一种快速提取高纯度质粒dna的方法
技术领域
1.本发明属于核酸提取纯化技术领域，尤其是涉及一种快速提取高纯度质粒dna的方法。
背景技术：
2.质粒是存在于细菌染色体外的能独立复制并稳定遗传的环状双链dna分子，质粒dna是基因工程的常用载体，可以携带外源基因进入细菌、动物细胞或植物体内进行扩增与表达。质粒dna提取的效率及质量对后续实验(酶切、pcr扩增等)的成功与否有着直接的关系，因此快速高效地从细菌细胞中提取和传话质粒具有重要的意义。
3.碱裂解法是一种应用最为广泛的现有制备质粒dna的方法，碱变形抽提质粒dna是基于染色体dna与质粒dna的变形与复性的差异而达到分离目的。在ph值高达12.6的碱性条件下，染色体dna的氢键断裂，双螺旋结构解开而变形。质粒dna的大部分氢键也断裂，但是超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以ph4.8的naac/kac高盐缓冲液去调节其ph值至中性时，变性的质粒dna又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体dna不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体dna与不稳定的大分子rna、蛋白质
‑
sds复合物等一起沉淀下来而被除去。
4.但是现有的碱裂解法存在以下不足：
5.1、实验过程中杂蛋白和rna去除不干净，使得最终提取出来的质粒dna纯度不高。
6.2、提取的dna含量低。
7.3、在实验过程中使用到苯酚/氯仿/异戊醇等有害试剂，不利于人员健康。
技术实现要素：
8.本发明要解决的问题是提供一种快速提取高纯度质粒dna的方法，该方法提取的质粒dna的含量高、纯度高，且在制备过程中没有使用有害试剂，安全无隐患，不会伤害人员健康。
9.为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种快速提取高纯度质粒dna的方法，包括以下步骤：
10.1)细菌的培养：挑选单一的菌落在液体培养基中进行扩大培养，之后吸取培养后的菌液无菌封装在两个离心管中，离心，吸干上清液；
11.2)细菌的裂解：向离心管中加入溶液i，充分悬浮细菌沉淀；之后加入溶液ii，缓慢翻转数次，使其充分混匀；之后加入溶液iii，缓慢翻转数次，至形成白色聚合物；
12.3)质粒dna的分离：将步骤2)中得到的溶液在离心后取上清液放置在收集管内的离心柱中；
13.4)质粒dna的沉淀：离心后弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱；
14.向离心柱内加入清洗液a，离心后弃掉滤液；
15.之后向离心柱内加入清洗液b，离心后弃掉滤液并重复该步骤4次；
16.将离心柱放入无菌工作台的无菌ep管内，加入预热后的te缓冲液，静置1min；
17.离心后，去掉离心柱，无菌ep管内即得到目的dna，放入
‑
20℃保存或者常温干燥保存；
18.其中，所述的离心柱为硅膜吸附柱，所述清洗液a为5m异硫氰酸胍、20mm tris
‑
cl与浓度为37.5％乙醇的混合液，其ph为6.0。
19.一种快速提取高纯度质粒dna的方法，包括以下步骤：
20.1)细菌的培养：挑选单一的菌落在液体培养基中进行扩大培养，在35℃
‑
40℃下培养12
‑
16小时，吸取培养后的菌液3.0ml无菌封装在两个1.5ml的离心管中，4℃下10000rpm
‑
12000rpm离心2min，吸干上清液；
21.2)细菌的裂解：向每个离心管中加入150μl溶液i，充分悬浮细菌沉淀；之后加入200μl溶液ii，缓慢翻转数次，使其充分混匀，裂解3
‑
5min；之后加入250μl溶液iii，缓慢翻转数次且温和振荡10s，至形成白色聚合物，室温放置10min；
22.3)质粒dna的分离：将步骤2)中得到的溶液在4℃下10000rpm
‑
12000rpm离心15min，之后取上清液放置在收集管内的离心柱中；
23.4)质粒dna的沉淀：10000rpm
‑
12000rpm离心1min，弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱；
