专利名称：用于抗性作物的除草剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及磺酰脲类除草剂，其适于农用的组合物以及它们的使用方法，该磺酰脲类除草剂控制不需要植物的生长并且对棉花或大豆这种含有至少一种对乙酰乳酸合酶抑制剂表现抗性的基因的植物是无害的。
有效控制不需要植物生长的新型化合物成为一种长久的需要，这不仅因为其控制所有植物的生长，还因为其在控制该植物生长的同时不伤害有用的作物。
“磺酰脲类”除草剂为在过去几年内发现的一种极有效的除草剂，其通常由一个磺酰脲桥-SO2NHCONH-连接两个芳环或芳香杂环构成。
US.4，723，990中公开了化学式如下的化合物
其中L选自Cl、F、Br;
R为H、F、Cl、Br、NO2、CF3、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基;
R1为H、F、Cl或C1-C4烷基;
R2为H或CH3;
R3为H、CH3或OCH3;
A选自
W为O或S;
X为H、Cl、Br、CH3、CH2CH3、C1-C3烷氧基、CF3、SCH3或CH2OCH3;
Y为CH3或OCH3;及Z为N、CH、CCl、CBr、CCN、CCH3、CCH2CH3、CCH2CH2Cl或CCH2CH＝CH2;
以及其适于农用的盐;条件是(1)R1为Cl时，则L为Cl或Br，而R2为H;
(2)R3为OCH3时，则R4为CH3;
(3)W为S时，则R3为H;及(4)L为F时，则R1为H、F或C1-C4烷基。
SA84/2255公开了化学式如下的化合物
其中A为C1-C6卤代烷基;
R1为氢、卤素、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚硫酰基、C1-C4烷基磺酰基、-CO-R6、-NR7R8、-CO-NR9R10或-SO2-NR11R12;
R2为氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚硫酰基、C1-C4磺酰基;
R3和R4彼此不相关，各为氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C2-C4卤代烷氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4卤代烷硫基、C2-C4烷氧基烷基、C1-C4烷氧基或-NR12R13;
R5为氢、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基;
R6为C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4烷硫基、C2-C6烷氧基烷氧基、氢、C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基;
R7、R8、R9、R10、R11、R12和R13彼此不相关。各为氢或C1-C4烷基;
E为氮或次甲基桥;且Z为氧或硫;
并且该发明还涉及这些化合物的盐，条件是A不是三氟甲基或-CRaRbRc基团，其中Ra为氢、氯或C1-C4烷基、Rb为氢或甲基且Rc为氯或溴。
US.4，394，506及US.4，592，978公开了化学式如下的化合物
其中Q为O;
R为C1-C12烷基;
R2为H、Cl、Br、F、C1-C3烷基、-NO2、-SO2CH3、-OCH3、-SCH3、-CF3、-N(CH3)2、-NH2或-CN;且
R3为H、Cl、Br、F或CH3。
US.4，478，635公开了化学式如下的化合物
其中R18为氢、烷基或烷氧基;
X为一未取代或取代的苯基或萘基基团;
Y为C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3烷硫基、C2-C3烷氧基烷基、卤素或未取代氨基;且Z为氧或硫。
本发明的化合物均未在上述参考文献中专门描述，该参考文献也未讲述这些化合物于抗除草剂作物上的潜在用途。不过，本发明的化合物在上述专利权利要求通指的范围以内。
EP-A-154，204记载了对除草剂(包括磺酰脲类)有抗性的植物、植物组织和植物种子，特别是玉米(Zea mays L.)，该除草剂通常会抑制这些植物、植物组织和植物种子的生长和发育。
