一种帕珠沙星铱配合物的制备方法和应用与流程

1.本发明属于帕珠沙星技术领域，具体涉及一种帕珠沙星铱配合物的制备方法和应用。


背景技术：

2.帕珠沙星是合成氟喹诺酮类抗菌药的第三代成员之一，属于广谱抗生素。其对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和厌氧菌均有较高的抗菌活性。与常规喹诺酮类抗菌药物相比，易穿透感染灶，表现出较低的毒性、较少的光敏性和广谱性。
3.但由于抗生素的广泛使用，抗菌药物耐药性已成为公共卫生的主要威胁。多药耐药现象对新型抗生素的开发产生了紧迫感。大多数正在临床开发用于治疗细菌感染的药物是目前使用的抗生素的有机衍生物，该有机衍生物往往不能真正解决抗菌细菌耐药性的问题。
4.因此，迫切需要开发新类别的抗菌药物来对抗由于细菌耐药性而产生的相关感染。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的第一个技术问题是：
6.提供一种帕珠沙星铱配合物。所述帕珠沙星铱配合物具有抗菌、抗肿瘤双重功能，其具有一定选择性，对正常细胞l-02的细胞毒性极小。
7.本发明所要解决的第二个技术问题是：
8.提供一种所述帕珠沙星铱配合物的制备方法。
9.本发明所要解决的第三个技术问题是：
10.所述帕珠沙星铱配合物的应用。
11.为了解决所述第一个技术问题，本发明采用的技术方案为：
12.一种帕珠沙星铱配合物，所述帕珠沙星铱配合物至少含有如下结构式中的一种：
13.即[ir(ppy)2(mbpypaz)]pf6；
[0014]
即[ir(bzq)2(mbpypaz)]pf6；
[0015]
即[ir(dfppy)2(mbpypaz)]pf6；
[0016]
即[ir(thpy)2(mbpypaz)]pf6；
[0017]
即[ir(pq)2(mbpypaz)]pf6。
[0018]
所述ppy为2-苯基吡啶，所述bzq为7,8-苯并喹啉，所述dfppy为2-(2,4-二氟苯基)吡啶，所述thpy为2-(2-噻吩)吡啶，所述pq为2-苯基喹啉。
[0019]
所述paz为帕珠沙星。
[0020]
在生理ph下，由于存在带负电荷的组分，如磷脂、磷壁酸和脂多糖，细菌外细胞壁和膜通常带负电荷，因此，为了增加选择性，帕珠沙星铱配合物中通常含有金属阳离子成分。
[0021]
所述帕珠沙星铱配合物还具有其他抗生素药物不容易获得的独特作用机制：ros(活性氧)生成、氧化还原活化、配体交换和参与重要细胞过程的底物耗竭等。
[0022]
所述帕珠沙星铱配合物具有抗菌、抗肿瘤双重功能，其具有一定选择性，对正常细胞l-02的细胞毒性极小。
[0023]
与帕珠沙星相比，帕珠沙星铱配合物展现出有利于作为光敏剂的良好的光谱性质及阳离子性质，可对细菌进行有效的跟踪识别及抑制。
[0024]
为了解决所述第二个技术问题，本发明采用的技术方案为：
[0025]
一种制备所述帕珠沙星铱配合物的方法，包括以下步骤：
[0026]
混合4,4'-二甲基-2,2'-联吡啶与氧化剂，反应后，加入催化剂和帕珠沙星，得到中间体；
[0027]
在避光环境下，混合铱盐与化合物r，再加入中间体和含氟化合物，经反应，得到所述帕珠沙星铱配合物；
[0028]
化合物r包括2-苯基吡啶，7,8-苯并喹啉，2-(2,4-二氟苯基)吡啶，2-(2-噻吩)吡啶和2-苯基喹啉中的至少一种。
[0029]
在反应中添加不同的化合物r，会得到不同结构的帕珠沙星铱配合物，但这些结构的帕珠沙星铱配合物，都能够实现本发明宣称的技术效果。
[0030]