24.向离心柱内加入400μl清洗液a，10000rpm
‑
12000rpm离心30s，弃掉滤液；
25.之后向离心柱内加入580μl清洗液b，10000rpm
‑
12000rpm离心30s，弃掉滤液并重复该步骤4次；
26.将离心柱放入无菌工作台的1.5ml的无菌ep管内，加入预热后的te缓冲液60
‑
100μl，静置1min；
27.10000rpm
‑
12000rpm离心1min，去掉离心柱，无菌ep管内即得到目的dna，放入
‑
20℃保存或者常温干燥保存。
28.进一步地，溶液i为25mm tris
‑
cl与10mm edta高压灭菌后加入rnasea 2.5mg/ml得到，其ph为8.0。
29.进一步地，溶液ii为0.2m naoh与1％sds。
30.进一步地，溶液iii为5m盐酸胍与4m醋酸钾，其ph为4.8。
31.进一步地，清洗液b为浓度为60％
‑
80％的乙醇。
32.进一步地，te缓冲液为10mm tris
·
hcl，ph8.0和1mm edta，ph8.0。
33.本发明具有的优点和积极效果是：
34.1、本发明的质粒dna的提取方法，提取的质粒dna的纯度高，且在提取过程中不使用有害试剂，可以保证实验安全，另外，在该方法中的收集管内使用硅膜吸附可以吸附裂解后的dna，便于将后期的杂蛋白和rna除去，且保证不会有多余的dna损失。
35.2、本发明的方法中，清洗液a为5m异硫氰酸胍、20mm tris
‑
cl与浓度为37.5％乙醇的混合液，在进行清洗时，可以将多余的杂蛋白进行溶解，使得杂蛋白和rna去除干净，从而提高质粒dna的纯度和含量。
具体实施方式
36.下面结合具体实施方式对本发明作详细说明。
37.实施例1：
38.一种快速提取高纯度质粒dna的方法，包括以下步骤：
39.1)细菌的培养：挑选单一的菌落在液体培养基中进行扩大培养，在35℃下培养12小时，吸取培养后的菌液3.0ml无菌封装在两个1.5ml的离心管中，4℃下10000rpm离心2min，吸干上清液；
40.2)细菌的裂解：向每个离心管中加入150μl溶液i，充分悬浮细菌沉淀；之后加入200μl溶液ii，缓慢翻转数次，使其充分混匀，裂解3min；之后加入250μl溶液iii，缓慢翻转数次且温和振荡10s，至形成白色聚合物，室温放置10min；
41.3)质粒dna的分离：将步骤2)中得到的溶液在4℃下10000rpm离心15min，之后取上清液放置在收集管内的离心柱中；离心柱为硅膜吸附柱；
42.4)质粒dna的沉淀：10000rpm离心1min，弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱；
43.向离心柱内加入400μl清洗液a，10000rpm离心30s，弃掉滤液；
44.之后向离心柱内加入580μl清洗液b，10000rpm离心30s，弃掉滤液并重复该步骤4次；
45.将离心柱放入无菌工作台的1.5ml的无菌ep管内，加入预热后的te缓冲液60，静置1min；
46.10000rpm离心1min，去掉离心柱，无菌ep管内即得到目的dna，放入
‑
20℃保存。
47.其中，在本实施例中，溶液i为25mm tris
‑
cl与10mm edta高压灭菌后加入rnasea 2.5mg/ml得到，其ph为8.0；溶液ii为0.2m naoh与1％sds；溶液iii为5m盐酸胍与4m醋酸钾，其ph为4.8；清洗液a为5m异硫氰酸胍、20mm tris
‑
cl与浓度为37.5％乙醇的混合液，其ph为6.0；清洗液b为浓度为60％的乙醇；te缓冲液为10mm tris
·
hcl，ph8.0和1mm edta，ph8.0。
48.采用本实施例的方法提取dna的含量为896μg/ml，a
260
/a
280
＝1.85。
49.实施例2：
50.一种快速提取高纯度质粒dna的方法，包括以下步骤：
51.1)细菌的培养：挑选单一的菌落在液体培养基中进行扩大培养，在40℃下培养16小时，吸取培养后的菌液3.0ml无菌封装在两个1.5ml的离心管中，4℃下12000rpm离心2min，吸干上清液；
52.2)细菌的裂解：向每个离心管中加入150μl溶液i，充分悬浮细菌沉淀；之后加入200μl溶液ii，缓慢翻转数次，使其充分混匀，裂解5min；之后加入250μl溶液iii，缓慢翻转数次且温和振荡10s，至形成白色聚合物，室温放置10min；
