专利名称：作为hiv逆转录酶抑制剂的苯并噁嗪酮的制作方法
本案涉及Merck申请18429、18429IA和18727。本案是1992年8月7日申请的Merck Case18793，U.S.S.N.07/926，607的部分连续申请。
称为人类免疫缺乏病毒(HIV)的逆病毒(retovirus)是复杂疾病的病因学试剂，它包括免疫系统的逐步破坏(获得性免疫缺乏综合症;AIDS)以及中枢神经和神经末梢系统的退变。此病毒以前已知为LAV，HTLV-Ⅲ或ARV。逆病毒复制通常的特征是通过病毒编码的逆转录酶将RNA染色体组逆转录生成HIV序列的DNA复制物，它是病毒复制中所需要的步骤。已知一些化合物是逆转录酶抑制剂，在治疗AIDS和类似疾病方面是有效试剂，例如，叠氮胸苷(azidothymidine)或AZT。
HIV核苷酸序列显示在一个开放的阅读框架中存在着pol基因[Ratner，L.等，Nature，313，277(1985)]。氨基酸序列的同系现象证明pol序列可以将逆转录酶、核酸内切酶以及HIV蛋白酶编码[Toh，H.等，EMBO J.4，1267(1985);Power，M.D.等，Science，231，1567(1986);Pearl，L.H.等，Nature 329，351(1987)]。
本申请人验证了本发明化合物是HIV逆转录酶抑制剂。本发明化合物特别的优点是它们对阻碍HIV逆转录酶方面的抑制作用。
公开了如下定义的式Ⅰ化合物。这些化合物用作抑制HIV逆转录酶(和其抗变性(its resistant varieties))，预防HIV感染，治疗HIV感染以及治疗AIDS和/或ARC，可用化合物，药学上可接受的盐(如适宜)，药物组合物成分，或者与其它抗病毒剂，抗感染剂，免疫调节剂，抗菌剂或疫苗结合使用。治疗AIDS的方法;预防HIV感染的方法，以及治疗HIV感染的方法也在此公开。
本发明涉及式Ⅰ化合物，其结合物，或其药学上可接受的盐，HIV逆转录酶和其抗变性的抑制，预防或治疗HIV感染以及治疗由此引起的获得性免疫缺乏综合症(AIDS)。式Ⅰ化合物定义如下
其中X是卤素;
X1是三卤代甲基，或五卤代乙基;
Z是O;
R为(a)未取代的或被A取代的C1-6烷基，A为卤素，C3-6环烷基，CN，羟基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷氨基-C1-2烷基，杂环，或芳硫基;
(b)C2-4链烯基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;
(c)C2-5炔基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;或(d)C3-4环烷基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;
或其药学上可接受的盐。
本发明亦包括用于抑制HIV逆转录的药物组合物，包括有效量的式Ⅱ化合物，
和药学上可接受的载体，其中X为卤素;
X1为三卤代甲基，五卤代乙基;C2-5烷基;C2-5炔基;
C3-5环烷基;或芳基;
Z为O或S;
R为(a)C1-8烷基，未取代或被A取代，A为卤素，C3-6环烷基，CN，羟基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷基氨基-C1-2烷基，杂环，或芳硫基;
(b)C2-4链烯基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;
(c)C2-5炔基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;或(d)C3-4环烷基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;
或其药学上可接受的盐。
优选的化合物包括下面表Ⅰ中化合物37.2，4，2，5和24，其次序以优选下降排列。这些化合物具有下列结构化合物37.2
(-)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，它是最优选的;
化合物4
(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮;
化合物2
( /-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮;
化合物5
( /-)4-(1-氯-1，1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮;
化合物24
( /-)4-(2-[二甲氨基甲基]乙炔基)-4-三氟甲基-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮;或其药学上可接受的盐。
本发明化合物与具体说明于下面表Ⅰ和Ⅱ表Ⅰ
本发明化合物可具有不对称中心，除有特别说明，否则为外消旋体，外消旋混合物或为单一的非对映异构体，或对映体，所有的异构体形式都包括在本发明中，符号( /-)包括( )的光学异构体或(-)光学异构体或其混合物。
当在任何结构或在式Ⅰ中的任何可变数(如R)的存在超过一次时，每种情况下它的定义独立于每个其它情况。此外，只有当取代基和/或可变数(量)的组合构成的稳定化合物时，这种组合才是允许的。
除有说明，这里使用的“烷基”包括具有特定数目碳原子的支链和直链和脂肪烃基;“烯基”包括至少含一个碳-碳双键的直链或支链烷基;“炔基”包括至少含一个碳-碳三键的支链和直链烷基。“卤素”或“卤”用在这里意指氟、氯、溴和碘。
除有说明，这里的“芳基”意指苯基、萘基、四氢萘基、联苯基、菲基、蒽基或苊基(acenaphthyl)。
除有说明，这里使用的术语“杂环”或“杂环基”代表稳定的5-至7-元单环或稳定的8-到11-元双环杂环，它们可以是饱和的，或部分不饱和或不饱和，由碳原子和一到四个选自N，O和S的杂原子组成，其中氮和硫杂原子可任意被氧化，以及上述定义的任何杂环稠合到苯环上形成任何双环基。杂环可以接在任何杂原子或碳原子上以形成稳定结构。这样的杂环单元的例子包括哌啶基、哌嗪基、2-氧哌嗪基、2-氧哌啶基、2-氧吡咯烷基、2-氧吖庚因基、吖庚因基，吡咯基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑基，吡唑烷基，咪唑基，咪唑啉基、咪唑烷基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，哒嗪基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑基、异噁唑烷基、吗啉基、噻唑基、噻唑烷基、异噻唑基、奎宁环基、异噻唑烷基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、噻二唑基、苯并吡喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、四氢呋喃基、苯并呋喃基、四氢吡喃基、噻吩基、苯并噻吩基、硫代吗啉基、氧化硫代吗啉基(硫代吗啉基亚砜)、二氧硫代吗啉基(硫代吗啉基砜)，以及噁二唑基。
本发明化合物可用下列方法合成。
在本发明的苯并噁嗪合成中，典型的一般方法包括以在苯核上环化作为最后步骤。见路线Ⅰ。以新戊酰氯首先对对氯苯胺上的氨基进行保护，得到2，其它较不优选的氨基保护基包括叔丁氧基羰基，乙酸基或异戊酰(isovaleroyl)基。然后以大约2当量的烷基锂(优选为正丁基锂)与2反应。在本金属化步骤中，无其它金属有机化合物是合适的。接着，与CF3COOEt的反应骤冷停止得到3。
接着，通过向3的酮中加入格氏试剂合成叔甲醇4。此格氏试剂必须是二价阳离子的盐如Mg 或Zn 。单价阳离子如Li 或Na 是不适宜的。适宜的溶剂包括(但不限制)THF或乙醚。约在0℃到约室温宽的温度范围可以允许。
合环生成本发明化合物5在缩合剂存在下完成，这些缩合剂如1，1′-羰基二咪唑，光气，碳酸二甲酯，碳酸二苯酯或碳酸二(对硝基苯酯)。环化可以用这些化合物中的任一种，也可以用许多其它试剂完成。
路线ⅠA中提供了路线Ⅰ的具体例子。它以图表示L-741，211的合成，为化合物37.2的外消旋体，进一步说明于实施例6中。
路线ⅠA
路线Ⅱ
路线Ⅱ提供了一种衍生苯并噁嗪核4-位乙炔取代基的方法。作为说明，化合物6金属化，然后加入锌盐。在Heck反应中，使用与CuⅠ复合的四(三苯基膦)钯(0)作为催化剂，得到7。
路线Ⅲ
路线Ⅲ说明了4-乙炔基被含氮杂环取代。Mannich反应包括甲醛与杂环如吡咯烷的缩合反应。接着在CuⅠ催化剂存在下，在端基碳上进行取代。
路线Ⅳ
路线Ⅳ说明了式Ⅰ或式Ⅱ化合物的光学异构体的拆分。在此例子中，(-)莰烷酸作为拆分试剂。许多其它的拆分试剂也是适宜的，包括O-甲基扁桃酰氯或Mosher氏试剂。显然，技术人员知道这些异构体怎么分离。
路线ⅣA特别适用于L-743，726分离中L-741，211的拆分，见路线ⅣA，和实施例6。
路线ⅣA
根据如C.E.Hudson等，J.Am.Chem.Soc.94，1158(1972)和W.Schoberth等，Synthesis，703(1972)公开的方法，通过路线Ⅴ制备环丙基乙炔。
本发明化合物用于抗病毒化合物的制剂和进行筛选评估。例如，本发明化合物用作分离酶突变种，对更有效的抗病毒化合物，它们是极好的筛选工具。此外，本发明化合物用来建立或确定其它抗病毒剂对HIV逆转录酶的连接位点，例如通过竞争性抑制剂，这样本发明化合物为此目的可作为商售产品。
本发明化合物用作抑制HIV逆转录酶，预防或治疗由人体免疫缺乏病毒(HIV)引起的感染以及治疗由此产生的病理上的症状如AIDS。治疗AIDS或预防或治疗由HIV引起的感染的定义包括，但不限制，治疗很宽范围的HIV感染征兆AIDS，ARC(与复合体有关的AIDS)，征兆和无征兆，对HIV实际显现或潜在显现。例如，本发明化合物用于治疗认为是由过去对HIV暴露所致而由HIV引起的感染，例如通过输血，体液交换，咬伤，意外针刺，或外科手术中患者血液暴露所致。
本发明化合物特殊的优点是其对它抗病毒剂产生抗性的HIV逆转录酶具有强有力的抑制作用，这些其它抗病毒剂例如L-697，661，它是3-([(4，7-二氯-1，3-苯并噁唑-2-基)甲基]-氨基)-5-乙基-6-甲基-2(1H)-酮;或L-696，229，它是3-[2-(1，3-苯并噁唑-2-基)乙基]-5-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮;或AZT。
为了这些目的，本发明化合物可以用含通常的无毒的药物上可接受的载体，辅助和赋形剂的剂量单位制剂形式口服，肠胃外(包括皮下注射、静脉、肌肉、胸骨内注射或灌输技术)，喷雾吸入，或直肠路途给药。
因而，根据本发明，它进而提供治疗HIV感染和AIDS的方法和药物组合物。治疗包括给患者施以所需的含药物学载体和治疗有效量的本发明化合物的治疗药物组合物。
这些药物组合物可以是口服给药的悬浮剂或片剂;由鼻给药的喷雾剂;无菌注射剂，如无菌注射水溶液或油性悬浮液或栓剂。
当以悬浮剂口服给药时，这些组合物可根据药物制剂领域已知技术制得，它们可含有使其增量的微晶纤维素，作悬浮剂的藻酸或藻酸钠，作增粘剂的甲基纤维素，以及本领域已知的增甜剂/调味剂。作为快速释放的片剂，这些组合物中可含有微晶纤维素，磷酸二钙，淀粉，硬脂酸镁和乳糖和/或其它本领域已知的赋形剂，粘合剂，补充剂，崩解剂，稀释剂和润滑剂。
如果通过鼻部气溶胶或吸入给药，这些组合物可根据药物制剂领域已知的技术制得，其可被制成盐水溶液，其中使用苄醇或本领域已知的其它适宜的保存剂，吸收促进剂以提高其生物利用率，碳氟化合物，和/或其它的加溶剂或分散剂。
注射溶液或悬浮剂可根据本领域已知技术制备，其中使用了适宜的无毒性，肠胃外可接受的稀释剂或溶剂，如甘露糖醇，1，3-丁二醇，水，Ringer氏溶液或等渗的氯化钠溶液，或适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂，如无菌的无刺激的，固定油类，包括合成的甘油(单)酯或甘油二酯，以及脂肪酸，包括油酸。
当以栓剂形式进行直肠给药时，这些组合物可通过将药物用适宜的无刺激性赋形剂如可可脂，合成的甘油酯或聚乙二醇混合制备，它们在常温下是固体，但在直肠空腔内是液化和/或溶解释放出药物。
本发明化合物可分离的剂量范围在1到100mg/千克体重的量对人体口服给药。一个优选的剂量范围是口服可分离的剂量0.1到10mg/Kg体重。另一优选的剂量是口服分剂量为0.1～20mg/Kg体重。如果和核苷类似物结合治疗，在口服给药可分离的剂量中本发明化合物优选的口服给药剂量范围在0.1到20mg/Kg体重，而在口服分剂量中核苷类似物的剂量在50mg到5g/Kg体重。但是可以理解，对任一患者具体的剂量水平和用剂频率是可以变化的，它依赖于许多因素，包括所使用具体化合物的活性，代谢稳定和使用化合物的作用时间，年龄，体重，通常健康状况，性别，饮食，给药方式和时间，排泄速度，药物结合，特定的病症的程度，以及接受治疗的主体。
本发明也指明HIV逆转录酶抑制化合物与一种或多种用于治疗AIDS试剂的结合。例如，本发明化合物不论在暴露前和/或暴露后与下表中的那些有效量的AIDS抗病毒剂，免疫调节剂，抗传染剂，或疫苗结合给药是很有效的。
表抗病毒剂药物名称 制造厂家 备注AL-721 Ethigen ARC,PGL(Los Angeles,CA) HIV阳性,AIDS重组人类干扰素 Triton Biosciences AIDS,卡波济氏干扰素β (Almeda,CA) 肉瘤,ARCAcemannan Carrington Labs ARC(也见免疫调(Irving,TX) 节剂)
药物名称 制造厂家 备注Cytovene Syntex 威胁视力CMVGanciclovir (Palo Alto,CA) 外围CMV视网膜炎d4T Bristol-Myers AIDS,ARC双去氢去氧胸苷 (New York,NY)ddI Bristol-Myers AIDS,ARC双去氧肌苷 (New York,NY)EL10 Elan Corp,PLC HIV感染(也见免(Gainesville,GA) 疫调节剂)膦酰甲酸三钠 Astra Pharm. CMV视网膜炎,HIV感Products,Inc. 染,其它CMV感染(Westborough,MA)双去氧胞苷 Hoffman-La Roche AIDS,ARCddC (Nutley,NJ)Novapren Novaferon Labs,Inc HIV抑制剂(Akron,OH)Diapren,Inc.
