专利名称：3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯非对映体的结晶性酸加成盐的制作方法
技术领域：
本发明涉及式Ⅰ的7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-羟亚胺基-乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯非对映体的结晶性的肠内吸收盐及其制备方法。
在德国专利申请P3804841(EP-A-0329008)中描述了7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2(Z)-羟亚胺基-乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸。其中式Ⅰ的酯特别重要，因为它在不同的动物物种中均能很好地吸收，並且在被吸收后通过体内的酶很快地和完全地再裂解成为带有游离羧基的有抗菌活性的头孢菌素。
接着，在德国专利申请P3919259(EP-A-0402806)中描述了由式Ⅰ的酯和磺酸得到的化学计量的结晶性的盐，相对于式Ⅰ的游离碱而言该盐具有它的高稳定性的优点。
式Ⅰ的酯在乙酯基团的1位具有一个不对称碳原子，在德国专利申请P3919259中描述的该盐是以非对映体的混合物存在的。
可比的非对映体混合物存在于头孢替安-Hxetil、头孢呋新-Axetil、头孢多肟-Proxetil和BMY28271中。
根据至今对这样的头孢前体药物肠吸收机制的研究，在乙酯基团的1位具有的立体化学结构不影响肠道吸收，对头孢替安-Hxetil非对映体的实验表明了这种可能(T.Nishimura等人，The Journal of Antibioties，Vol.XL(1987)81-90)。
因此，分出的式Ⅰ的非对映体的盐在肠道吸收方面明显地不同是令人惊奇的。因此，更好的可吸收的非对映体显示了比在德国专利申请P3919259中描述的非对映体的混合物更高的生物利用度。
因此，本发明的主题是通式Ⅱ的非对映体的纯净盐，式中＝N-OH基团处在顺位。这两种具有(1S)构型的非对映体在酯的部份最好具有较小的极性，从而具有较高的生物利用度。
式Ⅱ中，HX可以是一个一元或多元酸，其中X可以是一个无机的或有机的生理学允许的阴离子。
作为无机酸，HX代表例如化学计量的HCl、HBr、HI、HBF4、HNO3、HClO4、H2SO4或H3PO4。作为有机酸，HX代表脂族的或芳族的磺酸，无机酸最好是HCl、HBr和H2SO4，有机酸最好是甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸和4-乙基苯磺酸。特别好的是苯磺酸、对甲苯磺酸和4-乙基苯磺酸。
本发明另一个主题是制备通式Ⅱ非对映体化合物的方法，其特征在于1.制备式Ⅲ的化合物，通过色谱法分离非对映体，裂解掉三苯甲基，制备酸加合盐产物，或者
2.通过结晶法，从式Ⅱ的非对映体的混合物中浓集极性较小的非对映体，或者3.制备以分离的非对映体形式的式Ⅳ中间体，並将此中间体转化成分离形式的式Ⅱ的非对映体。
制备方法1中所需要的式Ⅲ非对映体混合物已经在德国专利申请P3804841中叙述了。
非对映体的分离用由甲苯和醋酸乙酯组成的展开剂在硅胶上进行色谱分离来达到。甲苯与醋酸酯的比率可在3∶1至20∶1之间变化，其中10∶1至15∶1的范围较好。对于一份要分离的混合物，使用20-80份硅胶，其中以30-50份为好。
这样得到的式Ⅲ的纯非对映体转化成式Ⅱ的盐，所用的方法已在德国专利P3804841和P3919259中叙述过。
根据方法2，用有机溶剂结晶非对映体混合物可获得式Ⅱ的较小极性的非对映体。
通常的重结晶条件是把一种物质在一种溶剂中加热到溶液沸腾。式Ⅰ和Ⅱ的化合物在这样的条件下被溶解。而下面描述的方法则可使盐重结晶。
首先将一份非对映体混合物溶解在1-5份，最好是1-2份的一种有机溶剂例如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺中，再将这样得到的溶液滴到5-50倍体积的一种有机溶剂中(如醇、酯、醚、酮、腈)例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、醋酸乙酯、醋酸丁酯、丙酮、乙醚、二异丙醚和乙腈。最好是10-20倍体积的正丙醇、异丙醇或正丁醇中的一种。
滴加可以持续10分钟至2小时，最好在30分钟至1小时。为了结晶完全，再搅拌1-18小时，最好是3-6小时，温度应在0℃至40℃之间，以20°-25℃为好。
这样得到的盐通过常规实验方法例如过滤进行分离并在高真空(＜1托)中在一种干燥剂例如五氧化二磷的存在下除去附着的溶剂。
重复几次上述过程，得到纯的式Ⅱ(HX对甲苯磺酸)的具有较高肠吸收的非对映体。
如在德国专利申请P3804841中所描述的，根据方法3制备非对映体混合物的式Ⅳ化合物。
非对映体可通过对式Ⅴ化合物的盐结晶法加以分离。
在通式Ⅴ中，HY代表一元或多元酸，其中Y可以是一个无机或有机阴离子。
作为无机酸，HY代表例如HCl、HBr、HI、HF、HNO3、HClO4、HSCN、H2SO4或H3PO4，作为有机酸，HY代表脂族的或芳族的磺酸、羧酸和磷酸，下列的有机酸可作为例子苯磺酸、对甲苯磺酸、4-乙基苯磺酸、4-氯苯磺酸、4-溴苯磺酸、2-
磺酸、4-联苯磺酸、4-联苯磺酸、萘-1，5-二磺酸、甲磺酸、乙磺酸、十二烷基磺酸、樟脑磺酸、草酸。
优选的酸性成分是HCl、HBr、苯磺酸、对甲苯磺酸、4-乙基苯磺酸和4-联苯磺酸。
式Ⅳ非对映体混合物的溶液和酸性成分HY的溶液经混合来制备式Ⅴ的盐，有机溶剂可以是例如酯、醚、醇、酮、碳氢化合物、腈和卤代碳氢化合物以及它们的混合物。优选的溶剂有，例如苯、甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、叔丁醇、二异丙醚、乙腈、二氯甲烷、丙酮及它们的混合物。
如果有机溶剂是与水可混溶的，作为无机酸的溶剂可以加入水。HCl和HBr在有机溶剂中的溶液可以例如通过导入氯化氢或溴化氢来制备，也可以由乙酰卤、卤化磷和三卤氧化磷和醇(卤＝Cl，Br)来制备。
式Ⅳ的碱与酸成分的比值对于浓集一个非对映体是很重要的。一当量的非对映体混合物应加入0.2-2.0最好是0.3-1.0当量的酸性成份。
在室温下加入酸性组分，为了沉淀完全，还要搅拌直至10个小时，这取决于酸性组分和溶剂。为了使沉淀完全可任选地将温度冷却至室温至-78℃之间。
得到的盐过滤后，如果需要，通过重结晶进一步纯化。为此，加入上述溶剂和它们的混合物。最佳溶剂的选择取决于所使用的酸性成份，因此例如对于对甲苯磺酸盐适用的溶剂是甲醇、乙醇、正丙醇和异丙醇。
本方法的特征是以两个连续的步骤进行通式Ⅳ非对映体的沉淀。例如，将式Ⅳ非对映体混合物的溶液和酸性成分HY的溶液混合，较难溶的式Ⅴ的非对映体首先沉淀，过滤分离，接着从滤液中再沉淀较易溶解的通式Ⅴ的非对映体。
在该连续的步骤中，酸性成分HY可以是相同的或者是不同的，其中不同的酸性成分加入的顺序是随意的。可以例如通过适当地选择酸性成分HY，首先沉淀的作为难溶盐的通式Ⅳ的极性非对映体或者通式Ⅳ的非极性对映体。
通过对酸性成分的选择，可得到纯净形式的式Ⅴ的两个差向异构体。例如，若使用氯化氢或溴化氢，得到极性较强的差向异构体;若用苯磺酸，4-乙基苯磺酸，联苯磺酸或对甲苯磺酸，则得到较低极性的差向体。
此外，还可以从通式Ⅵ的化合物得到式Ⅳ的非对映体混合物，
式中基团R1代表在肽化学中常规用的氨基保护基团，例如甲酰基，叔丁氧基羰基，苯氧乙酰基，苯乙酰基，烯丙氧羰基，苄氧基羰基和4-硝基苯氧基羰基等基团。
保护基团的裂解是用已知的方法进行，因此甲酰基和叔丁氧基羰基例如可以用酸裂解掉，苯氧乙酰基和苯乙酰基可以例如用五氯化磷或者用青霉素酰化酶酶解离去，烯丙氧基羰基可以用 Pd〔P(C6H5)3〕4使之裂解，苄氧基羰基和4-硝基苯氧羰基可以通过氢解除去。
