一种无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺的制作方法

1.本发明属于饮料技术领域，特别是一种无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺。


背景技术：

2.南瓜(cucurbita)，属于葫芦科南瓜属植物，一年生蔓生草本植物，广泛分布于世界各地，是生活中常见的一种蔬菜。南瓜的营养物质种类丰富、果肉中含有丰富的碳水化合物、蛋白质、氨基酸、脂肪、维生素和矿物质等营养物质，以及生物碱、南瓜子碱、葫芦巴碱等生物活性物质。南瓜的食用药用价值高，具有降血糖、降血脂、抗炎、抗过敏、抗肿瘤、促进胃肠消化和防动脉硬化等作用。
3.目前，市场上较开发的南瓜食品主要有南瓜饼等食品，比较单一，南瓜饼属于小吃类，食用前还需加热熟化。将南瓜加工成饮料将会极大地方便消费者饮用，受众面大。常见的南瓜饮料类的产品有型主要是南瓜果肉饮料、南瓜果蔬汁复合发酵饮料、南瓜醋和南瓜酒等。虽然复合饮料可借助其他果蔬汁的香气掩盖南瓜的不良风味，同时还能丰富饮料的营养价值，但是复合饮料会稀释南瓜汁的浓度从而降低南瓜的功效。在这个快节奏时代，奶茶、可乐等快消品十分受大家喜爱，但这些产品含糖较高，长期饮用易造成蛀牙、肥胖、高血糖等疾病，并不建议多饮用。因而研制更多健康的低糖或无糖饮料迫在眉睫。因而，利用乳酸菌发酵，研制一款无糖南瓜饮料十分必要，符合时代发展的需要。


技术实现要素：

4.本发明目的在于提供一种无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺。本发明以南瓜为原料，利用一株本实验室从贵州发酵酸菜中分离筛选得到的发酵乳杆菌gzsc-1进行发酵，通过优化工艺得到南瓜乳酸菌饮料，该饮料不仅具有南瓜的营养保健价值，又具有乳酸菌饮料独特的风味，且产品色泽诱人、贮存方便。本发明采用木糖醇代替蔗糖进行调配，所得饮料不含庶糖，南瓜中的碳水化合物经过乳酸菌的发酵后也转化为小分子的有机酸等物质，符合现代消费者的需求，具有良好的市场开发前景。在本发明的发酵温度37℃、发酵时间36h、乳酸菌接种量5％、木糖醇添加量为6％的工艺条件下，所得南瓜饮料的感官品质和质量达到最佳。
5.本发明采用如下技术方案实现发明目的：
6.一种无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺，所述生产工艺的流程是:将原料南瓜去皮切块，经蒸煮、打浆、酶解、调节ph、装罐、灭菌、冷却、接种、发酵、均质、封装和灭菌后，得成品；所述发酵的工艺条件是：发酵温度36-38℃、发酵时间34-38h、发酵乳杆菌gzsc-1的接种量4.5-5.5％。
7.前述的无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺中，所述发酵的工艺条件是：发酵温度 36.5-37.5℃、发酵时间35-37h、发酵乳杆菌gzsc-1接种量4.8-5.2％。
8.前述的无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺中，所述发酵的工艺条件是：发酵温度37℃、发酵时间36h、发酵乳杆菌gzsc-1接种量5％。
9.前述的无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺中，所述发酵后对发酵产物加入木糖醇调配。
10.前述的无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺中，所述发酵后对发酵产物加入5-7％木糖醇调配。
11.前述的无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺中，所述发酵后对发酵产物加入5.5-6.5％木糖醇调配。