(Roseville,MN,marketer)肽T Peninsula Labs AIDS辛肽系列 (Belmont,CA)
药物名称 制造厂家 备注Zidovudine; Burroughs Wellcome AIDS,adv,ARCAZT (Rsch.Triangle Park 小儿AIDS,NC) 卡波济氏肉瘤,无征兆HIV感染,不严重HIV疾病,有关神经病,结合精神治疗,安莎霉素 Adria Laboratories ARCLM427 (Dublin,OH)Erbamont(Stamford,CT)糖肝酯 Ueno Fine Chem AIDS,ARC,HIVInd.Ltd. 阳性无征兆(Osaka,Japan)三唑核苷 Viratek/ICN 无征兆HIV阳性Ribavirin (Costa Mesa,CA) LAS,ARCα干扰素诱导 Burronghs Wellcome 卡波济氏肉瘤,剂 (Rsch.Triangle HIV结合Park,NC) w/Retrovir无环鸟苷 Burroughs Wellcome AIDS,ARC,无征兆的HIV阳性,与AZT结合药物名称 制造厂家 备注中和免疫一吸收 Advanced Biotherapy AIDS,ARC柱中pH不稳定 Conceptsα误差干扰素 Rockville,MD)诱导剂的抗体L-697,661 Merck(Rahway,NJ) AIDS,ARC,无征兆HIV阳性,也与AZT结合L-696,229 Merck AIDS,ARC,无征兆HIV(Rahway,NJ) 阳性,也与AZT结合L-735,524 Merck(Rahway,NJ) AIDS,ARC,无征兆HIV阳性,也与AZT结合免疫调节剂药物名称 制造厂家 备注AS-101 Wyeth-Ayerst Labs AIDS(Philadelphia,PA)Bropirimine Upjohn 早期AIDS(Kalamazoo,MI)Acemannan Carrington Labs,Inc AIDS,ARC(Irving TX) (也见抗病毒剂)CL246,738 American Cyanamid AIDS,卡波济氏肉瘤(Pearl River,NY)Lederle Labs(Wayne,NJ)
药物名称 制造厂家 备注EL10 Elan Corp,PLC HIV感染(Gainesville,GA) (也见抗病毒剂)γ-干扰素诱导剂 Genentech ARC,与w/TNF结合(S,San Francisco,CA) (肿瘤坏死因子)粒细胞的巨噬细 Genetics Institute AIDS胞菌落促进因子 (Cambridge,MA)Sandoz(East Hanover,NJ)粒细胞的巨噬细 Hoeschst-Roussel AIDS胞菌落促进因子 (Somerville,NJ)Immunex(Seattle,WA)粒细胞的巨噬细 Schering-Plough AIDS胞菌落促进因子 (Madison,NJ) AIDS与w/AZT结合HIV Core Rorer 血清反应阳性HIVParticle (Ft.Washington,PA)免疫刺激剂IL-2 Hoffman-La Roche AIDS,ARC,HIV,白细胞介素-2 (Nutley,NJ) 与w/AZT结合Immunex免疫球蛋白 Cutter Biological 儿科AIDS,与静脉内(人) (Berkeley,CA) w/AZT结合IMREG-1 Imreg AIDS,卡波济氏肉瘤(New Orleans,LA) ARC,PGL
药物名称 制造厂家 备注IMREG-2 Imreg AIDS,卡波济氏肉瘤(New Orleans,LA) ARC,PGLImuthiol Diethyl Merieux Institute AIDS,ARCDithio Carbamate (Miami,FL)(二硫代氨基甲酸酯)α-2 Schering Plough 卡波济氏肉瘤干扰素 (Madison,NJ) W/AZT:AIDS蛋氨酸脑 TNI Pharmaceutical AIDS,ARC菲肽 (Chicago,IL)MTP-PE Ciba-Geigy Corp 卡波济氏肉瘤胞壁酰-三肽 (Summit,NJ)粒细胞 Amgen AIDS,与w/AZT菌落刺激因子 (Thousand Oaks,CA) 结合rCD4 Genentech AIDS,ARC重组可溶人体CD4 (S,San Francisco,CA)重组 Biogen AIDS,ARC可溶人体CD4 (Cambridge,MA)干扰素 Hoffman-La Roche 卡波济氏肉瘤α-2a (Nutley,NJ) AIDS,ARC,与w/AZT结合SK&F106528 Smith,Kline&French HIV感染可溶T4 Laboratories(Philadelphia,PA)
药物名称 制造厂家 备注胸腺五肽 Immunobiology HIV感染(Thymopentin) Research Institute(Annandale,NJ)肿瘤坏死因子; Genentech ARC与w/γ干扰素结TNF (S.San Francisco,CA) 合抗感染剂药物名称 制造厂家 备注氯林可霉素与伯 Upjohn PCP氨喹 (Kalamazoo,MI)Fluconazolec Pfizer 隐球菌病(New York NY) 脑膜炎,念珠菌病锭剂 Squibb Corp 预防口腔念珠菌病制霉菌素锭剂 (Princeton,NJ)Ornidyl Merrell Dow PCPEflornithine (Cincinnati,OH)戊烷脒 Lypho Med PCP治疗羟乙基磺酸盐 (Rosemont,IL)(IM&IV)Piritrexim Burroughs Wellcome PCP治疗(Rsch.TrianglePark,NC)
药物名称 制造厂家 备注戊烷脒 Fisons Corporation PCP预防羟乙基磺酸盐 (Bedford,MA)(吸入)螺旋霉素 Rhone-Poulenc 隐球菌腹泻Pharmaceuticals(Princeton,NJ)Intraconazole- Janssen Pharm. 组织胞浆菌病R51211 (Piscataway,NJ) 隐球菌脑膜炎Trimetrexate Warner-Lambert PCP其它药物名称 制造厂家 备注重组人体 Ortho Pharm.Corp. 与AZT治疗有关的红细胞生成素 (Raritan,NJ) 严重贫血乙酸甲地孕酮酯 Bristol-Myers 治疗与w/AIDS有关(New York,NY) 的厌食总的肠内 Norwich Eaton 与AIDS有关的腹泻和营养物 Pharmaceuticals 吸收障碍(Norwich,NY)当然，本发明化合物与AIDS抗病毒素，免疫调制剂，抗感染或疫苗的结合范围不限于上表中所列，而原则上包括与用于治疗AIDS的任何药物组合物结合。例如，式Ⅰ或式Ⅱ化合物可以与具有已知抗HIV逆转录酶生物活性的核苷类似物适合地结合给药。适合的核苷类似物通常是链终止剂并包括AZT，ddC，ddI，D4T，HEPT和3′-氟-2′，3′-二脱氧胸苷。
AZT用下述方法合成J.P.Horwitz等，J.Org.Chem.29，2076(1964);R.P.Glinski等，J.Org.Chem.38，4299(1973);C.K.Chu等，Tetrahedron Letters 29，5349(1988)。在US4724232中描述了AZT用作治疗AIDS的治疗药物。
化合物ddC用下述合成J.P.Horwitz等，J.Org.Chem.32，817(1967);R.Marumoto，Chem.Pharm.Bull.22，128(1974);和T.S.Lin等，J Med.Chem.30，440(1987)。
D4T用Herdewijn，P.等的方法合成(J.Med.Chem.30，1270(1987))。
HEPT用下述方法合成Miyasaka，T.等J.Med.Chem.32，2507(1989);和A.Rosowsky，J.Med.Chem.24，1177(1981)。在EPO484071中也描述了ddC，ddI和AZT的合成。
用Herdewijn，P.等的方法(J.Med.Chem.30，1270(1987))合成化合物3′-氟-2′，3′-二脱氧胸苷。化合物L-735，524是N-(2(R)-羟基-1(S)-2，3-二氢化茚基)-2(R)-苯甲基-4-(S)-羟基-5-(1-(4-(3-吡啶甲基)-2(S)-N′-(叔丁基甲酰胺基)-哌嗪基)-戊酰胺，或其药学上可接受的盐。L-697，661或‘661'是3-([4，7-二氯-1，3-苯并噁唑-2-基)甲基]氨基)-5-乙基-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮;L-696，229是3-[2-(1，3-苯并噁唑-2-基)-乙基]-5-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮。在EP0484071和EP0462800中描述了L-697，661和L-696，229的合成，在此两者均列为参考文献。
优选的结合是L-743，726与或不与HIV蛋白酶抑制剂同时，间歇，或交替处理。在结合中的任何任意的第三个组分是HIV逆转录酶的核苷抑制剂，例如AZT，ddC或ddI。HIV蛋白酶的优选的抑制剂是L-735，524。其他优选的HIV逆转录酶的抑制剂包括L-697，661。这些结合在限制HIV的传布上可有协同效果。优选的结合包括下述(1)L-743，726与L-735，524和任意地任一L-697，661，AZT，ddI或ddC;(2)L-743，726和任一L-697，661，AZT，ddI或ddC。也包括这些结合的药学上可接受的盐。
实施例1( /-)4-(1，1，1-三氟甲基)-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物15)步骤AN-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙酰胺向装有顶部搅拌器的5升三颈圆底烧瓶中加入4-氯苯胺(127.57g，1mole)，1200ml CHCl3和1200ml饱和Na2CO3水溶液。将加液漏斗装在烧瓶上并注入2，2-二甲基丙酰氯(129ml，1.05mole)。1小时期间将此酰基氯滴加到剧烈搅拌的混合物中，将所得混合物于室温下再搅拌23小时。从混合物中分离出一些白色晶状产物。过滤收集这些晶体。将滤液倒入分液漏斗并分层。用水和盐水洗涤氯仿层。干燥(MgSO4)，过滤并真空除去溶剂，得到附加的产物，合并此两份产物并从沸腾的乙酸乙酯-己烷中重结晶，得到185.6g白色晶状固体N-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙酰胺。
步骤B1-(2-氨基-5-氯苯基)-2，2，2-三氟乙酮向装有顶部搅拌器，氩气入口管和500ml烘干的加液漏斗的干燥的3升三颈圆底烧瓶中加入N-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙酰胺(100g，472mmol)和干燥的THF(1l)。将此溶液在冰浴中冷至0℃并向加液漏斗中注入正丁基锂(387ml，2.5M己烷溶液，968mmol)。1小时期间将正丁基锂溶液缓慢滴加到酰胺溶液中，保持温度低于 5℃。将所得溶液于0℃冷1小时，在所述时间内形成橙色沉淀，向此混合物中1小时期间滴加入1，1，1-三氟乙酸乙酯(115ml，968mmol)。将所得清液再置30分钟。将反应混合物用5%HCl水溶液中止。将混合物用1l乙酸乙酯稀释并分层。用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，得到160黄色油。将此物质悬浮于1l 3N盐酸水溶液中并将此溶液加热回流24小时，用1l乙酸乙酯稀释冷却了的上述溶液并用浓NH4OH使混合物呈碱性。分离出两层，有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩，在1.5Kg硅胶上进行色谱分离，用15%在己烷中的乙酸乙酯作洗脱液。使经色谱分离的物质从沸腾的己烷中重结晶，得到57g(54%)纯1-(2-氨基-5-氯苯基)-2，2，2-三氟乙酮，为浅黄色结晶，
mp91-92℃.1H NMR(CDCl3)δ6.46(br s，2H)，6.69(d，1H，J＝9.2Hz)，7.32(dd，1H，J＝2.4，9.2Hz)，7.70(d，1H，J＝2.4Hz).
步骤C( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氯-5-己-2-醇向装有搅拌棒，氩气入口管，加液漏斗和回流冷凝器的300ml干燥三颈圆底烧瓶中加入镁(车屑，3.03g，125mmol)和干THF(75ml)。向良好搅拌的混合物中，于保持缓慢回流的速率下，加入4-溴-1-丁烯(12.0ml，118.21mmol)。加入完成后，将混合物放置30分钟，然后于冰浴中冷至0℃。在30分钟期间，向良好搅拌的溶液中滴加1-(2-氨基-5-氯苯基)-2，2，2-三氟乙酮(5.00g，22.36mmol)的THF(35ml)溶液。将冷浴放置至终了。然后将混合物于室温搅拌20小时，将反应物用乙酸乙酯和10%柠檬酸水溶液稀释。将混合物搅拌4小时。分离各层并用NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机相。干燥(MgSO4)，过滤，真空除去溶剂，在300g硅胶上进行色谱分离，用15%在己烷中的乙酸乙酯作洗脱液，得到4.80g黄色固体状的( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氟-5-己-2-醇。
步骤D( /-)4-(1，1，1-三氟甲基-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮向装有搅拌棒，氩气入口管和回流冷凝器的200ml圆底烧瓶中加入( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氟-5-己-2-醇(4.80g，17.16mmol)，1，1′-羰基二咪唑(13.91g，85.81mmol)和干燥的THF(75ml)。将混合物于60℃加热18小时。用乙酸乙酯稀释冷却了的反应混合物并用水(3×200ml)和盐水(250ml)洗涤。干燥(MgSO4)，过滤，真空除去溶剂，接着从沸腾的乙酸乙酯-己烷重结晶，得到3.22g( /-)4-(1，1，1-三氟甲基)-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，为白色晶状固体，m.p.165-166℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.99(m，1H)，2.09-2.40(m，3H)，5.00(d，1H，J＝1.4Hz)，5.03(dd，1H，J＝1.4，7.9)，5.78(m，1H)，6.85(d，1H，J＝8.6Hz)，7.21(brs，1H)，7.35(dd，1H，J＝2.2，8.6Hz)，9.63(brs，1H).