在用五氯化磷裂解苯氧乙酰基和苯乙酰基时，迅速地处理后会得到浓集形式的极性强的差向异构体的盐酸盐，甚至不必加入氯化氢。在处理完毕后未除去的磷酸酯氯化物慢慢地释放出氯化氢，这作为氯化氢的来源。
从化合物Ⅵ起始，还可以先分离该非对映体然后裂解掉保护基团来得到式Ⅴ的纯净的非对映体化合物。非对映体的分离可以用结晶法或色谱法，精确的条件取决于保护基团R1。例如R1是苯氧乙酰基就可以将非对映体在硅胶上用一种有机溶剂进行色谱分离。
式Ⅳ的纯非对映体的另一个制备方法还可以从式Ⅶ的席夫碱起始，式中R2可以是苯基或萘基，它们可以被(C1-C4)烷基、苯基、甲氧基、卤素(例如F、Br、Cl、I)或硝基取代。
式Ⅶ的席夫碱的非对映体混合物可以通过色谱例如在硅胶上进行或者通过分步结晶使之分离。该席夫碱再裂解成式Ⅳ的纯非对映体可以按照已知的方法，例如用酸水解或用Girard-T试剂来完成。
还可以根据已知的方法从式Ⅴ的非对映体纯净盐制备式Ⅳ的非对映体碱，並如在德国专利申请P3804841和P3919259中所描述的那样制备式Ⅱ的非对映体盐。
本发明的有用性在于提高了式Ⅱ的较小极性的非对映体的肠道吸收，正如在表1中对甲苯磺酸盐所显示的。
表1非对映体组份 回收率(四次实验的平均值)由实例1得到的非对映体1 67.7%由实例1得到的非对映体2 19.7%非对映体混合物(比例1/1) 39.2%表1显示了在口服用药7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-肟基-乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯-对甲苯磺酸盐(剂量基于有效抗菌成份为10毫克/公斤)后，在狗(数量＝4)尿中(0-24小时)的7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-肟基-乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸的回收率。狗尿中的有效物质量通过使用Mueller-Hinton-琼脂(含10%绵羊血)和酿脓链球菌A77作为试验菌进行琼脂扩散试验来测定。
本发明的式Ⅱ化合物以常规的药物制剂形式例如胶囊、片剂、粉剂、糖浆剂或悬浮剂口服给药，剂量取决于患者的年龄、症状和体重以及治疗持续时间。而常规为每天大约0.1克至大约5克，以每天大约0.2克至3克为好，该化合物最好分几次给药，例如每天2至4次，每次剂量可以含有效物质50至500毫克。
口服制剂可以含有常用载体和/或稀释剂，例如胶囊或片剂用的粘合剂可考虑明胶、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮或羧甲基纤维素，稀释剂可以是例如乳糖、蔗糖、淀粉、磷酸钙或聚乙二醇，润滑剂例如滑石粉或硬脂酸镁。对于液体制剂，例如水或油悬浮剂，糖浆或通常已知的形式都合适。
下面根据本发明可制备式1化合物7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2(Z)-肟基-乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯的实施例是为了进一步说明本发明，而不是对本发明的限制。
实施例1前体2-(2-三苯甲胺基噻唑-4-基)-2-(Z)-三苯甲氧亚胺基-乙酰氯向42.0克(54毫摩尔)2(2-三苯甲胺基噻唑-4-基)-2(Z)-三苯甲氧亚胺基醋酸-三乙铵盐在400毫升无水二氯甲烷中的溶液在-70℃，于30分钟内滴加溶解在200毫升无水二氯甲烷的11.4克(55毫摩尔)五氯化磷，並使溶液内部温度不超过-50℃。在-70℃继续保持60分钟后将该溶液在真空中挥发干溶剂，並使温度不超过30℃。接着在高真空中干燥片刻。将这样获得的粗产品溶解在100毫升无水二氯甲烷中并立即进行酰化。
步骤13-甲氧甲基-7-〔2-(2-三苯甲胺基噻唑-4-基)-2-(Z)-三苯甲氧亚胺-乙酰氨基〕-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯向14.0克(57毫摩尔)7-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸在160毫升无水二氯甲烷的混悬液在0℃慢慢加入9.5毫升(64毫摩尔)DBU並在0℃搅拌30分钟。然后再加入20.8克(81毫摩尔)2，2-二甲基丙酸-1-碘乙基酯，于0℃再搅拌30分钟，並在30分钟内使其升至室温。在重新冷却至0℃后滴入溶解在100毫升二氯甲烷中的粗制2-(2-三苯甲胺基噻唑-4-基)-2-(Z)-三苯甲氧亚胺基乙酰氯(大约54毫摩尔)，並于0℃搅拌2小时，将反应混合物于真空中浓缩，剩余物溶解在醋酸乙酯中，顺序用5%的硫代硫酸钠溶液、饱和的碳酸氢钠溶液和饱和的食盐溶液洗涤，将有机相用硫酸钠干燥並在真空中浓缩至干，粗品在硅胶(35-70μm)上进行色谱分离而纯化(柱50Cm×8.5Cm，甲苯∶醋酸乙酯＝5∶1)。
产量36.5克(66%)两种非对映体的比例为1∶1步骤2非对映体的色谱分离17克的非对映体混合物用硅胶(35-70微米，柱46×7.5Cm)、甲苯/醋酸乙酯(15/1)洗脱，流速为50毫升/分钟进行色谱分离。真空浓缩后得到6.0克无极性的非对映体1和4.5克极性非对映体2。
非对映体1Rf(甲苯/醋酸乙酯＝5/1)0.481H-NMR(DMSO-d6，270 MHz)δ＝1.15(s，9H，C(CH3)3);1.50(d，3H，OCH(CH3)O);3.20(s，3H，OCH3);3.57(AB-系统，2H，SCH2);4.15(s，2H，CH2O);5.25(d，1H，H-6);5.89(dd，1H，H-7);6.59(s，1H，噻唑-H);6.89(q，1H，OCH(CH3)O);7.12-7.37(m，30H，芳环-H);8.75(s，1H，NH);9.90(d，1H，酰胺-NH).
非对映体2Rf(甲苯/醋酸乙酯＝5/1)0.401H-NMR(CDCl3，270 MHz)δ＝1.22(s，9H，C(CH3)3);1.56(d，3H，OCH(CH3)O);3.30(s，3H，OCH3);3.39(AB-系统，2H，SCH2);4.27(s，2H，CH2O);5.05(d，1H，H-6);6.04(dd，1H，H-7);6.41(s，1H，噻唑-H);6.75(s，1H，NH);7.04(q，1H，OCH(CH3)O);7.10-7.44(m，30H，芳环-H).
步骤37-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-羟亚胺基乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯非对映体1把6.0克(5.9毫摩尔)由步骤2得到的非对映体1在15毫升甲酸中的溶液滴加到3毫升水中。先在室温搅拌90分钟，然后在0℃搅拌30分钟。抽滤沉淀出来的三苯基甲醇並用少量甲酸/水(5/1)洗涤。合并的滤液与60毫升醋酸乙酯和20毫升水混合。在冰浴冷却下，用2N苛性钠使PH值为3.0，分离有机相，用每次50毫升水洗涤二次並重新加入50毫升水，添加40%的苛性钠使PH值调节至6.5，其溶液的温度不得超过10℃。分离后有机相用饱和的食盐溶液洗涤，硫酸钠干燥並真空浓缩至原液的四分之一，这样得到的溶液滴到150毫升二异丙醚中，继续在室温搅拌60分钟然后抽滤出产品，用二异丙醚洗涤，先在空气中干燥18小时再在真空中在五氧化二磷中干燥。
产量1.7克(54%)1H-NMR(DMSO-d6，270 MHz)δ＝1.15(s，9H，C(CH3)3);1.48(d，3H，OCH(CH3)O);3.20(s，3H，OCH3);3.55(AB-系统，2H，SCH2);4.13(s，2H，CH2O);5.21(d，1H，H-6);5.85(dd，1H，H-7)，6.65(s，1H，噻唑-H);6.87(q，1H，OCH(CH3)O);7.11(s，2H，NH2);9.47(d，1H，酰胺-NH);11.28(s，1H，NOH).
