一种负载sCD83的水凝胶及其制备方法和应用

本发明涉及外用生物制剂，尤其涉及一种负载scd83的水凝胶及其制备方法和应用。

背景技术：

1、银屑病是一种以树突状细胞（dc）异常活化和th17介导的炎症为病理特征的慢性皮肤病。活化的dc高表达mhc-ii、cd80、cd86等共刺激分子，驱动il-23/th17炎症轴，是皮损持续存在的核心因素。

2、现有外用药物（如糖皮质激素、维生素d3衍生物）能够在一定程度上缓解皮损症状，但长期使用存在皮肤萎缩、毛细血管扩张及停药后皮损反跳等风险；口服jak抑制剂虽可系统性地抑制炎症信号通路，但存在血脂异常、肝功能损伤等全身性毒副作用；注射用生物制剂虽靶向il-17/il-23等关键炎症因子，但因需全身给药，存在免疫抑制相关感染风险。上述方案均无法在皮损局部实现针对dc活化的靶向调控。

3、可溶性cd83（scd83）在体外能够抑制dc成熟并诱导其向耐受型分化。然而，该蛋白对温度和ph变化敏感，在溶液状态下构象稳定性差，难以维持其天然结构及生物活性。银屑病皮损微环境存在蛋白酶活性异常升高、表面ph偏移及大量组织渗液等特征，这些因素会进一步加速蛋白的降解与流失，导致scd83局部给药后有效作用窗口极短。理论上的调控活性与实际皮损环境下的不稳定性之间的矛盾，使得scd83难以直接用于银屑病的局部治疗。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种负载scd83的水凝胶及其制备方法和应用，以解决scd83在银屑病皮损微环境中因蛋白酶降解、渗液流失及构象不稳定而难以实现局部有效给药的问题。

2、第一方面，本发明提供了一种负载scd83的水凝胶，所述负载scd83的水凝胶以卡波姆940为凝胶骨架基质，包含可溶性cd83蛋白、乙二胺四乙酸二钠、保湿剂、甘羟铝和氮酮。

3、优选地，所述负载scd83的水凝胶中：

4、卡波姆940的浓度为8~12 mg/ml；

5、可溶性cd83蛋白的浓度为50~500 ng/ml；

6、乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.3~0.8 mg/ml；

7、保湿剂的浓度为5~30 μl/ml；

8、甘羟铝的浓度为0.5~1.2 mg/ml；

9、氮酮的浓度为2~5 μl/ml。

10、优选地，所述负载scd83的水凝胶中：

11、卡波姆940的浓度为9~11 mg/ml；

12、可溶性cd83蛋白的浓度为80~120 ng/ml；

13、乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.4~0.6 mg/ml；

14、保湿剂的浓度为8~15 μl/ml；

15、甘羟铝的浓度为0.7~0.9 mg/ml；

16、氮酮的浓度为2.5~3.5 μl/ml。

17、优选地，所述保湿剂选自甘油、丙二醇、丁二醇、透明质酸钠中的一种或多种。

18、第二方面，本发明提供了上述负载scd83的水凝胶的制备方法，包括如下步骤：

19、将卡波姆940在水中加热分散，冷却并静置溶胀，得到卡波姆溶胀液；

20、向所述卡波姆溶胀液中加入保湿剂、乙二胺四乙酸二钠、氮酮和甘羟铝，在搅拌条件下密闭熟化，得到空白凝胶基质；

21、将可溶性cd83蛋白与所述空白凝胶基质充分混合，随后静置交联，得到负载scd83的水凝胶。

22、优选地，将可溶性cd83蛋白与所述空白凝胶基质混合在2~8℃、避光条件下进行。

23、优选地，将可溶性cd83蛋白先稀释于缓冲液中，然后与所述空白凝胶基质混合。

24、进一步地，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷（tris）缓冲液或琥珀酸盐缓冲液中的一种，所述缓冲液的ph为6.5~7.5。

25、优选地，所述密闭熟化的时间为0.5~2 h；所述密闭熟化步骤之后还包括离心的步骤，所述离心的转速为1000~3000 r/min，离心的时间为5~15 min；离心后取上清液作为空白凝胶基质。

26、第三方面，本发明提供了上述负载scd83的水凝胶或上述制备方法制备得到的负载scd83的水凝胶在制备治疗银屑病的局部外用药物中的应用。

27、与现有技术相比，本发明取得了以下有益效果：

28、本发明所提供的负载scd83的水凝胶中，甘羟铝与卡波姆940分子链上的羧基发生离子交联，形成具有一定机械强度的三维网状结构，使水凝胶涂抹于银屑病皮损后能够抵抗组织渗液的冲刷，在皮损局部形成稳定的药物储库。同时，卡波姆交联形成的三维网状结构能够将scd83蛋白分子包裹于孔隙内部，与皮肤中的水解蛋白酶形成物理隔绝；配方中的乙二胺四乙酸二钠能够螯合皮损微环境中的金属离子，抑制金属蛋白酶的活性，减少scd83蛋白的降解。此外，甘羟铝与乙二胺四乙酸二钠之间还具有特定的配伍协同作用：甘羟铝缓释的三价铝离子用于卡波姆的离子交联，而乙二胺四乙酸二钠在特定浓度下对体系中的三价铝离子仅发生微弱的可逆络合，不会大量消耗用于交联的铝离子，从而在实现金属离子螯合保护scd83蛋白的同时不破坏凝胶的三维网状结构。在上述机制的共同作用下，scd83在银屑病皮损微环境中的稳定性得到显著提升，能够持续发挥免疫调控作用。

1.一种负载scd83的水凝胶，其特征在于，所述负载scd83的水凝胶以卡波姆940为凝胶骨架基质，包含可溶性cd83蛋白、乙二胺四乙酸二钠、保湿剂、甘羟铝和氮酮。

2.如权利要求1所述的负载scd83的水凝胶，其特征在于，所述负载scd83的水凝胶中：

3.如权利要求2所述的负载scd83的水凝胶，其特征在于，所述负载scd83的水凝胶中：

4.如权利要求1所述的负载scd83的水凝胶，其特征在于，所述保湿剂选自甘油、丙二醇、丁二醇、透明质酸钠中的一种或多种。

5.如权利要求1~4任一项所述的负载scd83的水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，将可溶性cd83蛋白与所述空白凝胶基质混合在2~8℃、避光条件下进行。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，将可溶性cd83蛋白先稀释于缓冲液中，然后与所述空白凝胶基质混合。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷（tris）缓冲液或琥珀酸盐缓冲液中的一种，所述缓冲液的ph为6.5~7.5。

9.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述密闭熟化的时间为0.5~2 h；所述密闭熟化步骤之后还包括离心的步骤，所述离心的转速为1000~3000 r/min，离心的时间为5~15 min；离心后取上清液作为空白凝胶基质。

10.如权利要求1~4任一项所述的负载scd83的水凝胶或权利要求5~9任一项所述的制备方法制备得到的负载scd83的水凝胶在制备治疗银屑病的局部外用药物中的应用。