酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸(Cbz)内酰胺(4)(Boc-DL-1-Tiq-Azt-Arg(Z)-内酰胺)。
在第一个烧瓶中将Boc-DL-1-Tiq-Azt(3)(5.3g，15mmol)溶解于50mlDMF中并将此溶液冷却至-15℃。加入N-甲基吗啉(1.65ml，15mmole)并将反应混合物在-15℃下搅拌2分钟。
在第2个烧瓶中将Arg(Z)-内酰胺以三氟乙酸盐(TFA)的形式(6.06g，15mmol)溶解于20mlDMF中并将此溶液冷却至0℃。向此冷溶液中加入N-甲基吗啉(1.98ml，在0℃下搅拌2分钟。然后将第2个烧瓶的内容物倒入第1个烧瓶中并将此反应混合物在-15℃下搅拌3小时。将此混合物放置过夜使其慢慢升温至室温，然后将其在真空中蒸发，得到一种油状物。往此油状物中加入乙酸乙酯(175ml)和1NNaHCO3(100ml)。分出有机层，先后用水、1.5N柠檬酸、水洗涤。将所获溶液用MgSO4干燥并在真空中蒸发至干，获得6.9g(73%产率)的一种无定形固体状的产品4，Boc-DL-1-Tiq-Azt(Z)-内酰胺。
TLC Rf(A)0.64FAB-MS633(MH )[α]D-62.5°(C＝0.5CHCl3)5)Boc-DL-1-Tiq-Azt-Arg(Z)-H(5)将Boc-DL-1-Tiq-Azt-Arg(Z)-内酰胺(4)(6.3g，10mmole)的85ml无水THF溶液在氮气氛中冷却至-15℃，然后在30分钟内往其中滴加1M氢化锂铝的THF(10ml，10mmol)溶液。在氢化物滴加完毕后，将反应混合物在-15℃下搅拌30分钟。接着在5分钟内往反应混合物中滴加10mlTHF和3.0ml0.5NH2SO4的混合溶液。将此混合物用200ml乙酸乙酯和200ml水稀释，分离出有机相，用MgSO4干燥并在真空中蒸发至干，得到6.0g(95%产率)的无定形固体状产品5。
TLC Rf(A)0.186)DL-1-Tiq-Azt-Arg-H硫酸盐往产品(5)(5.9g，9.3mmole)的60mlTHF和30ml水的溶液中加入10ml的1NH2SO4和2.0g的5%Pd/C催化剂。用一根气体导管将氮气通过该悬浮液鼓泡5分钟，接着用氢气鼓泡1.5小时，再用氮鼓泡5分钟。将催化剂滤出，并用Bio-Rad AG1-×8树脂(羟基型)将滤液的pH值调至4.0。将树脂滤掉并将滤液冷冻干燥得到4.5g干燥的固体。将此固体在0℃下用20ml三氟乙酸和5ml苯甲醚处理10分钟。将反应混合物搅拌10分钟，然后在不加热的情况下蒸发浓缩。往此浓缩物中加入乙醚(100ml)，收集生成的沉淀物并加以干燥，得到4.8g粗产品。将粗产品(4.8g)溶液于0.01%H2SO4中并将所获溶液加入串联在一起的两个5×25cm VydacC18树脂柱中。用浓度梯度不断增加的乙腈(2%至25%)溶液从吸附柱上将肽盐洗脱下来。根据上述分析用RP-HPLC来收集各流出液级分并汇集起来。使用羟基型的AG1-×8树脂(Bio Rad阴离子交换树脂，50-100目)将汇集的各级分溶液的pH值调节至pH4.0。将树脂滤出并将滤液冻干，得到1.36g(30%产率)纯的标题硫酸盐。
FAB-MS401(MH )HPLC停留时间23.1分钟实施例4D-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-酰基-L-氮杂环丁烷-2-酰基-L-精氨酸醛硫酸盐。(D-3-Tiq-Azt-Arg-H)按照实施例3的步骤来制备标题化合物，不同之处是以1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸来代替实施例3中的1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羧酸。
FAB-MS401(MH )停留时间18.5分钟实施例5-8表2中列出了本发明的代表性化合物的质谱数据与HPLC停留时间，其中的A是(R)(R1)(B)C-并且其中的R1是甲基，这些化合物是按照上述的实施例中的一般的偶合方法制备的。
表2实施例 停留时间序号化合物1FAB-MS(MH ) (分)25 N-Acetyl-D-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 431 20.46 N-Boc-D-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 489 36.37 N-Acetyl-DL-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 431 21.68 N-Boc-DL-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 489 39.01)硫酸盐2)通过如上所述的分析的RP-HPLC方法测得。
实施例9N-[N-三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酰基]-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛盐酸合物TFA-D-Phg(α-Me)-Azt-Arg-H·HCl按照实施例1中的步骤1和2中的操作程度来制备Boc-Arg(Z)-内酰胺3)HCl-Arg(Z)-内酰胺将Boc-Arg(Z)-内酰胺(2)(641g，1.64mol)在3小时内在-10℃下溶解于CH2Cl2(3L)中，然后向所获溶液中在30分钟内滴加经HCl(气)饱和过的EtOAc(7.2L)溶液。往其中加入乙醚(12L)，将沉淀物滤出并用乙醚洗涤，然后在真空中干燥，得到580g标题化合物(理论值的108%)TLC Rf(C)0.29;FD-MS291(MH )。
4)甲基-Nα二苯基亚甲基-DL-苯基甘氨酸酯将二苯酮亚胺(53.8g，297mmol)溶液于二氯甲烷(500ml)中并在室温下搅拌。往此溶液中加入DL-苯基甘氨酸甲酯盐酸合物(59.9g，297mmol)并在室温下搅拌反应48小时。将反应混合物用水(200ml)洗涤3次。分离出有机层，用MgSO4干燥，然后过滤并将滤液在真空中浓缩，得到一种透明的油状物。将此油状物置戊烷中结晶，得到标题化合物(98.5g，100%)FAB-MS330(MH );
对C22H19NO2作元素分析理论值C，80.22;H，5.81;N，4.25实测值C，80.50;H，5.93;N，4.145)甲基-Nα二苯基亚甲基-DL-(α-甲基)苯基甘氨酸酯将甲基-Nα二苯基亚甲基-DL-苯基甘氨酸酯(4)(14.8g，44.8mmol)的无水THF(200ml)溶液滴加入由18-冠-6(11.8g，44.8mmol)、氢化钾(11.2g，67.3mmol)、THF(100ml)组成的混合物中，并在氮气氛中搅拌。往此反应混合物中滴加甲基碘(6.0ml，89.7mmol)的THF(20ml)溶液。在滴加完毕后将反应混合物在室温下再搅拌1.5小时。往此反应混合物中滴加冰乙酸HOAc(7.0ml)、水(25ml)和THF(30ml)混合溶液。将反应混合物用乙酸乙酯和水稀释。将有机层分出，用水洗涤3次，然后用MgSO4干燥。将滤液在真空中浓缩，得到一种油状物。将这种粗的油状物置己烷中结晶，得到标题化合物(10.2g，66%)FAB-MS344(MH );
对C23H21NO2作元素分析理论值C，80.44;H，6.16;N，4.08，实测值C，80.40;H，6.26;N，4.036)DL-(α-甲基)苯基甘氨酸将甲基-Nα二苯基亚甲基-DL-(α-甲基)苯基甘氨酸酯(5)(72.4g，211mmol)的5NHCl(400ml)溶液回流(24小时)。将此溶液冷却至室温后过滤，用稀NH4OH溶液将滤液的pH值调节至pH5.8。将此水溶液在真空中浓缩直至开始结晶为止。将反应混合物在5℃下保存过夜，将沉淀物滤出，得到了标题化合物(22g，63%)FAB-MS166(MH )7)三氟乙酰-DL-(α-甲基)苯基甲氨酸往DL-(α-甲基)苯基甘氨酸(6)(21.9g，133mmol)的三氟乙酸(250ml)溶液中加入三氟乙酸酐(33.5g，159mmol)，然后将此反应混合物回流(2小时)。将反应混合物在真空中浓缩，得到一种油状物，将此油状物用EtOAc/H2O稀释。将有机层分出并用水洗涤3次，用MgSO4干燥，然后将所获滤液在真空中浓缩，得到一种白色固体状的标题化合物(25.3g，73%)，FAB-MS262(MH )。
8)三氯乙酰基-DL-(α-甲基)苯基甘氨酸-Azt-OH将三氟乙酰基-DL-(α-甲基)苯基甘氨酸(7)(8.0g，31mmol)溶解于EtOAc(80ml)中并将此溶液冷却至0℃。往此溶液中加入2，4，5-三氯苯酚(6.1g，31mmol)和二环己基碳化二亚胺(6.3g，31mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时，然后再在室温下搅拌1.5小时。滤去沉淀物并将滤液在真空中浓缩，得到一种油状物。将此油状物溶解于吡啶(60ml)中，并往其中加入L-氮杂环丁烷-2-羧酸(3.1g，31mmol)和三乙胺(4.3ml，31mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24小时。在真空中除去反应溶剂，得到一种油状物。将此油状物溶解于水(100ml)和乙醚(50ml)中并用2N NaOH将所获溶液的pH值调节至9.0。将分出的水相用乙醚萃取2次。分离出水层，往其中加入EtOAc(150ml)，用3N HCl将溶液的pH值调至3.0。分出有机层，用MgSO4干燥，将滤液在真空中蒸发浓缩，得到一种无定形的固体(9.3g，88%);FD-MS345(MH );[α]D＝-80°(C＝0.5/CHCl3)。
9)三氟乙酰-D-(α-甲基)苯基甘氨酸-Azt-Arg(Z)-内酰胺在烧瓶1中将三氟乙酰-DL-(α-甲基)-苯基甘氨酸-Azt-OH(8)(6.7g，19.9mmol)溶解于DMF(50ml)中，冷却至-15℃，然后加入N-甲基喹啉(2.5ml，21.9mmol)并接着加入氯甲酸异丁酯(2.6ml，19.9mmol)。将反应混合物在-15℃下搅拌2分钟。