非对映体2类似地转化4.5克(毫摩尔)由步骤2得到的非对映体2。
产量1.7克(71%)1H-NMR(DMSO-d6，270 MHz)δ＝1.16(s，9H，C(CH3)3);1.49(d，3H，OCH(CH3)O);3.20(s，3H，OCH3);3.55(AB系统2H，SCH2);4.12(s，2H，CH2O);5.19(d，1H，H-6);5.82(dd，1H，H-7);6.66(s，1H，噻唑-H);6.93(q，1H，OCH(CH3)O);7.10(s，2H，NH2);9.45(d，1H，酰胺-NH);11.29(s，1H，NOH).
步骤47-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-羟亚胺基乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯-对甲苯磺酸盐非对映体1将从步骤3得到的1克(1.85毫摩尔)非对映体1在35毫升正丙醇中的混悬液与在1毫升正丙醇中的383毫克(2.0毫摩尔)对甲苯磺酸-水合物混合。固体物质进入到溶液中，並且几分钟后盐开始结晶。在室温再搅拌1小时，吸滤该产品並用5毫升正丙醇和10毫升二异丙醚洗涤，先在空气中干燥18小时，再在高真空中用氯化钙和石蜡干燥。
产量1.09克(83%)〔α〕20D＝ 48.8(C＝1，甲醇)熔点＞200℃(分解)1H-NMR(DMSO-d6，270 MHz)δ＝1.15(s，9H，C(CH3)3);1.48(d，3H，OCH(CH3)O);2.29(s，3H，Aryl-CH3);3.20(s，3H，OCH3);3.59(A B系统，2H，SCH2);4.14(s，2H，CH2O);5.24(d，1H，H-6);5.85(dd，1H，H-7);6.82(s，1H，噻唑-H);6.87(q，1H，OCH(CH3)O);7.08-7.15 und 7.45-7.52(2 x m，2x 2H，芳环-H);8.0-8.8(br.，3H，NH3);9.67(d，1H，酰胺-NH);12.04(s，1H，NOH).
非对映体2由步骤3得到的1.6克(2.5毫摩尔)非对映体2为起始物在15毫升正丙醇中重结晶制备的对-甲苯磺酸盐。
产量1.4克(66%)〔α〕20D＝ 12.7(C＝1，甲醇)熔点＞200℃(分解)
1H-NMR(DMSO-d6，270 MHz)δ＝1.17(s，9H，C(CH3)3);1.49(d，3H，OCH(CH3)O);2.29(s，3H，Aryl-CH3);3.21(s，3H，OCH3);3.57(A B系统，2H，SCH2);4.13(s，2H，CH2O);5.22(d，1H，H-6);5.82(dd，1H，H-7);6.85(s，1H，噻唑-H);6.94(q，1H，OCH(CH3)O);7.08-7.16 und 7.45-7.52(2 x m，2x 2H，芳环-H);8.4-8.9(br.，3H，NH3);9.68(d，1H，酰胺-NH);12.12(s，1H，NOH).
实施例27-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2(Z)-羟亚氨基乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯-对甲苯磺酸盐(非对映体1)50克(70毫摩尔)7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-羟亚氨基乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯-对甲苯磺酸盐(非对映体1/非对映体2＝63/37)在65毫升二甲基乙酰胺中小心加温使溶解。在1小时内将该溶液滴入450毫升正丙醇中，为了使结晶完全，再于室温搅拌4小时，抽滤产品，依次用正丙醇和二异丙醚洗涤，先在空气中干燥然后在真空中用五氧化二磷干燥。
产量29.5克(59%，非对映体1/非对映体2＝79/21)。
在三次连续结晶(每次65毫升二甲基乙酰胺和450毫升正丙醇)后，得到8.0克(25%)纯度大于97%的非对映体1。
其光谱数据与实施例1中的非对映体1相符。该非对映体化合物用HPLC确定(LiChrospher 60，RP-select B，125×4mm，甲醇/水＝5/6加有0.12%磷酸二氢铵，PH＝2.3;流速1毫升/分钟测定时的λ＝228nm，停留时间非对映体114.6分钟，非对映体211.7分钟)。
实施例3步骤13-甲氧甲基-7-苯氧乙酰氨基-3-头孢-4-羧酸钠盐该钠盐可从其羧酸(Fujimoto等人，Antibiotics XL(1987))370-84)获得。
50.3克(133毫摩尔)的羧酸和11.7克(140毫摩尔)碳酸氢钠与900毫升水搅拌，过滤和冻干后即可得此钠盐。
产量47.8克(67%)1H-NMR(D2O，270 MHz)δ＝3.28(s，3H，OCH3);3.42(A B系统，2H，SCH2);4.16(A B系统，2H，CH2O);4.72(A B系统，2H，OCH2CO);5.12(d，1H，H-6);5.67(d，1H，H-7);6.98-7.12 und 7.32-7.42(2 x m，5H，芳环-H).
步骤23-甲氧甲基-7-苯氧乙酰氨基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯42.8克(107毫摩尔)3-甲氧甲基-7-苯氧乙酰氨基-3-头孢-4-羧酸钠在430毫升干燥的二甲基甲酰胺中与25.7克(100毫摩尔)2，2-二甲基丙酸-1-碘乙基酯混合。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后倒入由2.5升水和1.5升醋酸乙酯的混合物中，水相再用醋酸乙酯提取一次，合并有机相并且用饱和食盐溶液洗涤。硫酸镁干燥並在真空中蒸干。
产量50.3克(98%，非对映体1/非对映体2＝50/50)步骤3非对映体的色谱分离。
用中压色谱仪分离在步骤2中得到的非对映体混合物(硅胶35-70μm，1克物质用40克硅胶，甲苯/醋酸乙酯/二异丙醚＝120/15/6)。
非对映体11H-NMR(DMSO-d6，270MHz)δ＝1.14(s，9H，C(CH3)3);1.48(d，3H，OCH(CH3)O);3.21(s，3H，OCH3);3.59(A B系统，2H，SCH2);4.14(s，2H，CH2O);4.52(d，2H，OCH2CO);5.18(d，1H，H-6);5.78(dd，1H，H-7);6.87(q，1H，OCH(CH3)O);6.9-7.0 und 7.25-7.32(2 x m，5H，Ar芳环-H);9.13(d，1H，酰胺-NH).
非对映体21H-NMR(DMSO-d6，270MHz)δ＝1.17(s，9H，C(CH3)3);1.49(d，3H，OCH(CH3)O);3.22(s，3H，OCH3);3.60(A B系统，2H，SCH2);4.13(s，2H，CH2O);4.52(d，2H，OCH2CO);5.18(d，1H，H-6);5.75(dd，1H，H-7);6.90-6.99(m，4H，芳环-H und OCH(CH3)O);7.20-7.32(m，2H，芳环-H);9.12(d，1H，酰胺-NH);
步骤47-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯。
非对映体1-(对甲苯磺酸盐)3.93克(7.8毫摩尔)由步骤3得到的非对映体1和1.07ml(8.45毫摩尔)N，N-二甲基苯胺溶于39毫升无水二氯甲烷中的溶液以滴加方式与1.94克(9.32毫摩尔)五氯化磷在32毫升无水二氯甲烷的溶液混合，溶液内温度不得超过-25℃。在2小时内将温度上升至-10℃，然后一次加到19.4毫升异丙醇中，10分钟后将反应混合物倒入250毫升饱和碳酸氢钠和250毫升醋酸乙醋中並尽快分离有机相。用醋酸乙酯再次提取有机相。合并的有机相用饱和的食盐溶液洗涤，硫酸镁干燥並真空浓缩，将剩余物溶解在5毫升醋酸乙酯中，並与1.47克(7.74毫摩尔)对甲苯磺酸-水合物在10毫升醋酸乙酯的溶液混合，抽滤该产品，用醋酸乙酯洗涤並在真空中用五氧化二磷干燥。
产量2.57克(61%)1H-NMR(DMSO-d6，270MHz)δ＝1.15(s，9H，C(CH3)3);1.48(d，3H，OCH(CH3)O);2.29(s，3H，Aryl-CH3);3.23(s，3H，OCH3);3.69(AB系统，2H，SCH2);4.16(s，2H，CH2O);5.24 und 5.28(2 x d，2 x 1H，H-6 und H-7);6.87(q，1H，OCH(CH3)O);7.12(d，2H，芳环-H);7.49(d，2H，芳环-H);8.88(s，2H，NH2).
非对映体2盐酸盐从步骤2得到的506毫克(1毫摩尔)非对映体2起始用类似的方法裂解苯氧乙酰基团，非对映体2作为盐酸盐从醋酸乙酯中结晶出来。
产量223毫克(55%)1H-NMR(DMSO-d6，270MHz)δ＝1.17(s，9H，C(CH3)3);1.49(d，3H，OCH(CH3)O);3.24(s，3H，OCH3);3.68(AB系统，2H，SCH2);4.20(s，2H，CH2O);5.21和5.25(2 x d，2 x 1H，H-6和H-7);6.93(q，1H，OCH(CH3)O);9.18(s，2H，NH2).