53.3)质粒dna的分离：将步骤2)中得到的溶液在4℃下12000rpm离心15min，之后取上清液放置在收集管内的离心柱中；离心柱为硅膜吸附柱；
54.4)质粒dna的沉淀：12000rpm离心1min，弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱；
55.向离心柱内加入400μl清洗液a，12000rpm离心30s，弃掉滤液；
56.之后向离心柱内加入580μl清洗液b，12000rpm离心30s，弃掉滤液并重复该步骤4次；
57.将离心柱放入无菌工作台的1.5ml的无菌ep管内，加入预热后的te缓冲液100μl，静置1min；
58.12000rpm离心1min，去掉离心柱，无菌ep管内即得到目的dna，放入
‑
20℃保存。
59.其中，在本实施例中，溶液i为25mm tris
‑
cl与10mm edta高压灭菌后加入rnasea 2.5mg/ml得到，其ph为8.0；溶液ii为0.2m naoh与1％sds；溶液iii为5m盐酸胍与4m醋酸钾，其ph为4.8；清洗液a为5m异硫氰酸胍、20mm tris
‑
cl与浓度为37.5％乙醇的混合液，其ph为6.0；清洗液b为浓度为80％的乙醇；te缓冲液为10mm tris
·
hcl，ph8.0和1mm edta，ph8.0。
60.采用本实施例的方法提取dna的含量为842μg/ml，a
260
/a
280
＝1.83。
61.实施例3：
62.一种快速提取高纯度质粒dna的方法，包括以下步骤：
63.1)细菌的培养：挑选单一的菌落在液体培养基中进行扩大培养，在38℃下培养14小时，吸取培养后的菌液3.0ml无菌封装在两个1.5ml的离心管中，4℃下11000rpm离心2min，吸干上清液；
64.2)细菌的裂解：向每个离心管中加入150μl溶液i，充分悬浮细菌沉淀；之后加入200μl溶液ii，缓慢翻转数次，使其充分混匀，裂解4min；之后加入250μl溶液iii，缓慢翻转数次且温和振荡10s，至形成白色聚合物，室温放置10min；
65.3)质粒dna的分离：将步骤2)中得到的溶液在4℃下11000rpm离心15min，之后取上清液放置在收集管内的离心柱中；离心柱为硅膜吸附柱；
66.4)质粒dna的沉淀：11000rpm离心1min，弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱；
67.向离心柱内加入400μl清洗液a，11000rpm离心30s，弃掉滤液；
68.之后向离心柱内加入580μl清洗液b，11000rpm离心30s，弃掉滤液并重复该步骤4次；
69.将离心柱放入无菌工作台的1.5ml的无菌ep管内，加入预热后的te缓冲液80μl，静置1min；
70.11000rpm离心1min，去掉离心柱，无菌ep管内即得到目的dna，常温干燥保存。
71.其中，在本实施例中，溶液i为25mm tris
‑
cl与10mm edta高压灭菌后加入rnasea 2.5mg/ml得到，其ph为8.0；溶液ii为0.2m naoh与1％sds；溶液iii为5m盐酸胍与4m醋酸钾，其ph为4.8；清洗液a为5m异硫氰酸胍、20mm tris
‑
cl与浓度为37.5％乙醇的混合液，其ph为6.0；清洗液b为浓度为70％的乙醇；te缓冲液为10mm tris
·
hcl，ph8.0和1mm edta，ph8.0。
72.采用本实施例的方法提取dna的含量为909μg/ml，a
260
/a
280
＝1.85。
73.本发明的质粒dna的提取方法，提取的质粒dna的纯度高，且在提取过程中不使用有害试剂，可以保证实验安全，另外，在该方法中的收集管内使用硅膜吸附可以吸附裂解后的dna，便于将后期的杂蛋白和rna除去，且保证不会有多余的dna损失。制得的质粒dna的a
260
/a
280＞
1.80，满足常规分子生物学实验的需求。
74.以上对本发明的三个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。
技术领域