12.前述的无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺中，所述发酵后对发酵产物加入6％木糖醇调配。
13.前述的无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺中，所述调节ph是调节ph至6.2-6.8。
14.前述的无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺中，所述调节ph是调节ph至6.5。
15.前述的无糖南瓜乳酸菌饮料的生产工艺中，所述乳酸菌为发酵乳杆菌gzsc-1；所述发酵乳杆菌gzsc-1于2017年12月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为 cctcc no:m 2017847。
16.所述乳酸菌为发酵乳杆菌gzsc-1保藏完整信息如下：
17.保藏单位代码：cctcc
18.地址：中国.武汉.武汉大学
19.是否存活：是
20.保藏日期：2017年12月28日
21.保藏编号：cctcc no:m 2017847
22.分类命名：发酵乳杆菌gzsc-1
23.lactobacillus fermentum gzsc-1
24.与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
25.1、本发明以南瓜为原料，用发酵乳杆菌gzsc-1进行发酵，得到南瓜乳酸菌饮料，该饮料不仅具有南瓜的营养保健价值，又具有乳酸菌饮料独特的风味，且产品色泽诱人、贮存方便。本发明采用木糖醇代替蔗糖进行调配，所得饮料含糖量低，十分符合现代消费者的需求，具有良好的市场开发前景。
26.2、本发明南瓜浆制备时南瓜与水的比例为1:2，最优发酵工艺条件为发酵温度37℃、发酵时间36h、发酵乳杆菌gzsc-1接种量5％，在上述条件下对发酵完成产品加木糖醇调配最优比例为6％，南瓜乳酸菌饮料酸甜可口，香气浓郁。南瓜发酵饮料的可溶性固形物占比为2.3
±
0.1％、ph值为3.87
±
0.01、总酸含量为6.291
±
0.0566g/kg、总糖含量为 0.091
±
0.0636g/100g，总糖含量满足无糖产品总糖含量低于0.5g/100g的条件，感官得分为92
±
1.054分，是一款无糖南瓜乳酸菌饮料，适合中老年各类人群食用，糖尿病患者也可食用。除此之外，本发明无糖南瓜乳酸菌饮料中还含有丰富的k、na、ca、mg，是典型的高钾低钠产品。
27.3、本发明的工艺中，将ph调节至6.5，此为乳酸菌最适发酵ph。
28.4、本发明无糖南瓜乳酸菌饮料采用发酵乳杆菌gzsc-1发酵，发酵后的饮料不仅具有南瓜丰富的营养价值，还具有乳酸菌发酵产生的乳酸的独特风味，乳酸菌对于改善人体胃肠道也具有显著作用，且南瓜价格低、营养丰富、色泽诱人，必定会受到大众的喜爱。
29.5、本发明采用的发酵乳杆菌gzsc-1活力好，适应性强，相较于以往的乳酸菌，本发明提供的菌具有良好的抗氧化特性，并具有降血糖的效果，具有调节血糖水平的效果，所以
采用改菌的南瓜发酵饮料也有响应的技术效果。
附图说明
30.图1为发酵温度对南瓜发酵饮料的ph值和感官评价的影响图；
31.图2为发酵温度对南瓜发酵饮料的ph值和感官评价的影响图；
32.图3为发酵温度对南瓜发酵饮料的ph值和感官评价的影响图；
33.图4为无糖南瓜乳酸菌饮料的产品图。
具体实施方式
34.下面结合具体实施例对本发明做进一步详细描述。下述所使用的实验方法若无特殊说明，均为本技术领域现有常规方法，所使用的配料或材料，如无特殊说明，均为通过商业途径可得到的配料或材料。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
35.实施例1。一种无糖南瓜发酵乳杆菌gzsc-1饮料的生产工艺，工艺流程是将原料南瓜去皮切块，经蒸煮、打浆、酶解、调节ph至6.5、装罐、灭菌、冷却、接种、发酵、均质、封装和灭菌后，得成品。发酵工艺是36℃、发酵时间38h、发酵乳杆菌gzsc-1接种量4.5％，发酵后对发酵产物加入4％木糖醇调配再进行均质。
