用于测量脂蛋白(a)的生物标志物测定的制作方法

本公开属于诊断医学领域。更具体地，本公开涉及包括用于测量脂蛋白(a)的apo(a)抗体和生物标志物测定的化合物、方法和诊断法，脂蛋白(a)是心血管疾病风险因素。序列表的参考本技术与st.26 xml格式的序列表一起提交。序列表以于2025年3月19日创建的并且大小为79.9千字节的以“30972a_us_pri sequence listing st26.xml”命名的文件提供。st.26 xml格式的序列表信息全文以引用方式并入本文。本文未添加新内容。

背景技术：

1、脂蛋白(a)（lp(a)）是由共价结合至含有一分子载脂蛋白b-100的低密度脂蛋白（ldl）样颗粒的载脂蛋白(a) [apo(a)]构成的特殊脂蛋白（bodea等人curr opin lipidol.2022; 33(3):185-192）。lp(a)是遗传决定的独立心血管风险因素。在约20%的人群中发现的高于50mg/dl或125nmol/l的升高的血清lp(a)水平会导致至少1.6倍的第一次心血管事件风险（kronenberg, f. clin.res. cardiol. 增刊， 14, 5-12 (2019)）和增加>1.42倍的第二次事件风险（madsen, c.m.等人arterioscler. thromb. vasc. biol.40, 255-266(2020)）。lp(a)可表现出促血栓形成和抗血栓形成特性，以及致动脉粥样硬化和动脉粥样硬化血栓形成特性。lp(a)可抑制纤维蛋白溶解并在血管壁中积累，从而诱导血栓形成和动脉粥样硬化病变。lp(a)的血浆水平在个体之间有很大的变化。与其他风险因素不同，lp(a)血浆水平不随饮食和运动显著变化。

2、lp(a)已被视为降低心血管事件风险的治疗性靶标（reyes-sinate等人arterioscler thromb vasc biol. 2022; 42(1): e48-e60；nicholls等人jama. 2023;330(11):1042-1053）。为了帮助发现和/或开发用于降低lp(a)水平的疾病改善治疗，需要针对lp(a)的可靠且灵敏的诊断法。

3、有几种批准的用于lp(a)的诊断应用，例如randox lp(a)测定（朗道实验诊断有限公司（randox laboratories ltd.））。然而，市售lp(a)测定的一个限制是它们仅使用apo(a)抗体，并且因此它们检测apo(a)的存在，无论该apo(a)是作为lp(a)分子的一部分存在还是以“未结合”形式存在。这可能导致lp(a)水平的过高估计。marcovina等人，j. lipidres.(2022) 63(8) 100239公开了一种特定的测定，其中用主要针对载脂蛋白(a) kiv2中的表位的单克隆抗体lpa4捕获lp(a)，并且用针对kiv9上存在的单个抗原位点的单克隆抗体lpa-kiv9检测该lp(a)。这两种抗体都靶向apo(a)。marcovina等人，clin. chem. (1995)41/2 246-255和tsimikas等人，circulation, (2004) 109 3164-3170中公开了采用apo(a)抗体和apo(b)二者的lp(a)测定，然而，在这些测定中，所使用的apo(a)抗体对apo(a)的不同同工型敏感，并且这可能导致不准确的lp(a)测量。

4、apo(a)与纤溶酶原的几个区共享高度序列同源性，这些区包括蛋白酶结构域，以及所谓的kringle iv(kiv)和v结构域。kiv结构域揭示了apo(a)的复杂性，并且由编号为1至10的10种不同的kiv类型形成。除了kiv 2型（kiv-2）之外的所有kiv型都以单拷贝存在，而kiv-2重复序列在3至>40拷贝之间变化，导致在血浆中循环的apo(a)同工型的大小存在很大的异质性。结果，apo(a)浓度通常与apo(a)大小负相关，并且在个体之间变化很大。

5、apo(a)同工型的异质性给测量apo(a)带来了关键挑战，这导致lp(a)浓度的过低估计或过高估计。除非所测试样品中的校准物具有与测试样品相同的同工型范围，否则具有较高kiv-2结构域单元重复数的校准物将代表lp(a)浓度的过高估计，而具有较小kiv-2结构域单元重复数的校准物将代表过低估计。