根据本发明的一种实施方式，将4,4'-二甲基-2,2'-联吡啶和二氧化硒(seo2)的混合物中加入20-35ml溶剂，然后在氩气下将溶液回流加热24小时，反应完毕后溶液冷却至室温，抽滤除去不溶性物质，减压旋蒸除去溶剂，溶剂包括二氧六环。
[0031]
根据本发明的一种实施方式，所述4,4'-二甲基-2,2'-联吡啶与所述氧化剂的摩尔比为2-3：2.5-3。通过加入氧化剂，以生成醛。
[0032]
根据本发明的一种实施方式，所述催化剂为有机酸，优选为甲酸和冰醋酸中的至少一种。在催化反应中，催化剂与反应物发生作用，改变了反应途径，从而降低了反应的活化能。
[0033]
根据本发明的一种实施方式，在所述避光环境下，通入保护气氛。若不进行避光，将会改变反应方向。
[0034]
根据本发明的一种实施方式，所述铱盐与所述化合物r的摩尔比为1-3：4-9，优选为1-2：3-6。化合物r的添加要求过量。
[0035]
根据本发明的一种实施方式，所述铱盐与所述化合物r溶于醇/水混合溶剂中，其中，醇包括2-甲氧基甲醇和2-甲氧基乙醇中的至少一种，混合溶剂中醇与水体积比为2-3：1。
[0036]
根据本发明的一种实施方式，所述铱盐包括三氯化铱、溴化铱、碘化铱和五氟化铱中的至少一种，优选为三氯化铱。
[0037]
根据本发明的一种实施方式，还包括固液分离、干燥和纯化的步骤。
[0038]
本发明的再一个方面，还提供一种帕珠沙星铱配合物在抗菌药物和抗肿瘤药物中的应用。
[0039]
所述帕珠沙星铱配合物可以作为拓扑异构酶ⅱ的抑制剂和有丝分裂抑制剂。
[0040]
所述帕珠沙星铱配合物可用于制备新型抗肿瘤药物，同时也有利于抑制在化疗治疗的过程中因免疫系统能力降低而出现的感染。
[0041]
所述技术方案中的一个技术方案至少具有如下优点或有益效果之一：
[0042]
所述帕珠沙星铱配合物具有抗菌、抗肿瘤双重功能，其具有一定选择性，对正常细胞l-02的细胞毒性极小，可用于制备新型抗肿瘤药物，同时也有利于抑制在化疗治疗的过程中因免疫系统能力降低而出现的感染。与帕珠沙星相比，帕珠沙星铱配合物展现出有利
于作为光敏剂的良好的光谱性质及阳离子性质，可对细菌进行有效的跟踪识别及抑制。
附图说明
[0043]
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
[0044]
图1为实施例1的帕珠沙星铱配合物合成路线图。
[0045]
图2为实施例1的帕珠沙星铱配合物结构图。
[0046]
图3为实施例1中的4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛在氘代氯仿(cdcl3)中的核磁共振氢谱图。
[0047]
图4为实施例1中的mbpypaz在氘代氯仿(cdcl3)中的核磁共振氢谱图。
[0048]
图5为实施例1中的帕珠沙星铱配合物在dmso-d6(二甲基亚砜-d6)中的核磁共振氢谱图。
[0049]
图6为不同时间下，实施例1中的帕珠沙星铱配合物在dmso-d6(二甲基亚砜-d6)中的核磁共振氢谱图。
[0050]
图7为实施例1中的帕珠沙星铱配合物在乙腈中的紫外吸收光谱图。
[0051]
图8为实施例1中的帕珠沙星铱配合物在pbs(缓冲溶液)中的紫外吸收光谱图。
[0052]
图9为实施例1中的帕珠沙星铱配合物在乙腈中的荧光发射光谱图。
[0053]
图10为实施例1中的帕珠沙星铱配合物在pbs(缓冲溶液)中的荧光发射光谱图。
[0054]
图11为帕珠沙星铱配合物对hepg2细胞的体外细胞抗增殖活性，药物作用时间分别为24、48、72h。
[0055]
图12为不同浓度的帕珠沙星铱配合物对mrsa(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)的平板实验图。