在烧瓶2中将HCl·Arg(Z)-内酰胺(3)(6.5g，19.9mmol)溶解于DMF(40ml)中，冷却至0℃，并往其中加入二异丙基-乙胺(7.0ml，39.9mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌2分钟。
取部分烧瓶2的内容物加入烧瓶1中，然后将反应混合物在-15℃下搅拌4小时。然后在24小时内让反应混合物慢慢地升温至室温。往反应混合物中加入1NNaHCO3(18ml)并在室温下搅拌3分钟。用EtOAc(200ml)和水(100ml)稀释反应混合物，分离出有机层，将此有机层先后用1NNaHCO3、水和0.1NHCl洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并蒸发浓缩，获得一种无定形固体状的粗的标题化合物(11.5g，93%)。将粗的固体物质(11.5g)加入一台Water′s Prep500A型色谱仪内的两个硅胶柱中。使用一种由(A)CH2Cl2和(B)EtOAc组成的具有浓度梯度的体系来洗脱纯的化合物。所用的浓度梯度是指将EtOAc的浓度从0%增加至20%。分级收集流出液并根据TLC给出的曲线汇集所需的级分。将这些合并的级分在真空中浓缩，得到一种无定形固体状的标题化合物(3.02g，25%)TLC Rf(D)0.45;FAB-MS617(MH );[α]D＝-95.9°(C＝0.5CHCl3)。
10)三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酸-Azt-Arg(Z)-H在氮气氛下将三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酰基-Azt-Arg(Z)-内酰胺(9)(2.9g，4.8mmol)溶解于无水THF(60ml)中并将其装入一个烧瓶中。将反应混合物冷却至-70℃。往反应混合物中加入1M氢化锂铝的THF(5.0ml，5.0mmol)溶液，然后在5分钟内滴加THF(10ml)以将其稀释。将反应混合物在-70℃下搅拌30分钟，然后往其中慢慢滴加5mlTHF和5ml0.5NH2SO4的混合溶液。将反应混合物用EtOAc(100ml)和水(100ml)稀释，然后分离出有机层。将有机层干燥(MgSO4)并在真空中浓缩至干，得到一种无定形固体状的标题化合物(2.39g，81%)FAB-MS619(MH );
对C29H33N6O6作元素分析理论值C，56.31;H，5.38;N，13.58实测值C，56.10;H，5.51;N，13.3011)三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酸-Art-Arg-H·HCl将三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酸-Azt-Arg(Z)(10)(2.35g，3.8mmol)溶解于乙醇(110ml)、水(40ml)、1N HCl(5.7ml)溶液中，在有5%Pd/C催化剂(1.9g)的存在下和在室温及常压下氢化1.5小时。在反应结束后，过滤除去催化剂。在真空中将滤液浓缩至100ml。再往反应混合物中加入50ml水和100ml正丁醇。分出有机层并用正丁醇将水相萃取2次。将合并的有机萃取液在真空中浓缩至干。再往反应混合物中加入一种乙醚与异丙醚体积比1∶1的混合物(100ml)。滤出沉淀物并在真空中干燥，得到纯的标题化合物(1.4g，71%)FAB-MS485(MH );[α]D＝-77.6°(C＝0.5/0.1HCl)。
权利要求
1.一种用于制备如下通式化合物的方法
其中，A是1)一种如下面通式的基团
其中，R是一个如下通式的苯基
其中，a和a′任意地是氢、低级烷基、低级烷氧基、卤原子、三氟甲基、羟基、羟甲基、氨基、或氨甲基；以及n是0或1；或者R是噻吩基、呋喃基、萘基、或者被低级烷基、低级烷氧基、卤原子、氨基、一或二(低级烷基)氨基、或羟基进行一或二取代的萘基；或者R是环己二烯基、环己烯基、环己基或环戊基；R1是氢、甲基或乙基；B是低级烷基、低级烷氧基、羟基、或者是如下通式的一个氨基其中，R2和R3可任意地是氢或低级烷基，或者R2是氢，而R3是C1-C6烷酰基、卤原子取代的C2-C6烷酰基、或者是如下通式的氧羰基其中，R4是C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C3-C7环烷基、苄基、硝基苄基、二苯基甲基、或者一个如上述定义的苯基；前提条件是，当R1是甲基或乙基时，而B不能是甲基或乙基；2)如通式2的一个双环基团
其中，Q是一个由
、-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由-CH2-CH2-、-CH2
或CH2
所代表的含两个碳的基团；Y是一个由-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由
所代表的含两个碳的基团；其前提条件是，在Q和Y中，只能有一个而不能两个都是
或
；另外还有一个条件是，Q和Y中只有一个是含两个碳的基团；R5是氢或一个如上面所定义的氧羰基R4-OC(O)-；R6是氢、低级烷基、低级烷氧基、卤原子、羟基、三氟甲基、羧基、氨基甲酰基或氨基磺酰基；而六元环中的虚线表示它是一个芳环或全氢环；其特征在于该方法包含从如下通式的化合物中除去氨基保护基P
2.按权利要求1用于制备一种化合物的方法，在该化合物中，A是一个如下式的基团
其中，B是一个通式为-N(R2)(R3)的氨基，其中，R2是氢或C1-C4烷基，R3是一个氧羰基R4-O-C(O)-，其中，R4是C1-C6烷基，其中的R则是如下通式的一个基团
3.按权利要求1用于制备N-Boc-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的方法。
4.按权利要求1用于制备N-甲基-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的方法。
5.按权利要求1用于制备N-Boc-D-苯基丙氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的方法。
6.按权利要求1用于制备N-甲基-D-苯基丙氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的方法。
7.按权利要求1用于制备N-乙基-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的方法。
8.按权利要求1用于制备化合物的方法，在该化合物中，A是如下通式的一个双环基团
其中，Q是-CH2-CH2-或CH2
，以及Y是
或-CH2-。
9.按权利要求8用于制备如下通式化合物的方法
10.按权利要求8用于制备如下通式化合物的方法
11.按权利要求8用于制备如下通式化合物的方法
12.按权利要求8用于制备如下通式化合物的方法
13.按权利要求1用于制备一种化合物的方法，在该化合物中，A是
R1是甲基或乙基，R2是氢，R3是C1-C6烷酰基、卤原子取代的C2-C6烷酰基，或者一个氧羰基R4-O-C(O)-。
14.按权利要求13的方法，其中的化合物是N-乙酰基-D-Phg(α-CH3)-L-Azt-L-Arg-H。
15.按权利要求13的方法，其中的化合物是N-Boc-D-Phg(α-CH3)-L-Azt-t-Arg-H。
16.按权利要求13的方法，其中的化合物是三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛。
17.按权利要求13的方法，其中的化合物是三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛。
18.一种用于制备药物制剂的方法，该方法包括，将一种或多种药物学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂与一种如下通式的化合物掺合
其中，A是1)一种如下面通式的基团
其中，R是如下通式的一个苯基
其中，a和a′可任意地是氢、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤原子、三氟甲基、羟基、羟甲基、氨基、或氨甲基;n是0或1;或者R是噻吩基、呋喃基、萘基、或者被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤原子、氨基、一或二(C1-C4烷基)氨基、或羟基进行一或二取代的萘基;或者R是环己二烯基、环己烯基、环己基或环戊基;R1是氢、甲基或乙基;B是C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、或者具有如下通式的一个氨基其中，R2和R3可任意地是氢或C1-C4烷基，或者R2是氢，而R3是C1-C6烷酰基、卤原子取代的C2-C6烷酰基、或者是如下通式的氧羰基其中，R4是C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C3-C7环烷基、苄基、硝基苄基、二苯基甲基、或者一个如上述定义的苯基;其前提条件是，当R1是甲基或乙基时，B不能是甲基或乙基;2)如下列通式的一个双环基团
其中，Q是一个由
、-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由-CH2-CH2-、
或
所代表的含两个碳的基团;Y是一个由-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由
所代表的含两个碳的基团;其前提条件是，在Q和Y中，只能有一个而不能两个都是
或
;另外还有一个前提条件是，Q和Y中只能有一个是含两个碳的基团;R5是氢或一个如上面所定义的氧羰基R4-OC(O)-;R6是氢、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤原子、羟基、三氟甲基、羧基、氨基甲酰基或氨基磺酰基;而六元环中的虚线表示它是一个芳环或全氢环;或者是由它们制备的一种药物学上可接受的无毒性的盐。
全文摘要