36.实施例2。一种无糖南瓜发酵乳杆菌gzsc-1饮料的生产工艺，工艺流程是将原料南瓜去皮切块，经蒸煮、打浆、酶解、调节ph至6.5、装罐、灭菌、冷却、接种、发酵、均质、封装和灭菌后，得成品。其中发酵工艺是36.5℃、发酵时间37h、发酵乳杆菌gzsc-1 接种量4.8％，发酵后对发酵产物加入4.5％木糖醇调配。
37.实施例3。一种无糖南瓜发酵乳杆菌gzsc-1饮料的生产工艺，工艺流程是将原料南瓜去皮切块，经蒸煮、打浆、酶解、调节ph至6.5、装罐、灭菌、冷却、接种、发酵、均质、封装和灭菌后，得成品。其中发酵工艺是37℃、发酵时间36h、发酵乳杆菌gzsc-1 接种量5％，发酵后对发酵产物加入5％木糖醇调配。
38.实施例4。一种无糖南瓜发酵乳杆菌gzsc-1饮料的生产工艺，工艺流程是将原料南瓜去皮切块，经蒸煮、打浆、酶解、调节ph至6.5、装罐、灭菌、冷却、接种、发酵、均质、封装和灭菌后，得成品。其中发酵工艺是37.5℃、发酵时间35h、发酵乳杆菌gzsc-1 接种量5.2％，发酵后对发酵产物加入5.5％木糖醇调配。
39.实施例5。一种无糖南瓜发酵乳杆菌gzsc-1饮料的生产工艺，工艺流程是将原料南瓜去皮切块，经蒸煮、打浆、酶解、调节ph至6.5、装罐、灭菌、冷却、接种、发酵、均质、封装和灭菌后，得成品。其中发酵工艺是38℃、发酵时间34h、发酵乳杆菌gzsc-1 接种量5.5％，发酵后对发酵产物加入6％木糖醇调配。
40.为研究本发明，发明人做了大量实验和分析，部分实验记录如下：
41.实验例1
42.1材料与方法
43.1.1材料与试剂
44.1.1.1试验原料
45.新鲜本地(贵阳)蜜本南瓜、发酵乳杆菌gzsc-1、纤维素酶、果胶酶、柠檬酸、碳酸氢
钠、木糖醇。
46.1.1.2试验培养基及试剂
47.msr肉汤培养基、平板计数琼脂培养基、马铃薯-葡萄糖琼脂培养基、结晶紫中性红胆盐琼脂培养基。
48.1.2仪器与设备
49.ph计：仪电科学仪器
50.榨汁机：上海云辉电器有限公司
51.恒温培养箱：上海博讯实业有限公司医疗设备厂
52.恒温水浴锅：上海博讯实业有限公司医疗设备厂
53.高压灭菌锅：江阴滨江医疗设备有限公司
54.电子天平：奥豪斯仪器(常州)有限公司
55.数字折射计：浙江托普云农科技股份有限公司
56.高压均质机：生物科技股份有限公司
57.离心机：上海安亭科学仪器厂。
58.1.3试验方法
59.1.3.1工艺流程
60.南瓜
→
去皮
→
切块
→
蒸煮
→
打浆
→
酶解
→
调节ph至6.5
→
装罐
→
灭菌
→
冷却
→
接种
→
发酵
→
均质
→
封装
→
灭菌
→
成品
61.单因素试验
62.根据预试验结果，在发酵温度为37℃、菌种接种量为4％、发酵时间为36h的工艺基础上对发酵温度、发酵时间、接种量设定五个合理的因素水平进行单因素实验，发酵温度设置为25℃、29℃、33℃、37℃、41℃，接种量设置为2％、3％、4％、5％、6％，发酵时间设置为32h、34h、36h、38h、40h进行发酵，通过对发酵后饮料的ph值和感官得分进行分析来评定各因素对饮料品质的影响。
63.1.3.3正交试验
64.以根据单因素试验结果，挑选出各因素较优的三个水平，采用l9(33)进行正交试验，根据发酵结果的好坏，找出最优发酵工艺条件，正交因素水平表2.1如下。
65.表1南瓜乳酸菌发酵试验因素水平表
[0066][0067]
1.3.4感官评定
[0068]
感官评分为色泽、香气、滋味和组织状态4个指标评分之和，评分制为100分制，4个指标各25分，整个感官评价需10位及以上的品评员进行品评，统计好评价结果并进行数据分析，评分标准如表2所示：
[0069]
表2南瓜汁评分表
[0070][0071]
1.3.5检测指标
[0072]
(1)ph：测定采用phs-3c型ph计测定；
[0073]