具体实施方式
[0056]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的范围。
[0057]
实施例中，单位m为物质的量浓度。
[0058]
实施例中，所述调节ph值至约10，即控制ph在10左右，不要求一定精确到10，但也不能相距太多。
[0059]
实施例1
[0060]
一种帕珠沙星铱配合物(ir-paz)的制备方法，包括以下步骤：
[0061]
实施例1制备的帕珠沙星铱配合物为[ir(ppy)2(mbpypaz)]pf6。
[0062]
4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛的制备：
[0063]
将2mmol的4，4'-二甲基-2，2'-联吡啶(dmb)和2.5mmol的二氧化硒(seo2)的混合物中加入20ml二氧六环，然后在氩气下将溶液回流加热24小时，反应完毕后溶液冷却至室温，抽滤除去不溶性物质，减压旋蒸除去二氧六环。往烧瓶中的固体加入80ml乙酸乙酯，60℃回流加热2小时后趁热抽滤除去不溶性固体。滤液冷却至室温后，用40ml的0.1m碳酸钠分
三次清洗滤液，然后用60ml的0.3m焦亚硫酸钠溶液分三次提取产物，合并萃取液，通过碳酸钠调节ph值至约10后，将产物萃取至300ml的二氯甲烷中，减压除去溶剂得到产物。
[0064]
mbpypaz的制备：
[0065]
将帕珠沙星(0.0828g，0.2mmol)和4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛(0.0396g，0.2mmol)加入乙醇溶液(20ml)中，滴加两滴甲酸，混悬液在氩气保护下80℃加热回流后反应24小时，反应结束后将溶液冷却至室温，将溶剂旋蒸至干后得到粗产物，粗产物通过硅胶柱层析纯化。
[0066]
ir2(ppy)4cl2的制备：
[0067]
在三口烧瓶中将1mmol的三氯化铱水合物ircl3·
xh2o溶解在40ml的2-甲氧基乙醇/水(3:1，v/v)的混合溶液中，并加入3mmol的ppy，混合物在氩气保护下120℃避光回流搅拌24h后，将溶液冷却至室温，抽滤收集所产生的沉淀即得ir2(ppy)4cl2。
[0068]
[ir(ppy)2(mbpypaz)]pf6的制备：
[0069]
将0.1mmol的ir2(ppy)4cl2和0.2mmol的mbpypaz溶解在二氯甲烷/甲醇(2:1，v/v)的混合溶液(45ml)中，在氩气保护下避光回流4h，反应结束后冷却至室温，抽滤，滤液减压浓缩后转移至烧杯，加入kpf6饱和水溶液。静置后抽滤收集沉淀，真空干燥后使用二氯甲烷和甲醇作为洗脱剂，硅胶柱层析纯化得所述帕珠沙星铱配合物(ir-paz)。
[0070]
实施例1的帕珠沙星铱配合物合成路线图见图1。
[0071]
实施例1的帕珠沙星铱配合物结构图见图2。
[0072]
不同时间下，实施例1中的帕珠沙星铱配合物在dmso-d6(二甲基亚砜-d6)中的核磁共振氢谱图，如图6所述，从中可得，所述帕珠沙星铱配合物稳定性好。
[0073]
图7为实施例1中的帕珠沙星铱配合物在乙腈中的紫外吸收光谱图。
[0074]
图8为实施例1中的帕珠沙星铱配合物在pbs(缓冲溶液)中的紫外吸收光谱图。
[0075]
图9为实施例1中的帕珠沙星铱配合物在乙腈中的荧光发射光谱图。
[0076]
图10为实施例1中的帕珠沙星铱配合物在pbs(缓冲溶液)中的荧光发射光谱图。
[0077]
实施例2
[0078]