提供了由通式所代表的凝血酶抑制剂，其中的A是，例如，苯基甘氨酰基、和苯基丙氨酰基、α-甲基苯基丙氨酸和α-甲基苯基甘氨酸(其中的氨基最好是被低级烷基、烷酰基或低级烷氧基羰基所取代)，或者是一个双环基团，如1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基。另外还提供了一种用于在人类和动物体内抑制形成凝血块的方法，和该方法所使用的药物制剂以及生产该抑制剂的中间产物。
文档编号C07K5/06GK1074438SQ9211438
公开日1993年7月21日 申请日期1992年11月11日 优先权日1991年11月12日
发明者R·T·舒曼 申请人:伊莱利利公司
技术领域：
本发明涉及一种可以防止在温血动物中形成凝血块的凝血酶抑制剂。具体地说，本发明涉及L-氮杂环丁烷-2-羧酸和L-精氨酸醛的二肽的N-苯基丙氨酰和N-苯基甘氨酰的衍生物，以及涉及它们的衍生物及其盐类。
为了抑制凝血酶，目前的治疗方法是服用肝素和香豆素，例如苄丙酮香豆素。这些药剂的作用机理已经成为广泛的研究课题。肝素是通过胃肠外给药的药物，它的用量必须小心地加以控制，以便防止在病人体内出现不必要的出血现象。香豆素通过阻止或抑制凝血酶原的生成而起作用，通常需要经过一定时间才能见效。有一种治疗(例如静脉炎)方法是先使用肝素，接着再使用香豆素。虽然这两种药物都很有效，但是仍然需要凝血酶抑制剂，它们能迅速地防止血块的形成并且不会妨碍血纤维蛋白溶酶在溶解已存在的血块方面的作用，也不妨碍已服用的溶解血块药物如组织纤维蛋白溶酶原激活剂。
本发明提供的凝血酶抑制剂可用下列的通式1表示。
其中，A是1)一种如下面通式的基团
其中R是如下面通式的苯基
其中，a和a′任意地为氢、低级烷基、低级烷氧基、卤原子、三氟甲基、羟基、羟甲基、氨基、或氨甲基;而n是0或1;或者，R是噻吩基、呋喃基、萘基、或者被低级烷基、低级烷氧基、卤原子、氨基、一或二(低级烷基)氨基、或羟基进行一或二取代的萘基;或者，R是环己二烯基、环己烯基、环己基或环戊基;
R1是氢、甲基或乙基;
B是低级烷基、低级烷氧基、羟基或者一种如下列通式的氨基其中，R2和R3任意地是氢或低级烷基，或者R2是氢，而R3是C1-C6的烷酰基、卤代的C2-C6的烷酰基，或者一种如下列通式的氧羰基其中，R4是C1-C6的烷基、C2-C6的链烯基、C3-C7的环烷基、苄基、硝基苄基、二苯基甲基，或者如上面所定义的苯基;但前提条件是，当R1是甲基或乙基时，B不能是甲基或乙基;
2)由下列通式2所代表的双环基团
其中，Q是一个由
、-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由-CH2-CH2-、
或
所代表的含两个碳的基团;
Y是一个由-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由
所代表的含两个碳的基团;其假定条件是，在Q和Y中，只能有一个而不能两个都是
或
;另外还有一个前提条件是，Q和Y中只有一个是含两个碳的基团;
R5是氢或一个如上面所定义的氧羰基R4-OC(O)-;以及R6是氢、低级烷基、低级烷氧基、卤原子、羟基、三氟甲基、羧基、氧基甲酰基或氨基磺酰基;而六元环中的虚线表示它是一个芳环或全氢环;
以及涉及药物学上可接受的，无毒性的上述化合物的盐类。
由上述式1代表的肽类是有用的抗血栓剂，并且它们还可用作组织纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)、链激酶或尿激酶中的添加剂。
本发明还包含由下列通式所代表的通式1的化合物的中间体
其中，A的定义与上述通式1所给的定义相同，而P是一种氨基保护基团，例如碳酸苄酯基、碳酸叔丁酯基、对甲苯磺酰基等类似基团。
上述的化合物可用常规的偶合方法来制备。例如，使Boc-D-苯基精氨酸与一种由L-氮杂环丁烷-2-羧酸和精氨酸的环状内酰胺形成的二肽进行偶合反应，以形成一种具有氨基保护基团的Boc-D-Phg-Azt-Arg内酰胺。其中的Arg内酰胺环可以通过还原作用来打开，而精氨酸上的氨基保护基团也可以除去，以生成一种Boc-D-Phg-Arg醛。上述的肽类可以转化成合适的盐类，例如乙酸盐、盐酸化物和硫酸盐。
本发明还提供了一种用于防止在人类和动物体内形成凝血块的方法以及在该方法中所用的药物制剂。
由通式1所代表的本发明的化合物是三肽类化合物，当AC(O)-是一个诸如D-苯基甘胺酰或D-苯基丙胺酰之类的氨基酸残基时，以及当A是一个氨基酸残基以外的基团，例如，当B是一个氨基或烷基氨基以外的基团时，该化合物就是氮杂环丁烷-2-羧酸和精氨酸醛(Azt-Arg-H)所生成二肽的N-酰基衍生物。在通式1中的A(C＝O)部分的不对称中心最好是R或RS，而氮杂环丁烷和精氨酸醛部分的不对称中心是L;但是，A(C＝O)的不对称中心也可以是S。
在通式1中所使用的符号的定义如下Arg是精氨酸，Pro是脯氨酸，Phe是苯基丙氨酸，Phg是苯基甘氨酸，以及Azt是氮杂环丁烷-2-羧酸。
低级烷基是指直链或支链的C1-C4烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基等。
低级烷氧基是指C1-C4的烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基等。
卤原子是指氟、氯、溴或碘。
一或二(低级烷基)氨基是指诸如甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、甲基乙基氨基、二乙基氨基、正丁基氨基、正丙基氨基之类的基团。
术语“C1-C6烷酰基”是指C1-C6羧酸的酰基部分，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、己酰基之类的基团。“卤原子取代的C2-C6烷酰基”是指至多由三个卤原子取代的上述的C2-C6烷酰基、氟乙酰基、4-溴丁酰基、3，3，3-三氟丙酰基、3，4-二氯丁酰基、3，3-二氯己酰基之类由氟、氯或溴取代的C1-C6烷酰基。“C1-C6烷基”是指直链和支链的烷基，例如前面所定义的C1-C4烷基，以及正戊基、异戊基、正己基、异己基等。“C2-C6链烯基”是指诸如乙烯基、烯丙基、丁烯基、异戊烯基和己烯基之类的烯烃基因。“C3-C7环烷基”是指具有3至7个碳原子环的环状烃类基团，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
按照在通式1中的定义，当A是一种(R)(R1)(B)C-基团时，R可以是一或二取代的苯基或苄基(n＝1)。这类基团的例子有苯基(a和a′＝H)、苄基(a和a′＝H，n＝1)、4-甲基苯基、3-乙基苯基、4-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、3-乙氧基苯基、2-甲氧基苯基、3-异丙氧基苯基、4-羟基苯基、4-羟基苄基、4-氯苯基、4-氯苄基、3-氯苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、3-溴苯基、4-氟苯基、3-三氟甲基苯基、4-三氟甲基苯基、3-三氟甲基苄基、4-羟甲基苯基、2-羟甲基苯基、3-氨基苯基、4-氨基苯基、3-氨基-4-氯苯基、2，4-二甲基苄基、3，4-二氯苯基、3-羟基-4-氟苯基、3-羟基-4-甲基苯基、3-甲氧基-4-羟基苯基、3-氯-4-乙氧基苯基之类的一或二取代的苯基。
当R是萘基或一或二取代的萘基时，R基的例子有1-萘基、2-萘基、6-甲氧基-2-萘基、8-羟基-1-萘基、8-氨基-2-萘基、4-甲基-1-萘基、6-氯-2-萘基、4-羟基-6-乙氧基-2-萘基、8-甲氧基-4-氯-2-萘基、6，8-二甲氧基-2-萘基、6-乙基-1-萘基、4-羟基-1-萘基、3-甲氧基-1-萘基等类似的萘基基团。
当B是一个氨基-N(R2)(R3)时，通式1所代表的基团的例子有氨基(R2＝R3＝H)、甲氨基、乙氨基、异丙氨基、二甲氨基之类的氨基;当R2是氢而R3是C1-C6的烷酰基或卤原子取代的C2-C6烷酰基时，这类基团的例子有乙酰基、丙酰基、己酰基、2-甲基丙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、2，3-二溴丙酰基等类似基团;当R2是氢，R3是一种氧羰基R4-O-C(O)-时，这类基团的例子有C1-C6烷氧羰基氨基，例如甲氧基羰基氨基、乙氧基羰基氨基、叔丁氧基羰基氨基、异戊氧基羰基氨基等;C2-C6链烯基氧羰基氨基，例如乙烯基氧羰基氨基、烯丙基氧羰基氨基、2-丁烯基氧羰基氨基等;C3-C7环烷基氧羰基氨基，例如环丙基氧羰基氨基、环戊基氧羰基氨基、环乙基氧羰基氨基等。由符号B所代表的氧羰基氨基还包括，例如苄氧基羰基氨基、4-硝基苄氧基羰基氨基、二苯基甲氧基羰基氨基、苯氧基羰基氨基，或者是一种取代的苯氧基羰基氨基，其中取代的苯基部分是如上所定义的苯基，等等。
在通式1中，当A是一种通式为(R)(R1)BC-的基团(基团1)时，基团A(C＝O)的例子有苯基甘氨酰基、苯基丙氨酰基、3-甲氧基苯基甘氨酰基、4-甲氧基苯基甘氨酰基、4-氯苯基甘氨酰基、3，4-二氯苯基甘氨酰基、4-氯苯基丙氨酰基、3-三氟甲基苯基甘氨酰基、N-(叔丁基氧羰基)苯基甘氨酰基、α-甲基苯乙酰基、α-乙基苯乙酰基、α-甲氧基苯乙酰基、异丙氧基苯乙酰基、1-萘基甘氨酰基、2-萘基甘氨酰基、N-(叔丁氧基羰基)-2-萘基甘氨酰基、2-噻吩基甘氨酰基、3-噻吩基甘氨酰基、N-(环戊基氧羰基)-2-噻吩基甘氨酰基、2-呋喃基甘氨酰基、N-乙基-2-呋喃基甘氨酰基、扁桃酰基、4-氯扁桃酰基、3-甲氧基扁桃酰基、α-羟基-α-(2-萘基)乙酰基、α-羟基-α-(2-噻吩基)乙酰基、1，4-环己二烯基甘氨酰基、1-环己烯基甘氨酰基、N-(叔丁氧基羰基)-1，4-环己二烯基甘氨酰基、环己基甘氨酰基之类的A(CO)基团。
当A是一种由上面通式2所代表的双环基团时，这时由通式1所代表的肽类的例子有D-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基羰基(D-1-Tiq-Azt-Arg-H)，D-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-基羰基、D-全氢异喹啉-1-基羰基，以及如下式所示的Azt-Arg-H的D-全氢异喹啉-3-基羰基衍生物、