(2)可溶性固形物：使用数字折射计测定；
[0074]
(3)总酸：参照gb/t 12456-2008《食品中总酸的测定》检测(以乳酸计)；
[0075]
(4)总糖：按照gb/t 10782-2006规定执行，采用直接滴定法；
[0076]
(5)菌落总数的测定采用稀释倒平板法，具体原理及步骤参gb4789.2-2016《食品微生物检验菌落总数计数》中乳酸菌菌落总数的测定方法；
[0077]
(6)霉菌的测定根据gb 4789.15-2016《食品微生物检验霉菌和酵母计数》对其霉菌进行检测；
[0078]
(7)大肠杆菌的测定根据gb/t 4789.3-2016《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》对样品中大肠杆菌进行检测；
[0079]
(8)矿物质元素及其含量：按照gb5009.268-2016《食品中多元素的测定》采用电感耦合等离子体质谱仪(icp-ms)进行检测，仪器工作条件如表2.3：
[0080]
表3矿物质检测仪器工作表
[0081]
参数名称参数参数名称参数射频功率1550w雾化器同心雾化器等离子体流量14l/min雾化器流速0.999l/min载气流量0.80l/min蠕动泵流速40l/min辅助气流量0.40l/min样品提升速率0.3r/s氦气流量4ml/min采样深度5mm雾化室温度2.7℃积分时间0.02s扫描次数20次重复次数3次
[0082] 1.3.6数据处理
[0083]
数据统计与分析、图表的制作使用microsoft-excel 2010，采用直接分析法。
[0084]
2结果与分析
[0085]
2.1单因素实验结果与分析
[0086]
2.1.1发酵温度对ph值和感官评价的影响
[0087]
发酵温度对南瓜发酵饮料的ph值和感官评价的影响如图1所示。
[0088]
由图1可知，在接种量和发酵时间不变时，在25℃～37℃的发酵范围内，南瓜浆中乳酸菌的产酸量随着发酵温度的升高而增加，ph值逐步下降。37℃～41℃范围内乳酸菌的产酸量随着发酵温度的升高减少，ph值急速上升，感官评价得分在25℃～33℃范围内稳定上升，33℃～37℃范围内保持不变，37℃～41℃范围内迅速下降。在33℃和37℃下发酵的南瓜饮料的感官评价最好，均得分为84分，由此推出，在接种量为4％、发酵时间为36h的条件下，发酵乳杆菌gzsc-1较适宜的发酵温度为33℃和37℃。
[0089]
2.1.2发酵时间对ph值和感官评价的影响
[0090]
发酵时间对南瓜发酵饮料的ph值和感官评价的影响如图2所示。
[0091]
由图2可知，在保持发酵温度为和接种量为不变时，在32h～40h的发酵时间范围内，南瓜浆中乳酸的含量随着发酵时间的增加而增加，ph值逐步减小，在发酵时间32h～34h 之间的ph值下降速度稍快于36h～40h之间，而感官评价得分则在32h～36h的发酵时间范围内随着时间的增加而升高，在36h～40h的发酵范围内逐步下降，在发酵时间为36h 时达到口感最优，感官评价得分最高，为84分。
[0092]
2.1.3接种量对ph值和感官评价的影响
[0093]
接种量对南瓜发酵饮料的ph值和感官评价的影响如图3所示。
[0094]
如图3所示，发酵温度37℃、发酵时长为36h时，在2％～6％的接种量范围内，南瓜饮料中的乳酸菌产酸量随着菌种接种量的增加而增多，ph值随接种量的增加而逐步下降，感官评价得分在接种量为2％～5％的范围内呈现上升趋势，在5％～6％范围内呈下降趋势，接种量为5％时的南瓜发酵饮料的感官评价最好，得分为83分。在发酵温度37℃、发酵时长36h的条件下，南瓜发酵饮品的菌种接种量在5％较为适宜。
[0095]
2.2正交试验
[0096]
南瓜乳酸菌饮料发酵正交试验结果与分析见表4。
[0097]
表4发酵型南瓜饮品发酵条件的正交试验结果与分析
[0098][0099][0100]