一种帕珠沙星铱配合物(ir-paz)的制备方法，包括以下步骤：
[0079]
实施例2制备的帕珠沙星铱配合物为[ir(ppy)2(mbpypaz)]pf6。
[0080]
4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛的制备：
[0081]
将3mmol的4，4'-二甲基-2，2'-联吡啶(dmb)和3mmol的二氧化硒(seo2)的混合物中加入35ml二氧六环，然后在氩气下将溶液回流加热24小时，反应完毕后溶液冷却至室温，抽滤除去不溶性物质，减压旋蒸除去二氧六环。往烧瓶中的固体加入120ml乙酸乙酯，60℃回流加热2小时后趁热抽滤除去不溶性固体。滤液冷却至室温后，用40ml的0.1m碳酸钠分三次清洗滤液，然后用60ml的0.3m焦亚硫酸钠溶液分三次提取产物，合并萃取液，通过碳酸钠调节ph值至约10后，将产物萃取至300ml的二氯甲烷中，减压除去溶剂得到产物。
[0082]
mbpypaz的制备：
[0083]
将帕珠沙星(0.0828g，0.2mmol)和4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛(0.0396g，0.2mmol)加入乙醇溶液(30ml)中，滴加三滴甲酸，混悬液在氩气保护下80℃加热回流后反应24小时，反应结束后将溶液冷却至室温，将溶剂旋蒸至干后得到粗产物，粗产物通过硅胶柱层析纯化。
[0084]
ir2(ppy)4cl2的制备：
[0085]
在三口烧瓶中将2mmol的三氯化铱水合物ircl3·
xh2o溶解在80ml的2-甲氧基乙醇/水(3:1，v/v)的混合溶液中，并加入6mmol的ppy，混合物在氩气保护下120℃避光回流搅拌24h后，将溶液冷却至室温，抽滤收集所产生的沉淀即得ir2(ppy)4cl2。
[0086]
[ir(ppy)2(mbpypaz)]pf6的制备：
[0087]
将0.2mmol的ir2(ppy)4cl2和0.4mmol的mbpypaz溶解在二氯甲烷/甲醇(2:1，v/v)的混合溶液(60ml)中，在氩气保护下避光回流6h，反应结束后冷却至室温，抽滤，滤液减压浓缩后转移至烧杯，加入kpf6饱和水溶液。静置后抽滤收集沉淀，真空干燥后使用二氯甲烷和甲醇作为洗脱剂，硅胶柱层析纯化得所述帕珠沙星铱配合物(ir-paz)。
[0088]
实施例3
[0089]
一种帕珠沙星铱配合物(ir-paz)的制备方法，包括以下步骤：
[0090]
实施例3制备的帕珠沙星铱配合物为[ir(bzq)2(mbpypaz)]pf6。
[0091]
4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛的制备：
[0092]
将2mmol的4，4'-二甲基-2，2'-联吡啶(dmb)和2.5mmol的二氧化硒(seo2)的混合物中加入20ml二氧六环，然后在氩气下将溶液回流加热24小时，反应完毕后溶液冷却至室温，抽滤除去不溶性物质，减压旋蒸除去二氧六环。往烧瓶中的固体加入80ml乙酸乙酯，60℃回流加热2小时后趁热抽滤除去不溶性固体。滤液冷却至室温后，用40ml的0.1m碳酸钠分三次清洗滤液，然后用60ml的0.3m焦亚硫酸钠溶液分三次提取产物，合并萃取液，通过碳酸钠调节ph值至约10后，将产物萃取至300ml的二氯甲烷中，减压除去溶剂得到产物。
[0093]
mbpypaz的制备：
[0094]