6、仍然需要结合至除kiv-2以外的kiv结构域，并且可用于灵敏且可靠的lp(a)诊断测定的apo(a)抗体。此外，需要克服了当前可用测定的一个或多个限制的适用于测试血液、血浆和血清的lp(a)诊断测定。特别地，需要这样的lp(a)诊断测定，该lp(a)诊断测定灵敏、可靠、准确地测量lp(a)水平（不论lp(a)中存在的apo(a)的同工型如何）、消除个体之间的变异性，和/或在apo(a)结合至lp(a)分子中的apob时仅测量该apo(a)。更一般地，需要一种可鉴定和/或区分需要进一步诊断评价和/或治疗性治疗的患者的lp(a)诊断测定。

技术实现思路

1、本公开提供了特异性结合apo(a)的抗体。

2、特别地，本公开提供了一种特异性结合apo(a)并且包含轻链可变区（vl）和重链可变区（vh）的抗体，其中该vl包含轻链互补决定区（lcdr）lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且该vh包含轻链互补决定区（hcdr）hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中该lcdr1包含seq id no:4，该lcdr2包含seq id no:5，该lcdr3包含seq id no:6，该hcdr1包含seq id no:10，该hcdr2包含seqid no:11，并且该hcdr3包含seq id no:12。

3、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有与seq id no:7的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vl和含有与seq id no:13的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vh。

4、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有seq id no:7的氨基酸序列的vl和含有seq id no:13的氨基酸序列的vh。

5、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含轻链（lc）和重链（hc），其中该lc包含seq id no:8的氨基酸序列并且该hc包含seq id no:14的氨基酸序列。

6、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含轻链可变区（vl）和重链可变区（vh），其中该vl包含轻链互补决定区（lcdr）lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且该vh包含轻链互补决定区（hcdr）hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中该lcdr1包含seq id no:27，该lcdr2包含seqid no:28，该lcdr3包含seq id no:29，该hcdr1包含seq id no:32，该hcdr2包含seq idno:33，并且该hcdr3包含seq id no:34。

7、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有与seq id no:30的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vl和含有与seq id no:35的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vh。

8、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有seq id no:30的氨基酸序列的vl和含有seq id no:35的氨基酸序列的vh。

9、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含轻链（lc）和重链（hc），其中该lc包含seq id no:31的氨基酸序列并且该hc包含seq id no:36的氨基酸序列。

10、在一些实施方案中，该抗体特异性结合apo(a)，包含轻链可变区（vl）和重链可变区（vh），其中该vl包含轻链互补决定区（lcdr）lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且该vh包含轻链互补决定区（hcdr）hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中该lcdr1包含seq id no:37，该lcdr2包含seqid no:38，该lcdr3包含seq id no:39，该hcdr1包含seq id no:42，该hcdr2包含seq idno:43，并且该hcdr3包含seq id no:44。

11、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有与seq id no:40的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vl和含有与seq id no:45的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vh。

12、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有seq id no:40的氨基酸序列的vl和含有seq id no:45的氨基酸序列的vh。

13、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含轻链（lc）和重链（hc），其中该lc包含seq id no:41的氨基酸序列并且该hc包含seq id no:46的氨基酸序列。

14、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含轻链可变区（vl）和重链可变区（vh），其中该vl包含轻链互补决定区（lcdr）lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且该vh包含轻链互补决定区（hcdr）hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中该lcdr1包含seq id no:47，该lcdr2包含seqid no:48，该lcdr3包含seq id no:49，该hcdr1包含seq id no:52，该hcdr2包含seq idno:53，并且该hcdr3包含seq id no:54。

15、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有与seq id no:50的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vl和含有与seq id no:55的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vh。

16、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有seq id no:50的氨基酸序列的vl和含有seq id no:55的氨基酸序列的vh。

17、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含轻链（lc）和重链（hc），其中该lc包含seq id no:51的氨基酸序列并且该hc包含seq id no:56的氨基酸序列。

18、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含轻链可变区（vl）和重链可变区（vh），其中该vl包含轻链互补决定区（lcdr）lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且该vh包含轻链互补决定区（hcdr）hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中该lcdr1包含seq id no:57，该lcdr2包含seqid no:58，该lcdr3包含seq id no:59，该hcdr1包含seq id no:62，该hcdr2包含seq idno:63，并且该hcdr3包含seq id no:64。

19、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有与seq id no:60的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vl和含有与seq id no:65的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vh。

20、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有seq id no:60的氨基酸序列的vl和含有seq id no:65的氨基酸序列的vh。

