抗菌肽、抗菌组合物、筛选方法及应用

本申请涉及生物医药，特别涉及一种抗菌肽、抗菌组合物、筛选方法及应用。

背景技术：

1、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant

staphylococcus aureus,mrsa）是临床常见的耐药革兰氏阳性致病菌，在血流感染、重症肺炎、术后感染及免疫功能低下患者中具有较高的发病率和病死率，已成为严重威胁公共卫生安全的重要病原体。β-内酰胺类抗生素因安全性高、价格低廉，在临床中占据重要地位，但在mrsa感染中几乎失效。mrsa对β-内酰胺类抗生素的耐药主要是由meca基因编码的pbp2a介导，该蛋白与β-内酰胺类抗生素亲和力极低，同时部分菌株还表达β-内酰胺酶（blaz），进一步水解抗生素。

2、近年来，抗生素佐剂（antibiotic adjuvant）策略逐渐成为抗耐药研究的重要方向，其核心思想是在不直接杀菌或弱杀菌的前提下，通过抑制耐药机制或增强细菌对现有抗生素的敏感性，从而恢复传统抗生素的临床价值。抗菌肽（antimicrobial peptides，amps）是机体固有免疫系统的重要组成部分，具有广谱抗菌活性、多靶点作用模式及较低的耐药诱导风险，被认为具有作为抗生素佐剂的潜在优势。但现有技术中的抗菌肽在协同浓度下仍具有膜破坏性，安全性不足。

3、因此亟须开发一种毒性低、稳定性好，并能在较低浓度下与现有抗生素产生协同效应的抗菌肽。

技术实现思路

1、本申请的主要目的是提出一种抗菌肽、抗菌组合物、筛选方法及应用，旨在解决现有技术中的抗菌肽在协同浓度下仍具有膜破坏性，安全性不足的问题。

2、为实现上述目的，第一方面，本申请提出了一种抗菌肽，所述抗菌肽的氨基酸序列如seq id no.1所示。

3、第二方面，本申请提出一种抗菌组合物，所述抗菌组合物包括本申请第一方面提出的抗菌肽。

4、在一些实施方式中，所述抗菌组合物还包括抗生素。

5、在一些实施方式中，所述抗生素包括氨苄西林、哌拉西林、头孢吡肟和利奈唑胺中的至少一种。

6、在一些实施方式中所述抗菌组合物还包括药学上可接受的载体。

7、第三方面，本申请还提出一种本申请第一方面提出的抗菌肽和/或本申请第二方面提出的抗菌组合物在制备抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的药物中的应用。

8、第四方面，本申请还提出一种本申请第一方面提出的抗菌肽在制备耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗生素增敏剂中的应用，所述增敏剂所增敏的抗生素包括氨苄西林、哌拉西林、头孢吡肟和利奈唑胺中的至少一种。

9、第五方面，本申请还提出一种抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌联合增效抗菌肽的筛选方法，包括以下步骤：

10、步骤s1，获取抗菌肽候选序列，并根据候选序列的理化性质进行初筛；

11、步骤s2，采用多个抗菌活性预测模型对初筛所得序列进行交叉预测，并依次进行溶血性预测、毒性预测和同源性分析，获得低溶血、低毒且低同源性的候选序列；

12、步骤s3，对步骤s2所得候选序列进行多肽结构预测，并将预测所得多肽结构分别与青霉素结合蛋白2a和β-内酰胺酶进行分子对接，根据分子对接结果筛选待验证候选序列；

13、步骤s4，合成所述待验证候选序列，测定其对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度，并将其与抗生素进行联合药敏试验，根据分级抑菌浓度指数筛选具有联合增效作用的抗菌肽。

14、在一些实施方式中，步骤s1中，所述理化性质包括净正电荷、疏水残基比例以及精氨酸与赖氨酸残基的总占比；保留净正电荷为+4至+8、疏水残基比例为35%至55%且精氨酸与赖氨酸残基的总占比大于30%的候选序列；

15、步骤s2中，采用至少三个抗菌活性预测模型进行交叉预测，并保留在各抗菌活性预测模型中的抗菌肽预测概率均大于0.9的候选序列。

16、在一些实施方式中，步骤s2中，通过hemopi进行溶血性预测，通过toxinpred 3.0进行毒性预测，并保留与apd6数据库中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌肽序列以及人类蛋白序列的同源性均低于40%的候选序列；

17、步骤s3中，采用pep-fold 3.5进行多肽结构预测；

18、步骤s4中，采用微量肉汤稀释法测定所述最低抑菌浓度和最低杀菌浓度，采用棋盘法进行所述联合药敏试验，并保留分级抑菌浓度指数不大于0.5的候选序列。

19、本申请以联合协同、耐药逆转为核心筛选指标，精准匹配临床mrsa耐药感染联合治疗场景，筛选得到氨基酸序列如seq id no.1所示的抗菌肽，其毒性低、稳定性好，并能在较低浓度下与现有抗生素产生协同效应。

1.一种抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.一种抗菌组合物，其特征在于，所述抗菌组合物包括权利要求1所述的抗菌肽。

3.如权利要求2所述的抗菌组合物，其特征在于，所述抗菌组合物还包括抗生素。

4.如权利要求3所述的抗菌组合物，其特征在于，所述抗生素包括氨苄西林、哌拉西林、头孢吡肟和利奈唑胺中的至少一种。

5.如权利要求2至4任一项所述的抗菌组合物，其特征在于，所述抗菌组合物还包括药学上可接受的载体。

6.权利要求1所述的抗菌肽和/或权利要求2至5任一项所述的抗菌组合物在制备抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的药物中的应用。

7.权利要求1所述的抗菌肽在制备耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗生素增敏剂中的应用，其特征在于，所述增敏剂所增敏的抗生素包括氨苄西林、哌拉西林、头孢吡肟和利奈唑胺中的至少一种。

8.一种抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌联合增效抗菌肽的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.如权利要求8所述的筛选方法，其特征在于，步骤s1中，所述理化性质包括净正电荷、疏水残基比例以及精氨酸与赖氨酸残基的总占比；保留净正电荷为+4至+8、疏水残基比例为35%至55%且精氨酸与赖氨酸残基的总占比大于30%的候选序列；

10.如权利要求8或9所述的筛选方法，其特征在于，步骤s2中，通过hemopi进行溶血性预测，通过toxinpred 3.0进行毒性预测，并保留与apd6数据库中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌肽序列以及人类蛋白序列的同源性均低于40%的候选序列；