脂质纳米粒及其应用的制作方法

本发明涉及生物医药，具体而言，涉及一种脂质纳米粒及其应用。

背景技术：

1、脂质纳米粒作为mrna等核酸药物的核心递送载体，其物理化学稳定性直接决定了药物的有效性和安全性。冻融循环是脂质纳米粒一种常见的储存、运输和处理操作，冻融过程主要通过冰晶机械损伤、冷冻浓缩引起的化学应力以及界面变性等多种物理化学机制，对lnp（lipid nanoparticle，脂质纳米粒）的包封率稳定性构成威胁。这种影响并非轻微波动，而是可能导致包封率下降、颗粒聚集甚至完全失效的严重问题。因此，在mrna-lnp等先进疗法的研发和生产中，必须高度重视冻融稳定性，并采取有效的保护策略。

2、为了应对冻融带来的稳定性挑战，本领域研究人员普遍采用添加冷冻保护剂的策略，但现有技术往往将保护剂作为独立的添加剂使用，未能与lnp的配方组成和制备工艺形成有效的协同作用。此外，现有技术缺少关于lnp配方组成如何影响其冻融稳定性的系统研究，目前还没有针对冻融稳定性设计的lnp配方。

3、综上所述，现有技术中缺乏将特定脂质配方、两步法制备工艺与保护剂进行系统性协同设计以解决冻融稳定性问题的技术方案。开发一种能够高效、稳定制备高包封率、高转染效率、低细胞毒性且具备良好冻融稳定性的脂质纳米粒，是核酸递送技术领域亟需解决的技术难题。

技术实现思路

1、本发明的主要目的在于提供一种脂质纳米粒及其应用，以解决现有技术中脂质纳米粒的冻融稳定性较差的问题。

2、为了实现上述目的，根据本发明的第一个方面，提供了一种脂质纳米粒，上述脂质纳米粒包括：可电离阳离子脂质、中性脂质、peg化脂质和胆固醇；上述脂质纳米粒中，上述可电离阳离子脂质、上述中性脂质、上述胆固醇和上述peg化脂质的摩尔比为30-60：5-20：30-50：0.1-10；上述可电离阳离子脂质包括yk-009，上述中性脂质包括二硬脂酰磷脂酰胆碱、1，2-二油酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺或二棕榈酸磷脂酰胆碱，上述peg化脂质包括dmg-peg2000。

3、进一步地，上述脂质纳米粒的粒径为50-100nm，上述脂质纳米粒的分散指数为0.001-0.2。

4、进一步地，上述可电离阳离子脂质、上述中性脂质、上述胆固醇和上述peg化脂质的摩尔比为45-48：10-14：39-42：1-3。

5、为了实现上述目的，根据本发明的第二个方面，提供了一种制备脂质纳米粒的方法，将可电离阳离子脂质、中性脂质、peg化脂质和胆固醇溶解于醇类溶液后制备获得有机相，通过微流控设备将上述有机相与水相进行混合后去除上述醇类溶液，获得脂质纳米粒；上述可电离阳离子脂质、上述中性脂质、上述胆固醇和上述peg化脂质的摩尔比为30-60：5-20：30-50：0.1-10；上述可电离阳离子脂质包括yk-009，上述中性脂质包括dspc，上述peg化脂质包括dmg-peg2000。

6、进一步地，上述水相包括柠檬酸盐缓冲液；上述柠檬酸盐缓冲液的ph为4.0~4.5；上述微流控设备的流速为8 ml/min~30ml/min。

7、进一步地，利用缓冲液去除上述醇类溶液；上述缓冲液包括tris-hcl缓冲液；上述tris-hcl缓冲液的ph为3.0~8.0。

8、为了实现上述目的，根据本发明的第三个方面，提供了一种核酸脂质纳米粒组合物的制备方法，上述制备方法包括：在弱酸性溶液中，将上述的脂质纳米粒或利用上述的方法制备获得的上述脂质纳米粒与核酸分子进行第一混合，获得含有核酸分子的纳米粒；将上述含有核酸分子的纳米粒与碱性缓冲液进行第二混合，制备获得上述核酸脂质纳米粒组合物。

9、进一步地，上述弱酸性溶液包括tris-hcl缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液中的一种或多种；优选地，上述核酸分子包括dna分子或rna分子。

10、进一步地，上述核酸脂质纳米粒组合物中上述脂质纳米粒中n元素与上述核酸分子的p元素的摩尔比为1-30：1；优选地，上述核酸脂质纳米粒组合物中上述脂质纳米粒中n元素与上述核酸分子的p元素的摩尔比为3-10：1；优选地，上述碱性缓冲液包括含有蔗糖的tris缓冲液；更优选地，上述含有蔗糖的tris缓冲液中蔗糖的占比为10-30%（w/v）。

11、为了实现上述目的，根据本发明的第四个方面，提供了一种上述的脂质纳米粒、利用上述的制备脂质纳米粒的方法制备获得的脂质纳米粒、或利用上述的核酸脂质纳米粒组合物的制备方法制备获得的核酸脂质纳米粒组合物在体内和/或体外核酸递送中的应用。

12、应用本发明的技术方案，提供了一种脂质纳米粒，上述脂质纳米粒的成分包括可电离阳离子脂质、中性脂质、peg化脂质和胆固醇，通过合理选择可电离阳离子脂质、中性脂质、peg化脂质和胆固醇的具体成分，并对其进行科学配比。制备获得了一种结构完整、粒径均一且具备良好冻融稳定性的脂质纳米粒，其能够较好地用于包载核酸等物质，对推动核酸递送技术发展具有重要意义。

1.一种脂质纳米粒，其特征在于，所述脂质纳米粒包括：可电离阳离子脂质、中性脂质、peg化脂质和胆固醇；

2.根据权利要求1所述的脂质纳米粒，其特征在于，所述脂质纳米粒的粒径为50-100nm，所述脂质纳米粒的分散指数为0.001-0.2。

3.根据权利要求1或2所述的脂质纳米粒，其特征在于，所述可电离阳离子脂质、所述中性脂质、所述胆固醇和所述peg化脂质的摩尔比为45-48：10-14：39-42：1-3。

4.一种制备脂质纳米粒的方法，其特征在于，将可电离阳离子脂质、中性脂质、peg化脂质和胆固醇溶解于醇类溶液后制备获得有机相，通过微流控设备将所述有机相与水相进行混合后去除所述醇类溶液，获得脂质纳米粒；

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述水相包括柠檬酸盐缓冲液；所述柠檬酸盐缓冲液的ph为4.0~4.5；

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，利用缓冲液去除所述醇类溶液；

7.一种核酸脂质纳米粒组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述弱酸性溶液包括tris-hcl缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液中的一种或多种；

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述核酸脂质纳米粒组合物中所述脂质纳米粒中n元素与所述核酸分子的p元素的摩尔比为1-30：1；

10.权利要求1-3中任一项所述的脂质纳米粒、利用权利要求4-6中任一项所述的制备脂质纳米粒的方法制备获得的脂质纳米粒、或利用权利要求7-9中任一项所述的核酸脂质纳米粒组合物的制备方法制备获得的核酸脂质纳米粒组合物在体内和/或体外核酸递送中的应用。