由表4中的正交试验分析结果可知，三个因素的极差值大小排序为：ra＞rb＞rc，即3个因素对南瓜发酵饮料感官评价结果的影响程度排序为：发酵温度＞发酵时间＞接种
量，由表4中r值可知，abc三个因素的r值均大于空白列d的r值，则说明abc三个因素均对发酵有显著影响。由表4中k值大小可知，a列k3＞k2＞k1，b列k2＞k3＞k1， c列k2＞k3＞k1，可确定最优发酵工艺组合为a3b2c2，即发酵温度37℃、发酵时间36h、乳酸菌接种量5％为南瓜乳酸菌饮料的最优发酵工艺条件。
[0101]
2.3指标测定
[0102]
2.3.1理化指标
[0103]
采用木糖醇对最优发酵工艺条件下发酵的南瓜饮品进行调配，调配数据如表5。以感官得分挑选出木糖醇的最优配比量，最终以木糖醇配比量6％时感官最佳，感官得分为9.5 分，南瓜饮料酸甜可口，乳酸回香浓郁，感官评分以10分制。
[0104]
表5木糖醇配比量
[0105]
木糖醇添加量感官得分/分2％7
±
0.673％8
±
0.474％8.5
±
0.335％9
±
0.246％9.5
±
0.337％9
±
0.24
[0106]
在最优发酵工艺条件37℃、36h、5％时制作的南瓜饮品的部分理化指标如表6所示。其可溶性固形物为2.3
±
0.1％，ph值为3.87
±
0.01，总糖含量为0.091
±
0.0636g/100g，总酸含量为6.291
±
0.0566g/kg，酸度适宜，感官得分为92
±
1.054分。
[0107]
表6最优发酵条件下的南瓜饮品的理化指标
[0108][0109][0110]
对最优发酵工艺条件下发酵的南瓜饮品的矿物质元素及其含量进行检测，对样品进行预处理后采用gb5009.268-2016《食品中多元素的测定》中的icp-ms进行检测，检测结果如表7所示。矿物质的含量从高至低依次为k、na、ca、mg、fe、mn、zn、al、cu、 cr、ni、se，其中常量元素有k、na、ca、mg，必需微量元素有fe、mn、zn、cu、cr、 ni、se，al为非必需微量元素。南瓜是典型的高钾低钠食品，根据国家标准gb 14880 和gb 2760可知：钾含量大于强化钾饮料0.05g/kg～0.2g/kg；钙含量小于饮液中钙的最大使用量0.6g/kg～0.8g/kg，镁含量小于饮液的最大使用量140mg/kg～280mg/kg；铁含量小于饮料的最大使用量10ppm～20ppm，锰含量小于饮液的最大使用量0.15ppm～ 0.32ppm，锌小于饮液的最大使用量5ppm～10ppm；铜含量小于饮液的最大使用量1～ 1.25ppm；硒含量小于饮液的最大使用量50ppb～200ppb，重金属铬含量也小于国家标准 gb 2762-2005《食品中污染物限量》规定中蔬菜、水果、薯类中的铬含量≤0.5ppm。
[0111]
表7发酵南瓜饮品的矿物质含量
[0112][0113]
2.3.2微生物指标
[0114]
对发酵完成后的样品进行封装和巴氏杀菌，按照食品安全国家标准《食品中微生物学检验》的gb4789.2-2016、gb4789.15-2016、gb4789.3-2016分别对成品中的菌落总数、霉菌计数和大肠菌群计数进行检测，检测结果如表8、表9、表10所示。
[0115]
表8菌落总数测定
[0116][0117][0118]
表9霉菌计数
[0119][0120]
表10大肠杆菌计数
[0121][0122]
根据表8、表9、表10所示，在成品中均没有检出杂菌、霉菌、大肠杆菌，说明产品安全性高，未受到霉菌、大肠杆菌等致病菌的污染。
[0123]
3试验结论与前景展望
[0124]
3.1试验结论
[0125]
本研究对发酵型南瓜饮品进行开发研究，利用发酵乳杆菌gzsc-1对南瓜浆进行发酵，优化了乳酸菌发酵工艺，研制出了一款健康、营养、美味、低糖的南瓜乳酸菌饮料。南瓜浆制备时南瓜与水的比例为1:2，最优发酵工艺条件为发酵温度37℃、发酵时间36h、乳酸杆菌接种量5％，在上述条件下对发酵完成产品加木糖醇调配最优比例为6％，南瓜乳酸菌饮料酸甜可口，香气浓郁。南瓜发酵饮料的可溶性固形物占比为2.3
