一种抗菌肽D-263及其抗菌作用

本发明属于生物，具体涉及一种抗菌肽d-263及其抗菌作用。

背景技术：

1、全球范围内耐药性感染的快速增加已对现有抗感染治疗体系构成严峻考验。据相关研究预测，若不采取有效干预措施，耐药性感染造成的全球经济和健康负担将在未来数十年内持续加重。这一紧迫形势促使研究者积极探索有别于传统抗生素的新型抗菌策略。

2、抗菌肽（amps）是一类在生物进化过程中高度保守的天然生物活性分子，作为宿主防御体系的核心成分之一，在动物、植物和微生物中均有广泛分布，参与机体抵御外源病原体入侵的第一道防线。这类小分子肽段对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌等多种病原体表现出显著的抑菌或杀菌效果，且通常对哺乳动物正常细胞表现出较好的安全性，不易引起严重的细胞毒性反应。上述优势使抗菌肽成为替代或辅助传统抗生素的有力候选物质，在医药、农业和食品工业等领域具有广阔的应用前景。

3、然而，将抗菌肽从实验室研究推向临床或产业化应用，仍需克服产量受限、合成成本较高、体内酶解敏感及生物利用度不足等方面的技术障碍。

技术实现思路

1、本发明所要解决的主要问题是如何获得一种广谱抗菌活性、低毒性的抗菌肽。

2、为了解决上述问题，本发明提供了一种抗菌肽。

3、本发明提供的抗菌肽的氨基酸序列是mgkkglifsffakfltkmyvnskknanfas，为序列表中seq id no:1的抗菌肽。

4、所述抗菌肽为抗菌肽d-263，所述抗菌肽d-263的分子量为3.42 kda，等电点为10.748，平均疏水性为0.013。

5、前文所述抗菌肽的制备方法包括化学合成方式或生物合成方式，所述化学合成方式可为固相合成法；所述生物合成方法可包含以下几种：1）生物合成方法：通过微生物表达系统合成抗菌肽；2）dna合成法：如使用dna合成仪合成抗菌肽基因，并通过融合表达的方式在大肠杆菌中生产抗菌肽；3）氨基酸残基替换和化学修饰：通过设计和改造天然抗菌肽，提高其抑菌效果和降低溶血作用。

6、上述抗菌肽的药用盐也属于本发明要求保护的范围。

7、本发明还提供了抑制细菌或治疗细菌感染性疾病的药物，所述药物含有前文所述的抗菌肽或所述的药用盐。

8、本发明的抗菌肽的药用盐，包括现有技术中公知的可应用于药物制备领域的各种盐类。这些盐可以采用标准方法制备，例如通过游离酸与有机或无机碱的反应。在一个酸性基团（如-cooh）或醇基存在的情况下，可药用的酯如醋酸酯（acetate）、马来酸酯（maleate）、三甲基乙酸氯甲酯（pivaloyloxymethyl）等，在一个碱性基团如氨基存在的情况下，酸性盐如氢氯化物（hydrochloride）、氢溴化物（hydrobromide）、醋酸盐（acetate）、扑酸盐（pamoate）等等可用作剂型；以及文献中公知的用于改善可溶性和水解性的酯可以用作持续释放和前体药制剂。

9、上文中，所述药物除含有seq id no:1的抗菌肽或其药学上可接受的盐外，还可含有适宜的载体或赋形剂。这里的载体材料包括但不限于水溶性载体材料（如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、有机酸等）、难溶性载体材料（如乙基纤维素、胆固醇硬脂酸酯等）、肠溶性载体材料（如醋酸纤维素酞酸酯和羧甲乙纤维素等）。其中优选的是水溶性载体材料。

10、使用这些材料可以制成多种剂型，包括但不限于片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。

11、本文中，所述细菌为革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。

12、进一步地，所述革兰氏阳性菌为斯氏芽孢杆菌（

bacillusspizizenii）和金黄色葡萄球菌金黄色亚种（

staphylococcus aureus subsp.

aureus）；所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌（

escherichiacoli）、铜绿假单胞菌（

pseudomonas aeruginosa）、鲍曼不动杆菌（

acinetobacter baumannii）和肺炎克雷伯菌肺炎亚种（

klebsiella pneumoniae subsp.

pneumoniae）。

13、更进一步地，所述药物中所述抗菌肽的使用浓度为16至128 μg/ml。

14、在一个具体的实施例中，所述抗菌肽d-263对斯氏芽孢杆菌（

bacillus

spizizenii）atcc 6633的最低抑菌浓度（mic）为16 μg/ml；所述抗菌肽d-263对金黄色葡萄球菌金黄色亚种（

staphylococcus aureus subsp.

aureus）atcc 25923及鲍曼不动杆菌（

acinetobacter baumannii）atcc 19606的最低抑菌浓度（mic）为64 μg/ml；所述抗菌肽d-263对大肠杆菌（

escherichia coli）atcc 25922、肺炎克雷伯菌肺炎亚种（

klebsiella

pneumoniae subsp.

pneumoniae）atcc 13883及铜绿假单胞菌（

pseudomonas aeruginosa）atcc 27853的最低抑菌浓度（mic）为128 μg/ml。

15、前文所述的抗菌肽在制备抑制细菌或治疗细菌感染性疾病的药物中的应用也属于本发明要求保护的范围。

16、前文所述的药用盐在制备抑制细菌或治疗细菌感染性疾病的药物中的应用也属于本发明要求保护的范围。

17、本发明还提供了前文所述的药物在如下任一种中的应用：

18、1）制备抑制细菌活性的产品中的应用；

19、2）制备用于抑制细菌活性的产品中的应用；

20、3）制备治疗细菌感染性疾病的产品中的应用；

21、4）制备用于治疗细菌感染性疾病的产品中的应用。

22、本发明还提供了如下生物材料：

23、c1）编码前文所述抗菌肽的核酸分子；

24、c2）含有c1）所述核酸分子的表达盒；

25、c3）含有c1）所述核酸分子的重组载体、或含有c2）所述表达盒的重组载体。

26、本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化或点突变的方法，对本发明的编码所述抗菌肽的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明分离得到的所述抗菌肽的核苷酸序列75%或75%以上同一性的核苷酸，只要编码所述抗菌肽且具有所述抗菌肽功能，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

27、本文中，同一性是指氨基酸序列或核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列或核苷酸序列的同一性，如ncbi主页网站的blast网页。例如，可在高级blast2.1中，通过使用blastp作为程序，将expect值设置为10，将所有filter设置为off，使用blosum62作为matrix，将gap existence cost，per residue gap cost和lambda ratio分别设置为11，1和0.85（缺省值）并进行检索一对氨基酸序列或核苷酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值（%）。

28、本文所述核酸分子可以是dna，如cdna、基因组dna或重组dna；所述核酸分子也可以是rna，如grna、mrna、sirna、shrna、sgrna、mirna或反义rna。

29、本文所述载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒、噬菌体（如λ噬菌体或m13丝状噬菌体等）、黏粒（即柯斯质粒）、ti质粒或病毒载体。

30、在一个具体的实施例中，所述抗菌肽通过固相合成法合成得到粗抗菌肽；纯化获得纯度大于95%的抗菌肽。