2，3-二氢吲哚-3-基羰基、二氢异吲哚-1-基羰基(异吲哚-1-羰基)和六氢异吲哚-1-羰基以及如下式所示的Azt-Arg-H类的六氢异吲哚-3-羰基衍生物
符号R6和R5定义同上。R5最好是氢，而R6最好是氢、甲氧基、乙氧基、氯或甲基。
通式1所代表的化合物以酸加成盐的形式制备和使用，这是由于盐类具有较高的稳定性。较理想的应该是药物学上可接受的无毒性的盐类。
本发明中，肽类的药物学上可接受的盐包括那些使用无机酸和羧酸制得的酸加成盐。用于形成盐的无机酸有属于氢卤酸的盐酸和氢溴酸;以及磷酸和硫酸。羧酸盐由乙酸、丙酸、丙二酸、马来酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、苯甲酸、富马酸之类的羧酸制备。这些酸加成盐可按常规的方法来制备，例如可用酸来中和化合物1的游离碱来制备。较佳的酸加成盐是硫酸盐和盐酸盐。
本发明的较佳实施方案是由通式1所代表的化合物。其中，A是
其中的R是如下式所示的苯基
R1是氢，B是一个氨基-N(R2)(R3)。更理想的化合物是，其中的R2是氢而R3是一个氧羰基。R4O-C(O)-，还有一些较佳的化合物是，其中的R是萘基或取代的萘基，并且B和R1是如上所述的较佳基团。再有一些公式1所代表的较佳的化合物是，其中的B是氨基-N(R2)(R3)，R2是氢，R3是低级烷基，特别是甲基;R2是氢，R3是二氟乙酰基;R1是氢，R是一个如上所示的苯基，其中的n是0或1。
本发明的特别理想的实施方案包括当其中的A是一个双环基团(2)时的通式1的化合物。该实施方案的较佳的化合物是那些由通式1所代表的并且具有如下特征的化合物，即通式1中的A(C＝O)是1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基羰基和1，2，3，4-四氢异喹啉-3-基羰基。另外一个特别理想的实施方案包括由通式1所代表的并且具有如下特征的化合物，即其中的A是(R)(R1)(B)-C-，其中的R是如上所定义的，其中的n＝0或1的苯基;R1是甲基或乙基，B是一个氨基-N(R2)(R3)。
由通式1所代表的化合物可按肽偶合的现有方法来制备。根据这种方法，先制备出一种环状丙酰胺形式的精氨酸(b)，然后将它与一个在下式中示出的有氨基保护的氮杂环丁烷-2-羧酸(a)进行偶合反应，以获得一种二肽化合物(C)
其中的R代表一个氨基保护基团，如氨基甲酸苄酯(Cbz)基、氨基甲酸叔丁酯(BOC)基、对甲苯磺酸基等。所使用的氨保护基团最好是可以通过氢化作用或通过以中等强度的酸(例如三氟乙酸)或强酸(例如HF)来处理而除去的基团。不稳定的碱性保护基是不理想的。其他适用的氨基保护基团的例子记载于“Protective Groups In Organic Synthesis”，Second Edition，by Theodore W.Greene and Peter G.M.Wuts，第7章，第309-405页(1991)，John Wiley & Sons，Inc.，出版，此处将其列为参考。将Boc，或其他合适的保护基团从氮杂环丁烷环上的氮原子处除去，然后用一种所需的酰基或一种在通式1中以A(C＝O)表示的氨基酸酰基将所说的氮原子酰化，以获得如下所示的三肽(d)
用氢化锂铝在一种隋性溶剂中将偶合的Arg(P)内酰胺产品(d)还原，以除去内酰胺环并获得一种由通式表示的精氨酸醛形式的三肽，式中的Arg(P)-H表示一个氨基保护的精氨酸醛。
内酰胺形式的精氨酸可以通过氨基保护的精氨酸[Arg-OH]在分子内的偶合来获得。例如，首先用一种氯甲酸酯，例如氯甲酸乙酯或氯甲酸异丁酯将一种由下式所代表的Boc-Arg(Cbz)OH
转变成一种活泼的酯，例如一种活泼的混合酐。生成酯的反应是在有叔胺，例如N-甲基吗啉，存在下进行的。加入一种较强的叔胺，例如三乙胺，来进行内酰化反应，以获得一种如下式所示的内酰胺形式的二氨基保护的精氨酸
在使用如上图所示的氮杂环丁烷-2-羧酸来进行偶合反应之前，首先用三氟乙酸将Bco保护基选择性地除去，以获得所需的自由氨基。
另一种可供选择的用于制备本发明化合物的方法是用2-氮杂环丁烷羧酸来偶合ACOOH酸。然后用一种按上述的方法制备的，内酰胺形式的氨基保护的精氨酸来与所获的二肽偶合。再将所获的三肽还原，以打开内酰胺环得到一种如上所述的氨基保护的精氨酸的三肽。这一系列的偶合反应的具体例子列入下面的实施例3中。
当A是一个氨基酸的残基时，为了进行ACOOH化合物的偶合反应，必须首先将氨基酸上的氨基保护起来。可以使用一般用作临时性保护的或掩蔽氨基的常见氨基保护基。这类保护基的例子包括烷氧基、链烯氧基、环烷氧基、芳烷氧基和芳氧基羰基，例如乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、环己氧基羰基、金刚烷氧基羰基、三氯乙氧基羰基、苄氧基羰基、二苯基甲氧基羰基等。
当A是基团(R)(R1)(B)C-，而B是一个氨基-N(R2)(R3)，并且其中的R2是氢而R3是低级烷基时，由通式1所代表的化合物就可以使用一种其中的B是氨基的相应化合物，通过已知的烷基化的方法来制备。例如，N-甲基-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁烷基-L-精氨酸醛可以用甲醛通过还原烷基化反应来制备。如果用乙醛、丙醛或丁醛来代替甲醛，就可以获得N-乙基、N-正丙基和N-正丁基的烷基衍生物。还原烷基化反应是在惰性溶剂中和在有氢化催化剂，例如5%Pd/C，存在的条件下进行的，并且最好是在比较适中的温度与压力的条件下进行。还原烷基化反应可以按下述的方式进行，即将一种L-氮杂环丁烷基-L-精氨酸内酰胺，或者将L-氮杂环丁烷-2-羧酸偶合到氨基酸A(C＝O)-OH，例如，苯基甘氨酸或苯基丙氨酸的以及N-烷基衍生物分子上，然后再将所获的二肽与Arg(内酰胺)进行偶合。
当A是(R)(R1)(B)C-，而其中的R是环己二丁烯基或环己基，B是烷基氨基-N(R2)(R3)时，由通式1所代表的化合物就可以用氢氰硼化钠来还原一种由低级烷基醛形成的亚胺的方法来制备。同样，这类N-烷基化反应可以使用一种低级烷基碘和氢化钠来进行。
当A是一个双环的基团(2)时，通式1的化合物可以使用与上述相同的偶合方法来制备。例如，当A代表1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基(通式2，其中的Q＝-CH2CH2-，Y＝-CH-，R5＝R6＝H)时，通式1的肽可通过使用L-Arg(内酰胺)来酰化二肽D-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-酰基-L-氮杂环丁烷-2-羧酸的方法来制备。适用于偶合反应的较佳羧基衍生物是活泼的酯类，例如那些按常规的方法，用羟基苯并三唑或2，4，5-三氯苯酚来制得的酯类。其他可供使用的活泼衍生物包括一些酰基卤例如氯化物或溴化物，以及酰基叠氮。在酰化偶合反应中，四氢异喹啉(通式2，R5＝H)环上的氮要保护起来。例如，一种用氯甲酸异丁酯制得的N-Boc-1，2，3，4-四氢-1-羧基异喹啉的活泼酯可用于L-氮杂环丁烷-2-羧酸的酰化反应。然后将所获产品上的内酰胺基团转化成如上所述的醛的形式，以获得通式1的化合物，即Boc-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基羰基-Azt-Arg-H。
上述的偶合反应在冷的环境中进行，较佳温度范围在约-20℃至约15℃之间。偶合反应是在诸如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、四氢呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷等普通的惰性有机溶剂中进行。当使用一种酰化酸的活泼酯时，偶合反应通常要在无水的条件下进行。
当A是基团(R)(R1)(B)C-，而R1是甲基或乙基时，由通式1所代表的化合物就可使用一种二苯酮亚胺衍生物(其中的B是氨基)在有一种18-冠醚化合物存在的情况下与甲基碘或乙基碘和氢化钾一起进行反应的方法来制备。例如，将苯基甘氨酸甲酯与二苯酮亚胺反应，生成一种由(C6H5)(H)([C6H5]2C＝N-)C-COOCH3所代表的甘氨酸酯的二苯基甲基亚胺。然后在一种惰性溶剂中，在18-冠-6醚存在的情况下，使用一种至少为一当量的甲基碘或乙基碘和氨基钾来将所获的酯烷基化。然后将这种由(C6H5-)(CH3-)([C6H5]2C＝N-)C-COOCH3所代表的烷基化产物在6N HCl中水解，得到D-α-甲基或α-乙基-甘氨酸。
将本发明的化合物以酸加成盐的形式分离出来由上述酸制得的通式1化合物的盐类可作为药物上可接受的盐使用，以用于抗血栓剂的给药以及用来制成这类药物的制剂。可以制备出其他酸的加成盐并将其用于肽类化合物的分离与纯化过程中。例如，与诸如甲磺酸、正丁磺酸、对甲苯磺酸与萘磺酸等磺酸类形成的盐就可以这样使用。
用于纯化通式1所代表的化合物并同时用于制备一种所需稳定盐类的较佳方法记载于共同申请的，申请号为no.790884，申请日为1991年11月12日的申请文件中。根据该方法，采用C18反相色谱法来初步纯化所获的稳定的硫酸盐和盐酸合物，在该反相色谱法中，采用pH2.5的含硫酸或盐酸的水溶液作为水相，而以乙腈作为有机相。使用一种羟基型阴离子交换树脂(例如Bio-RadAG-IX8)来将酸性洗脱液的pH值调节到约为4-6之间。在调节好pH值之后，将硫酸三肽或盐酸三肽的溶液冷冻干燥，以获得一种干燥粉末形式的纯盐。在该操作过程的一个实施例中，将粗的D-Phg-L-Azt-L-Arg-H的硫酸盐溶于水中，再将此水溶液装载于一个Vydac C18RP-HPLC50cm×50cm的色谱柱中。A相对于B的浓度梯度为2-10%(A＝0.01%H2SO4;B＝乙腈)操作10小时。多级收集馏分并将含有产品的馏分汇集起来，用一种分析用RP-HPLC仪来测定。用一种羟基型的AG-1×8树脂(Bio-Rad，3300Ragatta Blvd.，Richmond，CA94804)来将汇集的馏分的pH值调节到pH4.0-4.5。将溶液过滤，然后将滤液冻干以获得一种硫酸盐形式的纯D-，L-，L-，三肽。