步骤53-甲氧甲基-7-(2-(2-三苯甲基氨基噻唑-4-基)-2(Z)-三苯甲氧亚胺基乙酰氨基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯(非对映体1)将1.5克(2.75毫摩尔)从步骤4得到的非对映体1-甲苯磺酸盐悬浮在100毫升醋酸乙酯和30毫升水中，在剧烈搅拌下在0℃用饱和碳酸氢钠溶液调节PH至6.5。有机相依次用30毫升水和饱和食盐溶液洗涤。硫酸钠干燥，真空浓缩至干。
产量1.03克(98%)如在实施例1中所描述的，将1.81克(2.3毫摩尔)2-(2-三苯甲基氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-三苯甲基肟基醋酸-三乙基铵盐转变成酰氯。
在-5℃将在8毫升无水二氯甲烷中的酰氯滴到880毫克(2.3毫摩尔)酯在10毫升无水二氯甲烷的溶液中，2小时后，按实施例1所描述的方法进行处理。粗产品在用甲苯/醋酸乙酯(5/1)色谱分离后得到纯净的非对映体产品。
产量2.38克(99%)光谱数据与实施例1的非对映体1的相符。后面的反应如该实施例所描述的那样进行。
实施例47-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯，非对映体1-甲苯磺酸盐和非对映体2盐酸盐。
按实施例3步骤4所描述的，从3.03克(6毫摩尔)3-甲氧甲基-7-苯氧乙酰胺基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯(非对映体1/非对映体2＝52/48)起始，裂解掉苯氧基乙酰基。干燥过的有机相浓缩至10毫升，在冷却至0℃时，非对映体2作为盐酸盐沉淀下来，抽滤。(产量759毫克＝31%)。在母液中加入1.13克(5.9毫摩尔)对甲苯磺酸-水合物在5毫升醋酸乙酯中的溶液。吸滤析出的甲苯磺酸盐，用少量醋酸乙酯洗涤，在真空中用五氧化二磷干燥。
产量667毫克(23%)根据HPLC，非对映体1的含量大于97%(HPLCLiChrospher 100RP-18，5μm，125×4mm，流速1ml/分钟，测定时的λ＝254nm，水/甲醇＝52/48，其中含0.1%乙酸胺，停留时间非对映体112.1分钟，非对映体211.8分钟)。
该中间体按已经在前面描述的方法转变成终产物。
实施例57-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯，非对映体1-对苯甲磺酸盐。
将4.88克(20毫摩尔)7-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸在200毫升无水二氯甲烷中的悬浮液于0℃与3.12毫升(21毫摩尔)DBU混合。成为略混浊的黄色溶液，将4.99克(24毫摩尔)2，2-二甲基丙酸-1-溴乙基酯加入该黄色液体中，于室温搅拌3小时。反应溶液加到600毫升饱和的碳酸氢钠和800毫升二氯甲烷中，有机相用饱和食盐溶液洗涤，硫酸钠干燥，真空蒸干。将产品(9.3克)溶于15毫升醋酸乙酯中，並与1.9克(10毫摩尔)对甲苯磺酸-水合物在醋酸乙酯中的溶液混合。抽滤析出的产品，用二异丙醚洗涤並在真空中干燥。
产量3.95克(36%)非对映体1/非对映体2＝85/15实施例67-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯，非对映体1甲苯磺酸盐和非对映体2盐酸盐正如在实施例5中所描述的，从4.88克(20毫摩尔)7-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸制备粗产品，将所得到的油状物溶于20毫升醋酸乙酯並与新鲜制备的0.65毫升(9.2毫摩尔)乙酰氯和溶于5毫升醋酸乙酯的1.07毫升(18.4毫摩尔)乙醇溶液混合，吸滤在冰浴中析出的盐酸盐，用醋酸乙酯洗涤並干燥。
产量2.57克(32%)，非对映体1/非对映体2＝22/78该滤液再与1.75克(9.2毫摩尔)对甲苯磺酸-水合物在8毫升醋酸乙酯中的溶液混合，吸滤析出的沉淀。
产量1.15克(16%)，非对映体1/非对映体2＝97/3光谱数据与实施例3的相同。
实施例7步骤13-甲氧甲基-7〔(萘-2-基)-次甲氨基〕-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯(非对映体混合物)正如在实施例5中描述的，从2.44克(10毫摩尔)7-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸制备粗制酯。这样得到的油状物溶解于30毫升无水二氯甲烷中並与1.56克(10毫摩尔)萘-2-甲醛在40毫升甲苯中的溶液混合，在室温放置3小时后用40毫升甲苯稀释，並每次用3.0毫升水洗三次。溶液用硫酸镁干燥，在真空中浓缩至干。
步骤2非对映体的色谱分离由步骤1得到的粗产品在500克硅胶上(PH7.5)进行色谱分离。为此将市售的硅胶(35-70μm)悬浮于水中並与稀释的苛性钠溶液混合直至PH值为7.5保持不变。抽滤该硅胶，用甲醇洗涤並在110℃/20托下干燥18小时。用甲苯/醋酸乙酯(20/1)洗脱，首先得到1.7克(33%)非对映体1，然后得到1.65克(32%)非对映体2。用甲醇重结晶得到无色针状结晶，熔点110℃。
非对映体1
1H-NMR(CDCl3，270MHz)δ＝1.22(s，9H，C(CH3)3);1.58(d，3H，CH-CH3);3.22(s，3H，OCH3);3.57(s，2H，SCH2);4.31(AB系统，2H，CH2O);5.21(d，1H，H-6);5.50(dd，1H，H-7);6.99(q，1H，CH-CH3);7.52(mc，2H，芳环-H)，7.88(mc，3H，芳环-H);8.03(mc，3H，芳环-H);8.78(d，1H，CH＝N).
非对映体21H-NMR(CDCl3，270MHz)δ＝1.22(s，9H，C(CH3)3);1.58(d，3H，CH-CH3);3.32(s，3H，OCH3);3.52(s，2H，SCH2);4.26(AB系统，2H，CH2O);5.26(d，1H，H-6);5.49(dd，1H，H-7);7.02(q，1H，CH-CH3);7.51(宽，2H，芳基-H)，7.84(宽，3H，芳基-H);8.02(宽，3H，芳基-H);8.75(d，1H，CH＝N).