实施例2( /-)6-氯-4-乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物26)步骤A2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇向装有加液漏斗，氩气入口管，搅拌棒和数字温度计的500ml三颈圆底烧瓶内装入乙炔基溴化镁(0.5M在己烷中，268ml，134mmol)，然后冷却至-78℃。保持温度≤-55℃15分钟后，完成滴加在50ml THF中的1-(2-氨基-5-氯苯基)-2，2，2-三氟乙酮(6.0g，26.8mmol)溶液。在缓慢温热至室温后，将反应混合物搅拌16小时。通过滴加饱和的氯化铵水溶液(60ml)于-5℃中止此暗红色溶液，接着用10%柠檬酸，饱和碳酸氢钠，水和盐水洗涤乙酸乙酯萃取液，以硫酸钠干燥，过滤和蒸去溶剂后得到8.5g粗产物，用快速色谱纯化，使用15-20%乙酸乙酯∶己烷作洗脱液，得到纯2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇(5g浅褐色油，产率75%)。
步骤B( /-)6-氯-4-乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮用1，1′-羰基二咪唑(13.0g，80.0mmol)处理2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇的THF溶液(5.0g，20.0mmol在225ml THF中)并在油浴中于60℃加热17小时，真空除去THF，将残留物溶于乙酸乙酯，然后用10%柠檬酸，碳酸氢钠，水和盐水洗涤，接着用硫酸钠干燥。过滤并真空蒸发后分离出粗产物(3.6g)并从乙酸乙酯∶己烷中重结晶。分离出产物( /-)6-氯-4-乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮为白色针状固体(3.22g，产率58.4%)，m.p.226-227℃。1H-NMR(CDCl3 痕量DMSO)δ3.16(s，1H)，6.98(d，J＝3.3Hz，1H)，7.35(m，1H)，7.51(s，1H)，10.66(s，1H)。
实施例3( /-)6-氯-4-(1，1，1-三氟甲基)-4-[(3-(1-吡咯烷基)-1-丙炔基]-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物7)
将( /-)6-氯-4-乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(150mg，0.544mmol)，吡咯烷(52.2μl，0.626mmol)，仲甲醛(20.5mg，0.681mmol)，乙酸(31.1μl，0.544mmol)和氯化铜(Ⅰ)(20.5mg，0.207mmol在3.5ml二噁烷中)的二噁烷溶液在油浴中于50℃加热约2小时。将反应混合物入2N HCl中止，并用乙酸乙酯萃取，用固体碳酸钾中和水层并用乙酸乙酯萃取三次。用水和盐水洗涤全并的萃取液，用硫酸钠干燥，得到140ml粗产物。在硅胶上进行色谱法纯化并从乙酸乙酯∶己烷中重结晶，得到晶状( /-)6-氯-4-(1，1，1-三氟甲基)-4-[(3-(1-吡咯烷基)-1-丙炔基]-1，4-二氢-2H-苯并噁嗪-2-酮(89mg，46%产率)m.p.160-161℃(分解)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.85-1.89(m，4H)，2.68-2.71(m，4H)，3.67(s，1H)，6.88(d，J＝8.55Hz，1H)，7.40(dd，J＝2.19，8.54Hz，1H)，7.55(s，1H)，9.45(s，1H).
( /-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物2)将6-氯-4-乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(138mg，0.5mmol)的3ml干燥THF溶液于-78℃下搅拌。向此溶液中加入0.4ml(1.0mmol)正丁基锂(2.5M在己烷中)。于-78℃将阴离子冷10分钟，然后加入1ml ZnCl2(1M在乙醚中)。于-78℃将反应混合物搅拌15分钟，移去冰浴，于30分钟期间混合物缓慢温热至0℃。将反应混合物加入2-碘苄腈(149mg，0.65mmol)的2ml THF溶液中，接着加入四(三苯基膦)钯(O)(56mg，0.05mmol)，将反应物温热至室温并继续搅拌15小时。将反应混合物用10ml2N HCl中止，用2×200ml乙酸乙酯萃取，将合并的萃取液用水，盐水洗涤并用MgSO4干燥。除去溶剂，得到195mg油，在硅胶上进行快速色谱纯化(20%乙酸乙酯在己烷中)，得到60mg未反应的起始原料和35mg偶合产物。后者用乙醚研制，得到25mg( /-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮。m.p.245-246℃。FAB.MS M 1＝377m/e。
1H NMR(CDCl3)δ6.82-6.85(d，J＝8.5Hz，1H);7.40-7.44(dd，J＝2.1，8.5Hz，1H);7.56-7.79(m，5H);8.00(s，1H).
实施例4( /-)4-(1-氯-1，1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物5)步骤A1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2，2-二氟乙酮向装有磁搅拌棒，氩气入口管和100ml烘干的加液漏斗的烘干的300ml三颈圆底烧瓶中加入N-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙酰胺(10g，47.2mmol)和干燥的THF(100ml)。将此溶液在冰浴中冷至0℃并向加液漏斗中注入正丁基锂(38.7ml 2.5M在己烷中的溶液，96.8mmol)。1小时期间将正丁基锂溶液缓慢加到酰胺溶液中，保持温度低于 5℃。将所得溶液于0℃冷却1小时，在此时间形成橙色沉淀。在15分钟期间向此混合物中滴加1-氯-1，1-二氟乙酸乙酯(10.2ml，96.8mmol)，将所得清液再放30分钟，用5%HCl水溶液中止反应。用1l乙酸乙酯稀释混合物并分离各层。用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，得到160g黄色油。将此物质悬浮于200ml 3N HCl水溶液并将此溶液加热回流24小时。用500ml乙酸乙酯稀释剂冷却的溶液并用浓NH4OH使混合物呈碱性。分离各层并用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩，在350硅胶上进行色谱分离，用在15%己烷中的乙酸乙酯作洗脱液。色谱分离物从沸腾的己烷中重结晶，得到5.5g纯1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2，2-二氟乙酮，为亮黄色结晶，m.p.55-56℃。
1H NMR(CDCl3)δ6.43(brs，2H)，6.69(d，1H，J＝9.0Hz)，7.31(dd，1H，J＝2.4，9.0Hz)，7.80(d，1H，J＝2.4Hz).
步骤B( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1，1-二氟-3-丁炔-2-醇向装有搅拌棒，氩气入口管，回流冷凝器和隔膜的100ml烘干圆底三颈烧瓶中加入乙炔基苯(2.13g，20.83mmol)，干燥THF(50ml)和乙基溴化镁(6.94ml，3.0M乙醚溶液)。于室温下将此混合物放置2小时，然后用注射器加入1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2，2-二氟乙酮的THF(6ml)溶液(1.00g，4.17mmol)。于室温下将所得橙红色溶液搅拌21.5小时。通过加入1N HCl(50ml)中止反应，然后用乙酸乙酯稀释。用浓NH4OH使溶液呈碱性并分离各层。用水和盐水洗涤有机相。干燥(MgSO4)，过滤，真空除去溶剂，在硅胶上进行色谱分离，用20%在己烷中的乙酸乙酯作洗脱液，得到1.02g( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1，1-二氟-3-丁炔-2-醇，为灰白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ4.42(brs，2H)，5.10(brs，1H)，6.65(d，1H，J＝8.5Hz)，7.15(dd，1H，J＝2.4，8.5Hz)，7.38(m，3H)，7.55(m，2H)，7.70(d，J＝2.4Hz).
步骤C( /-)4-(1-氯-1，1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮向装有搅拌棒，回流冷凝器和氩气入口管的100ml圆底烧瓶中加入( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1，1-二氟-3-丁炔-2-醇(0.81g，2.37mmol)，干燥THF(25ml)，1，1′-羰基二咪唑(1.919g，11.84mmol)。将此溶液于60℃加热20小时。用乙酸乙酯稀释冷却的反应混合物并用0.5N HCl，水和盐水洗涤。干燥(MgSO4)，过滤并真空除去溶剂，得到890mg油。将此物质在80g硅胶上进行色谱分离，用20%在己烷中的乙酸乙酯作洗脱液。从沸腾的乙酸乙酯-己烷中重结晶色谱分离物，得到507mg，(58%)( /-)4-(1-氯-1，1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，为白色针状，m.p.154-155℃。
1H NMR(CDCl3)δ6.89(d，1H，J＝8.4Hz)，7.35-7.48(m，4H)，7.56(m，2H)，7.64(brs，1H)，9.19(brs，1H).
实施例5(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物4)步骤A2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇从4.83ml苯基乙炔(0.044ml)和17.2ml2.5N正丁基锂的己烷溶液(0.043mol)，于50ml THF中，于-78℃，制备苯基乙炔锂溶液，然后于5分钟期间用11.4g溴化镁醚合物(0.044mol)处理，将混合物温热至-20℃并于氩气下继续搅拌30分钟，然后将混合物冷至-60℃，并加入预先与等当量(2.8g，0.011mol)在25ml THF中的溴化镁醚合物络合的2.5g(0.011mol)1-(2-氨基-5-氯)-2，2，2-三氟甲基乙酮的溶液，将反应混合物于15℃搅拌1小时，然后冷至0℃并通过滴加30ml饱和氯化铵水溶液和30ml水的混合物进行处理。将混合物用2×100ml乙醚萃取，用盐水洗涤合并的有机相并用MgSO4干燥。除去干燥剂和溶剂，余下6g油，在硅胶上进行快速色谱分离，用20%在己烷中的乙酸乙酯洗脱，得到2.5g 2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇。1H-NMR(CDCl3)δ4.63(brs，3H)，6.69(d，J＝8.5Hz，1H)，7.15(d，J＝2Hz，1H)，7.17(d，J＝2Hz，1H)，7.35-7.44(m，3H)，7.53-7.56(m，2H)，7.66(d，J＝2Hz，1H).FAB MS M H＝326m/e.
步骤B(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物12)将2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇(2.0g，6.1mmol)和11.0g(12.0mmol)1，1′-羰基二咪唑在300ml干燥THF中的溶液在氩气氛下于55℃搅拌24小时，在旋转蒸发器上除去溶剂，将残余物在200ml乙醚和400ml水之间进行分配。分离开两层，再次用乙醚萃取水层，用2×200ml10%柠檬酸洗涤合并的乙醚萃取物，然后用盐水洗涤，在MgSO4上干燥。除去干燥剂和溶剂，得到油状粗标题化合物1.5g(70%)。用乙醚-己烷研制，得到875mg(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮为白色固体，于137℃部分熔化，147℃全部熔化。
1H-NMR(CDCl3)δ6.92(d，J＝8Hz，1H)，7.30-7.49(m，4H)，7.58-7.65(m，3H)，8.99(s，1H).
步骤C6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮搅拌下，于氩气氛下，冰浴中向含有(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(2.24g，6.37mmol)，4-二甲基氨基吡啶(0.10g，0.8mmol)，和(-)莰烷酰氯(2.07g，9.55mmol)的60ml干燥二氯甲烷溶液中加入三乙胺(2.22ml，15.9mmol)。移去冷浴，使反应物于室温下继续进行。当反应通过薄层色谱(SiO2，4%在CHCl3中的乙酸乙酯)检测完成时，用200ml CHCl3稀释溶液并两次用10%柠檬酸然后用盐水洗涤。在干燥(MgSO4)下于旋转蒸发器上除去溶剂，将泡沫状残余物进行快速色谱分离，用CHCl3洗脱。得到575mg油状6-氯-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮非对映体I，1H-NMR(CDCl3);δ0.85(s，3H)，1.08(s，3H)，1.22(s，3H)，1.73-1.85(m，1H)，1.92-2.08(m，1H)，2.50-2.67(m，2H)，7.30-7.79(m，8H)。接着得到1.52g混合物馏分(非对映体Ⅰ和Ⅱ)。继续洗脱得到680mg较慢移动的标题化合物非对映体(Ⅱ)，用乙醚/己烷混合物研制下得到白色针状块，mp177-178.5℃;1H-NMR(CDCl3)δ0.83(s，3H)，1.12(s，3H)，1.23(s，3H)，1.73-1.86(m，1H)，1.93-2.06(m，1H)，2.50-2.63(m，2H)，7.38-7.51(m，4H)，7.49-7.62(m，2H)，7.72(d，J＝9Hz，1H)，7.76(d，J＝2Hz，1H).
将从快速色谱法得到的1.52g异构体混合物溶于75ml乙醚，用50ml己烷稀释该溶液，然后用异构体Ⅱ的结晶接种。缓慢结晶得到另外385mg异构体Ⅱ，将其从乙醚/己烷中重结晶，通过HPLC分析证实得到＞96%非对映纯物质。
步骤D(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮于45℃，氩气氛下，将晶状6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，2-二氢-4(H)-3，1-苯并噁嗪-2-酮(53mg，0.10mmol)的非对映异构体(Ⅱ)溶于8ml12-丙醇中。向此溶液中加入0.27ml10%K2CO3水溶液。继续搅拌10分钟，在此期间全部原料耗尽(TLC，SiO2，4%在CHCl3中的乙酸乙酯)。真空浓缩该溶液，将残余物溶于乙醚中。用0.1N HCl和盐水洗涤后，干燥(MgSO4)乙醚溶液，过滤并真空蒸发得到油状固体，将其用SiO2色谱法纯化，用5%在己烷中的2-丙醇洗脱。从乙醚/己烷中得到白色针状晶体(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，m.p.178-179℃;[α]D20＝-92.5℃(CHCl3，C＝0.0012g ml-1);
1H-NMR(CDCl3)δ6.87(d，J＝8.5Hz，1H)，7.37-7.50(m，4H)，7.56-7.63(m，3H)，8.60(s，1H)。
步骤E( )6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物3)按照步骤D的方法，从步骤C的非晶状产物，非对映异构体Ⅰ制备( )6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮m.p.178-179℃;D20＝ 87.6°(CHCl3，C＝0.0050g ml-1);
1H-NMR(CDCl3)δ6.87(d，J＝8.5Hz，1H)，7.37-7.50(m，4H)，7.56-7.63(m，3H)，8.60(s，1H)。
实施例6(-)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-743726，化合物37.2)和( )6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-743725)步骤A2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-环丙基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇于1小时期间，向250ml THF中的23g环丙基乙炔(0.348mol)滴加116ml3.0M的溴化乙基镁乙醚溶液(0.348mol)制备环丙基乙炔溴化镁溶液。于0℃将此溶液保持1小时，然后于40℃3小时。向再冷至0℃的此溶液于5分钟期间分批添加15.56g固体1-(2-氨基-5-氯苯基)-2，2，2-三氟甲基乙酮(0.0696mol)。将反应混合物于0℃搅拌1.5小时。于0℃通过滴加700ml饱和氯化铵水溶液中止该反应。用2×400ml乙酸乙酯萃取混合物，用盐水洗涤合并的有机相并用MgSO4干燥。除去干燥剂和溶剂得到黄色固体。从沸腾的己烷(100ml最终体积)中重结晶此物质，得到14.67g 2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-环丙基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇。通过浓缩母液得到第二批产物(2.1g)。m.p.153-154℃。
1H-NMR(CDCl3)δ0.84(m，2H)，0.90(m，2H)，1.38(m，1H)，4.50(brs，3H)，6.69(d，J＝8.5Hz，1H)，7.13(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.55(d，J＝2.5Hz，1H).