将帕珠沙星(0.0828g，0.2mmol)和4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛(0.0396g，0.2mmol)加入乙醇溶液(20ml)中，滴加两滴甲酸，混悬液在氩气保护下80℃加热回流后反应24小时，反应结束后将溶液冷却至室温，将溶剂旋蒸至干后得到粗产物，粗产物通过硅胶柱层析纯化。
[0095]
ir2(bzq)4cl2的制备：
[0096]
在三口烧瓶中将三氯化铱水合物ircl3·
xh2o(0.298g，1mmol)溶解在80ml的2-甲氧基乙醇/水(3:1，v/v)的混合溶液中，并加入过量bzq(0.537g，3mmol)，混合物在氩气保护下120℃避光回流搅拌24h后，将溶液冷却至室温，抽滤收集所产生的沉淀即得ir2(bzq)4cl2。
[0097]
[ir(bzq)2(mbpypaz)]pf6的制备：
[0098]
将ir2(bzq)4cl2(0.1168g，0.1mmol)和mbpypaz(0.0996g，0.2mmol)溶解在二氯甲烷/甲醇(2:1，v/v)的混合溶液(45ml)中，在氩气保护下避光回流4h，反应结束后冷却至室温，抽滤，滤液减压浓缩后转移至烧杯，加入kpf6饱和水溶液。静置后抽滤收集沉淀，真空干燥后使用二氯甲烷和甲醇作为洗脱剂，硅胶柱层析纯化得[ir(bzq)2(mbpypaz)]pf6。
[0099]
实施例4
[0100]
一种帕珠沙星铱配合物(ir-paz)的制备方法，包括以下步骤：
[0101]
实施例4制备的帕珠沙星铱配合物为[ir(dfppy)2(mbpypaz)]pf6。
[0102]
4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛的制备：
[0103]
将2mmol的4，4'-二甲基-2，2'-联吡啶(dmb)和2.5mmol的二氧化硒(seo2)的混合
物中加入20ml二氧六环，然后在氩气下将溶液回流加热24小时，反应完毕后溶液冷却至室温，抽滤除去不溶性物质，减压旋蒸除去二氧六环。往烧瓶中的固体加入80ml乙酸乙酯，60℃回流加热2小时后趁热抽滤除去不溶性固体。滤液冷却至室温后，用40ml的0.1m碳酸钠分三次清洗滤液，然后用60ml的0.3m焦亚硫酸钠溶液分三次提取产物，合并萃取液，通过碳酸钠调节ph值至约10后，将产物萃取至300ml的二氯甲烷中，减压除去溶剂得到产物。
[0104]
mbpypaz的制备：
[0105]
将帕珠沙星(0.0828g，0.2mmol)和4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛(0.0396g，0.2mmol)加入乙醇溶液(20ml)中，滴加两滴甲酸，混悬液在氩气保护下80℃加热回流后反应24小时，反应结束后将溶液冷却至室温，将溶剂旋蒸至干后得到粗产物，粗产物通过硅胶柱层析纯化。
[0106]
ir2(dfppy)4cl2的制备：
[0107]
在三口烧瓶中将三氯化铱水合物ircl3·
xh2o(0.298g，1mmol)溶解在80ml2-甲氧基乙醇/水(3:1，v/v)的混合溶液中，并加入过量dfppy(0.573g，3mmol)，混合物在氩气保护下120℃避光回流搅拌24h后，将溶液冷却至室温，抽滤收集所产生的沉淀即得ir2(dfppy)4cl2。
[0108]
[ir(dfppy)2(mbpypaz)]pf6的制备：
[0109]
将ir2(dfppy)4cl2(0.1216g，0.1mmol)和mbpypaz(0.0996g，0.2mmol)溶解在二氯甲烷/甲醇(2:1，v/v)的混合溶液(45ml)中，在氩气保护下避光回流4h，反应结束后冷却至室温，抽滤，滤液减压浓缩后转移至烧杯，加入kpf6饱和水溶液。静置后抽滤收集沉淀，真空干燥后使用二氯甲烷和甲醇作为洗脱剂，硅胶柱层析纯化得[ir(dfppy)2(mbpypaz)]pf6。
