一种负载PDRN的胶原微球及其制备方法与应用与流程

本发明涉及一种负载pdrn的胶原微球及其制备方法与应用，属于化妆品。

背景技术：

1、胶原蛋白作为一种天然高分子材料，具有良好的生物相容性和可降解性，并能够为细胞提供适宜的微环境，在细胞黏附、增殖及组织修复过程中发挥积极作用，现已广泛应用于医美和组织工程领域。为改善胶原材料的力学性能、结构稳定性及其在体内的滞留时间，现有技术中通常将胶原蛋白制备成微球、微粒或多孔结构形式，用于负载活性成分并实现缓释。

2、中国专利文献cn120860321a（申请号为202511377887.0）报道了一种通过乳化交联法制备胶原微球的技术方案，其通过将胶原溶液分散于油相形成乳液，并经交联固化得到粒径可控的胶原微球。该类微球在一定程度上改善了胶原材料的结构稳定性，可作为药物或生物活性成分的载体。在实际应用中，微球的性能直接影响其所负载活性成分的稳定性和释放行为。

3、多聚脱氧核糖核苷酸（polydeoxyribonucleotide，pdrn）是一种由脱氧核糖核苷酸片段组成的生物活性物质，具有促进细胞增殖、抗凋亡、促进组织修复和减缓机体的衰老等作用，近年来在皮肤修复和医美领域受到广泛关注。然而，pdrn作为水溶性生物大分子，易在体内扩散和降解，而其应用方式通常以溶液形式直接使用，或与透明质酸、水凝胶等载体简单混合用于医美和组织修复，缺乏稳定的负载结构，导致pdrn难以得到有效保护和缓慢释放，从而限制其作用持续时间和生物利用率。

4、基于胶原蛋白起效相对较慢但持续时间较长，而pdrn起效较快但作用持续时间相对有限，二者在作用时效上具有一定互补性；同时，胶原蛋白还可制备成微球结构，为pdrn提供相对稳定的负载与保护，因此将二者进行组合应用具有一定的实际应用价值。

5、中国专利文献cn118681062a（申请号为202410697320.0）提供了一种pdrn复合重组胶原蛋白微球及其制备方法，然而，其制备方法为在乳化交联过程中将胶原蛋白与pdrn同时引入并制备成微球，pdrn在交联或成球环境中的状态极易发生变化，从而对其生物活性的保持产生一定影响。因此，如何在保持胶原蛋白微球结构稳定性的同时，实现pdrn的有效负载与活性保持，值得进一步探究。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种负载pdrn的胶原微球及其制备方法与应用，本发明提供的制备方法，能在保证微球结构稳定性的同时，实现对pdrn的稳定负载，从而改善微球的热稳定性、粒径均一性、体外降解行为及pdrn的保留率。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种负载pdrn的胶原微球的制备方法，包括如下步骤：

4、（1）将重组胶原蛋白按质量比0.5%~1.5%加入缓冲液中，均质得到胶原蛋白溶液；

5、（2）将所述胶原蛋白溶液与油相按体积比1:（1~3）混合，均质至形成稳定的乳液体系，向乳液体系中加入交联剂，室温、300~800 rpm搅拌反应1~4h，离心弃上清，并用注射用水洗涤沉淀3~5次，得到洗涤后的胶原微球；

6、（3）将pdrn按质量比0.5%~1.5%加入缓冲液中，45~55℃搅拌至完全溶解，得到pdrn溶液；

7、（4）将洗涤后的胶原微球分散于pdrn溶液中，控制重组胶原蛋白与pdrn的投料质量比为1:（0.5~1.5），在室温条件下以50~120rpm振荡4~8h，进行pdrn的负载；