1.本发明属于核酸提取纯化技术领域，尤其是涉及一种快速提取高纯度质粒dna的方法。
背景技术：
2.质粒是存在于细菌染色体外的能独立复制并稳定遗传的环状双链dna分子，质粒dna是基因工程的常用载体，可以携带外源基因进入细菌、动物细胞或植物体内进行扩增与表达。质粒dna提取的效率及质量对后续实验(酶切、pcr扩增等)的成功与否有着直接的关系，因此快速高效地从细菌细胞中提取和传话质粒具有重要的意义。
3.碱裂解法是一种应用最为广泛的现有制备质粒dna的方法，碱变形抽提质粒dna是基于染色体dna与质粒dna的变形与复性的差异而达到分离目的。在ph值高达12.6的碱性条件下，染色体dna的氢键断裂，双螺旋结构解开而变形。质粒dna的大部分氢键也断裂，但是超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以ph4.8的naac/kac高盐缓冲液去调节其ph值至中性时，变性的质粒dna又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体dna不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体dna与不稳定的大分子rna、蛋白质
‑
sds复合物等一起沉淀下来而被除去。
4.但是现有的碱裂解法存在以下不足：
5.1、实验过程中杂蛋白和rna去除不干净，使得最终提取出来的质粒dna纯度不高。
6.2、提取的dna含量低。
7.3、在实验过程中使用到苯酚/氯仿/异戊醇等有害试剂，不利于人员健康。
技术实现要素：
8.本发明要解决的问题是提供一种快速提取高纯度质粒dna的方法，该方法提取的质粒dna的含量高、纯度高，且在制备过程中没有使用有害试剂，安全无隐患，不会伤害人员健康。
9.为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种快速提取高纯度质粒dna的方法，包括以下步骤：
10.1)细菌的培养：挑选单一的菌落在液体培养基中进行扩大培养，之后吸取培养后的菌液无菌封装在两个离心管中，离心，吸干上清液；
11.2)细菌的裂解：向离心管中加入溶液i，充分悬浮细菌沉淀；之后加入溶液ii，缓慢翻转数次，使其充分混匀；之后加入溶液iii，缓慢翻转数次，至形成白色聚合物；
12.3)质粒dna的分离：将步骤2)中得到的溶液在离心后取上清液放置在收集管内的离心柱中；
13.4)质粒dna的沉淀：离心后弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱；
14.向离心柱内加入清洗液a，离心后弃掉滤液；
15.之后向离心柱内加入清洗液b，离心后弃掉滤液并重复该步骤4次；
16.将离心柱放入无菌工作台的无菌ep管内，加入预热后的te缓冲液，静置1min；
17.离心后，去掉离心柱，无菌ep管内即得到目的dna，放入
‑
20℃保存或者常温干燥保存；
18.其中，所述的离心柱为硅膜吸附柱，所述清洗液a为5m异硫氰酸胍、20mm tris
‑
cl与浓度为37.5％乙醇的混合液，其ph为6.0。
19.一种快速提取高纯度质粒dna的方法，包括以下步骤：
20.1)细菌的培养：挑选单一的菌落在液体培养基中进行扩大培养，在35℃
‑
40℃下培养12
‑
16小时，吸取培养后的菌液3.0ml无菌封装在两个1.5ml的离心管中，4℃下10000rpm
‑
12000rpm离心2min，吸干上清液；
21.2)细菌的裂解：向每个离心管中加入150μl溶液i，充分悬浮细菌沉淀；之后加入200μl溶液ii，缓慢翻转数次，使其充分混匀，裂解3
‑
5min；之后加入250μl溶液iii，缓慢翻转数次且温和振荡10s，至形成白色聚合物，室温放置10min；
22.3)质粒dna的分离：将步骤2)中得到的溶液在4℃下10000rpm
‑
12000rpm离心15min，之后取上清液放置在收集管内的离心柱中；
23.4)质粒dna的沉淀：10000rpm
‑
12000rpm离心1min，弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱；
24.向离心柱内加入400μl清洗液a，10000rpm
‑
12000rpm离心30s，弃掉滤液；