±
0.1％、 ph值为3.87
±
0.01、总酸含量为6.291
±
0.0566g/kg、总糖含量为0.091
±ꢀ
0.0636g/100g，总糖含量满足无糖产品总糖含量低于0.5g/100g的条件，感官得分为 92
±
1.054分，是一款无糖南瓜乳酸菌饮料，适合中老年各类人群食用，糖尿病患者也可食用。除此之外，南瓜发酵饮料中还含有丰富的k、na、ca、mg，是典型的高钾低钠产品。
[0126]
3.2前景展望
[0127]
目前，我国南瓜产品开发的种类包括南瓜粉、南瓜汁及多种南瓜饮料、南瓜晶、南瓜酱、南瓜饼、南瓜脯、南瓜糊、速冻南瓜块、南瓜挂面、南瓜粉丝和南瓜添加剂等。但南瓜饮料的品种不多，且生产规模较小、产量较低,远不能满足市场的需求和人们对营养健康食品的追求，无糖南瓜乳酸菌饮料不仅具有乳酸菌发酵的独特风味，还具有南瓜的营养价值，具有良好的市场前景。
[0128]
4物料衡算
[0129]
按照年产1000吨发酵型南瓜饮品计算：
[0130]
预处理损失以1％计
[0131]
均质损失：以0.1％计
[0132]
杀菌损失：以1％计
[0133]
接种发酵剂：发酵剂为南瓜浆的5％计
[0134]
南瓜浆：南瓜与水比率为1:2
[0135]
配料:加木糖醇量以南瓜浆的6％
[0136]
总管道损失率：以0.1％计
[0137]
罐装损失率：以0.05％计
[0138]
包装以250g/瓶，12瓶/箱，包装瓶损坏率按照1％计
[0139]
一年工作250天，每8h，每小时的工作量为500kg。因此，以500kg/h作物料衡算：
[0140]
取罐装损失率为0.05％
[0141]
则罐装前的物料量为500
÷
(1-0.05％)＝500.25kg/h
[0142]
取总管道损失率为0.1％
[0143]
则搅拌前的物料量为500.25
÷
(1-0.1％)＝500.75kg/h
[0144]
添加发酵剂为乳含量的5％
[0145]
则冷却前物料为500.75
÷
(1 5％)＝476.90kg/h
[0146]
杀菌损失率为1％
[0147]
则杀菌前物料量为476.90
÷
(1-1％)＝481.72kg/h
[0148]
均质损失率为0.1％
[0149]
则均质前物料量为481.72
÷
(1-0.1％)＝482.20kg/h
[0150]
木糖醇添加量为6％
[0151]
则添加配料前的物料量为482.20
÷
(1 6％)＝454.91kg/h
[0152]
按南瓜与水比率为1:2，其中南瓜为151.64kg/h，水303.27kg/h
[0153]
由以上计算得：
[0154]
预处理前的南瓜量为151.64
÷
(1-1％)＝153.17kg/h
[0155]
需水：303.27
×8×
250＝606.54吨；
[0156]
包装南瓜发酵饮料的包装瓶按照1％的损坏率计算得到：
[0157]
pet食品级透明塑料瓶：1000/0.00025＝4000000个
[0158]
4000000/(1-1％)＝4040405个
[0159]
包装纸箱按5％损失计：4000000/12＝333334 333334/(1-5％)＝350878个
[0160]
木糖醇需要量：1000
×
6％＝60吨
[0161]
直投式发酵剂：1000
×
5％＝50吨
[0162]
实验例2。本发明提供的抗氧化发酵乳杆菌：发酵乳杆菌gzsc-1。
[0163]
1抗氧化发酵乳杆菌的保藏和培养
[0164]
抗氧化发酵乳杆菌的菌种分离自贵州省贵阳市清镇市站街镇布依族村民自制的发酵酸菜。
[0165]
(1)菌种保藏：接种固体mrs培养基试管斜面，检查菌数在1
×
107cfu/ml后，试管上部添加甘油，封口，于-20℃条件下保藏3～6个月。菌种可制成冻干粉于1～8℃条件下保藏1～5年。
[0166]
(2)菌种活化：无菌条件下接种一环乳酸菌至mrs肉汤培养基中，置于37℃条件下培养24～48h。