8、（5）离心弃上清，并用注射用水洗涤沉淀3~5次，在低温条件下干燥，得到负载pdrn的胶原微球。

9、根据本发明优选的，所述重组胶原蛋白为ⅰ型重组胶原蛋白或ⅲ型重组胶原蛋白或二者的混合物。

10、进一步优选的，所述重组胶原蛋白为ⅰ型重组胶原蛋白和ⅲ型重组胶原蛋白的混合物，ⅰ型重组胶原蛋白和ⅲ型重组胶原蛋白按质量比为（1～6）：1复配。

11、进一步优选的，所述ⅰ型重组胶原蛋白和ⅲ型重组胶原蛋白按质量比为4：1复配。

12、根据本发明优选的，步骤（1）和步骤（3）中所述缓冲液的组分为：7~10 wt‰ nacl、0.16~0.30 wt‰ na2hpo4、0.03~0.10 wt‰ nah2po4，溶剂为注射用水。

13、根据本发明优选的，步骤（2）中所述油相的制备方法为：将span 80按质量体积比（g/ml）1%~3%加入液体石蜡中，室温条件下搅拌至均匀。

14、根据本发明优选的，步骤（2）中所述交联剂为edc和nhs。

15、进一步优选的，所述edc添加量为重组胶原蛋白质量的1%~3%，所述edc与nhs的质量比为1:1。

16、根据本发明优选的，步骤（1）中所述均质的条件为：转速10,000~12,000 rpm，均质5 min，停机5 min，重复4~6次；步骤（2）中所述均质的条件为：转速10,000~12,000 rpm，均质3 min，停机2 min，重复3~5次。

17、根据本发明优选的，步骤（2）和步骤（5）中所述离心条件均为：4,500~5,000 rpm离心10~15 min。

18、上述制备方法制备的负载pdrn的胶原微球。

19、根据本发明优选的，所述微球的粒径分布d50值为45~58μm、d90值为75~89μm，热变性温度为56~66℃。

20、所述负载pdrn的胶原微球以胶原蛋白微球作为核心，pdrn作为包覆层，所述pdrn吸附于胶原蛋白微球的表面或内部孔隙中。

21、利用上述制备方法制备的负载pdrn的胶原微球或上述负载pdrn的胶原微球在制备组织修复或医美产品中的应用。

22、有益效果：

23、本发明通过制备胶原微球负载pdrn，由于微球在负载pdrn前已经形成了稳定的交联网络，微球的孔隙和表面特性能够有效固定pdrn，可对pdrn起到一定的缓释作用，降低其快速扩散和降解风险，延长作用时间。采用先制备胶原微球，再通过物理吸附负载pdrn的策略，能够温和保护活性分子，减少制备过程中pdrn的损失，在提高负载量的同时，增强了pdrn的活性保留率和负载稳定性。

24、pdrn为水溶性生物大分子，易在体内扩散和降解，具有促进细胞增殖、抗凋亡、促进组织修复和减缓机体衰老等生物学功能，而胶原蛋白微球结构稳定、降解缓慢，具有促进细胞黏附和增殖、支持组织修复、改善局部微环境等生物学作用。通过将胶原蛋白微球作为核心、pdrn作为包覆层，两者能够在作用时效上实现互补：pdrn在初期发挥作用，而胶原蛋白在后期逐渐发挥作用，从而增强整体效果。

25、本发明采用ⅰ型与ⅲ型重组胶原蛋白混合制备微球，所得微球的结构稳定，可用于pdrn的负载和释放。

1.一种负载pdrn的胶原微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述重组胶原蛋白为ⅰ型重组胶原蛋白或ⅲ型重组胶原蛋白或二者的混合物。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述重组胶原蛋白为ⅰ型重组胶原蛋白和ⅲ型重组胶原蛋白的混合物，ⅰ型重组胶原蛋白和ⅲ型重组胶原蛋白按质量比为（1～6）：1复配。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述ⅰ型重组胶原蛋白和ⅲ型重组胶原蛋白按质量比为4：1复配。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，满足以下条件之一或多项：

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述edc的添加量为重组胶原蛋白质量的1%~3%，所述edc与nhs的质量比为1:1。

7.权利要求1~6任一项所述制备方法制备的负载pdrn的胶原微球。

8.如权利要求7所述的负载pdrn的胶原微球，所述微球的粒径分布d50值为45~58μm、d90值为75~89μm，热变性温度为56~66℃。

9.利用权利要求1~6任一项所述制备方法制备的负载pdrn的胶原微球或权利要求7或8所述负载pdrn的胶原微球在制备组织修复或医美产品中的应用。