一种抗人SLAMF7抗体、基因及其应用

本发明属于生物，具体涉及一种抗人slamf7抗体、基因及其应用。

背景技术：

1、信号淋巴细胞激活分子成员7（signaling lymphocytic activation moleculefamily 7，slamf7），又称为cd319、cracc和cs1等，是一个相对分子量为66 kda的跨膜蛋白受体，属免疫球蛋白cd2超家族的i型跨膜糖蛋白。其胞外域含有免疫球蛋白可变域（igv）和免疫球蛋白恒定2（c2）样域，igv样结构域缺乏典型的二硫键，表现出强烈的自亲和力，能够结合配体或抗体。相比之下，c2样结构域含有两个二硫键，有助于维持slamf受体的结构稳定性。胞内域含有免疫受体酪氨酸开关基序（immunoreceptor tyrosine-based switchmotif，itsms），该基序在酪氨酸磷酸化后可招募单个淋巴细胞活化信号分子结合蛋白（slam-associated protein，sap），或尤文氏肉瘤相关转录本2（ewing’s sarcoma-associated transcript 2，eat-2）从而启动下游信号传导（li j, et al. mol cancer.2025;24(1):145.）。

2、slamf7在多种免疫细胞表面表达，包括自然杀伤（nk）细胞、细胞毒性t淋巴细胞、成熟树突状细胞、活化的b细胞及单核细胞。在nk细胞中，slamf7通过结合靶细胞表面的cracc而参与肿瘤识别与清除。这一过程促使nk细胞内的eat-2（一种含sh2结构域的衔接蛋白）与slamf7的磷酸化itsm结合，进而激活磷脂酶c-γ（plc-γ）和磷酸肌醇3-激酶（pi3k）的酪氨酸磷酸化（gutierrez-guerrero a, et al. eur j immunol. 2022;52(1):62-74.）。plc-γ通路驱动nk细胞脱颗粒，释放细胞毒性物质；pi3k通路则通过akt/mtor轴促进细胞因子（如il-2、il-15、il-12）产生，进一步强化脱颗粒反应。eat-2的存在对此通路至关重要，若缺失则会抑制nk细胞的杀伤功能，从而削弱抗肿瘤免疫并可能促进多发性骨髓瘤等疾病的进展（chu e, et al. curr oncol. 2023;30(9):7891-7903.）。在t细胞中，slamf7的激活导致信号转导和转录激活因子1（stat1）与stat3磷酸化。与nk细胞不同，这种磷酸化并未增强抗肿瘤活性，反而会诱导多种抑制性受体（如pd-1）及与t细胞耗竭相关的转录因子表达，进而抑制cd8⁺ t细胞功能，帮助肿瘤逃避免疫攻击（o'connell p, et al. j immunol.2021;206(1):193-205.）。

3、slamf7在多发性骨髓瘤（mm）细胞中高表达，并参与疾病的发生发展。在骨髓微环境中，mm细胞通过与细胞外基质（ecm）及骨髓基质细胞（bmscs）相互作用，激活mapk、notch和pi3k等信号通路，从而逃避免疫监视并促进肿瘤生长（ho m, et al. curr oncol.2022;29(11):8975-9005.）。slamf7存在膜结合型和可溶性型（sslamf7）两种形式。膜结合型slamf7的表达水平与mm疾病进展无明显关联，而sslamf7则可能反映病情进展。约31%的mm患者血清中可检出sslamf7，健康人群中则未发现（ishibashi m, et al. oncotarget.2018;9(78):34784-34793.）。sslamf7阳性患者通常表现出更具侵袭性的临床特征，其无进展生存期较短，且在修订国际分期系统（r-iss）iii期患者中比例更高，因此sslamf7有望成为潜在的预后生物标志物。sslamf7可与mm细胞表面的膜结合型slamf7结合，进而激活shp-2和erk信号通路。免疫荧光染色显示，该结合过程伴随shp-2和erk的磷酸化激活，并引起erk核转位。然而，这些信号并未触发抗肿瘤效应，反而通过erk激酶促进肿瘤细胞增殖，从而加速mm进展（kikuchi j, et al. leukemia. 2020;34(1):180-195.）。