[0167]
2不同种乳酸菌的菌悬液及其胞外分泌物的抗氧化能力对比
[0168]
1、无菌条件下接种一环副干酪乳杆菌sr10-1乳酸菌至mrs肉汤培养基中，置于37℃无菌培养箱培养48h，离心收集菌体与上清液，上清液为sr10-1胞外分泌物；用0.85％的生理盐水调整菌液浓度为109cfu/ml，即为sr10-1菌悬液。
[0169]
2、无菌条件下接种一环干酪乳杆菌h1乳酸菌至mrs肉汤培养基中，置于37℃无菌培养箱培养24h，离心收集菌体与上清液，上清液为h1胞外分泌物；用0.85％的生理盐水调整菌液浓度为109cfu/ml，即为h1菌悬液。
[0170]
3、无菌条件下接种一环gzsc-1乳酸菌至mrs肉汤培养基中，置于37℃无菌培养箱培养60h，离心收集菌体与上清液，上清液为gzsc-1胞外分泌物；用0.85％的生理盐水调整菌液浓度为109cfu/ml，即为gzsc-1菌悬液。
[0171]
分析sr10-1胞外分泌物、sr10-1菌悬液、h1胞外分泌物、h1菌悬液、gzsc-1胞外分泌物和gzsc-1菌悬液得表1-表3的数据。
[0172]
表1-不同乳酸菌对dpph自由基清除率的测定
[0173]
[0174][0175]
表2-不同乳酸菌对abts自由基清除率的测定
[0176]
样品名称abts自由基清除率(％)vc当量(mg
·
ml-1
)sr10-1菌悬液34.000.064sr10-1胞外分泌物68.650.118h1菌悬液35.800.066h1胞外分泌物39.230.072gzsc-1菌悬液11.660.029gzsc-1胞外分泌物50.000.089
[0177]
表3-不同乳酸菌对羟自由基清除率的测定
[0178]
样品名称羟基自由基清除率(％)vc当量(mg
·
ml-1
)sr10-1菌悬液98.960.545sr10-1胞外分泌物98.290.499h1菌悬液98.000.497h1胞外分泌物67.740.308gzsc-1菌悬液80.270.386gzsc-1胞外分泌物70.210.323
[0179]
以vc当量表示3株乳酸菌菌悬液与胞外分泌物的抗氧化能力，vc当量值越高，抗氧化能力越强。由表1可知，发酵乳杆菌gzsc-1的胞外分泌物对dpph自由基的清除率最高，达95.45％，显著高于干酪乳杆菌h1和副干酪乳杆菌sr10-1；此外，发酵乳杆菌gzsc-1 的胞外分泌物对abts自由基清除率也较高，说明发酵乳杆菌gzsc-1具有较高的抗氧化特性，特别是其培养物或发酵产物具有较高的抗氧化性。
[0180]
3、3种乳酸菌菌悬液与胞外分泌物的体外降血糖能力比较
[0181]
分析上述的sr10-1胞外分泌物、sr10-1菌悬液、h1胞外分泌物、h1菌悬液、gzsc-1 胞外分泌物和gzsc-1菌悬液得表4的数据。
[0182]
表4-不同乳酸菌对降血糖水平测定
[0183]
样品名称α-糖苷酶抑制率(％)阿卡波糖当量(mg/ml-1
)sr10-1菌悬液97.89
±
1.11a2.45
×
10-5
sr10-1胞外分泌物94.07
±
1.56a2.3
×
10-5
h1菌悬液68.77
±
1.34c1.42
×
10-5
h1胞外分泌物94.52
±
2.51a2.37
×
10-5
gzsc-1菌悬液98.27
±
4.55d2.96
×
10-5
gzsc-1胞外分泌物88.96
±
0.67b2.16
×
10-5
[0184]
以阿卡波糖当量表示3株乳酸菌菌悬液与胞外分泌物的抑制α-糖苷酶抑制率能力，阿卡波糖当量值越高，抗氧化能力越强。由表4可知：在体外实验中，发酵乳杆菌gzsc-1 菌悬液的阿卡波糖当量值最高，说明其抗氧化能力较高。另外，从α-糖苷酶抑制率来看， gzsc-1菌悬液亦具有较好的降血糖效果。
[0185]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
[0186]
[0187]