[0110]
实施例5
[0111]
一种帕珠沙星铱配合物(ir-paz)的制备方法，包括以下步骤：
[0112]
实施例5制备的帕珠沙星铱配合物为[ir(thpy)2(mbpypaz)]pf6。
[0113]
4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛的制备：
[0114]
将2mmol的4，4'-二甲基-2，2'-联吡啶(dmb)和2.5mmol的二氧化硒(seo2)的混合物中加入20ml二氧六环，然后在氩气下将溶液回流加热24小时，反应完毕后溶液冷却至室温，抽滤除去不溶性物质，减压旋蒸除去二氧六环。往烧瓶中的固体加入80ml乙酸乙酯，60℃回流加热2小时后趁热抽滤除去不溶性固体。滤液冷却至室温后，用40ml的0.1m碳酸钠分三次清洗滤液，然后用60ml的0.3m焦亚硫酸钠溶液分三次提取产物，合并萃取液，通过碳酸钠调节ph值至约10后，将产物萃取至300ml的二氯甲烷中，减压除去溶剂得到产物。
[0115]
mbpypaz的制备：
[0116]
将帕珠沙星(0.0828g，0.2mmol)和4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛(0.0396g，0.2mmol)加入乙醇溶液(20ml)中，滴加两滴甲酸，混悬液在氩气保护下80℃加热回流后反应24小时，反应结束后将溶液冷却至室温，将溶剂旋蒸至干后得到粗产物，粗产物通过硅胶柱层析纯化。
[0117]
ir2(thpy)4cl2的制备：
[0118]
在三口烧瓶中将三氯化铱水合物ircl3·
xh2o(0.298g，1mmol)溶解在80ml2-甲氧基乙醇/水(3:1，v/v)的混合溶液中，并加入过量thpy(0.483g，3mmol)，混合物在氩气保护下120℃避光回流搅拌24h后，将溶液冷却至室温，抽滤收集所产生的沉淀即得ir2(thpy)4cl2。
[0119]
[ir(thpy)2(mbpypaz)]pf6的制备：
[0120]
将ir2(thpy)4cl2(0.1096g，0.1mmol)和mbpypaz(0.0996g，0.2mmol)溶解在二氯甲烷/甲醇(2:1，v/v)的混合溶液(45ml)中，在氩气保护下避光回流4h，反应结束后冷却至室温，抽滤，滤液减压浓缩后转移至烧杯，加入kpf6饱和水溶液。静置后抽滤收集沉淀，真空干燥后使用二氯甲烷和甲醇作为洗脱剂，硅胶柱层析纯化得[ir(thpy)2(mbpypaz)]pf6。
[0121]
实施例6
[0122]
一种帕珠沙星铱配合物(ir-paz)的制备方法，包括以下步骤：
[0123]
实施例6制备的帕珠沙星铱配合物为[ir(pq)2(mbpypaz)]pf6。
[0124]
4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛的制备：
[0125]
将2mmol的4，4'-二甲基-2，2'-联吡啶(dmb)和2.5mmol的二氧化硒(seo2)的混合物中加入20ml二氧六环，然后在氩气下将溶液回流加热24小时，反应完毕后溶液冷却至室温，抽滤除去不溶性物质，减压旋蒸除去二氧六环。往烧瓶中的固体加入80ml乙酸乙酯，60℃回流加热2小时后趁热抽滤除去不溶性固体。滤液冷却至室温后，用40ml的0.1m碳酸钠分三次清洗滤液，然后用60ml的0.3m焦亚硫酸钠溶液分三次提取产物，合并萃取液，通过碳酸钠调节ph值至约10后，将产物萃取至300ml的二氯甲烷中，减压除去溶剂得到产物。