由本发明所提供的化合物(通式1)能抑制人体和动物体内的凝血酶的作用。对凝血酶的这种抑制作用可用在试管测试的方法来证明，在此测试程序中，将凝血酶水解成一种显色的基质，N-苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-异戊氨酰基-L-精氨酰基-对硝基酰苯胺，结果表明，凝血酶的酰胺酶活性受到抑制。
测试是在50μl的缓冲液(0.03MTris，0.15MNaCl，pH7.4)和25μl的凝血酶溶液(由0.21mg/ml的凝血酶粉末溶解于0.06MTris和0.3MNaCl的溶液中，pH7.4)以及150μl的一种浓度为0.25mg/ml的显色基质的水溶液。按不同的浓度加入这些被测试化合物的溶液(25μl)。通过在405nm处监测释放对硝基苯酰氨的反应来测定该基质的水解速率。将自由的凝血酶浓度对水解速率作图，绘制标准曲线。在具体的分析步骤中，借助于标准曲线将被测试化合物的水解速率转换成“自由凝血酶”的浓度。从每一次分析中所用的凝血酶的已知初始含量减去在该次分析中所测得的自由凝血酶(结合到被测试的化合物上)的数量。从加入的抑制剂(被试验的化合物)的摩尔数中减去被结合的凝血酶的摩尔数，于是求得在每次分析中的自由抑制剂的数量。Kass值是在凝血酶与被试验化合物(Ⅰ)之间的反应的一个假想平衡常数。
Kass＝ ([凝血酶I])/([(凝血酶)x(I)])Kass值是针对被试验化合物的某一个浓度范围求得的，而求得的平均值的单位为L/mol。
在上述的分别使用Boc-D-Phe-L-Azt-L-Arg-H和Boc-D-Phg-L-Azt-L-Arg-H的分析方法中，所测得的本发明化合物的凝血酶抑制活性以Kass值来表示时分别为6.5×107和14.9×107(L/mol)。
下面的表1列出了由通式1所代表的具体化合物所测得的Kass值表1凝血酶抑制水平化合物1Kass×106(L/mol)TFA-D-Phg(α-Et)-Azt-Arg-H 226Boc-D-Phg-Azt-Arg-H 149TFA-D-Phg(α-Me)-Azt-Arg-H 127Boc-D-Phe-Azt-Arg-H 65Ac-D-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 70Boc-D-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 61D-3-Tiq-Azt-Arg-H 35DL-1-Tiq-Azt-Arg-H 27Ac-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 15Boc-DL-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 11D-Phg＝苯基甘氨酰基Azt＝氮杂环丁基3-Tiq＝1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羰基1-Tiq＝1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羰基AC＝乙酰基TFA＝三氟乙酰基本发明的化合物能抑制凝血块的形成，但不含明显地影响机体原有的溶解凝血块的能力，例如，该化合物仅轻微抑制血纤维蛋白溶解作用。
在某一方面，本发明提供了一种用于抑制在人体内和动物体内形成凝血块的方法，该方法包括按能够有效地抑制凝血块的形成但不会产生毒性的剂量给所说的人或动物服用由通式1所代表的化合物。这种抗凝血化合物可以通过口服、胃肠外的方法给药，例如可以通过静脉输液(iv)、肌肉注射(im)或皮下注射(sc)的方式给药。根据具体的情况，例如根据患者的条件，看患者是需要紧急的处理或者是需要长期的治疗，可以决定给药方式是采用P.O或者i.V.。
抑制凝血块的一次有效剂量在约5-1000mg之间。这种剂量制度是可以变化的，例如，对于预防的目的来说，可以将一日的剂量作为一次服用，也可以将日剂量分成多次，例如分成3次或5次服用。在需要进行紧急治疗的情况下，可以将本发明的一种化合物以约0.1mg/Kg/h至约50mg/Kg/h，最好以约1.0mg/Kg/h至约20mg/Kg/h的速率进行静脉输液。
本发明的方法也可以与一些血块溶解剂，例如与组织纤维蛋白溶解酶原激活剂(tPA)、改进的tPA、链激素或尿激素结合使用。在已经形成了凝血块并且已经堵塞了动脉或静脉的情况下，不管是部分地堵塞或者全部堵塞，通常都必须使用凝血块溶解剂。本发明的一种化合物可以与血块溶解剂一起服用，也可以在服用血块溶解剂之后服用，以防止凝血块再生。
在实施该方法时，最好使用本发明较佳的一种化合物。例如可以使用如上所述的一种较佳化合物。特别理想的是N-Boc-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛。
本发明还提供了一种用于上述治疗方法的药物制剂。本发明的药物制剂包含抑制血块有效量的由通式1所代表的化合物以及一种药物学可接受的载体。对于口服药，可将抗凝血酶化合物制成胶囊或片剂，其中可能含有赋形剂(例如粘结剂)、润滑剂、雾化剂等。对于胃肠外给药来说，可将抗凝血酶化合物配在一种药物学上可接受的稀释剂中，例如配制在重量盐水(0.9%)、5%葡萄糖、Ringer′s溶液等稀释剂中。
本发明的抗凝血酶化合物可以制成单位剂量的制剂，所含的剂量可在约1mg至约1000mg之间。最好该化合物是以药物学上可接受的盐的形式使用，例如它可以是硫酸盐、乙酸盐或磷酸盐。一单位剂量制剂的一个例子是在一个10ml的无菌玻璃安瓿瓶中含有5mg的N-Boc-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的硫酸盐。一单位剂量制剂的另一个例子是在一个无菌安瓿瓶内的20ml等渗盐水中含有约10mg的N-甲基-D-苯丙氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的硫酸盐。
下面的实施例可用来进一步解释本发明，但不能认为是对本发明的限定。
在下列实施例中，所有的Rf值皆是用硅胶薄层色谱法来测定的，测定时使用Kieselgel60F-254(Merck，Darmstadt)在下列的溶剂体系中(A)三氯甲烷-甲醇-乙酸，135∶15∶1，V∶V∶V(B)乙酸乙酯-乙酸-无水乙醇，90∶90∶10，V∶V∶V(C)三氯甲烷-甲醇-乙酸，90∶30∶5，V∶V∶V在各实施例中，使用分析用的HPLC来监测色谱馏分、测定停留时间以及产品的纯度。测定方法如下使用一种Vydar C18反相色谱柱(0.46cm×10cm)的Water600E。采用A＝0.01M乙酸铵或者B＝乙腈的浓度梯度，在一台Pharmacia UV-M仪于214nm处进行监测。Pharmacia公司的地址为800Centennial Ave.，Piscataway，N.J.08854。
在各实施例中使用的缩写符号具有下列意义。
氨基酸Arg＝精氨酸;Azt＝氮杂环丁烷;Pro＝脯氨酸;Phg＝苯基甘氨酸;1-Tiq＝1，2，3，4-异喹啉-1-羰基Boc＝叔丁氧基羰基Bzl＝苄基Cbz＝苄氧基羰基DCC＝二环己基碳化二酰亚胺DMF＝二甲基甲酰胺DMSO＝二甲基亚砜FAB-MS＝快原子轰击质谱FD-MS＝场解吸质谱THF＝四氢呋喃TLC＝薄层色谱EtOAc＝乙酸乙酯n-BuOH＝正丁基乙醇实施例1N-(N-叔丁氧基羰基-D-苯基甘氨酰基)-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的二乙酸盐1)t-Boc和Cbz双保护基的精氨酸将N-(叔丁氧基羰基)精氨酸的盐酸合物[Boc-Arg(HCl)-OH]，(82.1g，250mmole)溶解于在一个三颈圆底烧瓶内的5NNaOH(240ml)中。将溶液冷却至-5℃，然后在55分钟内往其中滴加氯甲酸苄酯(143ml，1.0mole，4eq)。同时用5NNaOH(25ml)调节PH值在13.2-13.5之间。在滴加操作结束后以100ml水将其稀释，然后将反应混合物在-5℃下搅拌1小时。往其中加入乙醚(500ml)进行萃取，然后分离出水层，再用500ml一份的乙醚将水相萃取两次。用3N硫酸(560ml)将水层酸化至pH3.0，然后用550ml乙酸乙酯萃取。将水层再用乙酸乙酯萃取，然后将各次萃取液合并，用水洗涤，用硫酸镁将其干燥，然后在真空中将其蒸发至干，获得66.1g的双保护基精氨酸，Boc-Arg(Cbz)-OH(1)。
TLC Rf(C)0.43FD-MS408(M )1HNMR(CDCl3)δ1.42(s，9H)，1.61-1.91(m，4H)，3.23-3.41(m，2H)，4.17(d，1H)，5.21(s，2H)，5.62(d，1H)，7.30-7.42(m，6H)，8.37(m，1H)。
2)Boc-Arg(Z)-内酰胺将在上述步骤中制得的双保护基精氨酸(66.0g，0.162mole)溶解于230ml无水THF中，然后将此溶液在冰-丙酮浴中冷却至-10℃。往此溶液中加入三乙胺(23.5ml，1.05eq)，接着加入氯甲酸异丁酯(22.5ml，1.05eq)，然后将此混合物在-10℃下搅拌5分钟。接着加入N-甲基吗啉(18.7ml，1.05eq)并将反应混合物在-10℃下搅拌1小时，再在室温下搅拌1小时。将反应混合物倒入1升的冰水中并滤出生成的沉淀物，将沉淀物用冷水洗涤然后在真空中干燥。将所获产品，Boc-Arg(Z)-内酰胺(2)置于乙酸乙酯中重结晶，得到38.05g产品(60%产率)TLC Rf(A)0.77FD-MS391(MH )1HNMR(CDCl3)δ1.48(s，9H)，1.78-1.98(m，2H)，2.50(m，1H)，3.41(m，1H)，4.43(m，1H)，4.90(m，1H)，5.16(s，2H)，5.27(m，1H)，7.28-7.45(m，6H)，9.41(m，1H)，9.68(m，1H)。
3)Arg(Z)-内酰胺三氟乙酸盐将按上述步骤制得的Boc保护的Arg内酰胺(2)(38.0g，0.097mole)用三氟乙酸(200ml)和20ml的苯甲醚处理并在0℃下搅拌1小时。将反应混合物在不加热的情况下真空浓缩，然后往浓缩液中加入400ml乙醚。将固体滤出，再用乙醚洗涤，然后在真空中干燥，获得40.5g的产品3。