21、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含轻链（lc）和重链（hc），其中该lc包含seq id no:61的氨基酸序列并且该hc包含seq id no:66的氨基酸序列。

22、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含轻链可变区（vl）和重链可变区（vh），其中该vl包含轻链互补决定区（lcdr）lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且该vh包含轻链互补决定区（hcdr）hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中该lcdr1包含seq id no:67，该lcdr2包含seqid no:68，该lcdr3包含seq id no:69，该hcdr1包含seq id no:72，该hcdr2包含seq idno:73，并且该hcdr3包含seq id no:74。

23、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有与seq id no:70的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vl和含有与seq id no:75的氨基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列的vh。

24、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含含有seq id no:70的氨基酸序列的vl和含有seq id no:75的氨基酸序列的vh。

25、在一些实施方案中，该特异性结合apo(a)的抗体包含轻链（lc）和重链（hc），其中该lc包含seq id no:71的氨基酸序列并且该hc包含seq id no:76的氨基酸序列。

26、在各种方面和实施方案中，本公开提供了用于检测或测量人样品中的lp(a)的方法。

27、特别地，本公开提供了一种用于检测或测量人样品中的lp(a)的方法，该方法包括以下步骤：

28、a.使该人样品与捕获抗体接触，该捕获抗体是结合至人apo(a)的kringle iv 7型（kiv-7）结构域和kringle iv 8型（kiv-8）结构域的apo(a)抗体，其中该人apo(a)共价结合至人apob，从而形成捕获抗体-apo(a)-apob蛋白复合物，

29、b.用检测抗体检测该捕获抗体-apo(a)-apob蛋白复合物，该检测抗体是结合至人apob的apob抗体。

30、在一些实施方案中，检测步骤可指示人样品中lp(a)的存在、量或两者。

31、在其他实施方案中，本公开提供了一种试剂盒，该试剂盒包含本文所述的特异性结合apo(a)的抗体、该apo(a)抗体在用于检测或测量人样品中的lp(a)的方法中的用途，以及含有该试剂盒和/或其任何部件的使用说明的包装插页，该使用说明包含关于测试人样品的说明，其中该人样品来自患有与lp(a)表达相关的疾病、障碍或病症的患者。

32、在一些实施方案中，该包含本文所述的特异性结合apo(a)的抗体以及该apo(a)抗体在用于检测或测量人样品中的lp(a)的方法中的用途的试剂盒与用于降低患者中的lp(a)水平的治疗的施用组合使用。

33、在一些实施方案中，该包含本文所述的特异性结合apo(a)的抗体以及该apo(a)抗体在用于检测或测量人样品中的lp(a)的方法中的用途的试剂盒与用于降低患者中的lp(a)水平的治疗的施用联合使用。

34、在一些实施方案中，该包含本文所述的特异性结合apo(a)的抗体以及该apo(a)抗体在用于检测或测量人样品中的lp(a)的方法中的用途的试剂盒被用于确定患者是否有资格接受用于降低lp(a)水平的治疗。

35、在一些实施方案中，该包含本文所述的特异性结合apo(a)的抗体以及该apo(a)抗体在用于检测或测量人样品中的lp(a)的方法中的用途的试剂盒被用于确定该治疗是否正常地发挥降低患者中的lp(a)水平的作用。

36、在一些实施方案中，该包含本文所述的特异性结合apo(a)的抗体以及该apo(a)抗体在用于检测或测量人样品中的lp(a)的方法中的用途的试剂盒是在患者接受治疗之前、患者接受治疗期间或患者接受治疗之后施用的。

37、在一些实施方案中，该用于降低患者中的lp(a)水平的治疗选自由以下项组成的组：佩拉卡森（pelacarsen）、奥帕西兰（olpasiran）、来泊地西兰（lepodisiran）、泽拉西兰（zerlasiran）、莫伐倍林（muvalaplin）、hrs-5346或任何其他可降低lp(a)的量的化合物。

38、在一些实施方案中，该与lp(a)表达相关的疾病、障碍或病症是心血管代谢疾病，任选地动脉粥样硬化、nafld、nash、钙化主动脉瓣狭窄（cavs）、包括冠状动脉血运重建在内的心血管事件、cv死亡、脑血管疾病、慢性肾病、冠状动脉性心脏病、血脂异常、心力衰竭、mi和中风、和/或外周血管疾病。