步骤B(±)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-741，211)氩气氛下，于55℃，将2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-环丙基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇(15.00g，0.0518mol)和41.98g(0.259mol)1，1′-羰基二咪唑的250ml干燥THF溶液搅拌24小时，在旋转蒸发器上除去溶剂，残余物在500ml乙酸乙酯和400ml水间进行分配。分离两层，用乙酸乙酯再洗涤水相一次。用2×200ml2%HCl水溶液，饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤合并的乙酸乙酯萃取液。用MgSO4干燥，过滤，真空除去溶剂，得到16.42g固体标题化合物，从乙酸乙酯-己烷中重结晶，得到12.97g分析纯(±)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮白色结晶。m.p.178-180℃。1H-NMR(CDCl3)0.85(m，2H)，0.94(m，2H)，1.40(m，1H)，6.81(d，J＝8.5Hz，1H)，7.37(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.49(d，J＝2.5Hz，1H)，8.87(brs，1H).
步骤C6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮氩气氛下，于冰浴中，搅拌下向含(±)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(12.97g，0.041mol)，4-二甲基氨基吡啶(1.02g，0.0083mol)，和(-)莰烷酰氯(14.22g，0.06556mol)的350ml干燥二氯甲烷溶液中加入三乙胺(22.84ml，0.164mol)。移去冷浴，使反应于室温下进行。75分钟后，用薄层色谱法(SiO2，4%乙酸乙酯在CHCl3中)鉴定反应终点，将该溶液用500ml CHCl3稀释，然后用10%柠檬酸(2X)，水(1X)和盐水(1X)洗涤。用MgSO4干燥，过滤，真空除去溶剂，留下无色泡沫。将此物质用200ml沸腾己烷研制。冷至室温，沉淀出期间的非对映异构体莰烷酰亚胺。在多孔玻璃滤器上收集此固体，用很小量的冷己烷洗涤并真空干燥，得到7.79g 6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮白色结晶。m.p.164-165℃，HPLC纯度99.2%。
＠254nm。1H-NMR(CDCl3)δ0.77(s，3H)，0.86-0.96(m，4H)，1.08(s，3H)，1.19(s，3H)，1.44(m，1H)，1.76(m，1H)，1.95(m，1H)，2.51(m，2H)，7.42(dd，J＝2.4，9.0Hz，1H)，7.63(m，2H).
步骤D(-)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-743，726，化合物37.2)于60℃，氩气氛下，将6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，2-二氢-4(H)-3，1-苯并噁嗪-2-酮(7.50g，0.01512mol)溶于150ml正丁醇中，向此溶液中加入10ml 1H HCl。于60℃将此溶液保持72小时，用NaHCO3水溶液中和混合物，真空除去正丁醇。将残余物溶于150ml THF并于室温下用50ml 2N LiOH处理3小时。用乙酸乙酯稀释此混合物并用二份水和一份盐水洗涤。干燥(MgSO4)，过滤并真空除去溶剂，得到白色固体。将此物质于热己烷中重结晶，得到3.43g(-)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-3，1-苯并噁嗪-2-酮白色结晶。
m.p.131-132℃;[α]D20＝-84.7°(CHCl3，c＝0.005g mL-1);
1H-NMR(CDCl3)δ0.85(m，2H)，0.94(m，2H)，1.40(m，1H)，6.81(d，J＝8.5Hz，1H)，7.37(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.49(d，J＝2.5Hz，1H)，8.87(brs，1H).
步骤E( )6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-743，725)将上述步骤C所得母液用柱色谱法在硅胶上纯化，用10%在己烷中的乙酸乙酯作洗脱液。纯的，不期望的非对映异构体(无色泡沫)按步骤D水解。得到白色晶体对映体苯并噁嗪酮，( )6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮。m.p.131-132℃;D20＝ 84.4°(CHCl3，c＝0.005g mL-1);1H-NMR(CDCl3)δ0.85(m，2H)，0.94(m，2H)，1.40(m，1H)，6.81(d，J＝8.5Hz，1H)，7.37(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.49(d，J＝2.5Hz，1H)，8.87(brs，1H).
逆转录酶测定本测定方法是通过于dGTP Km值和多r(c).寡d(G)12-18下，使HIV逆转录酶(HIV RTR)(或其他RT)重组入酸可沉淀的cDNA来测量氚化了的脱氧鸟苷单磷酸酯的结合。本发明的抑制剂抑制此结合。
试验在下述试剂中进行55mM Tris(pH8.2)-30mM KCl-30mM MgCl2-1mM二硫苏糖醇-20μg rCdG12-18(Pharmacia)/ml-8mM[3H]dG TP(New England Nuclear)-0.01%Triton X-100-50mM甘醇-双(β-氨基-乙基醚)-N，N，N′，N′-四乙酸(EGTA)-1mg牛血清蛋白/ml。于37℃培养60分钟后，使用半自动细胞采集器将酸可沉淀物质收集在玻璃纤维滤器上。稀释含RT的细菌细胞提取液至测定的线性范围内，在抑制剂存在和不存在下测定活性。在E.Coli中产生的纯化了的HIV-1RT杂二聚物(heterodimer)也用作对比。结果测定为给出50%抑制(IC50wt)的抑制剂浓度，nmole/l。
对double突变种试验(dm)，将A17 RT用于试验。如Nunberg，J.H.等在J.Virol，65，4887(1991)中所述，A17RT对多种氨基吡啶酮是抗性的。结果被测定为IC50dm，nmole/l。
细胞传布试验按照Nunberg，J.H.等在J.Virol.65，4887(1991)中所述测量在细胞培养物中HIV传布的抑制。在此测定中，使用予先确定的接种物用HIV-1感染MT-4 T-淋巴细胞，(Wildtype，除非另有指示)将培养物培养24小时。此时，≤1%的这种细胞通过间接免疫荧光呈阳性。然后将细胞彻底清洗并分配在96阱培养皿中，将抑制剂的序列的两倍稀释液加入阱中，再继续培养3天。在感染后第四天在对照培养物中的细胞100%被感染。HIV-1 p24累积与病毒扩散直接有关。细胞培养抑制剂浓度定义为抑制剂浓度(nmole/l)，它降低感染扩散至少95%，或CIC95。
化合物37.2结果摘要A.逆转录酶试验和细胞传布试验WT K103N* Y181C DM RT-2IC50(μM) 0.02 0.030 0.008 0.085 80.8CIC95(μM) ＜0.006(N=2) 0.100 ＜0.025 0.400 N.D.
蛋白质结合98.0%正常人血浆(HPLC方法)＊突变体K103N和Y181C是HIV-1逆转录酶的抗药。DM是两次突变体，如在逆转录酶试验中所述。RT-2是HIV的逆转录酶。
协同效果A制备HIV感染的MT-4细胞悬浮液使MT细胞，于0日，浓度为250000/ml时，用Ⅲb种的HIV-1菌株的1∶1000的稀释液感染(最终125pg p24/ml;足以产生于第1日≤1%的感染细胞，于第4日25-100%)。细胞被感染并于下述介质中生长RPMI 1640(Whittaker Bioproducts)，10%减活牛胎儿血清，4mM谷氨酰胺(Gibco Labs)和1∶100青霉素-链霉素(Gibco Labs)。
于37℃，5%CO2气氛中培养该混合物过夜。
B.用抑制剂处理制备配对抑制剂结合(见表S)的毫微摩尔范围浓度的基质。于第1天，将125μl抑制剂的等分试样加入在96阱微滴度细胞培养板中的等体积HIV-感染的MT-4细胞(每阱50000)中。于37℃在5%CO2气氛中继续培养3天。
C.测量病毒传布用多道移液管管理器重新悬浮沉淀了的细胞，采集125μl放入分离的微滴度板。对上清液进行HIV p24抗原测定。
按下述，通过酶免疫试验测量HIV p24抗原浓度。将要测量p24抗原的等分试样加到用对HIV核抗原的特异单克隆抗体涂复的微阱中。于此时，和于后续的其他合适的步骤洗涤微阱。然后加入生物素基化的HIV-的特异抗体，然后结合抗生蛋白链菌素-辣根过氧化酶。通过加入过氧化氢和四甲基联苯胺被酶作用物产生显色反应。色的强度与HIV p24抗原的浓度成正比。
协同度计算业已发现配对抑制剂结合(见表5)与各抑制剂单独相比，或与每个抑制剂仅仅加和的抑制剂相比显著提高了对病毒扩散的抑制。这样，例如，发现726和AZT的配对的结合，与726单独或AZT单独相比，或与726抑制和AZT抑制之和相比显著提高了对病毒传布的抑制。
数据整理如下按Elion等在Biol.Chem.，208，477(1954)中所述计算部分抑制剂浓度比率(FIC)。测定了各种配对抑制剂结合的最大协同的最小FICS之和。另一方面，计算了平均协同的FICS之平均和。见表S。这些结果表明病毒扩散抑制中的实际的协同，数字愈小，协同愈大。
表S配对抑制剂结合 平均协同726 ddI 0.81726 AZT 0.62736 524 0.65726 524 AZT524是L-735524。其他化合物也在上述C表中定义。
在上述说明书阐述本发明的原则时，同时提供实例其目的是为了举例说明，当然，当进入下述权利要求和其等同物范围时，本发明的实际应用包括所有一般变化，配合，或改进。
权利要求
1.式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐
其中X是卤素；X1是三卤代甲基，或五卤代乙基；Z是O；R为(a)未取代的或被A取代的C1-8烷基，A为卤素，C3-5环烷基，CN，羟基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷氨基-C1-2烷基，杂环，或芳硫基；(b)C2-4链烯基，未取代或被(i)A，或(ii)未取代或被A取代的芳基所取代；(c)C2-5炔基，未取代或被(i)A，或(ii)未取代或被A取代的芳基所取代；或(d)C3-4环烷基，未取代或被(i)A，或(ii)未取代或被A取代的芳基所取代；
2.用于抑制HIV逆转录的药物组合物，包括有效量的式Ⅱ化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体，
其中X为卤素;X1为三卤代甲基，五卤代乙基;C2-5烷基;C2-5炔基;C3-5环烷基;或芳基;Z为O或S;R为(a)C1-8烷基，未取代或被A取代，A为卤素，C3-6环烷基，CN，羟基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷基氨基-C1-2烷基，杂环，或芳硫基;(b)C2-4链烯基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;(c)C2-5炔基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;或(d)C3-4环烷基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代。
3.一种化合物或其药学上可接受的盐，它是(-)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，( /-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，( /-)4-(1-氯-1，1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，或( /-)4-2-[二甲基氨基甲基]乙炔基-4-三氟甲基-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮。
4.抑制HIV逆转录酶的方法，包括对哺乳动物施以有效量的式Ⅰ或式Ⅱ或权利要求3的化合物。
5.预防HIV感染，或治疗HIV感染或治疗AIDS或ARC的方法，包括以有效量的式Ⅰ或式Ⅱ或权利要求3的化合物对哺乳动物给药。
6.用于抑制HIV逆转录酶的药物组合物，包含有效量的权利要求1，2或3的任一化合物，以及药学上可接受的载体。
7.用于预防或治疗HIV感染或治疗AIDS或ARC的药物组合物，包含有效量的式Ⅰ或式Ⅱ或权利要求3的化合物，以及药学上可接受的载体。
8.对HIV逆转录酶具有生物活性的式Ⅰ或式Ⅱ化合物与核苷类似物的组合。
9.AIDS抗病毒化合物L-743，726和L-735，524与任选的一种或多种选自L-697，661，AZT，ddI或ddC的HIV抑制剂的协同组合。
10.AIDS抗病毒化合物L-743，726和一种或多种选自L-697，661，AZT，ddI，或ddC的HIV抑制剂的协同组合。
11.合成(-)-6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-743，726)的方法，包括下列步骤(a)获得定量的( /-)-6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-741，211);(b)以步骤(a)的化合物与拆分试剂缩合;(c)分离所得的非对映异构体;(d)移去拆分试剂变体得所要的化合物。
12.根据权利要求11的方法，其中拆分试剂是(-)-莰酰基氯。
全文摘要
某些苯并噁嗪酮可用于抑制HIV逆转录酶(包括其抗变性)，预防或治疗HIV感染以及治疗AIDS，提及了化合物，药学上可接受的盐，药物组合物成分，或与其它抗病毒剂，免疫调节剂，抗菌素或疫苗结合。其中也描述了治疗AIDS的方法以及预防或治疗被HIV感染的方法。