25.之后向离心柱内加入580μl清洗液b，10000rpm
‑
12000rpm离心30s，弃掉滤液并重复该步骤4次；
26.将离心柱放入无菌工作台的1.5ml的无菌ep管内，加入预热后的te缓冲液60
‑
100μl，静置1min；
27.10000rpm
‑
12000rpm离心1min，去掉离心柱，无菌ep管内即得到目的dna，放入
‑
20℃保存或者常温干燥保存。
28.进一步地，溶液i为25mm tris
‑
cl与10mm edta高压灭菌后加入rnasea 2.5mg/ml得到，其ph为8.0。
29.进一步地，溶液ii为0.2m naoh与1％sds。
30.进一步地，溶液iii为5m盐酸胍与4m醋酸钾，其ph为4.8。
31.进一步地，清洗液b为浓度为60％
‑
80％的乙醇。
32.进一步地，te缓冲液为10mm tris
·
hcl，ph8.0和1mm edta，ph8.0。
33.本发明具有的优点和积极效果是：
34.1、本发明的质粒dna的提取方法，提取的质粒dna的纯度高，且在提取过程中不使用有害试剂，可以保证实验安全，另外，在该方法中的收集管内使用硅膜吸附可以吸附裂解后的dna，便于将后期的杂蛋白和rna除去，且保证不会有多余的dna损失。
35.2、本发明的方法中，清洗液a为5m异硫氰酸胍、20mm tris
‑
cl与浓度为37.5％乙醇的混合液，在进行清洗时，可以将多余的杂蛋白进行溶解，使得杂蛋白和rna去除干净，从而提高质粒dna的纯度和含量。
具体实施方式
36.下面结合具体实施方式对本发明作详细说明。
37.实施例1：
38.一种快速提取高纯度质粒dna的方法，包括以下步骤：
39.1)细菌的培养：挑选单一的菌落在液体培养基中进行扩大培养，在35℃下培养12小时，吸取培养后的菌液3.0ml无菌封装在两个1.5ml的离心管中，4℃下10000rpm离心2min，吸干上清液；
40.2)细菌的裂解：向每个离心管中加入150μl溶液i，充分悬浮细菌沉淀；之后加入200μl溶液ii，缓慢翻转数次，使其充分混匀，裂解3min；之后加入250μl溶液iii，缓慢翻转数次且温和振荡10s，至形成白色聚合物，室温放置10min；
41.3)质粒dna的分离：将步骤2)中得到的溶液在4℃下10000rpm离心15min，之后取上清液放置在收集管内的离心柱中；离心柱为硅膜吸附柱；
42.4)质粒dna的沉淀：10000rpm离心1min，弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱；
43.向离心柱内加入400μl清洗液a，10000rpm离心30s，弃掉滤液；
44.之后向离心柱内加入580μl清洗液b，10000rpm离心30s，弃掉滤液并重复该步骤4次；
45.将离心柱放入无菌工作台的1.5ml的无菌ep管内，加入预热后的te缓冲液60，静置1min；
46.10000rpm离心1min，去掉离心柱，无菌ep管内即得到目的dna，放入
‑
20℃保存。
47.其中，在本实施例中，溶液i为25mm tris
‑
cl与10mm edta高压灭菌后加入rnasea 2.5mg/ml得到，其ph为8.0；溶液ii为0.2m naoh与1％sds；溶液iii为5m盐酸胍与4m醋酸钾，其ph为4.8；清洗液a为5m异硫氰酸胍、20mm tris
‑
cl与浓度为37.5％乙醇的混合液，其ph为6.0；清洗液b为浓度为60％的乙醇；te缓冲液为10mm tris
·
hcl，ph8.0和1mm edta，ph8.0。
48.采用本实施例的方法提取dna的含量为896μg/ml，a
260
/a
280
＝1.85。
49.实施例2：
50.一种快速提取高纯度质粒dna的方法，包括以下步骤：
51.1)细菌的培养：挑选单一的菌落在液体培养基中进行扩大培养，在40℃下培养16小时，吸取培养后的菌液3.0ml无菌封装在两个1.5ml的离心管中，4℃下12000rpm离心2min，吸干上清液；
52.2)细菌的裂解：向每个离心管中加入150μl溶液i，充分悬浮细菌沉淀；之后加入200μl溶液ii，缓慢翻转数次，使其充分混匀，裂解5min；之后加入250μl溶液iii，缓慢翻转数次且温和振荡10s，至形成白色聚合物，室温放置10min；