TLC Rf(C)0.29FD-MS291(MH )4)N-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-2-羧酸Boc-Azt-OH将L-氮杂环丁烷-2-羧酸(5g，0.0495mole)溶解于一种含有50ml2NNaOH(0.099mole)的50ml叔丁醇中。往所获溶液中加入碳酸氢二叔丁酯(12.9g，0.0594mole)，然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水和乙醚稀释并分离出水层。将水层用3NHCl酸化至pH2.3，然后用乙酸乙酯萃取。将萃取液用MgSO4干燥，然后在真空中蒸发浓缩，得到一种油状物。将此油状物置于乙醚/石油醚中结晶，得到8.6g的产品4(产率87%)。
FAB-MS202(MH )[α]D＝-120°(C＝0.5CH3OH)对C9H15NO4的元素分析理论值C，53.72;H，7.51;N，6.96实测值C，53.62;H，7.63;N，6.835)Boc-Azt-Arg(Z)-内酰胺将Boc-Azt-OH(4)(1.51g，7.5mmole)溶解于20mlDMF中，将此溶液冷却至-15℃，先加入0.83ml(7.5mmol)的N-甲基吗啉，接着再加入氯甲酸异丁酯(0.93ml，7.5mmol)。将此溶液在-15℃下搅拌2分钟。
在另一个容器中，将Arg(Z)-内酰胺三氟乙酸盐(3)(3.03g，7.5mmol)溶解于10mlDMF中，将此溶液冷却至0℃，然后往此溶液中加入N-甲基吗啉(0.83ml，7.5mmol)。将此溶液在0℃下搅拌2分钟，然后将其与上述所获的溶液混合。将反应混合物在-15℃下搅拌2小时，然后放置过夜使其慢慢升温至室温。往其中加入5%的碳酸氢钠溶液(5ml)并用175ml乙醚和150ml水稀释该反应混合物。分出有机层，先后用5%NaHCO3、水、1.5N柠檬酸和水洗涤该有机相。将洗涤过的有机层用MgSO4干燥并在真空中蒸发浓缩，得到3.5g的一种非晶形固体产品5(产率99%)TLC Rf(A)0.71FD-MS474(MH )
1HNMR(CDCl3)δ1.45(s，9H)，1.55-1.65(m，2H)，1.80-2.00(m，2H)，2.40-2.60(m，3H)，3.45(m，1H)，3.80(q，1H)，3.95(q，1H)，4.68(m，1H)，4.90(m，1H)，5.15(s，2H)，7.30-7.42(m，5H)6)Azt-Arg(Z)内酰胺三氟乙酸盐将Boc-Azt-Arg(Z)-内酰胺(5)(3.4g，7.2mmole)用25ml三氟乙酸和5ml苯甲醚处理(在0℃下搅拌30分钟)。在不加热的情况下将该反应混和物在真空中蒸发浓缩，然后用100ml乙醚处理该浓缩物。过滤出固体并用乙醚洗涤，然后将其在真空中干燥，得到3.5g的产品6(100%产率)。
FD-MS374(MH )7)Boc-D-Phg-Azt-Arg(Z)内酰胺将Boc-D-苯基甘氨酸(0.88g，3.5mmole)和Azt-Arg(Z)内酰胺三氟乙酸盐(6)(1.71g，3.5mmole)溶解于10ml DMF中并将此溶液冷却至0℃。往该溶液中加入N，N-二异丙基乙基胺(0.73mL，4.2mmol)，接着再加入1-羟苯三唑水合物(0.47g，3.5mmol)和二环己基碳化二亚胺(0.72g，3.5mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌4小时，再在室温下搅拌3天。将混合物过滤，然后将滤液溶解于200ml乙酸乙酯和100ml的5%NaHCO3中。分出有机层并先后用水、1.5N柠檬酸(100ml)、H2O(150ml)洗涤，然后用MgSO4干燥。将该有机相在真空中蒸发浓缩至干，获得1.2g固体状的产品7(产率57%)。
TLC Rf(A)0.65
FAB-MS607(MH )8)Boc-D-Phg-L-Azt-L-Arg-(Z)-H将Boc-D-Phg-L-Azt-L-Arg(Z)-内酰胺(7)(1.16g，1.9mmole)溶解于100ml无水THF中。将此溶液在N2气氛中冷却至-15℃，然后在3分钟内往其中滴加1M氢化锂铝的THF(1.9ml，1.9mmole)溶液。将反应混合物升温至0℃并搅拌1小时。在10分钟内慢慢地滴加5mlTHF和5ml的0.5NH2SO4。将反应混合物用100ml乙酸乙酯和50ml水稀释，然后将有机层分出并用MgSO4干燥。将干燥的有机层在真空中浓缩，得到0.97g产品(产率84%)FAB-MS609(MH )按下述的方法用化合物8来制备标题化合物。往含有化合物8(0.95g，1.56mmol)的120mlTHF和30ml水的溶液中加入乙酸(0.19ml，2eq)和0.5g的10%Pd/C催化剂。经由一根通气管将氮气通过悬浮液鼓泡5分钟，接着通入氢气鼓泡4小时，再通氮鼓泡5分钟。用滤垫将催化剂滤去。将滤液在真空中浓缩至体积为20ml并将此浓缩物冷冻干燥，获得0.822g固体状态的粗标题化合物肽。
将此标题化合物在一个5×25cm的C-18反相HPLC柱上(Vydac C-18，Separation Group，17434Mojave St.，Hesperia，CA92345)进行色谱分离，使用浓度梯度为10-50%乙腈/0.01M乙酸铵混合溶液分离9小时。将流出液分成多级收集并根据反相HPLC的分析曲线汇集所需的级分。将汇集的级分冻干，得到0.303g(41%产率)的纯标题化合物。
FAB-MS475(MH )[α]D＝-146.2°(C＝0.5，在1M乙酸中)停留时间RP-HPLC在5-50%乙腈的60分钟内＝48.5分钟实施例2N-(N-叔丁氧基羰基)-D-苯丙氨酰基-L-氮杂环丁基-4-精氨酸醛二乙酸盐采用在实施例1中所用的操作步骤、反应条件以及试剂，并用D-苯基丙氨酸代替实施例1中的D-苯基甘氨酸。可获得标题化合物。
FAB-MS489(MH )停留时间40.9分钟实施例3DL-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛硫酸盐1)DL-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羧酸。
将异喹啉-1-羧酸(12.5g，0.072mmol)在185ml冰乙酸中的溶液在一个Parr氢化装置中在室温下氢化24小时，在氢化时使用2g氧化铂催化剂和60磅/英寸2的氢气压力。将反应混合物通过一个过滤垫(硅藻土)过滤，将滤液在真空中蒸发至干。将固体的产品残渣用水研碎，过滤并干燥，获得8g(63%产率)的纯产品1。
FD-MS178(MH )1HNMR(DMSO)δ2.80-3.00(m，3H)，3.10-3.20(m，1H)，3.30-3.40(m，2H)，7.05-7.25(m，4H)，7.65-7.75(m，1H)。
2)叔丁氧基羰基-DL-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羧酸二环己基氨盐(Boc-DL-Tiq DCHA)往1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羧酸(1)(7.08g，0.040mole)的2NNaOH(40ml，0.080mole)溶液中加入40ml叔丁醇和碳酸氢二叔丁酯(10.5g，0.048mole)。在室温下约24小时后大部分的叔丁醇已从反应混合物中蒸发掉，将所获的水相用乙醚洗涤一次。将水层用2NHCl酸化至pH2.0，然后用乙酸乙酯萃取。将萃取液用MgSO4干燥并在真空中蒸发至干。将残渣(油状)溶解于乙醚中并向所获溶液中加入二环己基胺，DCHA，(7.9ml，0.040mole)。将溶液在4℃下放置4小时，将沉淀出来的盐过滤出来，用乙醚洗涤并在真空中干燥，获得15.7g(86%产率)的纯DCHA盐2。
FD-MS459(MH )对C27H42N2O4作元素分析理论值C，70.71;H，9.23;N，6.11实测值C，71.07;H，9.37;N，5.873)叔丁氧基羰基-DL-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-酰基-氮杂环丁烷-2-羧酸。(Boc-DL-1-Tiq-AztOH)。
将DCHA盐(2)(13.7g，30mmol)悬浮于200ml乙酸乙酯中，先后用1.5N柠檬酸和水洗涤该悬浮液，然后用MgSO4干燥。在真空中将该悬浮液蒸发至干并将油状残渣溶解于100ml乙酸乙酯中。将此溶液冷却至0℃，加入2，4，5-三氯苯酚(5.91g，30mmol)，随后再加入DCC(6.18g，30mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌5分钟，然后升温至室温再搅拌1.5小时。将反应混合物冷却至0℃，滤去沉淀并将母液在真空中蒸发至干。将油状残渣溶解于80ml吡啶中并往此溶液中加入2-氮杂环丁烷-2-羧酸(3.0g，30mmole)和4.2ml(30mmole)三乙胺。将反应混合物在室温下搅拌48小时并在真空中蒸发至干。将残渣溶解于乙酸乙酯/水中并用2NNaOH将溶液的pH值调节至9.5。分离出水层，用2NHCl将其酸化至pH2.0，然后用乙酸乙酯萃取。萃取液用MgSO4干燥并在真空中蒸发至干，获得10g的产品3。
将产品(3)溶解于三氯甲烷∶己烷(1∶1，V∶V)混和溶剂中，然后将此溶液加入Water′s Prep500A仪中已预先用己烷平衡过的硅胶柱中。用增加乙酸乙酯浓度梯度的方法洗脱产品(3)。收集各个流出液级分并根据TLC曲线分离出产品。将各级分合并，蒸发至干，获得4.8g(44%产率)的纯产品3。
TLC Rf(A)0.35FAB-MS361(MH )[α]D＝-20.6°(C＝0.5CH3OH)4)叔丁氧基羰基-DL-1，2，3，4-四氢-1-异喹啉酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸(Cbz)内酰胺(4)(Boc-DL-1-Tiq-Azt-Arg(Z)-内酰胺)。
在第一个烧瓶中将Boc-DL-1-Tiq-Azt(3)(5.3g，15mmol)溶解于50mlDMF中并将此溶液冷却至-15℃。加入N-甲基吗啉(1.65ml，15mmole)并将反应混合物在-15℃下搅拌2分钟。