文档编号C07D413/06GK1090277SQ93117660
公开日1994年8月3日 申请日期1993年8月6日 优先权日1992年8月7日
发明者S·D·杨格, L·S·佩恩, 小·W·C·卢马, S·F·布力查, L·O·特兰 申请人:麦克公司
本案涉及Merck申请18429、18429IA和18727。本案是1992年8月7日申请的Merck Case18793，U.S.S.N.07/926，607的部分连续申请。
称为人类免疫缺乏病毒(HIV)的逆病毒(retovirus)是复杂疾病的病因学试剂，它包括免疫系统的逐步破坏(获得性免疫缺乏综合症;AIDS)以及中枢神经和神经末梢系统的退变。此病毒以前已知为LAV，HTLV-Ⅲ或ARV。逆病毒复制通常的特征是通过病毒编码的逆转录酶将RNA染色体组逆转录生成HIV序列的DNA复制物，它是病毒复制中所需要的步骤。已知一些化合物是逆转录酶抑制剂，在治疗AIDS和类似疾病方面是有效试剂，例如，叠氮胸苷(azidothymidine)或AZT。
HIV核苷酸序列显示在一个开放的阅读框架中存在着pol基因[Ratner，L.等，Nature，313，277(1985)]。氨基酸序列的同系现象证明pol序列可以将逆转录酶、核酸内切酶以及HIV蛋白酶编码[Toh，H.等，EMBO J.4，1267(1985);Power，M.D.等，Science，231，1567(1986);Pearl，L.H.等，Nature 329，351(1987)]。
本申请人验证了本发明化合物是HIV逆转录酶抑制剂。本发明化合物特别的优点是它们对阻碍HIV逆转录酶方面的抑制作用。
公开了如下定义的式Ⅰ化合物。这些化合物用作抑制HIV逆转录酶(和其抗变性(its resistant varieties))，预防HIV感染，治疗HIV感染以及治疗AIDS和/或ARC，可用化合物，药学上可接受的盐(如适宜)，药物组合物成分，或者与其它抗病毒剂，抗感染剂，免疫调节剂，抗菌剂或疫苗结合使用。治疗AIDS的方法;预防HIV感染的方法，以及治疗HIV感染的方法也在此公开。
本发明涉及式Ⅰ化合物，其结合物，或其药学上可接受的盐，HIV逆转录酶和其抗变性的抑制，预防或治疗HIV感染以及治疗由此引起的获得性免疫缺乏综合症(AIDS)。式Ⅰ化合物定义如下
其中X是卤素;
X1是三卤代甲基，或五卤代乙基;
Z是O;
R为(a)未取代的或被A取代的C1-6烷基，A为卤素，C3-6环烷基，CN，羟基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷氨基-C1-2烷基，杂环，或芳硫基;
(b)C2-4链烯基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;
(c)C2-5炔基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;或(d)C3-4环烷基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;
或其药学上可接受的盐。
本发明亦包括用于抑制HIV逆转录的药物组合物，包括有效量的式Ⅱ化合物，
和药学上可接受的载体，其中X为卤素;
X1为三卤代甲基，五卤代乙基;C2-5烷基;C2-5炔基;
C3-5环烷基;或芳基;
Z为O或S;
R为(a)C1-8烷基，未取代或被A取代，A为卤素，C3-6环烷基，CN，羟基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷基氨基-C1-2烷基，杂环，或芳硫基;
(b)C2-4链烯基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;
(c)C2-5炔基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;或(d)C3-4环烷基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;
或其药学上可接受的盐。
优选的化合物包括下面表Ⅰ中化合物37.2，4，2，5和24，其次序以优选下降排列。这些化合物具有下列结构化合物37.2
(-)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，它是最优选的;
化合物4
(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮;
化合物2
( /-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮;
化合物5
( /-)4-(1-氯-1，1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮;
化合物24
( /-)4-(2-[二甲氨基甲基]乙炔基)-4-三氟甲基-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮;或其药学上可接受的盐。
本发明化合物与具体说明于下面表Ⅰ和Ⅱ表Ⅰ
本发明化合物可具有不对称中心，除有特别说明，否则为外消旋体，外消旋混合物或为单一的非对映异构体，或对映体，所有的异构体形式都包括在本发明中，符号( /-)包括( )的光学异构体或(-)光学异构体或其混合物。
当在任何结构或在式Ⅰ中的任何可变数(如R)的存在超过一次时，每种情况下它的定义独立于每个其它情况。此外，只有当取代基和/或可变数(量)的组合构成的稳定化合物时，这种组合才是允许的。
除有说明，这里使用的“烷基”包括具有特定数目碳原子的支链和直链和脂肪烃基;“烯基”包括至少含一个碳-碳双键的直链或支链烷基;“炔基”包括至少含一个碳-碳三键的支链和直链烷基。“卤素”或“卤”用在这里意指氟、氯、溴和碘。
除有说明，这里的“芳基”意指苯基、萘基、四氢萘基、联苯基、菲基、蒽基或苊基(acenaphthyl)。
除有说明，这里使用的术语“杂环”或“杂环基”代表稳定的5-至7-元单环或稳定的8-到11-元双环杂环，它们可以是饱和的，或部分不饱和或不饱和，由碳原子和一到四个选自N，O和S的杂原子组成，其中氮和硫杂原子可任意被氧化，以及上述定义的任何杂环稠合到苯环上形成任何双环基。杂环可以接在任何杂原子或碳原子上以形成稳定结构。这样的杂环单元的例子包括哌啶基、哌嗪基、2-氧哌嗪基、2-氧哌啶基、2-氧吡咯烷基、2-氧吖庚因基、吖庚因基，吡咯基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑基，吡唑烷基，咪唑基，咪唑啉基、咪唑烷基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，哒嗪基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑基、异噁唑烷基、吗啉基、噻唑基、噻唑烷基、异噻唑基、奎宁环基、异噻唑烷基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、噻二唑基、苯并吡喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、四氢呋喃基、苯并呋喃基、四氢吡喃基、噻吩基、苯并噻吩基、硫代吗啉基、氧化硫代吗啉基(硫代吗啉基亚砜)、二氧硫代吗啉基(硫代吗啉基砜)，以及噁二唑基。
本发明化合物可用下列方法合成。
在本发明的苯并噁嗪合成中，典型的一般方法包括以在苯核上环化作为最后步骤。见路线Ⅰ。以新戊酰氯首先对对氯苯胺上的氨基进行保护，得到2，其它较不优选的氨基保护基包括叔丁氧基羰基，乙酸基或异戊酰(isovaleroyl)基。然后以大约2当量的烷基锂(优选为正丁基锂)与2反应。在本金属化步骤中，无其它金属有机化合物是合适的。接着，与CF3COOEt的反应骤冷停止得到3。
接着，通过向3的酮中加入格氏试剂合成叔甲醇4。此格氏试剂必须是二价阳离子的盐如Mg 或Zn 。单价阳离子如Li 或Na 是不适宜的。适宜的溶剂包括(但不限制)THF或乙醚。约在0℃到约室温宽的温度范围可以允许。
合环生成本发明化合物5在缩合剂存在下完成，这些缩合剂如1，1′-羰基二咪唑，光气，碳酸二甲酯，碳酸二苯酯或碳酸二(对硝基苯酯)。环化可以用这些化合物中的任一种，也可以用许多其它试剂完成。
路线ⅠA中提供了路线Ⅰ的具体例子。它以图表示L-741，211的合成，为化合物37.2的外消旋体，进一步说明于实施例6中。
路线ⅠA
路线Ⅱ
路线Ⅱ提供了一种衍生苯并噁嗪核4-位乙炔取代基的方法。作为说明，化合物6金属化，然后加入锌盐。在Heck反应中，使用与CuⅠ复合的四(三苯基膦)钯(0)作为催化剂，得到7。
路线Ⅲ
路线Ⅲ说明了4-乙炔基被含氮杂环取代。Mannich反应包括甲醛与杂环如吡咯烷的缩合反应。接着在CuⅠ催化剂存在下，在端基碳上进行取代。
路线Ⅳ
路线Ⅳ说明了式Ⅰ或式Ⅱ化合物的光学异构体的拆分。在此例子中，(-)莰烷酸作为拆分试剂。许多其它的拆分试剂也是适宜的，包括O-甲基扁桃酰氯或Mosher氏试剂。显然，技术人员知道这些异构体怎么分离。
路线ⅣA特别适用于L-743，726分离中L-741，211的拆分，见路线ⅣA，和实施例6。
路线ⅣA
根据如C.E.Hudson等，J.Am.Chem.Soc.94，1158(1972)和W.Schoberth等，Synthesis，703(1972)公开的方法，通过路线Ⅴ制备环丙基乙炔。
本发明化合物用于抗病毒化合物的制剂和进行筛选评估。例如，本发明化合物用作分离酶突变种，对更有效的抗病毒化合物，它们是极好的筛选工具。此外，本发明化合物用来建立或确定其它抗病毒剂对HIV逆转录酶的连接位点，例如通过竞争性抑制剂，这样本发明化合物为此目的可作为商售产品。
本发明化合物用作抑制HIV逆转录酶，预防或治疗由人体免疫缺乏病毒(HIV)引起的感染以及治疗由此产生的病理上的症状如AIDS。治疗AIDS或预防或治疗由HIV引起的感染的定义包括，但不限制，治疗很宽范围的HIV感染征兆AIDS，ARC(与复合体有关的AIDS)，征兆和无征兆，对HIV实际显现或潜在显现。例如，本发明化合物用于治疗认为是由过去对HIV暴露所致而由HIV引起的感染，例如通过输血，体液交换，咬伤，意外针刺，或外科手术中患者血液暴露所致。
本发明化合物特殊的优点是其对它抗病毒剂产生抗性的HIV逆转录酶具有强有力的抑制作用，这些其它抗病毒剂例如L-697，661，它是3-([(4，7-二氯-1，3-苯并噁唑-2-基)甲基]-氨基)-5-乙基-6-甲基-2(1H)-酮;或L-696，229，它是3-[2-(1，3-苯并噁唑-2-基)乙基]-5-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮;或AZT。
为了这些目的，本发明化合物可以用含通常的无毒的药物上可接受的载体，辅助和赋形剂的剂量单位制剂形式口服，肠胃外(包括皮下注射、静脉、肌肉、胸骨内注射或灌输技术)，喷雾吸入，或直肠路途给药。
因而，根据本发明，它进而提供治疗HIV感染和AIDS的方法和药物组合物。治疗包括给患者施以所需的含药物学载体和治疗有效量的本发明化合物的治疗药物组合物。
这些药物组合物可以是口服给药的悬浮剂或片剂;由鼻给药的喷雾剂;无菌注射剂，如无菌注射水溶液或油性悬浮液或栓剂。
当以悬浮剂口服给药时，这些组合物可根据药物制剂领域已知技术制得，它们可含有使其增量的微晶纤维素，作悬浮剂的藻酸或藻酸钠，作增粘剂的甲基纤维素，以及本领域已知的增甜剂/调味剂。作为快速释放的片剂，这些组合物中可含有微晶纤维素，磷酸二钙，淀粉，硬脂酸镁和乳糖和/或其它本领域已知的赋形剂，粘合剂，补充剂，崩解剂，稀释剂和润滑剂。
如果通过鼻部气溶胶或吸入给药，这些组合物可根据药物制剂领域已知的技术制得，其可被制成盐水溶液，其中使用苄醇或本领域已知的其它适宜的保存剂，吸收促进剂以提高其生物利用率，碳氟化合物，和/或其它的加溶剂或分散剂。
注射溶液或悬浮剂可根据本领域已知技术制备，其中使用了适宜的无毒性，肠胃外可接受的稀释剂或溶剂，如甘露糖醇，1，3-丁二醇，水，Ringer氏溶液或等渗的氯化钠溶液，或适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂，如无菌的无刺激的，固定油类，包括合成的甘油(单)酯或甘油二酯，以及脂肪酸，包括油酸。
当以栓剂形式进行直肠给药时，这些组合物可通过将药物用适宜的无刺激性赋形剂如可可脂，合成的甘油酯或聚乙二醇混合制备，它们在常温下是固体，但在直肠空腔内是液化和/或溶解释放出药物。
本发明化合物可分离的剂量范围在1到100mg/千克体重的量对人体口服给药。一个优选的剂量范围是口服可分离的剂量0.1到10mg/Kg体重。另一优选的剂量是口服分剂量为0.1～20mg/Kg体重。如果和核苷类似物结合治疗，在口服给药可分离的剂量中本发明化合物优选的口服给药剂量范围在0.1到20mg/Kg体重，而在口服分剂量中核苷类似物的剂量在50mg到5g/Kg体重。但是可以理解，对任一患者具体的剂量水平和用剂频率是可以变化的，它依赖于许多因素，包括所使用具体化合物的活性，代谢稳定和使用化合物的作用时间，年龄，体重，通常健康状况，性别，饮食，给药方式和时间，排泄速度，药物结合，特定的病症的程度，以及接受治疗的主体。
本发明也指明HIV逆转录酶抑制化合物与一种或多种用于治疗AIDS试剂的结合。例如，本发明化合物不论在暴露前和/或暴露后与下表中的那些有效量的AIDS抗病毒剂，免疫调节剂，抗传染剂，或疫苗结合给药是很有效的。
表抗病毒剂药物名称 制造厂家 备注AL-721 Ethigen ARC,PGL(Los Angeles,CA) HIV阳性,AIDS重组人类干扰素 Triton Biosciences AIDS,卡波济氏干扰素β (Almeda,CA) 肉瘤,ARCAcemannan Carrington Labs ARC(也见免疫调(Irving,TX) 节剂)
药物名称 制造厂家 备注Cytovene Syntex 威胁视力CMVGanciclovir (Palo Alto,CA) 外围CMV视网膜炎d4T Bristol-Myers AIDS,ARC双去氢去氧胸苷 (New York,NY)ddI Bristol-Myers AIDS,ARC双去氧肌苷 (New York,NY)EL10 Elan Corp,PLC HIV感染(也见免(Gainesville,GA) 疫调节剂)膦酰甲酸三钠 Astra Pharm. CMV视网膜炎,HIV感Products,Inc. 染,其它CMV感染(Westborough,MA)双去氧胞苷 Hoffman-La Roche AIDS,ARCddC (Nutley,NJ)Novapren Novaferon Labs,Inc HIV抑制剂(Akron,OH)Diapren,Inc.