53.3)质粒dna的分离：将步骤2)中得到的溶液在4℃下12000rpm离心15min，之后取上清液放置在收集管内的离心柱中；离心柱为硅膜吸附柱；
54.4)质粒dna的沉淀：12000rpm离心1min，弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱；
55.向离心柱内加入400μl清洗液a，12000rpm离心30s，弃掉滤液；
56.之后向离心柱内加入580μl清洗液b，12000rpm离心30s，弃掉滤液并重复该步骤4次；
57.将离心柱放入无菌工作台的1.5ml的无菌ep管内，加入预热后的te缓冲液100μl，静置1min；
58.12000rpm离心1min，去掉离心柱，无菌ep管内即得到目的dna，放入
‑
20℃保存。
59.其中，在本实施例中，溶液i为25mm tris
‑
cl与10mm edta高压灭菌后加入rnasea 2.5mg/ml得到，其ph为8.0；溶液ii为0.2m naoh与1％sds；溶液iii为5m盐酸胍与4m醋酸钾，其ph为4.8；清洗液a为5m异硫氰酸胍、20mm tris
‑
cl与浓度为37.5％乙醇的混合液，其ph为6.0；清洗液b为浓度为80％的乙醇；te缓冲液为10mm tris
·
hcl，ph8.0和1mm edta，ph8.0。
60.采用本实施例的方法提取dna的含量为842μg/ml，a
260
/a
280
＝1.83。
61.实施例3：
62.一种快速提取高纯度质粒dna的方法，包括以下步骤：
63.1)细菌的培养：挑选单一的菌落在液体培养基中进行扩大培养，在38℃下培养14小时，吸取培养后的菌液3.0ml无菌封装在两个1.5ml的离心管中，4℃下11000rpm离心2min，吸干上清液；
64.2)细菌的裂解：向每个离心管中加入150μl溶液i，充分悬浮细菌沉淀；之后加入200μl溶液ii，缓慢翻转数次，使其充分混匀，裂解4min；之后加入250μl溶液iii，缓慢翻转数次且温和振荡10s，至形成白色聚合物，室温放置10min；
65.3)质粒dna的分离：将步骤2)中得到的溶液在4℃下11000rpm离心15min，之后取上清液放置在收集管内的离心柱中；离心柱为硅膜吸附柱；
66.4)质粒dna的沉淀：11000rpm离心1min，弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱；
67.向离心柱内加入400μl清洗液a，11000rpm离心30s，弃掉滤液；
68.之后向离心柱内加入580μl清洗液b，11000rpm离心30s，弃掉滤液并重复该步骤4次；
69.将离心柱放入无菌工作台的1.5ml的无菌ep管内，加入预热后的te缓冲液80μl，静置1min；
70.11000rpm离心1min，去掉离心柱，无菌ep管内即得到目的dna，常温干燥保存。
71.其中，在本实施例中，溶液i为25mm tris
‑
cl与10mm edta高压灭菌后加入rnasea 2.5mg/ml得到，其ph为8.0；溶液ii为0.2m naoh与1％sds；溶液iii为5m盐酸胍与4m醋酸钾，其ph为4.8；清洗液a为5m异硫氰酸胍、20mm tris
‑
cl与浓度为37.5％乙醇的混合液，其ph为6.0；清洗液b为浓度为70％的乙醇；te缓冲液为10mm tris
·
hcl，ph8.0和1mm edta，ph8.0。
72.采用本实施例的方法提取dna的含量为909μg/ml，a
260
/a
280
＝1.85。
73.本发明的质粒dna的提取方法，提取的质粒dna的纯度高，且在提取过程中不使用有害试剂，可以保证实验安全，另外，在该方法中的收集管内使用硅膜吸附可以吸附裂解后的dna，便于将后期的杂蛋白和rna除去，且保证不会有多余的dna损失。制得的质粒dna的a
260
/a
280＞
1.80，满足常规分子生物学实验的需求。
74.以上对本发明的三个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。
再多了解一些
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