Sebastian等人(Crop Science 1989，291403-1408)讲述了对磺酰脲类除草剂有抗性的大豆突变种的选择，特征及应用。对系W20做了特别讲述。
EP-A-257，993记载了有效用于产生转基因植物的核酸片段，本发明的化合物及方法可施用于该植物上。
本发明涉及选自下列化合物组的化合物2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺，3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯，及其宜于农用的盐。
为了易于合成，提高除草活性，提高作物安全性或最佳土壤吸收特性，尤其优选的化合物为2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
本发明还涉及用来控制不需要植物生长的宜于农用的组合物，该组合物含有一种本发明的化合物。
本发明还涉及一种控制不需要植物生长的方法，该方法包括，将选自下面化合物组的一种化合物施用到棉花或大豆植物上的步骤，该植物含至少一种对乙酰乳酸合酶抑制剂表现抗性的基因2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺，3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯，和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
本发明的优选方法为
1.如上面概括的方法，其中该化合物选自2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
2.按照优选1的方法，其中该化合物为2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
3.按照优选1的方法，其中的化合物为2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
4.按照上述任一方法，其中的植物是大豆。
5.按照上述任一方法，其中的植物是棉花。
6.按照优选4的方法，其中的大豆植物含有AlsI基因。
7.按照优选6的方法，其中的大豆植物选自W20和W4-4系或其衍生物。
8.按照优选7的方法，其中的大豆为W20。
9.按照优选7的方法，其中的大豆为W4-4。
10.按照优选7的方法，其中的衍生物为衍生于含有W20系作为亲本杂交的大豆植物。
11.按照优选7的方法，其中的衍生物为衍生于含有W4-4系作为亲本杂交的大豆植物。
12.按照优选5的方法，其中的棉花植物选自19-51A、19-58b、19-58c、19-94、19-114a、19-114b、20-10、25-2、25-5、20-32、25-1、B6D4a系及其衍生物。
13.按照优选12的方法，其中的棉花为19-51a。
14.按照优选12的方法，其中的棉花为B6D-4a。
15.按照优选12的方法，其中的棉花为20-10。
16.按照优选12的方法，其中的棉花为25-2。
17.按照优选12的方法，其中的棉花为25-5。
18.按照优选12的方法，其中的棉花衍生于19-51a。
19.按照优选12的方法，其中的棉花衍生于B6D-4a。
20.按照优选12的方法，其中的棉花衍生于20-10。
21.按照优选12的方法，其中的棉花衍生于25-2。
22.按照优选12的方法，其中的棉花衍生于25-5。
合成根据以下给出的具体的合成实例，本领域普通技术人员便可制备本发明的化合物。
用于本发明的嘧啶氨基甲酸酯的制备如EP-A-44，807、EP-A-72，347、EP-A-173，498、US.4，666，506中所述，结合入本文。
2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯(化合物3)的制备如US.4，478，635所讲述，结合入本文。