[0126]
mbpypaz的制备：
[0127]
将帕珠沙星(0.0828g，0.2mmol)和4'-甲基-2，2'-联吡啶-4-甲醛(0.0396g，0.2mmol)加入乙醇溶液(20ml)中，滴加两滴甲酸，混悬液在氩气保护下80℃加热回流后反应24小时，反应结束后将溶液冷却至室温，将溶剂旋蒸至干后得到粗产物，粗产物通过硅胶柱层析纯化。
[0128]
ir2(pq)4cl2的制备：
[0129]
在三口烧瓶中将三氯化铱水合物ircl3·
xh2o(0.298g，1mmol)溶解在80ml2-甲氧基乙醇/水(3:1，v/v)的混合溶液中，并加入过量pq(0.615g，3mmol)，混合物在氩气保护下120℃避光回流搅拌24h后，将溶液冷却至室温，抽滤收集所产生的沉淀即得ir2(pq)4cl2。
[0130]
[ir(pq)2(mbpypaz)]pf6的制备：
[0131]
将ir2(pq)4cl2(0.1272g，0.1mmol)和mbpypaz(0.0996g，0.2mmol)溶解在二氯甲烷/甲醇(2:1，v/v)的混合溶液(45ml)中，在氩气保护下避光回流4h，反应结束后冷却至室温，抽滤，滤液减压浓缩后转移至烧杯，加入kpf6饱和水溶液。静置后抽滤收集沉淀，真空干燥后使用二氯甲烷和甲醇作为洗脱剂，硅胶柱层析纯化得[ir(pq)2(mbpypaz)]pf6。
[0132]
性能测试：
[0133]
性能测试中，所用ir-paz为实施例1制备的[ir(ppy)2(mbpypaz)]pf6。
[0134]
进行以下性能测试：
[0135]
(1)通过噻唑蓝(mtt)比色法分别检测ir-paz对正常人肝细胞l-02的毒性及其对肺癌细胞a549、宫颈癌细胞hela、肝癌细胞hepg2和乳腺癌细胞mcf-7等肿瘤细胞株的抑制效果。
[0136]
(2)采用微量肉汤稀释法分别测定ir-paz对金黄色葡萄球菌(s.aureus)、无乳链球菌(s.agalactiae)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)、大肠杆菌(e.coli)、铜绿假单胞菌(p.aeruginosa)、副溶血弧菌(v.parahaemolyticus)的最低抑菌浓度(mic)和最低杀菌
浓度(mbc)。并通过平板实验观察ir-paz对mrsa菌落生长的抑制作用。
[0137]
具体如下：
[0138]
(1)以mtt法研究述帕珠沙星铱配合物(ir-paz)的细胞毒性：
[0139]
分别取对数生长期的细胞(l-02、a549、hela、hepg2和mcf-7)，并用0.25％胰蛋白酶消化；
[0140]
将dmem培养基稀释为4.0
×
104/ml细胞悬液，接种于96孔板中，每孔100μl，在37℃、5％co2条件下培养细胞24h；
[0141]
吸出培养液，加入新培养液90μl及不同浓度的铱配合物和帕珠沙星药液。同时设对照组和调零孔，加入相同体积的培养液，每一浓度设3个平行孔。培养48h后，分别每孔加入5％mtt(5mg/ml)20μl，继续孵育4h，然后每孔加入二甲基亚砜(dmso)150μl。在微型振荡器上避光振荡20min，结晶溶解后，立即比色，用酶标仪测量od值，比色以空白孔调零。实验重复3次。
[0142]
根据公式计算细胞增殖率：细胞增殖抑制率(％)＝(1-加药孔平均od值/对照孔平均od值)
×
100％，并计算其半数抑制浓度(ic
50
)。结果如表1。
[0143]
表1帕珠沙星铱配合物对不同肿瘤细胞和正常细胞的ic
50
值
[0144][0145]
注：aic
50