4、目前针对slamf7的mm治疗主要有两种策略：依洛妥珠单抗（elotuzumab）和car-t细胞疗法。

5、依洛妥珠单抗（商品名empliciti®）是一种人源化igg1κ单克隆抗体，于2015年获美国fda批准用于成人mm的治疗。该药物通过双重机制发挥抗肿瘤作用：一是其fab段结合mm细胞表面的slamf7，fc段与nk细胞表面的fcγriiia/cd16结合，诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（adcc）（taniwaki m,, et al. mediterr j hematol infect dis. 2018;10(1):e2018014.）；二是直接激活nk细胞，促进il-2和tnf-α分泌，进而增强颗粒酶b释放，提升nk细胞对mm细胞的杀伤能力（pazina t, et al. cancer immunol res. 2019;7(10):1633-1646.）。

6、可溶性slamf7（sslamf7）可作为预测依洛妥珠单抗疗效的生物标志物，其高表达与更好的治疗反应相关。依洛妥珠单抗单药疗效有限，需联合其他药物治疗。在复发/难治性患者中，其联合来那度胺/地塞米松或泊马度胺/地塞米松的方案已证实能显著延长无进展生存期并提高缓解率（dimopoulos ma, et al. n engl j med. 2018;379(19):1811-1822.）。在新诊断患者中，联合方案也显示出良好的诱导和巩固治疗效果，但在不适合自体干细胞移植（asct）的患者中改善生存的优势尚不明确。此外，依洛妥珠单抗与硼替佐米、卡非佐米等蛋白酶体抑制剂的联合方案也展现出潜力。目前，该药与新型药物（如贝兰他单抗马福多汀、塞利尼索）的联合以及其与cd38单抗的序贯或联合策略仍在探索中。

7、靶向slamf7的嵌合抗原受体t细胞（car-t）疗法是一种针对多发性骨髓瘤的免疫治疗手段。它通过基因工程改造患者或供者的t细胞，使其表达能识别slamf7抗原的受体。这些car-t细胞被激活后，可增殖并释放细胞因子，直接杀伤slamf7阳性的肿瘤细胞。与单克隆抗体（如依洛妥珠单抗）相比，car-t疗法具有更强的效力和不同的作用机制。其优势在于能以更低的抗原密度识别并清除肿瘤细胞，并能自我扩增。然而，这也带来了更高的风险，包括更严重的副作用（如细胞因子释放综合征）以及对正常slamf7阳性细胞（如nk细胞、部分t细胞和b细胞）的“脱靶”毒性，可能导致感染风险增加。为应对这些挑战，研究人员正在开发多种策略。例如，在car-t细胞中整合可诱导的自杀基因（如基于半胱天冬酶-9的系统），以便在出现严重毒性时清除car-t细胞，从而保护正常的免疫细胞（amatya c, et al.mol ther. 2021;29(2):702-717.）。此外，也出现了使用无病毒转座子系统（如sleepingbeauty）的car-t产品，以及利用基因编辑技术（如talen）制备的“通用型”同种异体car-t细胞（ucartcs1），通过敲除内源性t细胞受体和slamf7基因来降低移植物抗宿主病和自相残杀的风险（teoh pj, et al. blood cancer j. 2021;11(4):84.）。更有前景的策略是开发同时靶向slamf7和bcma的双特异性car-t细胞，旨在扩大肿瘤覆盖范围并减少因抗原丢失导致的肿瘤逃逸（moares n, et al. front immunol. 2025;16:1613222.）。目前，多项针对slamf7 car-t的早期临床试验正在进行中，旨在评估其在复发/难治性多发性骨髓瘤患者中的安全性和初步疗效，并探索最佳的给药剂量。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种抗人slamf7抗体、基因及其应用。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、本发明的第一个方面，提供：一种抗人slamf7的纳米抗体，包括框架区域和互补决定区域，所述纳米抗体能够特异性结合人slamf7，其中：所述cdr1、cdr2和cdr3选自seq idno.1～seq id no.10所示纳米抗体对应的cdr组合，或者，所述cdr1、cdr2和cdr3与seq idno.1～seq id no.10所示纳米抗体对应的cdr组合具有至少85%、90%或95%的序列一致性，并且保持特异性结合人slamf7能力的cdr组合。