将席夫碱裂解成为7-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1(2，2-二甲基-丙酸)-乙酯的纯净的非对映体，是用Girard T试剂按照文献方法(例如Kamach等The Journal of Antibiotics XLI(11)(1988)，1602-1611)进行的。
权利要求
1.制备通式Ⅱ的3-头孢-4羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯的两种非对映体的结晶性酸加合盐的方法
式中X是生理上相容的、一元或多元的无机或有机酸的阴离子，并且基团=N-OH处于顺位，其特征在于a)制备式Ⅲ的化合物，
通过色谱分离该非对映体，裂解三苯甲基，制备酸加合产品，b)用结晶法从式Ⅱ非对映体的混合物中浓缩极性较小的非对映体或c)制备分离开的非对映体的式Ⅳ中间体，并转变成分离开的式Ⅱ非对映体。
2.根据权利要求1的方法，用于制备通式Ⅱ的3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯的两种非对映体的结晶性酸加合盐，其特征在于带有＊号的碳原子具有(1S)构型。
3.根据权利要求1或2的方法，用于制备通式Ⅱ的3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯的两种非对映体的结晶性酸加合盐，其特征在于，HX代表苯磺酸、对甲苯磺酸或4-乙基苯磺酸。
4.制备抗细菌感染有效的药物制剂的方法，该药含有根据权利要求1至3的方法制备的通式Ⅱ的3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯的两种对映体的结晶性酸加合盐，其特征在于，将通式Ⅱ的3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯的两种非对映体的结晶性酸加合盐与药剂学常规载体或稀释剂制成药物学合适的给药形式。
全文摘要
本发明涉及通式II
文档编号C07D501/34GK1067055SQ9210391
公开日1992年12月16日 申请日期1992年5月23日 优先权日1991年5月24日
发明者E·迪佛萨, G·费谢尔, J-H·金德拉雷, R·拉特莱尔, T·沃尔曼, D·易瑟特 申请人:赫彻斯特股份公司
技术领域：
本发明涉及式Ⅰ的7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-羟亚胺基-乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯非对映体的结晶性的肠内吸收盐及其制备方法。
在德国专利申请P3804841(EP-A-0329008)中描述了7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2(Z)-羟亚胺基-乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸。其中式Ⅰ的酯特别重要，因为它在不同的动物物种中均能很好地吸收，並且在被吸收后通过体内的酶很快地和完全地再裂解成为带有游离羧基的有抗菌活性的头孢菌素。
接着，在德国专利申请P3919259(EP-A-0402806)中描述了由式Ⅰ的酯和磺酸得到的化学计量的结晶性的盐，相对于式Ⅰ的游离碱而言该盐具有它的高稳定性的优点。
式Ⅰ的酯在乙酯基团的1位具有一个不对称碳原子，在德国专利申请P3919259中描述的该盐是以非对映体的混合物存在的。
可比的非对映体混合物存在于头孢替安-Hxetil、头孢呋新-Axetil、头孢多肟-Proxetil和BMY28271中。
根据至今对这样的头孢前体药物肠吸收机制的研究，在乙酯基团的1位具有的立体化学结构不影响肠道吸收，对头孢替安-Hxetil非对映体的实验表明了这种可能(T.Nishimura等人，The Journal of Antibioties，Vol.XL(1987)81-90)。
因此，分出的式Ⅰ的非对映体的盐在肠道吸收方面明显地不同是令人惊奇的。因此，更好的可吸收的非对映体显示了比在德国专利申请P3919259中描述的非对映体的混合物更高的生物利用度。
因此，本发明的主题是通式Ⅱ的非对映体的纯净盐，式中＝N-OH基团处在顺位。这两种具有(1S)构型的非对映体在酯的部份最好具有较小的极性，从而具有较高的生物利用度。
式Ⅱ中，HX可以是一个一元或多元酸，其中X可以是一个无机的或有机的生理学允许的阴离子。
作为无机酸，HX代表例如化学计量的HCl、HBr、HI、HBF4、HNO3、HClO4、H2SO4或H3PO4。作为有机酸，HX代表脂族的或芳族的磺酸，无机酸最好是HCl、HBr和H2SO4，有机酸最好是甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸和4-乙基苯磺酸。特别好的是苯磺酸、对甲苯磺酸和4-乙基苯磺酸。
本发明另一个主题是制备通式Ⅱ非对映体化合物的方法，其特征在于1.制备式Ⅲ的化合物，通过色谱法分离非对映体，裂解掉三苯甲基，制备酸加合盐产物，或者
2.通过结晶法，从式Ⅱ的非对映体的混合物中浓集极性较小的非对映体，或者3.制备以分离的非对映体形式的式Ⅳ中间体，並将此中间体转化成分离形式的式Ⅱ的非对映体。
制备方法1中所需要的式Ⅲ非对映体混合物已经在德国专利申请P3804841中叙述了。
非对映体的分离用由甲苯和醋酸乙酯组成的展开剂在硅胶上进行色谱分离来达到。甲苯与醋酸酯的比率可在3∶1至20∶1之间变化，其中10∶1至15∶1的范围较好。对于一份要分离的混合物，使用20-80份硅胶，其中以30-50份为好。
这样得到的式Ⅲ的纯非对映体转化成式Ⅱ的盐，所用的方法已在德国专利P3804841和P3919259中叙述过。
根据方法2，用有机溶剂结晶非对映体混合物可获得式Ⅱ的较小极性的非对映体。
通常的重结晶条件是把一种物质在一种溶剂中加热到溶液沸腾。式Ⅰ和Ⅱ的化合物在这样的条件下被溶解。而下面描述的方法则可使盐重结晶。
首先将一份非对映体混合物溶解在1-5份，最好是1-2份的一种有机溶剂例如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺中，再将这样得到的溶液滴到5-50倍体积的一种有机溶剂中(如醇、酯、醚、酮、腈)例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、醋酸乙酯、醋酸丁酯、丙酮、乙醚、二异丙醚和乙腈。最好是10-20倍体积的正丙醇、异丙醇或正丁醇中的一种。
滴加可以持续10分钟至2小时，最好在30分钟至1小时。为了结晶完全，再搅拌1-18小时，最好是3-6小时，温度应在0℃至40℃之间，以20°-25℃为好。
这样得到的盐通过常规实验方法例如过滤进行分离并在高真空(＜1托)中在一种干燥剂例如五氧化二磷的存在下除去附着的溶剂。
重复几次上述过程，得到纯的式Ⅱ(HX对甲苯磺酸)的具有较高肠吸收的非对映体。
如在德国专利申请P3804841中所描述的，根据方法3制备非对映体混合物的式Ⅳ化合物。
非对映体可通过对式Ⅴ化合物的盐结晶法加以分离。
在通式Ⅴ中，HY代表一元或多元酸，其中Y可以是一个无机或有机阴离子。
作为无机酸，HY代表例如HCl、HBr、HI、HF、HNO3、HClO4、HSCN、H2SO4或H3PO4，作为有机酸，HY代表脂族的或芳族的磺酸、羧酸和磷酸，下列的有机酸可作为例子苯磺酸、对甲苯磺酸、4-乙基苯磺酸、4-氯苯磺酸、4-溴苯磺酸、2-
磺酸、4-联苯磺酸、4-联苯磺酸、萘-1，5-二磺酸、甲磺酸、乙磺酸、十二烷基磺酸、樟脑磺酸、草酸。
优选的酸性成分是HCl、HBr、苯磺酸、对甲苯磺酸、4-乙基苯磺酸和4-联苯磺酸。
式Ⅳ非对映体混合物的溶液和酸性成分HY的溶液经混合来制备式Ⅴ的盐，有机溶剂可以是例如酯、醚、醇、酮、碳氢化合物、腈和卤代碳氢化合物以及它们的混合物。优选的溶剂有，例如苯、甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、叔丁醇、二异丙醚、乙腈、二氯甲烷、丙酮及它们的混合物。
如果有机溶剂是与水可混溶的，作为无机酸的溶剂可以加入水。HCl和HBr在有机溶剂中的溶液可以例如通过导入氯化氢或溴化氢来制备，也可以由乙酰卤、卤化磷和三卤氧化磷和醇(卤＝Cl，Br)来制备。
式Ⅳ的碱与酸成分的比值对于浓集一个非对映体是很重要的。一当量的非对映体混合物应加入0.2-2.0最好是0.3-1.0当量的酸性成份。
在室温下加入酸性组分，为了沉淀完全，还要搅拌直至10个小时，这取决于酸性组分和溶剂。为了使沉淀完全可任选地将温度冷却至室温至-78℃之间。
得到的盐过滤后，如果需要，通过重结晶进一步纯化。为此，加入上述溶剂和它们的混合物。最佳溶剂的选择取决于所使用的酸性成份，因此例如对于对甲苯磺酸盐适用的溶剂是甲醇、乙醇、正丙醇和异丙醇。
本方法的特征是以两个连续的步骤进行通式Ⅳ非对映体的沉淀。例如，将式Ⅳ非对映体混合物的溶液和酸性成分HY的溶液混合，较难溶的式Ⅴ的非对映体首先沉淀，过滤分离，接着从滤液中再沉淀较易溶解的通式Ⅴ的非对映体。
在该连续的步骤中，酸性成分HY可以是相同的或者是不同的，其中不同的酸性成分加入的顺序是随意的。可以例如通过适当地选择酸性成分HY，首先沉淀的作为难溶盐的通式Ⅳ的极性非对映体或者通式Ⅳ的非极性对映体。