：药物作用48h后凋亡细胞与全部细胞数之比等于50％时所对应的药物浓度，数据以平均值
±
标准偏差(mean
±
sd)表示。sib(选择性指数)＝ic
50
(l-02)/ic
50
(hepg2)。
[0146]
由表1的结果可以看出，配合物对4种肿瘤细胞都表现出优异的抗肿瘤活性，其中配合物对hepg2细胞的ic
50
值为4.1
±
0.4μm。而帕珠沙星对肿瘤细胞无抑制作用。此外，帕珠沙星铱配合物对正常细胞l-02的ic
50
值都高于肿瘤细胞的ic
50
值，选择性指数为顺铂(cisplatin)的5.48倍，反映出配合物对肿瘤细胞的选择性抑制活性。
[0147]
图11为帕珠沙星铱配合物对hepg2细胞的体外细胞抗增殖活性，药物作用时间分别为24、48、72h。
[0148]
图11结果显示，ir-paz对hepg2的活性呈浓度和时间依赖性关系。
[0149]
(2)微量肉汤稀释法测定配合物的抗菌活性：
[0150]
将细菌培养至对数生长期，使用lb培养基将细菌培养液稀释至4-8
×
106cfu/ml的浓度。在无菌96孔板上连续稀释配合物，并使其总体积为100μl。然后加入稀释完毕的细菌悬液100μl，此时每孔中所含配合物的浓度分别为51.2μm、25.6μm、12.8μm、6.4μm、3.2μm、1.6μm、0.8μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm、0.025μm。
[0151]
将平板放置在37℃恒温培养箱中孵育24h后，观察96孔板孔内的浊度，底部物白色沉淀，呈现澄清状态，无细菌生长的最后一孔所对应的药物浓度即为该药物的最低抑菌浓
度(mic)。用接种环蘸取菌液在无菌空白琼脂板上划线后放入37℃的培养箱中培养24h，观察没有长菌的最小配合物浓度，即为最低杀菌浓度(mbc)。所述帕珠沙星铱配合物对不同菌种的mic值的数据见表2。
[0152]
表2帕珠沙星铱配合物对不同菌种的mic值(μm)
[0153][0154]
根据表2的mic值测定结果，在所测试的六种细菌中，帕珠沙星铱配合物均表现出比帕珠沙星更高的抗菌活性。其中，铱配合物对金黄色葡萄球菌具有更好的抗菌活性，其mic和mbc都为0.2μm。相比其他5种细菌，帕珠沙星对于耐药细菌mrsa的抑制能力明显降低(mic值是其他细菌mic的8-64倍)，而对帕珠沙星进行修饰后所合成出来的铱配合物对耐药细菌的抑制效果明显提升，mic值是帕珠沙星mic值的16倍。
[0155]
通过平板试验进一步证实ir-paz对mrsa的抗菌活性。将ir-paz配合物与mrsa在37℃的摇床中孵育1h，孵育完成后，将菌液进行平板涂布并放在37℃的培养箱，24h后观察结果。
[0156]
图12为不同浓度的帕珠沙星铱配合物对mrsa(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)的平板实验图。
[0157]
如图12所示，实验结果表明，平板中菌落数量随着配合物的浓度增加而逐渐减少，配合物浓度增加至四倍mic值时，平板上没有菌落生长。
[0158]
以上仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
[0159]
ir-paz的其他化学式：[ir(bzq)2(mbpypaz)]pf6、[ir(dfppy)2(mbpypaz)]pf6、[ir(thpy)2(mbpypaz)]pf6和[ir(pq)2(mbpypaz)]pf6的性质与能达到的技术效果，与[ir(ppy)2(mbpypaz)]pf6相同或相近，因此没有各个列出性能测试图或性能测试数据。