本发明化合物(化合物1-3)的适于农用的盐也可作为有效的除草剂并可以本领域公知的数种方式制备。例如，通过将本发明的化合物(化合物1-3)与具有足够碱性阴离子(如氢氧化物、醇盐、碳酸盐或氢化物)的碱金属或碱土金属盐的溶液相接触，便可制成金属盐。采用类似的技术可制备季铵盐。
本发明化合物(化合物1-3)的盐还可通过互换阳离子而制备。通过将本发明化合物(化合物1-3)的盐(如碱金属盐或季铵盐)的水溶液与一含待交换的阳离子的溶液直接接触便可有效地进行阳离子交换。当含有交换阳离子的所要求的盐不溶于水并可过滤分离时，这一方法最为有效。
将本发明化合物(化合物1-3)的盐(如碱金属盐或季铵盐)的水溶液流经一装填了阳离子交换树脂(含有欲与原始盐交换的阳离子)的交换柱也可有效进行离子交换，所需要的产物从交换柱中洗脱。当所要求的盐为水溶性(如，钾、钠或钙盐)时，这一方法尤其有效。
将本发明的化合物(化合物1-3)与适宜的酸(如对甲苯磺酸、三氯乙酸等等)反应便可获得有效用于本发明的酸式盐。
温度以摄氏度计录。核磁共振(NMR)的缩写表示为s-单峰、d-双峰、t-三重峰、m-多重峰、brs-宽单峰、NMR峰的位置是由内标的四甲基硅烷低场以百万分数来表达。红外(IR)峰的位置以厘米的倒数(cm-1)给出。
表1
化合物 R1R2R3R4E1 Cl CHFCH3CH3OCH3N2 Cl C(O)OCH(CH3)2CH3CH3CH3 H C(O)OCH3OCF2H OCF2H CH化合物1的合成2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺(A)3-氯-2-苯基甲基苯甲硫醛在室温下向170ml二甲基甲酰胺(DMF)中的叔丁氧钾(32g)悬浮体加入苄硫醇(34ml)，同时维持温度在20℃。将反应混合物再搅拌1小时，然后分批加入2，3-二氯苯甲醛(50g)。使反应在室温下搅拌过夜，然后倒入过量的水/冰中。收集固体并在空气中干燥，获得40g标题化合物，熔点68-70°。
90MHz NMR(CDCl3)δ4.00(S，2H，CH2);
6.80-7.40(m，6H，芳族);
7.70(d，2H，芳族);和10.25(S，1H，醛)。
(B)3-氯-α-甲基-2-苯基甲基硫代苯甲醇在0°下向670ml四氢呋喃(THF)中含3-氯-2-苯基甲基苯甲硫醛(53g)的溶液中一滴滴地加入78.7ml2.7M的溴化甲基镁溶液。使反应在室温下进行并搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机相经硫酸镁干燥、过滤并浓缩从而获得适用于下一步反应的55g油。
90MHz NMR(CDCl3)δ1.20(d，3H，CH3);
1.50(brs，1H，OH);
4.00(s，2H，苄基);
1.12(q，1H);和6.85-7.55(m，8H，芳族)。
(C)3-氯-2-苯基甲硫基-(1-氟乙基)苯在-78°下向80ml二氯甲烷中含三氟化二乙氨基硫(10.3ml)的溶液中一滴滴地加入溶于最少量二氯甲烷中的3-氯-α-甲基-2-苯基甲硫基苯甲醇(23g)溶液。使反应慢慢升到室温然后倒到冰上。用过量的二氯甲烷萃取水相并将复合的有机相经硫酸镁干燥、过滤并浓缩以获得橙色油。在硅胶(用2%乙酸乙酯/己烷洗脱)上用柱色谱法产生16.41g呈浅黄色油状的标题化合物。
90MHz NMR(CDCl3)δ1.50(dd，3H，CH3);
4.15(s，2H，苄基);
6.05(dd，1H，苄基-H);和7.13-7.75(m，8H，芳族)。
(D)2-氯-6-(1-氟乙基)苯磺酰胺在-10°下向在45ml丙酸和1.5ml水的混合体中含8.0g3-氯-2-苯基甲硫基-(1-氟乙基)苯的溶液中加入5.2ml液态氯。再将反应搅拌30分钟然后倒入冰/水混合物。将水相用正丁基氯萃取并将复合有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩以得到油。将粗磺酰氯溶解在100mlTHF中，冷至-78°并用1.6ml液态无水氨处理。使反应慢慢升至室温并搅拌过夜。经过滤除去固体然后浓缩得到粗氨磺酰。自乙醇/水中再结晶产出2.7g呈白色固体状的标题化合物，熔点151-153°200MHz NMR(CDCl3)δ1.55(dd，3H，CH3);
6.40-6.55(m，2.5H，NH2和CHF);