(Roseville,MN,marketer)肽T Peninsula Labs AIDS辛肽系列 (Belmont,CA)
药物名称 制造厂家 备注Zidovudine; Burroughs Wellcome AIDS,adv,ARCAZT (Rsch.Triangle Park 小儿AIDS,NC) 卡波济氏肉瘤,无征兆HIV感染,不严重HIV疾病,有关神经病,结合精神治疗,安莎霉素 Adria Laboratories ARCLM427 (Dublin,OH)Erbamont(Stamford,CT)糖肝酯 Ueno Fine Chem AIDS,ARC,HIVInd.Ltd. 阳性无征兆(Osaka,Japan)三唑核苷 Viratek/ICN 无征兆HIV阳性Ribavirin (Costa Mesa,CA) LAS,ARCα干扰素诱导 Burronghs Wellcome 卡波济氏肉瘤,剂 (Rsch.Triangle HIV结合Park,NC) w/Retrovir无环鸟苷 Burroughs Wellcome AIDS,ARC,无征兆的HIV阳性,与AZT结合药物名称 制造厂家 备注中和免疫一吸收 Advanced Biotherapy AIDS,ARC柱中pH不稳定 Conceptsα误差干扰素 Rockville,MD)诱导剂的抗体L-697,661 Merck(Rahway,NJ) AIDS,ARC,无征兆HIV阳性,也与AZT结合L-696,229 Merck AIDS,ARC,无征兆HIV(Rahway,NJ) 阳性,也与AZT结合L-735,524 Merck(Rahway,NJ) AIDS,ARC,无征兆HIV阳性,也与AZT结合免疫调节剂药物名称 制造厂家 备注AS-101 Wyeth-Ayerst Labs AIDS(Philadelphia,PA)Bropirimine Upjohn 早期AIDS(Kalamazoo,MI)Acemannan Carrington Labs,Inc AIDS,ARC(Irving TX) (也见抗病毒剂)CL246,738 American Cyanamid AIDS,卡波济氏肉瘤(Pearl River,NY)Lederle Labs(Wayne,NJ)
药物名称 制造厂家 备注EL10 Elan Corp,PLC HIV感染(Gainesville,GA) (也见抗病毒剂)γ-干扰素诱导剂 Genentech ARC,与w/TNF结合(S,San Francisco,CA) (肿瘤坏死因子)粒细胞的巨噬细 Genetics Institute AIDS胞菌落促进因子 (Cambridge,MA)Sandoz(East Hanover,NJ)粒细胞的巨噬细 Hoeschst-Roussel AIDS胞菌落促进因子 (Somerville,NJ)Immunex(Seattle,WA)粒细胞的巨噬细 Schering-Plough AIDS胞菌落促进因子 (Madison,NJ) AIDS与w/AZT结合HIV Core Rorer 血清反应阳性HIVParticle (Ft.Washington,PA)免疫刺激剂IL-2 Hoffman-La Roche AIDS,ARC,HIV,白细胞介素-2 (Nutley,NJ) 与w/AZT结合Immunex免疫球蛋白 Cutter Biological 儿科AIDS,与静脉内(人) (Berkeley,CA) w/AZT结合IMREG-1 Imreg AIDS,卡波济氏肉瘤(New Orleans,LA) ARC,PGL
药物名称 制造厂家 备注IMREG-2 Imreg AIDS,卡波济氏肉瘤(New Orleans,LA) ARC,PGLImuthiol Diethyl Merieux Institute AIDS,ARCDithio Carbamate (Miami,FL)(二硫代氨基甲酸酯)α-2 Schering Plough 卡波济氏肉瘤干扰素 (Madison,NJ) W/AZT:AIDS蛋氨酸脑 TNI Pharmaceutical AIDS,ARC菲肽 (Chicago,IL)MTP-PE Ciba-Geigy Corp 卡波济氏肉瘤胞壁酰-三肽 (Summit,NJ)粒细胞 Amgen AIDS,与w/AZT菌落刺激因子 (Thousand Oaks,CA) 结合rCD4 Genentech AIDS,ARC重组可溶人体CD4 (S,San Francisco,CA)重组 Biogen AIDS,ARC可溶人体CD4 (Cambridge,MA)干扰素 Hoffman-La Roche 卡波济氏肉瘤α-2a (Nutley,NJ) AIDS,ARC,与w/AZT结合SK&F106528 Smith,Kline&French HIV感染可溶T4 Laboratories(Philadelphia,PA)
药物名称 制造厂家 备注胸腺五肽 Immunobiology HIV感染(Thymopentin) Research Institute(Annandale,NJ)肿瘤坏死因子; Genentech ARC与w/γ干扰素结TNF (S.San Francisco,CA) 合抗感染剂药物名称 制造厂家 备注氯林可霉素与伯 Upjohn PCP氨喹 (Kalamazoo,MI)Fluconazolec Pfizer 隐球菌病(New York NY) 脑膜炎,念珠菌病锭剂 Squibb Corp 预防口腔念珠菌病制霉菌素锭剂 (Princeton,NJ)Ornidyl Merrell Dow PCPEflornithine (Cincinnati,OH)戊烷脒 Lypho Med PCP治疗羟乙基磺酸盐 (Rosemont,IL)(IM&IV)Piritrexim Burroughs Wellcome PCP治疗(Rsch.TrianglePark,NC)
药物名称 制造厂家 备注戊烷脒 Fisons Corporation PCP预防羟乙基磺酸盐 (Bedford,MA)(吸入)螺旋霉素 Rhone-Poulenc 隐球菌腹泻Pharmaceuticals(Princeton,NJ)Intraconazole- Janssen Pharm. 组织胞浆菌病R51211 (Piscataway,NJ) 隐球菌脑膜炎Trimetrexate Warner-Lambert PCP其它药物名称 制造厂家 备注重组人体 Ortho Pharm.Corp. 与AZT治疗有关的红细胞生成素 (Raritan,NJ) 严重贫血乙酸甲地孕酮酯 Bristol-Myers 治疗与w/AIDS有关(New York,NY) 的厌食总的肠内 Norwich Eaton 与AIDS有关的腹泻和营养物 Pharmaceuticals 吸收障碍(Norwich,NY)当然，本发明化合物与AIDS抗病毒素，免疫调制剂，抗感染或疫苗的结合范围不限于上表中所列，而原则上包括与用于治疗AIDS的任何药物组合物结合。例如，式Ⅰ或式Ⅱ化合物可以与具有已知抗HIV逆转录酶生物活性的核苷类似物适合地结合给药。适合的核苷类似物通常是链终止剂并包括AZT，ddC，ddI，D4T，HEPT和3′-氟-2′，3′-二脱氧胸苷。
AZT用下述方法合成J.P.Horwitz等，J.Org.Chem.29，2076(1964);R.P.Glinski等，J.Org.Chem.38，4299(1973);C.K.Chu等，Tetrahedron Letters 29，5349(1988)。在US4724232中描述了AZT用作治疗AIDS的治疗药物。
化合物ddC用下述合成J.P.Horwitz等，J.Org.Chem.32，817(1967);R.Marumoto，Chem.Pharm.Bull.22，128(1974);和T.S.Lin等，J Med.Chem.30，440(1987)。
D4T用Herdewijn，P.等的方法合成(J.Med.Chem.30，1270(1987))。
HEPT用下述方法合成Miyasaka，T.等J.Med.Chem.32，2507(1989);和A.Rosowsky，J.Med.Chem.24，1177(1981)。在EPO484071中也描述了ddC，ddI和AZT的合成。
用Herdewijn，P.等的方法(J.Med.Chem.30，1270(1987))合成化合物3′-氟-2′，3′-二脱氧胸苷。化合物L-735，524是N-(2(R)-羟基-1(S)-2，3-二氢化茚基)-2(R)-苯甲基-4-(S)-羟基-5-(1-(4-(3-吡啶甲基)-2(S)-N′-(叔丁基甲酰胺基)-哌嗪基)-戊酰胺，或其药学上可接受的盐。L-697，661或‘661'是3-([4，7-二氯-1，3-苯并噁唑-2-基)甲基]氨基)-5-乙基-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮;L-696，229是3-[2-(1，3-苯并噁唑-2-基)-乙基]-5-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮。在EP0484071和EP0462800中描述了L-697，661和L-696，229的合成，在此两者均列为参考文献。
优选的结合是L-743，726与或不与HIV蛋白酶抑制剂同时，间歇，或交替处理。在结合中的任何任意的第三个组分是HIV逆转录酶的核苷抑制剂，例如AZT，ddC或ddI。HIV蛋白酶的优选的抑制剂是L-735，524。其他优选的HIV逆转录酶的抑制剂包括L-697，661。这些结合在限制HIV的传布上可有协同效果。优选的结合包括下述(1)L-743，726与L-735，524和任意地任一L-697，661，AZT，ddI或ddC;(2)L-743，726和任一L-697，661，AZT，ddI或ddC。也包括这些结合的药学上可接受的盐。
实施例1( /-)4-(1，1，1-三氟甲基)-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物15)步骤AN-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙酰胺向装有顶部搅拌器的5升三颈圆底烧瓶中加入4-氯苯胺(127.57g，1mole)，1200ml CHCl3和1200ml饱和Na2CO3水溶液。将加液漏斗装在烧瓶上并注入2，2-二甲基丙酰氯(129ml，1.05mole)。1小时期间将此酰基氯滴加到剧烈搅拌的混合物中，将所得混合物于室温下再搅拌23小时。从混合物中分离出一些白色晶状产物。过滤收集这些晶体。将滤液倒入分液漏斗并分层。用水和盐水洗涤氯仿层。干燥(MgSO4)，过滤并真空除去溶剂，得到附加的产物，合并此两份产物并从沸腾的乙酸乙酯-己烷中重结晶，得到185.6g白色晶状固体N-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙酰胺。
步骤B1-(2-氨基-5-氯苯基)-2，2，2-三氟乙酮向装有顶部搅拌器，氩气入口管和500ml烘干的加液漏斗的干燥的3升三颈圆底烧瓶中加入N-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙酰胺(100g，472mmol)和干燥的THF(1l)。将此溶液在冰浴中冷至0℃并向加液漏斗中注入正丁基锂(387ml，2.5M己烷溶液，968mmol)。1小时期间将正丁基锂溶液缓慢滴加到酰胺溶液中，保持温度低于 5℃。将所得溶液于0℃冷1小时，在所述时间内形成橙色沉淀，向此混合物中1小时期间滴加入1，1，1-三氟乙酸乙酯(115ml，968mmol)。将所得清液再置30分钟。将反应混合物用5%HCl水溶液中止。将混合物用1l乙酸乙酯稀释并分层。用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，得到160黄色油。将此物质悬浮于1l 3N盐酸水溶液中并将此溶液加热回流24小时，用1l乙酸乙酯稀释冷却了的上述溶液并用浓NH4OH使混合物呈碱性。分离出两层，有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩，在1.5Kg硅胶上进行色谱分离，用15%在己烷中的乙酸乙酯作洗脱液。使经色谱分离的物质从沸腾的己烷中重结晶，得到57g(54%)纯1-(2-氨基-5-氯苯基)-2，2，2-三氟乙酮，为浅黄色结晶，
mp91-92℃.1H NMR(CDCl3)δ6.46(br s，2H)，6.69(d，1H，J＝9.2Hz)，7.32(dd，1H，J＝2.4，9.2Hz)，7.70(d，1H，J＝2.4Hz).
步骤C( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氯-5-己-2-醇向装有搅拌棒，氩气入口管，加液漏斗和回流冷凝器的300ml干燥三颈圆底烧瓶中加入镁(车屑，3.03g，125mmol)和干THF(75ml)。向良好搅拌的混合物中，于保持缓慢回流的速率下，加入4-溴-1-丁烯(12.0ml，118.21mmol)。加入完成后，将混合物放置30分钟，然后于冰浴中冷至0℃。在30分钟期间，向良好搅拌的溶液中滴加1-(2-氨基-5-氯苯基)-2，2，2-三氟乙酮(5.00g，22.36mmol)的THF(35ml)溶液。将冷浴放置至终了。然后将混合物于室温搅拌20小时，将反应物用乙酸乙酯和10%柠檬酸水溶液稀释。将混合物搅拌4小时。分离各层并用NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机相。干燥(MgSO4)，过滤，真空除去溶剂，在300g硅胶上进行色谱分离，用15%在己烷中的乙酸乙酯作洗脱液，得到4.80g黄色固体状的( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氟-5-己-2-醇。
步骤D( /-)4-(1，1，1-三氟甲基-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮向装有搅拌棒，氩气入口管和回流冷凝器的200ml圆底烧瓶中加入( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氟-5-己-2-醇(4.80g，17.16mmol)，1，1′-羰基二咪唑(13.91g，85.81mmol)和干燥的THF(75ml)。将混合物于60℃加热18小时。用乙酸乙酯稀释冷却了的反应混合物并用水(3×200ml)和盐水(250ml)洗涤。干燥(MgSO4)，过滤，真空除去溶剂，接着从沸腾的乙酸乙酯-己烷重结晶，得到3.22g( /-)4-(1，1，1-三氟甲基)-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，为白色晶状固体，m.p.165-166℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.99(m，1H)，2.09-2.40(m，3H)，5.00(d，1H，J＝1.4Hz)，5.03(dd，1H，J＝1.4，7.9)，5.78(m，1H)，6.85(d，1H，J＝8.6Hz)，7.21(brs，1H)，7.35(dd，1H，J＝2.2，8.6Hz)，9.63(brs，1H).