通过对酸性成分的选择，可得到纯净形式的式Ⅴ的两个差向异构体。例如，若使用氯化氢或溴化氢，得到极性较强的差向异构体;若用苯磺酸，4-乙基苯磺酸，联苯磺酸或对甲苯磺酸，则得到较低极性的差向体。
此外，还可以从通式Ⅵ的化合物得到式Ⅳ的非对映体混合物，
式中基团R1代表在肽化学中常规用的氨基保护基团，例如甲酰基，叔丁氧基羰基，苯氧乙酰基，苯乙酰基，烯丙氧羰基，苄氧基羰基和4-硝基苯氧基羰基等基团。
保护基团的裂解是用已知的方法进行，因此甲酰基和叔丁氧基羰基例如可以用酸裂解掉，苯氧乙酰基和苯乙酰基可以例如用五氯化磷或者用青霉素酰化酶酶解离去，烯丙氧基羰基可以用 Pd〔P(C6H5)3〕4使之裂解，苄氧基羰基和4-硝基苯氧羰基可以通过氢解除去。
在用五氯化磷裂解苯氧乙酰基和苯乙酰基时，迅速地处理后会得到浓集形式的极性强的差向异构体的盐酸盐，甚至不必加入氯化氢。在处理完毕后未除去的磷酸酯氯化物慢慢地释放出氯化氢，这作为氯化氢的来源。
从化合物Ⅵ起始，还可以先分离该非对映体然后裂解掉保护基团来得到式Ⅴ的纯净的非对映体化合物。非对映体的分离可以用结晶法或色谱法，精确的条件取决于保护基团R1。例如R1是苯氧乙酰基就可以将非对映体在硅胶上用一种有机溶剂进行色谱分离。
式Ⅳ的纯非对映体的另一个制备方法还可以从式Ⅶ的席夫碱起始，式中R2可以是苯基或萘基，它们可以被(C1-C4)烷基、苯基、甲氧基、卤素(例如F、Br、Cl、I)或硝基取代。
式Ⅶ的席夫碱的非对映体混合物可以通过色谱例如在硅胶上进行或者通过分步结晶使之分离。该席夫碱再裂解成式Ⅳ的纯非对映体可以按照已知的方法，例如用酸水解或用Girard-T试剂来完成。
还可以根据已知的方法从式Ⅴ的非对映体纯净盐制备式Ⅳ的非对映体碱，並如在德国专利申请P3804841和P3919259中所描述的那样制备式Ⅱ的非对映体盐。
本发明的有用性在于提高了式Ⅱ的较小极性的非对映体的肠道吸收，正如在表1中对甲苯磺酸盐所显示的。
表1非对映体组份 回收率(四次实验的平均值)由实例1得到的非对映体1 67.7%由实例1得到的非对映体2 19.7%非对映体混合物(比例1/1) 39.2%表1显示了在口服用药7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-肟基-乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯-对甲苯磺酸盐(剂量基于有效抗菌成份为10毫克/公斤)后，在狗(数量＝4)尿中(0-24小时)的7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-肟基-乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸的回收率。狗尿中的有效物质量通过使用Mueller-Hinton-琼脂(含10%绵羊血)和酿脓链球菌A77作为试验菌进行琼脂扩散试验来测定。
本发明的式Ⅱ化合物以常规的药物制剂形式例如胶囊、片剂、粉剂、糖浆剂或悬浮剂口服给药，剂量取决于患者的年龄、症状和体重以及治疗持续时间。而常规为每天大约0.1克至大约5克，以每天大约0.2克至3克为好，该化合物最好分几次给药，例如每天2至4次，每次剂量可以含有效物质50至500毫克。
口服制剂可以含有常用载体和/或稀释剂，例如胶囊或片剂用的粘合剂可考虑明胶、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮或羧甲基纤维素，稀释剂可以是例如乳糖、蔗糖、淀粉、磷酸钙或聚乙二醇，润滑剂例如滑石粉或硬脂酸镁。对于液体制剂，例如水或油悬浮剂，糖浆或通常已知的形式都合适。
下面根据本发明可制备式1化合物7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2(Z)-肟基-乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯的实施例是为了进一步说明本发明，而不是对本发明的限制。
实施例1前体2-(2-三苯甲胺基噻唑-4-基)-2-(Z)-三苯甲氧亚胺基-乙酰氯向42.0克(54毫摩尔)2(2-三苯甲胺基噻唑-4-基)-2(Z)-三苯甲氧亚胺基醋酸-三乙铵盐在400毫升无水二氯甲烷中的溶液在-70℃，于30分钟内滴加溶解在200毫升无水二氯甲烷的11.4克(55毫摩尔)五氯化磷，並使溶液内部温度不超过-50℃。在-70℃继续保持60分钟后将该溶液在真空中挥发干溶剂，並使温度不超过30℃。接着在高真空中干燥片刻。将这样获得的粗产品溶解在100毫升无水二氯甲烷中并立即进行酰化。
步骤13-甲氧甲基-7-〔2-(2-三苯甲胺基噻唑-4-基)-2-(Z)-三苯甲氧亚胺-乙酰氨基〕-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯向14.0克(57毫摩尔)7-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸在160毫升无水二氯甲烷的混悬液在0℃慢慢加入9.5毫升(64毫摩尔)DBU並在0℃搅拌30分钟。然后再加入20.8克(81毫摩尔)2，2-二甲基丙酸-1-碘乙基酯，于0℃再搅拌30分钟，並在30分钟内使其升至室温。在重新冷却至0℃后滴入溶解在100毫升二氯甲烷中的粗制2-(2-三苯甲胺基噻唑-4-基)-2-(Z)-三苯甲氧亚胺基乙酰氯(大约54毫摩尔)，並于0℃搅拌2小时，将反应混合物于真空中浓缩，剩余物溶解在醋酸乙酯中，顺序用5%的硫代硫酸钠溶液、饱和的碳酸氢钠溶液和饱和的食盐溶液洗涤，将有机相用硫酸钠干燥並在真空中浓缩至干，粗品在硅胶(35-70μm)上进行色谱分离而纯化(柱50Cm×8.5Cm，甲苯∶醋酸乙酯＝5∶1)。
产量36.5克(66%)两种非对映体的比例为1∶1步骤2非对映体的色谱分离17克的非对映体混合物用硅胶(35-70微米，柱46×7.5Cm)、甲苯/醋酸乙酯(15/1)洗脱，流速为50毫升/分钟进行色谱分离。真空浓缩后得到6.0克无极性的非对映体1和4.5克极性非对映体2。
非对映体1Rf(甲苯/醋酸乙酯＝5/1)0.481H-NMR(DMSO-d6，270 MHz)δ＝1.15(s，9H，C(CH3)3);1.50(d，3H，OCH(CH3)O);3.20(s，3H，OCH3);3.57(AB-系统，2H，SCH2);4.15(s，2H，CH2O);5.25(d，1H，H-6);5.89(dd，1H，H-7);6.59(s，1H，噻唑-H);6.89(q，1H，OCH(CH3)O);7.12-7.37(m，30H，芳环-H);8.75(s，1H，NH);9.90(d，1H，酰胺-NH).
非对映体2Rf(甲苯/醋酸乙酯＝5/1)0.401H-NMR(CDCl3，270 MHz)δ＝1.22(s，9H，C(CH3)3);1.56(d，3H，OCH(CH3)O);3.30(s，3H，OCH3);3.39(AB-系统，2H，SCH2);4.27(s，2H，CH2O);5.05(d，1H，H-6);6.04(dd，1H，H-7);6.41(s，1H，噻唑-H);6.75(s，1H，NH);7.04(q，1H，OCH(CH3)O);7.10-7.44(m，30H，芳环-H).
步骤37-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-羟亚胺基乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯非对映体1把6.0克(5.9毫摩尔)由步骤2得到的非对映体1在15毫升甲酸中的溶液滴加到3毫升水中。先在室温搅拌90分钟，然后在0℃搅拌30分钟。抽滤沉淀出来的三苯基甲醇並用少量甲酸/水(5/1)洗涤。合并的滤液与60毫升醋酸乙酯和20毫升水混合。在冰浴冷却下，用2N苛性钠使PH值为3.0，分离有机相，用每次50毫升水洗涤二次並重新加入50毫升水，添加40%的苛性钠使PH值调节至6.5，其溶液的温度不得超过10℃。分离后有机相用饱和的食盐溶液洗涤，硫酸钠干燥並真空浓缩至原液的四分之一，这样得到的溶液滴到150毫升二异丙醚中，继续在室温搅拌60分钟然后抽滤出产品，用二异丙醚洗涤，先在空气中干燥18小时再在真空中在五氧化二磷中干燥。
产量1.7克(54%)1H-NMR(DMSO-d6，270 MHz)δ＝1.15(s，9H，C(CH3)3);1.48(d，3H，OCH(CH3)O);3.20(s，3H，OCH3);3.55(AB-系统，2H，SCH2);4.13(s，2H，CH2O);5.21(d，1H，H-6);5.85(dd，1H，H-7)，6.65(s，1H，噻唑-H);6.87(q，1H，OCH(CH3)O);7.11(s，2H，NH2);9.47(d，1H，酰胺-NH);11.28(s，1H，NOH).
非对映体2类似地转化4.5克(毫摩尔)由步骤2得到的非对映体2。
产量1.7克(71%)1H-NMR(DMSO-d6，270 MHz)δ＝1.16(s，9H，C(CH3)3);1.49(d，3H，OCH(CH3)O);3.20(s，3H，OCH3);3.55(AB系统2H，SCH2);4.12(s，2H，CH2O);5.19(d，1H，H-6);5.82(dd，1H，H-7);6.66(s，1H，噻唑-H);6.93(q，1H，OCH(CH3)O);7.10(s，2H，NH2);9.45(d，1H，酰胺-NH);11.29(s，1H，NOH).