4、在一些实例中，基于imgt编号方案，所述抗体互补决定区域cdr1～cdr3的氨基酸序列如下：

5、p1-a4，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：gsflslds、fsrrgyt、nkanwqpnmye；

6、p2-a6，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：gsflslds、frrgst、nkfnwqpimye；

7、p1-b7，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：gsflslds、itrrgyt、nkanwqpnmye；

8、p1-a3，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：gsflslds、firgyr、nkgnwqptmye；

9、p1-a12，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：gsflslds、iirgyr、nkgnwqptmye；

10、p1-f6，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：gftfssyd、intgggst、argdpfsdsdry；

11、p1-b12，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：gftfssyd、intggdst、argdpfsdspt；

12、p1-h1，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：gftfssfd、iktgggnt、atgrpwggssasi；

13、p2-a2，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：gftfsryg、isstggit、ngnqafrsvyny；

14、p1-g11，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：dsfdrhi、infsdgrt、aaephdmdrgtllliesnfns。

15、在一些实例中，其氨基酸序列如seq id no.1～seq id no.10中任一项所示；或者为上述纳米抗体经人源化、嵌合化、fc融合、亲和力优化、半衰期延长改造或其他蛋白工程改造获得的功能性变体；其中，所述功能性变体保持特异性结合人slamf7的能力。

16、本发明的第二个方面，提供：一种二价或多价抗体，包括本发明第一个方面所述的纳米抗体的互补决定区域并可特异性结合人slamf7分子。

17、本发明的第三个方面，提供：编码本发明第一个方面或本发明第二个方面所述抗体的基因。

18、本发明的第四个方面，提供：一种表达系统，含有本发明第三个方面所述的基因并表达本发明第一个方面或本发明第二个方面所述的抗体。

19、在一些实例中，所述表达系统包括但不限于表达载体、宿主细胞或包含所述基因的重组表达体系。

20、本发明的第五个方面，提供：本发明第一个方面或本发明第二个方面所述抗体的应用，所述应用包括：

21、制备靶向slamf7的治疗性抗体药物；

22、制备靶向slamf7的抗体偶联药物；

23、制备或修饰药物递送载体，使所述递送载体靶向表达slamf7的细胞；

24、构建靶向slamf7的嵌合抗原受体（car）免疫细胞；

25、制备靶向slamf7的诊断试剂或免疫吸附剂。

26、在一些实例中，所述抗体偶联物中的偶联物包括但不限于细胞毒性药物、示踪剂、放射性核素、免疫调节分子或其他功能性分子。

27、在一些实例中，所述car包括slamf7结合结构域、连接子、跨膜结构域及胞内信号结构域，所述slamf7结合域包括本发明第一个方面所述的纳米抗体。

28、在一些实例中，所述胞内信号结构域包括cd3ζ以及cd28、4-1bb、ox40、icos中的至少一种共刺激结构域。

29、在一些实例中，所述连接子选自(g4s)n、(eaaak)n、whitlow 218 linker、lhl、igg铰链区中的一种。

30、在一些实例中，所述car免疫细胞为car-t细胞、car-nk细胞或其他经基因工程改造的免疫细胞。

31、以上特征在不相冲突的情况下，可以任意组合。

32、本发明的第六个方面，提供：本发明第一个方面所述纳米抗体、本发明第二个方面所述二价或多价抗体、本发明第三个方面所述基因、本发明第四个方面所述表达系统、本发明第五个方面所述car免疫细胞在制备用于预防或治疗slamf7阳性肿瘤药物中的应用。

33、在一些实例中，所述slamf7阳性肿瘤包括多发性骨髓瘤及其他表达slamf7的血液系统恶性肿瘤。

34、本发明的有益效果是：

35、本发明一些实例的抗人slamf7的纳米抗体，对slamf7具有很好地亲和力，以其作为抗原识别结构域构建的car-t细胞能高效识别并杀伤表达slamf7的肿瘤细胞，展现出显著的抗肿瘤活性，有望为多发性骨髓瘤患者带来更有效、更安全的治疗选择。