实施例2( /-)6-氯-4-乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物26)步骤A2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇向装有加液漏斗，氩气入口管，搅拌棒和数字温度计的500ml三颈圆底烧瓶内装入乙炔基溴化镁(0.5M在己烷中，268ml，134mmol)，然后冷却至-78℃。保持温度≤-55℃15分钟后，完成滴加在50ml THF中的1-(2-氨基-5-氯苯基)-2，2，2-三氟乙酮(6.0g，26.8mmol)溶液。在缓慢温热至室温后，将反应混合物搅拌16小时。通过滴加饱和的氯化铵水溶液(60ml)于-5℃中止此暗红色溶液，接着用10%柠檬酸，饱和碳酸氢钠，水和盐水洗涤乙酸乙酯萃取液，以硫酸钠干燥，过滤和蒸去溶剂后得到8.5g粗产物，用快速色谱纯化，使用15-20%乙酸乙酯∶己烷作洗脱液，得到纯2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇(5g浅褐色油，产率75%)。
步骤B( /-)6-氯-4-乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮用1，1′-羰基二咪唑(13.0g，80.0mmol)处理2-(2-氨基-5-氯苯基)-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇的THF溶液(5.0g，20.0mmol在225ml THF中)并在油浴中于60℃加热17小时，真空除去THF，将残留物溶于乙酸乙酯，然后用10%柠檬酸，碳酸氢钠，水和盐水洗涤，接着用硫酸钠干燥。过滤并真空蒸发后分离出粗产物(3.6g)并从乙酸乙酯∶己烷中重结晶。分离出产物( /-)6-氯-4-乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮为白色针状固体(3.22g，产率58.4%)，m.p.226-227℃。1H-NMR(CDCl3 痕量DMSO)δ3.16(s，1H)，6.98(d，J＝3.3Hz，1H)，7.35(m，1H)，7.51(s，1H)，10.66(s，1H)。
实施例3( /-)6-氯-4-(1，1，1-三氟甲基)-4-[(3-(1-吡咯烷基)-1-丙炔基]-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物7)
将( /-)6-氯-4-乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(150mg，0.544mmol)，吡咯烷(52.2μl，0.626mmol)，仲甲醛(20.5mg，0.681mmol)，乙酸(31.1μl，0.544mmol)和氯化铜(Ⅰ)(20.5mg，0.207mmol在3.5ml二噁烷中)的二噁烷溶液在油浴中于50℃加热约2小时。将反应混合物入2N HCl中止，并用乙酸乙酯萃取，用固体碳酸钾中和水层并用乙酸乙酯萃取三次。用水和盐水洗涤全并的萃取液，用硫酸钠干燥，得到140ml粗产物。在硅胶上进行色谱法纯化并从乙酸乙酯∶己烷中重结晶，得到晶状( /-)6-氯-4-(1，1，1-三氟甲基)-4-[(3-(1-吡咯烷基)-1-丙炔基]-1，4-二氢-2H-苯并噁嗪-2-酮(89mg，46%产率)m.p.160-161℃(分解)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.85-1.89(m，4H)，2.68-2.71(m，4H)，3.67(s，1H)，6.88(d，J＝8.55Hz，1H)，7.40(dd，J＝2.19，8.54Hz，1H)，7.55(s，1H)，9.45(s，1H).
( /-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物2)将6-氯-4-乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(138mg，0.5mmol)的3ml干燥THF溶液于-78℃下搅拌。向此溶液中加入0.4ml(1.0mmol)正丁基锂(2.5M在己烷中)。于-78℃将阴离子冷10分钟，然后加入1ml ZnCl2(1M在乙醚中)。于-78℃将反应混合物搅拌15分钟，移去冰浴，于30分钟期间混合物缓慢温热至0℃。将反应混合物加入2-碘苄腈(149mg，0.65mmol)的2ml THF溶液中，接着加入四(三苯基膦)钯(O)(56mg，0.05mmol)，将反应物温热至室温并继续搅拌15小时。将反应混合物用10ml2N HCl中止，用2×200ml乙酸乙酯萃取，将合并的萃取液用水，盐水洗涤并用MgSO4干燥。除去溶剂，得到195mg油，在硅胶上进行快速色谱纯化(20%乙酸乙酯在己烷中)，得到60mg未反应的起始原料和35mg偶合产物。后者用乙醚研制，得到25mg( /-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮。m.p.245-246℃。FAB.MS M 1＝377m/e。
1H NMR(CDCl3)δ6.82-6.85(d，J＝8.5Hz，1H);7.40-7.44(dd，J＝2.1，8.5Hz，1H);7.56-7.79(m，5H);8.00(s，1H).
实施例4( /-)4-(1-氯-1，1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物5)步骤A1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2，2-二氟乙酮向装有磁搅拌棒，氩气入口管和100ml烘干的加液漏斗的烘干的300ml三颈圆底烧瓶中加入N-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙酰胺(10g，47.2mmol)和干燥的THF(100ml)。将此溶液在冰浴中冷至0℃并向加液漏斗中注入正丁基锂(38.7ml 2.5M在己烷中的溶液，96.8mmol)。1小时期间将正丁基锂溶液缓慢加到酰胺溶液中，保持温度低于 5℃。将所得溶液于0℃冷却1小时，在此时间形成橙色沉淀。在15分钟期间向此混合物中滴加1-氯-1，1-二氟乙酸乙酯(10.2ml，96.8mmol)，将所得清液再放30分钟，用5%HCl水溶液中止反应。用1l乙酸乙酯稀释混合物并分离各层。用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，得到160g黄色油。将此物质悬浮于200ml 3N HCl水溶液并将此溶液加热回流24小时。用500ml乙酸乙酯稀释剂冷却的溶液并用浓NH4OH使混合物呈碱性。分离各层并用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩，在350硅胶上进行色谱分离，用在15%己烷中的乙酸乙酯作洗脱液。色谱分离物从沸腾的己烷中重结晶，得到5.5g纯1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2，2-二氟乙酮，为亮黄色结晶，m.p.55-56℃。
1H NMR(CDCl3)δ6.43(brs，2H)，6.69(d，1H，J＝9.0Hz)，7.31(dd，1H，J＝2.4，9.0Hz)，7.80(d，1H，J＝2.4Hz).
步骤B( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1，1-二氟-3-丁炔-2-醇向装有搅拌棒，氩气入口管，回流冷凝器和隔膜的100ml烘干圆底三颈烧瓶中加入乙炔基苯(2.13g，20.83mmol)，干燥THF(50ml)和乙基溴化镁(6.94ml，3.0M乙醚溶液)。于室温下将此混合物放置2小时，然后用注射器加入1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2，2-二氟乙酮的THF(6ml)溶液(1.00g，4.17mmol)。于室温下将所得橙红色溶液搅拌21.5小时。通过加入1N HCl(50ml)中止反应，然后用乙酸乙酯稀释。用浓NH4OH使溶液呈碱性并分离各层。用水和盐水洗涤有机相。干燥(MgSO4)，过滤，真空除去溶剂，在硅胶上进行色谱分离，用20%在己烷中的乙酸乙酯作洗脱液，得到1.02g( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1，1-二氟-3-丁炔-2-醇，为灰白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ4.42(brs，2H)，5.10(brs，1H)，6.65(d，1H，J＝8.5Hz)，7.15(dd，1H，J＝2.4，8.5Hz)，7.38(m，3H)，7.55(m，2H)，7.70(d，J＝2.4Hz).
步骤C( /-)4-(1-氯-1，1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮向装有搅拌棒，回流冷凝器和氩气入口管的100ml圆底烧瓶中加入( /-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1，1-二氟-3-丁炔-2-醇(0.81g，2.37mmol)，干燥THF(25ml)，1，1′-羰基二咪唑(1.919g，11.84mmol)。将此溶液于60℃加热20小时。用乙酸乙酯稀释冷却的反应混合物并用0.5N HCl，水和盐水洗涤。干燥(MgSO4)，过滤并真空除去溶剂，得到890mg油。将此物质在80g硅胶上进行色谱分离，用20%在己烷中的乙酸乙酯作洗脱液。从沸腾的乙酸乙酯-己烷中重结晶色谱分离物，得到507mg，(58%)( /-)4-(1-氯-1，1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，为白色针状，m.p.154-155℃。
1H NMR(CDCl3)δ6.89(d，1H，J＝8.4Hz)，7.35-7.48(m，4H)，7.56(m，2H)，7.64(brs，1H)，9.19(brs，1H).
实施例5(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物4)步骤A2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇从4.83ml苯基乙炔(0.044ml)和17.2ml2.5N正丁基锂的己烷溶液(0.043mol)，于50ml THF中，于-78℃，制备苯基乙炔锂溶液，然后于5分钟期间用11.4g溴化镁醚合物(0.044mol)处理，将混合物温热至-20℃并于氩气下继续搅拌30分钟，然后将混合物冷至-60℃，并加入预先与等当量(2.8g，0.011mol)在25ml THF中的溴化镁醚合物络合的2.5g(0.011mol)1-(2-氨基-5-氯)-2，2，2-三氟甲基乙酮的溶液，将反应混合物于15℃搅拌1小时，然后冷至0℃并通过滴加30ml饱和氯化铵水溶液和30ml水的混合物进行处理。将混合物用2×100ml乙醚萃取，用盐水洗涤合并的有机相并用MgSO4干燥。除去干燥剂和溶剂，余下6g油，在硅胶上进行快速色谱分离，用20%在己烷中的乙酸乙酯洗脱，得到2.5g 2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇。1H-NMR(CDCl3)δ4.63(brs，3H)，6.69(d，J＝8.5Hz，1H)，7.15(d，J＝2Hz，1H)，7.17(d，J＝2Hz，1H)，7.35-7.44(m，3H)，7.53-7.56(m，2H)，7.66(d，J＝2Hz，1H).FAB MS M H＝326m/e.
步骤B(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物12)将2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇(2.0g，6.1mmol)和11.0g(12.0mmol)1，1′-羰基二咪唑在300ml干燥THF中的溶液在氩气氛下于55℃搅拌24小时，在旋转蒸发器上除去溶剂，将残余物在200ml乙醚和400ml水之间进行分配。分离开两层，再次用乙醚萃取水层，用2×200ml10%柠檬酸洗涤合并的乙醚萃取物，然后用盐水洗涤，在MgSO4上干燥。除去干燥剂和溶剂，得到油状粗标题化合物1.5g(70%)。用乙醚-己烷研制，得到875mg(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮为白色固体，于137℃部分熔化，147℃全部熔化。
1H-NMR(CDCl3)δ6.92(d，J＝8Hz，1H)，7.30-7.49(m，4H)，7.58-7.65(m，3H)，8.99(s，1H).
步骤C6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮搅拌下，于氩气氛下，冰浴中向含有(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(2.24g，6.37mmol)，4-二甲基氨基吡啶(0.10g，0.8mmol)，和(-)莰烷酰氯(2.07g，9.55mmol)的60ml干燥二氯甲烷溶液中加入三乙胺(2.22ml，15.9mmol)。移去冷浴，使反应物于室温下继续进行。当反应通过薄层色谱(SiO2，4%在CHCl3中的乙酸乙酯)检测完成时，用200ml CHCl3稀释溶液并两次用10%柠檬酸然后用盐水洗涤。在干燥(MgSO4)下于旋转蒸发器上除去溶剂，将泡沫状残余物进行快速色谱分离，用CHCl3洗脱。得到575mg油状6-氯-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮非对映体I，1H-NMR(CDCl3);δ0.85(s，3H)，1.08(s，3H)，1.22(s，3H)，1.73-1.85(m，1H)，1.92-2.08(m，1H)，2.50-2.67(m，2H)，7.30-7.79(m，8H)。接着得到1.52g混合物馏分(非对映体Ⅰ和Ⅱ)。继续洗脱得到680mg较慢移动的标题化合物非对映体(Ⅱ)，用乙醚/己烷混合物研制下得到白色针状块，mp177-178.5℃;1H-NMR(CDCl3)δ0.83(s，3H)，1.12(s，3H)，1.23(s，3H)，1.73-1.86(m，1H)，1.93-2.06(m，1H)，2.50-2.63(m，2H)，7.38-7.51(m，4H)，7.49-7.62(m，2H)，7.72(d，J＝9Hz，1H)，7.76(d，J＝2Hz，1H).
将从快速色谱法得到的1.52g异构体混合物溶于75ml乙醚，用50ml己烷稀释该溶液，然后用异构体Ⅱ的结晶接种。缓慢结晶得到另外385mg异构体Ⅱ，将其从乙醚/己烷中重结晶，通过HPLC分析证实得到＞96%非对映纯物质。
步骤D(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮于45℃，氩气氛下，将晶状6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，2-二氢-4(H)-3，1-苯并噁嗪-2-酮(53mg，0.10mmol)的非对映异构体(Ⅱ)溶于8ml12-丙醇中。向此溶液中加入0.27ml10%K2CO3水溶液。继续搅拌10分钟，在此期间全部原料耗尽(TLC，SiO2，4%在CHCl3中的乙酸乙酯)。真空浓缩该溶液，将残余物溶于乙醚中。用0.1N HCl和盐水洗涤后，干燥(MgSO4)乙醚溶液，过滤并真空蒸发得到油状固体，将其用SiO2色谱法纯化，用5%在己烷中的2-丙醇洗脱。从乙醚/己烷中得到白色针状晶体(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，m.p.178-179℃;[α]D20＝-92.5℃(CHCl3，C＝0.0012g ml-1);
1H-NMR(CDCl3)δ6.87(d，J＝8.5Hz，1H)，7.37-7.50(m，4H)，7.56-7.63(m，3H)，8.60(s，1H)。
步骤E( )6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(化合物3)按照步骤D的方法，从步骤C的非晶状产物，非对映异构体Ⅰ制备( )6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮m.p.178-179℃;D20＝ 87.6°(CHCl3，C＝0.0050g ml-1);
1H-NMR(CDCl3)δ6.87(d，J＝8.5Hz，1H)，7.37-7.50(m，4H)，7.56-7.63(m，3H)，8.60(s，1H)。
实施例6(-)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-743726，化合物37.2)和( )6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-743725)步骤A2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-环丙基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇于1小时期间，向250ml THF中的23g环丙基乙炔(0.348mol)滴加116ml3.0M的溴化乙基镁乙醚溶液(0.348mol)制备环丙基乙炔溴化镁溶液。于0℃将此溶液保持1小时，然后于40℃3小时。向再冷至0℃的此溶液于5分钟期间分批添加15.56g固体1-(2-氨基-5-氯苯基)-2，2，2-三氟甲基乙酮(0.0696mol)。将反应混合物于0℃搅拌1.5小时。于0℃通过滴加700ml饱和氯化铵水溶液中止该反应。用2×400ml乙酸乙酯萃取混合物，用盐水洗涤合并的有机相并用MgSO4干燥。除去干燥剂和溶剂得到黄色固体。从沸腾的己烷(100ml最终体积)中重结晶此物质，得到14.67g 2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-环丙基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇。通过浓缩母液得到第二批产物(2.1g)。m.p.153-154℃。
1H-NMR(CDCl3)δ0.84(m，2H)，0.90(m，2H)，1.38(m，1H)，4.50(brs，3H)，6.69(d，J＝8.5Hz，1H)，7.13(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.55(d，J＝2.5Hz，1H).