步骤47-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-羟亚胺基乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯-对甲苯磺酸盐非对映体1将从步骤3得到的1克(1.85毫摩尔)非对映体1在35毫升正丙醇中的混悬液与在1毫升正丙醇中的383毫克(2.0毫摩尔)对甲苯磺酸-水合物混合。固体物质进入到溶液中，並且几分钟后盐开始结晶。在室温再搅拌1小时，吸滤该产品並用5毫升正丙醇和10毫升二异丙醚洗涤，先在空气中干燥18小时，再在高真空中用氯化钙和石蜡干燥。
产量1.09克(83%)〔α〕20D＝ 48.8(C＝1，甲醇)熔点＞200℃(分解)1H-NMR(DMSO-d6，270 MHz)δ＝1.15(s，9H，C(CH3)3);1.48(d，3H，OCH(CH3)O);2.29(s，3H，Aryl-CH3);3.20(s，3H，OCH3);3.59(A B系统，2H，SCH2);4.14(s，2H，CH2O);5.24(d，1H，H-6);5.85(dd，1H，H-7);6.82(s，1H，噻唑-H);6.87(q，1H，OCH(CH3)O);7.08-7.15 und 7.45-7.52(2 x m，2x 2H，芳环-H);8.0-8.8(br.，3H，NH3);9.67(d，1H，酰胺-NH);12.04(s，1H，NOH).
非对映体2由步骤3得到的1.6克(2.5毫摩尔)非对映体2为起始物在15毫升正丙醇中重结晶制备的对-甲苯磺酸盐。
产量1.4克(66%)〔α〕20D＝ 12.7(C＝1，甲醇)熔点＞200℃(分解)
1H-NMR(DMSO-d6，270 MHz)δ＝1.17(s，9H，C(CH3)3);1.49(d，3H，OCH(CH3)O);2.29(s，3H，Aryl-CH3);3.21(s，3H，OCH3);3.57(A B系统，2H，SCH2);4.13(s，2H，CH2O);5.22(d，1H，H-6);5.82(dd，1H，H-7);6.85(s，1H，噻唑-H);6.94(q，1H，OCH(CH3)O);7.08-7.16 und 7.45-7.52(2 x m，2x 2H，芳环-H);8.4-8.9(br.，3H，NH3);9.68(d，1H，酰胺-NH);12.12(s，1H，NOH).
实施例27-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2(Z)-羟亚氨基乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯-对甲苯磺酸盐(非对映体1)50克(70毫摩尔)7-〔2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-羟亚氨基乙酰氨基〕-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯-对甲苯磺酸盐(非对映体1/非对映体2＝63/37)在65毫升二甲基乙酰胺中小心加温使溶解。在1小时内将该溶液滴入450毫升正丙醇中，为了使结晶完全，再于室温搅拌4小时，抽滤产品，依次用正丙醇和二异丙醚洗涤，先在空气中干燥然后在真空中用五氧化二磷干燥。
产量29.5克(59%，非对映体1/非对映体2＝79/21)。
在三次连续结晶(每次65毫升二甲基乙酰胺和450毫升正丙醇)后，得到8.0克(25%)纯度大于97%的非对映体1。
其光谱数据与实施例1中的非对映体1相符。该非对映体化合物用HPLC确定(LiChrospher 60，RP-select B，125×4mm，甲醇/水＝5/6加有0.12%磷酸二氢铵，PH＝2.3;流速1毫升/分钟测定时的λ＝228nm，停留时间非对映体114.6分钟，非对映体211.7分钟)。
实施例3步骤13-甲氧甲基-7-苯氧乙酰氨基-3-头孢-4-羧酸钠盐该钠盐可从其羧酸(Fujimoto等人，Antibiotics XL(1987))370-84)获得。
50.3克(133毫摩尔)的羧酸和11.7克(140毫摩尔)碳酸氢钠与900毫升水搅拌，过滤和冻干后即可得此钠盐。
产量47.8克(67%)1H-NMR(D2O，270 MHz)δ＝3.28(s，3H，OCH3);3.42(A B系统，2H，SCH2);4.16(A B系统，2H，CH2O);4.72(A B系统，2H，OCH2CO);5.12(d，1H，H-6);5.67(d，1H，H-7);6.98-7.12 und 7.32-7.42(2 x m，5H，芳环-H).
步骤23-甲氧甲基-7-苯氧乙酰氨基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯42.8克(107毫摩尔)3-甲氧甲基-7-苯氧乙酰氨基-3-头孢-4-羧酸钠在430毫升干燥的二甲基甲酰胺中与25.7克(100毫摩尔)2，2-二甲基丙酸-1-碘乙基酯混合。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后倒入由2.5升水和1.5升醋酸乙酯的混合物中，水相再用醋酸乙酯提取一次，合并有机相并且用饱和食盐溶液洗涤。硫酸镁干燥並在真空中蒸干。
产量50.3克(98%，非对映体1/非对映体2＝50/50)步骤3非对映体的色谱分离。
用中压色谱仪分离在步骤2中得到的非对映体混合物(硅胶35-70μm，1克物质用40克硅胶，甲苯/醋酸乙酯/二异丙醚＝120/15/6)。
非对映体11H-NMR(DMSO-d6，270MHz)δ＝1.14(s，9H，C(CH3)3);1.48(d，3H，OCH(CH3)O);3.21(s，3H，OCH3);3.59(A B系统，2H，SCH2);4.14(s，2H，CH2O);4.52(d，2H，OCH2CO);5.18(d，1H，H-6);5.78(dd，1H，H-7);6.87(q，1H，OCH(CH3)O);6.9-7.0 und 7.25-7.32(2 x m，5H，Ar芳环-H);9.13(d，1H，酰胺-NH).
非对映体21H-NMR(DMSO-d6，270MHz)δ＝1.17(s，9H，C(CH3)3);1.49(d，3H，OCH(CH3)O);3.22(s，3H，OCH3);3.60(A B系统，2H，SCH2);4.13(s，2H，CH2O);4.52(d，2H，OCH2CO);5.18(d，1H，H-6);5.75(dd，1H，H-7);6.90-6.99(m，4H，芳环-H und OCH(CH3)O);7.20-7.32(m，2H，芳环-H);9.12(d，1H，酰胺-NH);
步骤47-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯。
非对映体1-(对甲苯磺酸盐)3.93克(7.8毫摩尔)由步骤3得到的非对映体1和1.07ml(8.45毫摩尔)N，N-二甲基苯胺溶于39毫升无水二氯甲烷中的溶液以滴加方式与1.94克(9.32毫摩尔)五氯化磷在32毫升无水二氯甲烷的溶液混合，溶液内温度不得超过-25℃。在2小时内将温度上升至-10℃，然后一次加到19.4毫升异丙醇中，10分钟后将反应混合物倒入250毫升饱和碳酸氢钠和250毫升醋酸乙醋中並尽快分离有机相。用醋酸乙酯再次提取有机相。合并的有机相用饱和的食盐溶液洗涤，硫酸镁干燥並真空浓缩，将剩余物溶解在5毫升醋酸乙酯中，並与1.47克(7.74毫摩尔)对甲苯磺酸-水合物在10毫升醋酸乙酯的溶液混合，抽滤该产品，用醋酸乙酯洗涤並在真空中用五氧化二磷干燥。
产量2.57克(61%)1H-NMR(DMSO-d6，270MHz)δ＝1.15(s，9H，C(CH3)3);1.48(d，3H，OCH(CH3)O);2.29(s，3H，Aryl-CH3);3.23(s，3H，OCH3);3.69(AB系统，2H，SCH2);4.16(s，2H，CH2O);5.24 und 5.28(2 x d，2 x 1H，H-6 und H-7);6.87(q，1H，OCH(CH3)O);7.12(d，2H，芳环-H);7.49(d，2H，芳环-H);8.88(s，2H，NH2).
非对映体2盐酸盐从步骤2得到的506毫克(1毫摩尔)非对映体2起始用类似的方法裂解苯氧乙酰基团，非对映体2作为盐酸盐从醋酸乙酯中结晶出来。
产量223毫克(55%)1H-NMR(DMSO-d6，270MHz)δ＝1.17(s，9H，C(CH3)3);1.49(d，3H，OCH(CH3)O);3.24(s，3H，OCH3);3.68(AB系统，2H，SCH2);4.20(s，2H，CH2O);5.21和5.25(2 x d，2 x 1H，H-6和H-7);6.93(q，1H，OCH(CH3)O);9.18(s，2H，NH2).