在第2个烧瓶中将Arg(Z)-内酰胺以三氟乙酸盐(TFA)的形式(6.06g，15mmol)溶解于20mlDMF中并将此溶液冷却至0℃。向此冷溶液中加入N-甲基吗啉(1.98ml，在0℃下搅拌2分钟。然后将第2个烧瓶的内容物倒入第1个烧瓶中并将此反应混合物在-15℃下搅拌3小时。将此混合物放置过夜使其慢慢升温至室温，然后将其在真空中蒸发，得到一种油状物。往此油状物中加入乙酸乙酯(175ml)和1NNaHCO3(100ml)。分出有机层，先后用水、1.5N柠檬酸、水洗涤。将所获溶液用MgSO4干燥并在真空中蒸发至干，获得6.9g(73%产率)的一种无定形固体状的产品4，Boc-DL-1-Tiq-Azt(Z)-内酰胺。
TLC Rf(A)0.64FAB-MS633(MH )[α]D-62.5°(C＝0.5CHCl3)5)Boc-DL-1-Tiq-Azt-Arg(Z)-H(5)将Boc-DL-1-Tiq-Azt-Arg(Z)-内酰胺(4)(6.3g，10mmole)的85ml无水THF溶液在氮气氛中冷却至-15℃，然后在30分钟内往其中滴加1M氢化锂铝的THF(10ml，10mmol)溶液。在氢化物滴加完毕后，将反应混合物在-15℃下搅拌30分钟。接着在5分钟内往反应混合物中滴加10mlTHF和3.0ml0.5NH2SO4的混合溶液。将此混合物用200ml乙酸乙酯和200ml水稀释，分离出有机相，用MgSO4干燥并在真空中蒸发至干，得到6.0g(95%产率)的无定形固体状产品5。
TLC Rf(A)0.186)DL-1-Tiq-Azt-Arg-H硫酸盐往产品(5)(5.9g，9.3mmole)的60mlTHF和30ml水的溶液中加入10ml的1NH2SO4和2.0g的5%Pd/C催化剂。用一根气体导管将氮气通过该悬浮液鼓泡5分钟，接着用氢气鼓泡1.5小时，再用氮鼓泡5分钟。将催化剂滤出，并用Bio-Rad AG1-×8树脂(羟基型)将滤液的pH值调至4.0。将树脂滤掉并将滤液冷冻干燥得到4.5g干燥的固体。将此固体在0℃下用20ml三氟乙酸和5ml苯甲醚处理10分钟。将反应混合物搅拌10分钟，然后在不加热的情况下蒸发浓缩。往此浓缩物中加入乙醚(100ml)，收集生成的沉淀物并加以干燥，得到4.8g粗产品。将粗产品(4.8g)溶液于0.01%H2SO4中并将所获溶液加入串联在一起的两个5×25cm VydacC18树脂柱中。用浓度梯度不断增加的乙腈(2%至25%)溶液从吸附柱上将肽盐洗脱下来。根据上述分析用RP-HPLC来收集各流出液级分并汇集起来。使用羟基型的AG1-×8树脂(Bio Rad阴离子交换树脂，50-100目)将汇集的各级分溶液的pH值调节至pH4.0。将树脂滤出并将滤液冻干，得到1.36g(30%产率)纯的标题硫酸盐。
FAB-MS401(MH )HPLC停留时间23.1分钟实施例4D-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-酰基-L-氮杂环丁烷-2-酰基-L-精氨酸醛硫酸盐。(D-3-Tiq-Azt-Arg-H)按照实施例3的步骤来制备标题化合物，不同之处是以1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸来代替实施例3中的1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羧酸。
FAB-MS401(MH )停留时间18.5分钟实施例5-8表2中列出了本发明的代表性化合物的质谱数据与HPLC停留时间，其中的A是(R)(R1)(B)C-并且其中的R1是甲基，这些化合物是按照上述的实施例中的一般的偶合方法制备的。
表2实施例 停留时间序号化合物1FAB-MS(MH ) (分)25 N-Acetyl-D-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 431 20.46 N-Boc-D-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 489 36.37 N-Acetyl-DL-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 431 21.68 N-Boc-DL-Phg(α-CH3)-Azt-Arg-H 489 39.01)硫酸盐2)通过如上所述的分析的RP-HPLC方法测得。
实施例9N-[N-三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酰基]-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛盐酸合物TFA-D-Phg(α-Me)-Azt-Arg-H·HCl按照实施例1中的步骤1和2中的操作程度来制备Boc-Arg(Z)-内酰胺3)HCl-Arg(Z)-内酰胺将Boc-Arg(Z)-内酰胺(2)(641g，1.64mol)在3小时内在-10℃下溶解于CH2Cl2(3L)中，然后向所获溶液中在30分钟内滴加经HCl(气)饱和过的EtOAc(7.2L)溶液。往其中加入乙醚(12L)，将沉淀物滤出并用乙醚洗涤，然后在真空中干燥，得到580g标题化合物(理论值的108%)TLC Rf(C)0.29;FD-MS291(MH )。
4)甲基-Nα二苯基亚甲基-DL-苯基甘氨酸酯将二苯酮亚胺(53.8g，297mmol)溶液于二氯甲烷(500ml)中并在室温下搅拌。往此溶液中加入DL-苯基甘氨酸甲酯盐酸合物(59.9g，297mmol)并在室温下搅拌反应48小时。将反应混合物用水(200ml)洗涤3次。分离出有机层，用MgSO4干燥，然后过滤并将滤液在真空中浓缩，得到一种透明的油状物。将此油状物置戊烷中结晶，得到标题化合物(98.5g，100%)FAB-MS330(MH );
对C22H19NO2作元素分析理论值C，80.22;H，5.81;N，4.25实测值C，80.50;H，5.93;N，4.145)甲基-Nα二苯基亚甲基-DL-(α-甲基)苯基甘氨酸酯将甲基-Nα二苯基亚甲基-DL-苯基甘氨酸酯(4)(14.8g，44.8mmol)的无水THF(200ml)溶液滴加入由18-冠-6(11.8g，44.8mmol)、氢化钾(11.2g，67.3mmol)、THF(100ml)组成的混合物中，并在氮气氛中搅拌。往此反应混合物中滴加甲基碘(6.0ml，89.7mmol)的THF(20ml)溶液。在滴加完毕后将反应混合物在室温下再搅拌1.5小时。往此反应混合物中滴加冰乙酸HOAc(7.0ml)、水(25ml)和THF(30ml)混合溶液。将反应混合物用乙酸乙酯和水稀释。将有机层分出，用水洗涤3次，然后用MgSO4干燥。将滤液在真空中浓缩，得到一种油状物。将这种粗的油状物置己烷中结晶，得到标题化合物(10.2g，66%)FAB-MS344(MH );
对C23H21NO2作元素分析理论值C，80.44;H，6.16;N，4.08，实测值C，80.40;H，6.26;N，4.036)DL-(α-甲基)苯基甘氨酸将甲基-Nα二苯基亚甲基-DL-(α-甲基)苯基甘氨酸酯(5)(72.4g，211mmol)的5NHCl(400ml)溶液回流(24小时)。将此溶液冷却至室温后过滤，用稀NH4OH溶液将滤液的pH值调节至pH5.8。将此水溶液在真空中浓缩直至开始结晶为止。将反应混合物在5℃下保存过夜，将沉淀物滤出，得到了标题化合物(22g，63%)FAB-MS166(MH )7)三氟乙酰-DL-(α-甲基)苯基甲氨酸往DL-(α-甲基)苯基甘氨酸(6)(21.9g，133mmol)的三氟乙酸(250ml)溶液中加入三氟乙酸酐(33.5g，159mmol)，然后将此反应混合物回流(2小时)。将反应混合物在真空中浓缩，得到一种油状物，将此油状物用EtOAc/H2O稀释。将有机层分出并用水洗涤3次，用MgSO4干燥，然后将所获滤液在真空中浓缩，得到一种白色固体状的标题化合物(25.3g，73%)，FAB-MS262(MH )。
8)三氯乙酰基-DL-(α-甲基)苯基甘氨酸-Azt-OH将三氟乙酰基-DL-(α-甲基)苯基甘氨酸(7)(8.0g，31mmol)溶解于EtOAc(80ml)中并将此溶液冷却至0℃。往此溶液中加入2，4，5-三氯苯酚(6.1g，31mmol)和二环己基碳化二亚胺(6.3g，31mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时，然后再在室温下搅拌1.5小时。滤去沉淀物并将滤液在真空中浓缩，得到一种油状物。将此油状物溶解于吡啶(60ml)中，并往其中加入L-氮杂环丁烷-2-羧酸(3.1g，31mmol)和三乙胺(4.3ml，31mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24小时。在真空中除去反应溶剂，得到一种油状物。将此油状物溶解于水(100ml)和乙醚(50ml)中并用2N NaOH将所获溶液的pH值调节至9.0。将分出的水相用乙醚萃取2次。分离出水层，往其中加入EtOAc(150ml)，用3N HCl将溶液的pH值调至3.0。分出有机层，用MgSO4干燥，将滤液在真空中蒸发浓缩，得到一种无定形的固体(9.3g，88%);FD-MS345(MH );[α]D＝-80°(C＝0.5/CHCl3)。
9)三氟乙酰-D-(α-甲基)苯基甘氨酸-Azt-Arg(Z)-内酰胺在烧瓶1中将三氟乙酰-DL-(α-甲基)-苯基甘氨酸-Azt-OH(8)(6.7g，19.9mmol)溶解于DMF(50ml)中，冷却至-15℃，然后加入N-甲基喹啉(2.5ml，21.9mmol)并接着加入氯甲酸异丁酯(2.6ml，19.9mmol)。将反应混合物在-15℃下搅拌2分钟。
在烧瓶2中将HCl·Arg(Z)-内酰胺(3)(6.5g，19.9mmol)溶解于DMF(40ml)中，冷却至0℃，并往其中加入二异丙基-乙胺(7.0ml，39.9mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌2分钟。