步骤B(±)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-741，211)氩气氛下，于55℃，将2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-环丙基-1，1，1-三氟-3-丁炔-2-醇(15.00g，0.0518mol)和41.98g(0.259mol)1，1′-羰基二咪唑的250ml干燥THF溶液搅拌24小时，在旋转蒸发器上除去溶剂，残余物在500ml乙酸乙酯和400ml水间进行分配。分离两层，用乙酸乙酯再洗涤水相一次。用2×200ml2%HCl水溶液，饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤合并的乙酸乙酯萃取液。用MgSO4干燥，过滤，真空除去溶剂，得到16.42g固体标题化合物，从乙酸乙酯-己烷中重结晶，得到12.97g分析纯(±)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮白色结晶。m.p.178-180℃。1H-NMR(CDCl3)0.85(m，2H)，0.94(m，2H)，1.40(m，1H)，6.81(d，J＝8.5Hz，1H)，7.37(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.49(d，J＝2.5Hz，1H)，8.87(brs，1H).
步骤C6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮氩气氛下，于冰浴中，搅拌下向含(±)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(12.97g，0.041mol)，4-二甲基氨基吡啶(1.02g，0.0083mol)，和(-)莰烷酰氯(14.22g，0.06556mol)的350ml干燥二氯甲烷溶液中加入三乙胺(22.84ml，0.164mol)。移去冷浴，使反应于室温下进行。75分钟后，用薄层色谱法(SiO2，4%乙酸乙酯在CHCl3中)鉴定反应终点，将该溶液用500ml CHCl3稀释，然后用10%柠檬酸(2X)，水(1X)和盐水(1X)洗涤。用MgSO4干燥，过滤，真空除去溶剂，留下无色泡沫。将此物质用200ml沸腾己烷研制。冷至室温，沉淀出期间的非对映异构体莰烷酰亚胺。在多孔玻璃滤器上收集此固体，用很小量的冷己烷洗涤并真空干燥，得到7.79g 6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮白色结晶。m.p.164-165℃，HPLC纯度99.2%。
＠254nm。1H-NMR(CDCl3)δ0.77(s，3H)，0.86-0.96(m，4H)，1.08(s，3H)，1.19(s，3H)，1.44(m，1H)，1.76(m，1H)，1.95(m，1H)，2.51(m，2H)，7.42(dd，J＝2.4，9.0Hz，1H)，7.63(m，2H).
步骤D(-)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-743，726，化合物37.2)于60℃，氩气氛下，将6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，2-二氢-4(H)-3，1-苯并噁嗪-2-酮(7.50g，0.01512mol)溶于150ml正丁醇中，向此溶液中加入10ml 1H HCl。于60℃将此溶液保持72小时，用NaHCO3水溶液中和混合物，真空除去正丁醇。将残余物溶于150ml THF并于室温下用50ml 2N LiOH处理3小时。用乙酸乙酯稀释此混合物并用二份水和一份盐水洗涤。干燥(MgSO4)，过滤并真空除去溶剂，得到白色固体。将此物质于热己烷中重结晶，得到3.43g(-)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-3，1-苯并噁嗪-2-酮白色结晶。
m.p.131-132℃;[α]D20＝-84.7°(CHCl3，c＝0.005g mL-1);
1H-NMR(CDCl3)δ0.85(m，2H)，0.94(m，2H)，1.40(m，1H)，6.81(d，J＝8.5Hz，1H)，7.37(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.49(d，J＝2.5Hz，1H)，8.87(brs，1H).
步骤E( )6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-743，725)将上述步骤C所得母液用柱色谱法在硅胶上纯化，用10%在己烷中的乙酸乙酯作洗脱液。纯的，不期望的非对映异构体(无色泡沫)按步骤D水解。得到白色晶体对映体苯并噁嗪酮，( )6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮。m.p.131-132℃;D20＝ 84.4°(CHCl3，c＝0.005g mL-1);1H-NMR(CDCl3)δ0.85(m，2H)，0.94(m，2H)，1.40(m，1H)，6.81(d，J＝8.5Hz，1H)，7.37(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.49(d，J＝2.5Hz，1H)，8.87(brs，1H).
逆转录酶测定本测定方法是通过于dGTP Km值和多r(c).寡d(G)12-18下，使HIV逆转录酶(HIV RTR)(或其他RT)重组入酸可沉淀的cDNA来测量氚化了的脱氧鸟苷单磷酸酯的结合。本发明的抑制剂抑制此结合。
试验在下述试剂中进行55mM Tris(pH8.2)-30mM KCl-30mM MgCl2-1mM二硫苏糖醇-20μg rCdG12-18(Pharmacia)/ml-8mM[3H]dG TP(New England Nuclear)-0.01%Triton X-100-50mM甘醇-双(β-氨基-乙基醚)-N，N，N′，N′-四乙酸(EGTA)-1mg牛血清蛋白/ml。于37℃培养60分钟后，使用半自动细胞采集器将酸可沉淀物质收集在玻璃纤维滤器上。稀释含RT的细菌细胞提取液至测定的线性范围内，在抑制剂存在和不存在下测定活性。在E.Coli中产生的纯化了的HIV-1RT杂二聚物(heterodimer)也用作对比。结果测定为给出50%抑制(IC50wt)的抑制剂浓度，nmole/l。
对double突变种试验(dm)，将A17 RT用于试验。如Nunberg，J.H.等在J.Virol，65，4887(1991)中所述，A17RT对多种氨基吡啶酮是抗性的。结果被测定为IC50dm，nmole/l。
细胞传布试验按照Nunberg，J.H.等在J.Virol.65，4887(1991)中所述测量在细胞培养物中HIV传布的抑制。在此测定中，使用予先确定的接种物用HIV-1感染MT-4 T-淋巴细胞，(Wildtype，除非另有指示)将培养物培养24小时。此时，≤1%的这种细胞通过间接免疫荧光呈阳性。然后将细胞彻底清洗并分配在96阱培养皿中，将抑制剂的序列的两倍稀释液加入阱中，再继续培养3天。在感染后第四天在对照培养物中的细胞100%被感染。HIV-1 p24累积与病毒扩散直接有关。细胞培养抑制剂浓度定义为抑制剂浓度(nmole/l)，它降低感染扩散至少95%，或CIC95。
化合物37.2结果摘要A.逆转录酶试验和细胞传布试验WT K103N* Y181C DM RT-2IC50(μM) 0.02 0.030 0.008 0.085 80.8CIC95(μM) ＜0.006(N=2) 0.100 ＜0.025 0.400 N.D.
蛋白质结合98.0%正常人血浆(HPLC方法)＊突变体K103N和Y181C是HIV-1逆转录酶的抗药。DM是两次突变体，如在逆转录酶试验中所述。RT-2是HIV的逆转录酶。
协同效果A制备HIV感染的MT-4细胞悬浮液使MT细胞，于0日，浓度为250000/ml时，用Ⅲb种的HIV-1菌株的1∶1000的稀释液感染(最终125pg p24/ml;足以产生于第1日≤1%的感染细胞，于第4日25-100%)。细胞被感染并于下述介质中生长RPMI 1640(Whittaker Bioproducts)，10%减活牛胎儿血清，4mM谷氨酰胺(Gibco Labs)和1∶100青霉素-链霉素(Gibco Labs)。
于37℃，5%CO2气氛中培养该混合物过夜。
B.用抑制剂处理制备配对抑制剂结合(见表S)的毫微摩尔范围浓度的基质。于第1天，将125μl抑制剂的等分试样加入在96阱微滴度细胞培养板中的等体积HIV-感染的MT-4细胞(每阱50000)中。于37℃在5%CO2气氛中继续培养3天。
C.测量病毒传布用多道移液管管理器重新悬浮沉淀了的细胞，采集125μl放入分离的微滴度板。对上清液进行HIV p24抗原测定。
按下述，通过酶免疫试验测量HIV p24抗原浓度。将要测量p24抗原的等分试样加到用对HIV核抗原的特异单克隆抗体涂复的微阱中。于此时，和于后续的其他合适的步骤洗涤微阱。然后加入生物素基化的HIV-的特异抗体，然后结合抗生蛋白链菌素-辣根过氧化酶。通过加入过氧化氢和四甲基联苯胺被酶作用物产生显色反应。色的强度与HIV p24抗原的浓度成正比。
协同度计算业已发现配对抑制剂结合(见表5)与各抑制剂单独相比，或与每个抑制剂仅仅加和的抑制剂相比显著提高了对病毒扩散的抑制。这样，例如，发现726和AZT的配对的结合，与726单独或AZT单独相比，或与726抑制和AZT抑制之和相比显著提高了对病毒传布的抑制。
数据整理如下按Elion等在Biol.Chem.，208，477(1954)中所述计算部分抑制剂浓度比率(FIC)。测定了各种配对抑制剂结合的最大协同的最小FICS之和。另一方面，计算了平均协同的FICS之平均和。见表S。这些结果表明病毒扩散抑制中的实际的协同，数字愈小，协同愈大。
表S配对抑制剂结合 平均协同726 ddI 0.81726 AZT 0.62736 524 0.65726 524 AZT524是L-735524。其他化合物也在上述C表中定义。
在上述说明书阐述本发明的原则时，同时提供实例其目的是为了举例说明，当然，当进入下述权利要求和其等同物范围时，本发明的实际应用包括所有一般变化，配合，或改进。
权利要求
1.式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐
其中X是卤素；X1是三卤代甲基，或五卤代乙基；Z是O；R为(a)未取代的或被A取代的C1-8烷基，A为卤素，C3-5环烷基，CN，羟基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷氨基-C1-2烷基，杂环，或芳硫基；(b)C2-4链烯基，未取代或被(i)A，或(ii)未取代或被A取代的芳基所取代；(c)C2-5炔基，未取代或被(i)A，或(ii)未取代或被A取代的芳基所取代；或(d)C3-4环烷基，未取代或被(i)A，或(ii)未取代或被A取代的芳基所取代；
2.用于抑制HIV逆转录的药物组合物，包括有效量的式Ⅱ化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体，
其中X为卤素;X1为三卤代甲基，五卤代乙基;C2-5烷基;C2-5炔基;C3-5环烷基;或芳基;Z为O或S;R为(a)C1-8烷基，未取代或被A取代，A为卤素，C3-6环烷基，CN，羟基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷基氨基-C1-2烷基，杂环，或芳硫基;(b)C2-4链烯基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;(c)C2-5炔基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代;或(d)C3-4环烷基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代。
3.一种化合物或其药学上可接受的盐，它是(-)6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，( /-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1，1，1-三氟甲基)-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，( /-)4-(1-氯-1，1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮，或( /-)4-2-[二甲基氨基甲基]乙炔基-4-三氟甲基-6-氯-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮。
4.抑制HIV逆转录酶的方法，包括对哺乳动物施以有效量的式Ⅰ或式Ⅱ或权利要求3的化合物。
5.预防HIV感染，或治疗HIV感染或治疗AIDS或ARC的方法，包括以有效量的式Ⅰ或式Ⅱ或权利要求3的化合物对哺乳动物给药。
6.用于抑制HIV逆转录酶的药物组合物，包含有效量的权利要求1，2或3的任一化合物，以及药学上可接受的载体。
7.用于预防或治疗HIV感染或治疗AIDS或ARC的药物组合物，包含有效量的式Ⅰ或式Ⅱ或权利要求3的化合物，以及药学上可接受的载体。
8.对HIV逆转录酶具有生物活性的式Ⅰ或式Ⅱ化合物与核苷类似物的组合。
9.AIDS抗病毒化合物L-743，726和L-735，524与任选的一种或多种选自L-697，661，AZT，ddI或ddC的HIV抑制剂的协同组合。
10.AIDS抗病毒化合物L-743，726和一种或多种选自L-697，661，AZT，ddI，或ddC的HIV抑制剂的协同组合。
11.合成(-)-6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-743，726)的方法，包括下列步骤(a)获得定量的( /-)-6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮(L-741，211);(b)以步骤(a)的化合物与拆分试剂缩合;(c)分离所得的非对映异构体;(d)移去拆分试剂变体得所要的化合物。
12.根据权利要求11的方法，其中拆分试剂是(-)-莰酰基氯。
全文摘要
某些苯并噁嗪酮可用于抑制HIV逆转录酶(包括其抗变性)，预防或治疗HIV感染以及治疗AIDS，提及了化合物，药学上可接受的盐，药物组合物成分，或与其它抗病毒剂，免疫调节剂，抗菌素或疫苗结合。其中也描述了治疗AIDS的方法以及预防或治疗被HIV感染的方法。
文档编号C07D413/06GK1090277SQ93117660
公开日1994年8月3日 申请日期1993年8月6日 优先权日1992年8月7日
发明者S·D·杨格, L·S·佩恩, 小·W·C·卢马, S·F·布力查, L·O·特兰 申请人:麦克公司
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