6.76(q，0.5H，CHF);
7.40(d，2H，芳族);和7.58(t，1H，芳族)。
(E)2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺在室温下向5.0ml乙腈中含0.24g2-氯-6-(1-氟乙基)苯磺酰胺和0.26gO-苯基-N-(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基甲酸酯的溶液中加入1，8-二氮杂二环〔5.4.0〕十一-7-烯(0.15ml)。室温下再搅拌反应1小时，然后用水(5.0ml)稀释并用1N盐酸酸化至PH为4。过滤收集所得沉淀物，用水洗涤并干燥便获得0.23g呈白色固体的标题化合物，熔点181-183°。
200MHz NMR(CDCl3)δ1.68(dd，3H，CH3);
2.45(s，3H，CH3);
3.96(s，3H，OCH3);
6.76(dd，1H，CHF);和7.6-7.82(m，3H，芳族)。
化合物2的合成3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯(1)2-丙基-3-氯-2-硝基苯甲酸酯向在300ml2-丙醇中含10.582g(52.5mmol)商品3-氯-2-硝基苯甲酸的溶液中装入45ml浓缩H2SO4，并将所得混合物回流加热3.75天。该反应容器装配有一蒸馏头，且大约有150ml2-丙醇自该反应混合物中馏出。将剩余的反应混合物慢慢倒入300ml饱和NaHCO3(水溶液)中。伴随着约5gNaOH(使含水层保持碱性)和一些用来降温的冰加入二氯甲烷(100ml)。
各层分离，并用3×80ml二氯甲烷萃取水液层。将复合的有机体用150ml水和150ml盐水萃取，并干燥(MgSO4)和浓缩以获得9.28g(73%)的呈浅橙色液体的标题化合物。
NMR δ1.33(d，6H，J＝7.5Hz);
5.19(七重峰，1H，J＝7.5Hz);
7.5-7.77(m，2H);和7.95(dd，1H，J＝2.0，7.5H)(2)2-苯基甲硫基-3-氯苯甲酸二丙酯向500ml配备有温度计，氮气入口隔膜和磁性搅拌棒的三颈圆底烧瓶中装入含在矿物油(13.1mmol，1.6当量)中的1.505g35%氢化钾悬浮液，并将其溶解于30ml无水THF中。将所得混合物冷至-20°，然后用注射管加入1.25ml苄硫醇(10.7mmol，1.3当量)。使所得混合物回升至10°，搅拌1小时，然后冷至-12°。通过滴液漏斗向所得的白色浆体中加入含在总量9.5ml THF中的2.000g3-氯-2-硝基苯甲酸2-丙酯(8.21mmol)溶液，便获得褐色浆体。将该浆体回升至室温并搅拌20小时。
将反应混合物倒入100ml6N NaOH(水溶液)和盐水1∶1的混合体中，并用乙酸乙酯萃取三次。用盐水萃取该复合有机相，干燥(MgSO4)并浓缩获得5.04g透明的浅褐色液体。
将粗产物在二氧化硅(20%丙酮/己烷)上色谱分析，获得两种馏分馏分1122mg橙色固体，由1H-NMR表明没有2-丙酯，未进一步研究。
馏分22.07g(79%)呈橙色油状的标题化合物NMR δ1.38(d，6H，J＝7.5Hz);
4.10(s，2H);
5.20(m，1H);
7.25(s，5H);和7.1-7.7(m，3H)。
(3)3-氯-1-(2-丙氧基羰基)苯基-2-磺酰氯向配有机械搅拌器、滴液漏斗、温度计和塞子的1-L四颈圆底烧瓶中装入8.857g含在总量200ml二氯甲烷中的2-苯基甲硫基-3-氯苯甲酸2-丙酯(27.6mmol)、55ml水和8ml浓缩盐酸，并将所得混合物在冰/水/NaCl浴中冷却至约0°。持续45分钟向此混合物中慢慢加入130ml商品Clorox 漂白剂(91mmol，3.3当量)，同时保持温度在0-5°。添加完毕后于0°接着再搅拌1.5小时。
各层分离，将水液层用2×50ml二氯甲烷萃取，将该复合有机物用150ml盐水萃取，干燥(MgSO4)并浓缩获得11.81g金色液体。
将粗产物在300g二氧化硅(10%丙酮/石油醚，提高到15%、20%、33%)上色谱分析，获得7.824g(95%)的呈黄色透明液体的标题化合物NMR δ1.39(d，6H，J＝7.5Hz);