取部分烧瓶2的内容物加入烧瓶1中，然后将反应混合物在-15℃下搅拌4小时。然后在24小时内让反应混合物慢慢地升温至室温。往反应混合物中加入1NNaHCO3(18ml)并在室温下搅拌3分钟。用EtOAc(200ml)和水(100ml)稀释反应混合物，分离出有机层，将此有机层先后用1NNaHCO3、水和0.1NHCl洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并蒸发浓缩，获得一种无定形固体状的粗的标题化合物(11.5g，93%)。将粗的固体物质(11.5g)加入一台Water′s Prep500A型色谱仪内的两个硅胶柱中。使用一种由(A)CH2Cl2和(B)EtOAc组成的具有浓度梯度的体系来洗脱纯的化合物。所用的浓度梯度是指将EtOAc的浓度从0%增加至20%。分级收集流出液并根据TLC给出的曲线汇集所需的级分。将这些合并的级分在真空中浓缩，得到一种无定形固体状的标题化合物(3.02g，25%)TLC Rf(D)0.45;FAB-MS617(MH );[α]D＝-95.9°(C＝0.5CHCl3)。
10)三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酸-Azt-Arg(Z)-H在氮气氛下将三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酰基-Azt-Arg(Z)-内酰胺(9)(2.9g，4.8mmol)溶解于无水THF(60ml)中并将其装入一个烧瓶中。将反应混合物冷却至-70℃。往反应混合物中加入1M氢化锂铝的THF(5.0ml，5.0mmol)溶液，然后在5分钟内滴加THF(10ml)以将其稀释。将反应混合物在-70℃下搅拌30分钟，然后往其中慢慢滴加5mlTHF和5ml0.5NH2SO4的混合溶液。将反应混合物用EtOAc(100ml)和水(100ml)稀释，然后分离出有机层。将有机层干燥(MgSO4)并在真空中浓缩至干，得到一种无定形固体状的标题化合物(2.39g，81%)FAB-MS619(MH );
对C29H33N6O6作元素分析理论值C，56.31;H，5.38;N，13.58实测值C，56.10;H，5.51;N，13.3011)三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酸-Art-Arg-H·HCl将三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酸-Azt-Arg(Z)(10)(2.35g，3.8mmol)溶解于乙醇(110ml)、水(40ml)、1N HCl(5.7ml)溶液中，在有5%Pd/C催化剂(1.9g)的存在下和在室温及常压下氢化1.5小时。在反应结束后，过滤除去催化剂。在真空中将滤液浓缩至100ml。再往反应混合物中加入50ml水和100ml正丁醇。分出有机层并用正丁醇将水相萃取2次。将合并的有机萃取液在真空中浓缩至干。再往反应混合物中加入一种乙醚与异丙醚体积比1∶1的混合物(100ml)。滤出沉淀物并在真空中干燥，得到纯的标题化合物(1.4g，71%)FAB-MS485(MH );[α]D＝-77.6°(C＝0.5/0.1HCl)。
权利要求
1.一种用于制备如下通式化合物的方法
其中，A是1)一种如下面通式的基团
其中，R是一个如下通式的苯基
其中，a和a′任意地是氢、低级烷基、低级烷氧基、卤原子、三氟甲基、羟基、羟甲基、氨基、或氨甲基；以及n是0或1；或者R是噻吩基、呋喃基、萘基、或者被低级烷基、低级烷氧基、卤原子、氨基、一或二(低级烷基)氨基、或羟基进行一或二取代的萘基；或者R是环己二烯基、环己烯基、环己基或环戊基；R1是氢、甲基或乙基；B是低级烷基、低级烷氧基、羟基、或者是如下通式的一个氨基其中，R2和R3可任意地是氢或低级烷基，或者R2是氢，而R3是C1-C6烷酰基、卤原子取代的C2-C6烷酰基、或者是如下通式的氧羰基其中，R4是C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C3-C7环烷基、苄基、硝基苄基、二苯基甲基、或者一个如上述定义的苯基；前提条件是，当R1是甲基或乙基时，而B不能是甲基或乙基；2)如通式2的一个双环基团
其中，Q是一个由
、-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由-CH2-CH2-、-CH2
或CH2
所代表的含两个碳的基团；Y是一个由-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由
所代表的含两个碳的基团；其前提条件是，在Q和Y中，只能有一个而不能两个都是
或
；另外还有一个条件是，Q和Y中只有一个是含两个碳的基团；R5是氢或一个如上面所定义的氧羰基R4-OC(O)-；R6是氢、低级烷基、低级烷氧基、卤原子、羟基、三氟甲基、羧基、氨基甲酰基或氨基磺酰基；而六元环中的虚线表示它是一个芳环或全氢环；其特征在于该方法包含从如下通式的化合物中除去氨基保护基P
2.按权利要求1用于制备一种化合物的方法，在该化合物中，A是一个如下式的基团
其中，B是一个通式为-N(R2)(R3)的氨基，其中，R2是氢或C1-C4烷基，R3是一个氧羰基R4-O-C(O)-，其中，R4是C1-C6烷基，其中的R则是如下通式的一个基团
3.按权利要求1用于制备N-Boc-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的方法。
4.按权利要求1用于制备N-甲基-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的方法。
5.按权利要求1用于制备N-Boc-D-苯基丙氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的方法。
6.按权利要求1用于制备N-甲基-D-苯基丙氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的方法。
7.按权利要求1用于制备N-乙基-D-苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛的方法。
8.按权利要求1用于制备化合物的方法，在该化合物中，A是如下通式的一个双环基团
其中，Q是-CH2-CH2-或CH2
，以及Y是
或-CH2-。
9.按权利要求8用于制备如下通式化合物的方法
10.按权利要求8用于制备如下通式化合物的方法
11.按权利要求8用于制备如下通式化合物的方法
12.按权利要求8用于制备如下通式化合物的方法
13.按权利要求1用于制备一种化合物的方法，在该化合物中，A是
R1是甲基或乙基，R2是氢，R3是C1-C6烷酰基、卤原子取代的C2-C6烷酰基，或者一个氧羰基R4-O-C(O)-。
14.按权利要求13的方法，其中的化合物是N-乙酰基-D-Phg(α-CH3)-L-Azt-L-Arg-H。
15.按权利要求13的方法，其中的化合物是N-Boc-D-Phg(α-CH3)-L-Azt-t-Arg-H。
16.按权利要求13的方法，其中的化合物是三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛。
17.按权利要求13的方法，其中的化合物是三氟乙酰基-D-(α-甲基)苯基甘氨酰基-L-氮杂环丁基-L-精氨酸醛。
18.一种用于制备药物制剂的方法，该方法包括，将一种或多种药物学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂与一种如下通式的化合物掺合
其中，A是1)一种如下面通式的基团
其中，R是如下通式的一个苯基
其中，a和a′可任意地是氢、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤原子、三氟甲基、羟基、羟甲基、氨基、或氨甲基;n是0或1;或者R是噻吩基、呋喃基、萘基、或者被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤原子、氨基、一或二(C1-C4烷基)氨基、或羟基进行一或二取代的萘基;或者R是环己二烯基、环己烯基、环己基或环戊基;R1是氢、甲基或乙基;B是C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、或者具有如下通式的一个氨基其中，R2和R3可任意地是氢或C1-C4烷基，或者R2是氢，而R3是C1-C6烷酰基、卤原子取代的C2-C6烷酰基、或者是如下通式的氧羰基其中，R4是C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C3-C7环烷基、苄基、硝基苄基、二苯基甲基、或者一个如上述定义的苯基;其前提条件是，当R1是甲基或乙基时，B不能是甲基或乙基;2)如下列通式的一个双环基团
其中，Q是一个由
、-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由-CH2-CH2-、
或
所代表的含两个碳的基团;Y是一个由-CH2-或
所代表的含一个碳的基团，或者由
所代表的含两个碳的基团;其前提条件是，在Q和Y中，只能有一个而不能两个都是
或
;另外还有一个前提条件是，Q和Y中只能有一个是含两个碳的基团;R5是氢或一个如上面所定义的氧羰基R4-OC(O)-;R6是氢、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤原子、羟基、三氟甲基、羧基、氨基甲酰基或氨基磺酰基;而六元环中的虚线表示它是一个芳环或全氢环;或者是由它们制备的一种药物学上可接受的无毒性的盐。
全文摘要
提供了由通式所代表的凝血酶抑制剂，其中的A是，例如，苯基甘氨酰基、和苯基丙氨酰基、α-甲基苯基丙氨酸和α-甲基苯基甘氨酸(其中的氨基最好是被低级烷基、烷酰基或低级烷氧基羰基所取代)，或者是一个双环基团，如1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基。另外还提供了一种用于在人类和动物体内抑制形成凝血块的方法，和该方法所使用的药物制剂以及生产该抑制剂的中间产物。
文档编号C07K5/06GK1074438SQ9211438
公开日1993年7月21日 申请日期1992年11月11日 优先权日1991年11月12日
发明者R·T·舒曼 申请人:伊莱利利公司
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