人参皂苷CK的制备方法

本发明属于人参皂苷的制备领域，具体地涉及一种人参皂苷ck的制备方法。

背景技术：

1、人参具有很高的药用价值。人参皂苷为人参的主要活性成分，具有抗炎、抗癌、免疫调节、心血管保护等活性。从人参中直接分离获得的原型人参皂苷，如rb、rd、rc、re等，存在多种糖基侧链，一定程度阻碍了其药物活性。原型人参皂苷糖基侧链降解后获得的稀有人参皂苷，在抗肿瘤、增强免疫力、抗疲劳以及清除自由基等生物活性方面药理活性更强、药用价值更高。如稀有人参皂苷rg3的抗肿瘤、抗炎效果明显优于原型人参皂苷，稀有人参皂苷ck具有更好的降血糖、抗肿瘤效果。稀有人参皂苷ck口服片已经进入临床研究阶段。

2、虽然稀有人参皂苷ck具有很好的市场前景，但是稀有人参皂苷ck在人参等药材中含量极低，来源缺乏导致其大量获得困难。此外，利用人参主体作为皂苷原料用于获取稀有人参皂苷ck的方法成本过高，难以实现稀有人参皂苷ck的大规模生产。因此，如何快速、低成本、高效的获得稀有人参皂苷ck，是亟需解决的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种人参皂苷ck的制备方法。

2、本发明的第二个目的是提供另一种人参皂苷ck的制备方法。

3、本发明的技术方案概述如下：

4、人参皂苷ck的制备方法，包括如下步骤：

5、1)将β-葡萄糖苷酶基因tpexyrku-1和糖苷酶基因glacs整入表达型宿主细胞，得到工程菌1；对工程菌1进行培养；离心，得到菌体1；

6、2)将所述菌体1加入ph＝3.5-6.5的缓冲液中，进行重悬，得到重悬液1；

7、3)对人参根须、西洋参根须或三七，用甲醇进行提取，得到提取液1，干燥，得到粗提取物1；用甲醇溶解，得到粗提取物的甲醇溶液1；

8、4)将重悬液1与粗提取物的甲醇溶液1混合，进行生物催化反应，得到人参皂苷ck。

9、表达型宿主细胞优选为大肠杆菌escherichia coli、谷氨酸棒状杆菌corynebacterium glutamicum、枯草芽孢杆菌bacillus subtilis、毕赤酵母vibrionatriegens或需钠弧菌vibrio natriegens。

10、缓冲液优选为2-吗啉代乙磺酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。

11、第二种人参皂苷ck的制备方法，包括如下步骤：

12、1)将β-葡萄糖苷酶基因tpexyrku-1整入表达型宿主细胞，得到工程菌2；对工程菌2进行培养；离心，得到菌体2；再将糖苷酶基因glacs整入表达型宿主细胞，得到工程菌3；对工程菌3进行培养；离心，得到菌体3；

13、2)将菌体2加入ph＝3.5-6.5的缓冲液，进行重悬，得到重悬液2；将菌体3加入ph＝3.5-6.5的缓冲液，进行重悬，得到重悬液3；将重悬液2和重悬液3进行混合，得到重悬混合液1；

14、3)对人参根须、西洋参根须或三七，用甲醇进行提取，得到提取液2；

15、4)向提取液2中加入所述重悬混合液1，进行生物催化反应，得到人参皂苷ck。

16、表达型宿主细胞优选为大肠杆菌escherichia coli、谷氨酸棒状杆菌corynebacterium glutamicum、枯草芽孢杆菌bacillus subtilis、毕赤酵母vibrionatriegens或需钠弧菌vibrio natriegens。

17、缓冲液优选为2-吗啉代乙磺酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。

18、本发明的优点：

19、本发明的重悬液1或重悬混合液1，对人参根须、西洋参根须或三七进行催化转化，生成稀有人参皂苷ck。本发明的方法，原料价廉、生产成本低，稀有人参皂苷ck的转化率高，绿色、高效，可实现名贵稀有人参皂苷ck的规模化生产。

1.人参皂苷ck的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述表达型宿主细胞为大肠杆菌escherichia coli、谷氨酸棒状杆菌corynebacterium glutamicum、枯草芽孢杆菌bacillus subtilis、毕赤酵母vibrio natriegens或需钠弧菌vibrio natriegens。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述缓冲液为2-吗啉代乙磺酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。

4.人参皂苷ck的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

5.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述表达型宿主细胞为大肠杆菌escherichia coli、谷氨酸棒状杆菌corynebacterium glutamicum、枯草芽孢杆菌bacillus subtilis、毕赤酵母vibrio natriegens或需钠弧菌vibrio natriegens。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述缓冲液为2-吗啉代乙磺酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。