步骤53-甲氧甲基-7-(2-(2-三苯甲基氨基噻唑-4-基)-2(Z)-三苯甲氧亚胺基乙酰氨基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯(非对映体1)将1.5克(2.75毫摩尔)从步骤4得到的非对映体1-甲苯磺酸盐悬浮在100毫升醋酸乙酯和30毫升水中，在剧烈搅拌下在0℃用饱和碳酸氢钠溶液调节PH至6.5。有机相依次用30毫升水和饱和食盐溶液洗涤。硫酸钠干燥，真空浓缩至干。
产量1.03克(98%)如在实施例1中所描述的，将1.81克(2.3毫摩尔)2-(2-三苯甲基氨基噻唑-4-基)-2-(Z)-三苯甲基肟基醋酸-三乙基铵盐转变成酰氯。
在-5℃将在8毫升无水二氯甲烷中的酰氯滴到880毫克(2.3毫摩尔)酯在10毫升无水二氯甲烷的溶液中，2小时后，按实施例1所描述的方法进行处理。粗产品在用甲苯/醋酸乙酯(5/1)色谱分离后得到纯净的非对映体产品。
产量2.38克(99%)光谱数据与实施例1的非对映体1的相符。后面的反应如该实施例所描述的那样进行。
实施例47-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯，非对映体1-甲苯磺酸盐和非对映体2盐酸盐。
按实施例3步骤4所描述的，从3.03克(6毫摩尔)3-甲氧甲基-7-苯氧乙酰胺基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯(非对映体1/非对映体2＝52/48)起始，裂解掉苯氧基乙酰基。干燥过的有机相浓缩至10毫升，在冷却至0℃时，非对映体2作为盐酸盐沉淀下来，抽滤。(产量759毫克＝31%)。在母液中加入1.13克(5.9毫摩尔)对甲苯磺酸-水合物在5毫升醋酸乙酯中的溶液。吸滤析出的甲苯磺酸盐，用少量醋酸乙酯洗涤，在真空中用五氧化二磷干燥。
产量667毫克(23%)根据HPLC，非对映体1的含量大于97%(HPLCLiChrospher 100RP-18，5μm，125×4mm，流速1ml/分钟，测定时的λ＝254nm，水/甲醇＝52/48，其中含0.1%乙酸胺，停留时间非对映体112.1分钟，非对映体211.8分钟)。
该中间体按已经在前面描述的方法转变成终产物。
实施例57-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯，非对映体1-对苯甲磺酸盐。
将4.88克(20毫摩尔)7-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸在200毫升无水二氯甲烷中的悬浮液于0℃与3.12毫升(21毫摩尔)DBU混合。成为略混浊的黄色溶液，将4.99克(24毫摩尔)2，2-二甲基丙酸-1-溴乙基酯加入该黄色液体中，于室温搅拌3小时。反应溶液加到600毫升饱和的碳酸氢钠和800毫升二氯甲烷中，有机相用饱和食盐溶液洗涤，硫酸钠干燥，真空蒸干。将产品(9.3克)溶于15毫升醋酸乙酯中，並与1.9克(10毫摩尔)对甲苯磺酸-水合物在醋酸乙酯中的溶液混合。抽滤析出的产品，用二异丙醚洗涤並在真空中干燥。
产量3.95克(36%)非对映体1/非对映体2＝85/15实施例67-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯，非对映体1甲苯磺酸盐和非对映体2盐酸盐正如在实施例5中所描述的，从4.88克(20毫摩尔)7-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸制备粗产品，将所得到的油状物溶于20毫升醋酸乙酯並与新鲜制备的0.65毫升(9.2毫摩尔)乙酰氯和溶于5毫升醋酸乙酯的1.07毫升(18.4毫摩尔)乙醇溶液混合，吸滤在冰浴中析出的盐酸盐，用醋酸乙酯洗涤並干燥。
产量2.57克(32%)，非对映体1/非对映体2＝22/78该滤液再与1.75克(9.2毫摩尔)对甲苯磺酸-水合物在8毫升醋酸乙酯中的溶液混合，吸滤析出的沉淀。
产量1.15克(16%)，非对映体1/非对映体2＝97/3光谱数据与实施例3的相同。
实施例7步骤13-甲氧甲基-7〔(萘-2-基)-次甲氨基〕-3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)乙酯(非对映体混合物)正如在实施例5中描述的，从2.44克(10毫摩尔)7-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸制备粗制酯。这样得到的油状物溶解于30毫升无水二氯甲烷中並与1.56克(10毫摩尔)萘-2-甲醛在40毫升甲苯中的溶液混合，在室温放置3小时后用40毫升甲苯稀释，並每次用3.0毫升水洗三次。溶液用硫酸镁干燥，在真空中浓缩至干。
步骤2非对映体的色谱分离由步骤1得到的粗产品在500克硅胶上(PH7.5)进行色谱分离。为此将市售的硅胶(35-70μm)悬浮于水中並与稀释的苛性钠溶液混合直至PH值为7.5保持不变。抽滤该硅胶，用甲醇洗涤並在110℃/20托下干燥18小时。用甲苯/醋酸乙酯(20/1)洗脱，首先得到1.7克(33%)非对映体1，然后得到1.65克(32%)非对映体2。用甲醇重结晶得到无色针状结晶，熔点110℃。
非对映体1
1H-NMR(CDCl3，270MHz)δ＝1.22(s，9H，C(CH3)3);1.58(d，3H，CH-CH3);3.22(s，3H，OCH3);3.57(s，2H，SCH2);4.31(AB系统，2H，CH2O);5.21(d，1H，H-6);5.50(dd，1H，H-7);6.99(q，1H，CH-CH3);7.52(mc，2H，芳环-H)，7.88(mc，3H，芳环-H);8.03(mc，3H，芳环-H);8.78(d，1H，CH＝N).
非对映体21H-NMR(CDCl3，270MHz)δ＝1.22(s，9H，C(CH3)3);1.58(d，3H，CH-CH3);3.32(s，3H，OCH3);3.52(s，2H，SCH2);4.26(AB系统，2H，CH2O);5.26(d，1H，H-6);5.49(dd，1H，H-7);7.02(q，1H，CH-CH3);7.51(宽，2H，芳基-H)，7.84(宽，3H，芳基-H);8.02(宽，3H，芳基-H);8.75(d，1H，CH＝N).
将席夫碱裂解成为7-氨基-3-甲氧甲基-3-头孢-4-羧酸-1(2，2-二甲基-丙酸)-乙酯的纯净的非对映体，是用Girard T试剂按照文献方法(例如Kamach等The Journal of Antibiotics XLI(11)(1988)，1602-1611)进行的。
权利要求
1.制备通式Ⅱ的3-头孢-4羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯的两种非对映体的结晶性酸加合盐的方法
式中X是生理上相容的、一元或多元的无机或有机酸的阴离子，并且基团=N-OH处于顺位，其特征在于a)制备式Ⅲ的化合物，
通过色谱分离该非对映体，裂解三苯甲基，制备酸加合产品，b)用结晶法从式Ⅱ非对映体的混合物中浓缩极性较小的非对映体或c)制备分离开的非对映体的式Ⅳ中间体，并转变成分离开的式Ⅱ非对映体。
2.根据权利要求1的方法，用于制备通式Ⅱ的3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯的两种非对映体的结晶性酸加合盐，其特征在于带有＊号的碳原子具有(1S)构型。
3.根据权利要求1或2的方法，用于制备通式Ⅱ的3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯的两种非对映体的结晶性酸加合盐，其特征在于，HX代表苯磺酸、对甲苯磺酸或4-乙基苯磺酸。
4.制备抗细菌感染有效的药物制剂的方法，该药含有根据权利要求1至3的方法制备的通式Ⅱ的3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯的两种对映体的结晶性酸加合盐，其特征在于，将通式Ⅱ的3-头孢-4-羧酸-1-(2，2-二甲基丙酰氧基)-乙酯的两种非对映体的结晶性酸加合盐与药剂学常规载体或稀释剂制成药物学合适的给药形式。
全文摘要
本发明涉及通式II
文档编号C07D501/34GK1067055SQ9210391
公开日1992年12月16日 申请日期1992年5月23日 优先权日1991年5月24日
发明者E·迪佛萨, G·费谢尔, J-H·金德拉雷, R·拉特莱尔, T·沃尔曼, D·易瑟特 申请人:赫彻斯特股份公司
再多了解一些
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