5.28(七重峰，1H，J＝7.5Hz);
7.4-7.65(m，1H);和7.65-7.82(m，2H)。
(4)3-氯-1-(2-丙氧基羰基)苯基-2-氨磺酰将在60ml乙腈中含2.100g3-氯-1-(2-丙氧基羰基)苯基-2-磺酰氯(7.07mmol)的溶液在冷水浴中冷却并通过玻璃吸移管向该溶液的表面上充以气态NH3的缓气流。用薄层色谱法(TLC)监测反应进程，且当判定反应完全时，真空过滤所得悬浮液，并将滤饼用另外的乙腈漂洗。浓缩该乙腈溶液，产出1.912g(97%)的呈浅米色固体的标题化合物，熔点155-158°NMR δ1.33(d，6H，J＝7.5Hz);
5.19(七重峰，1H，J＝7.5Hz);
6.90(brs，2H);
7.35-7.55(m，1H);和7.65-7.8(m，2H)。
(5)3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)-氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯将在30ml无水乙腈中含602mg3-氯-1-(2-丙氧基羰基)苯基-2-氨磺酰(2.17mmol)和539mg N-(苯氧基羰基)-2-氨基-4，6-二甲基嘧啶(2.22mmol，1.02当量)的溶液在冷水浴中冷却并用注射管注入340μl1，8-二氮杂二环〔5.4.0〕癸-7-烯(2.27mmol，2.27当量)，将所得溶液在室温下搅拌3小时，在该时间，TLC指示缺少起始物质。
将反应混合物一滴滴地加到250ml水和一些冰的充分搅拌的混合体中。添加完毕时，使急冷的混合物在冰/水浴中冷却并用1N HCl(水溶液)处理至PH2-3，获得沉淀。将此悬浮体真空过滤并将所得固体在真空中干燥，得到898mg呈白色固体的粗级磺酰脲。
将450mg部分此产物在30g二氧化硅上以20%提高到30%和40%的丙酮/石油醚作色谱分析，产出209mg呈非常粘的清油状标题化合物。
NMR δ1.34(d，6H，J＝7.5Hz);
1.83(brs，1H);
2.46(s，6H);
5.20(七重峰，1H，J＝7.5Hz);
6.96(s，1H);
7.4-7.7(m，3H);和9.48(brs，1H)。
将此产物溶于2ml乙腈并一滴滴地加到20ml冷却的0.1N HCl(水溶液)中。将所得悬浮液过滤，并将固体于真空中干燥，产出173mg标题化合物，熔点158-160°。
如上所述，将剩余285mg粗级磺酰脲色谱分析并再度沉淀，产出252mg呈白色固体的标题化合物，熔点155-156°。〔共产出425mg(46%)〕。
配方本发明化合物的有效配方可用常规方式来制备。其包括粉剂、粒剂、片剂、溶液、悬浮液、乳剂、可湿性粉剂、可乳化浓缩物等等。其中许多可以直接使用。可将可喷洒的配方掺合在适宜的介质中并以每公顷数升到数百升的喷洒量使用。高强组合物主要用作下一步配制的中间体。广意地讲，配方含有约0.1%-99%(重量)的活性成分以及至少一种(a)约0.1%-20%的表面活性剂和(b)约1%-99.9%的固体或液体惰性稀释剂。具体讲，其含有的这些成分占以下近似比例重量百分比＊活性成分 稀释剂 表面活性剂可湿性粉剂 20-90 0-74 1-10油悬浮液、乳剂、溶液 3-50 40-95 0-15(包括可乳化浓缩物)水悬浮液 10-50 40-84 1-20粉剂 1-25 70-99 0-5
重量百分比活性成分 稀释剂 表面活性剂粒剂或片剂 0.1-95 5-99.9 0-15高强组合物 90-99 0-10 0-2＊活性成分加至少一种表面活性剂或稀释剂等于100%(重量)。
当然，根据使用需求及化合物的物理性能，活性成分的含量可以较低或较高。有时希望表面活性剂/活性成分的比率较高，这可通过向配方中掺混或罐混来实现。
典型的固体稀释剂见Watkins等人于“Handbook of Insecticide Dust Diluents and Carriers”，2nd Ed.，Dorland Books，Caldwell，New Jersey中所述，但其它固体，开采的或加工的均可使用。对可湿性粉剂较佳为吸收性更好的稀释剂，而对粉剂较佳为更致密的稀释剂。典型的液体稀释剂和溶剂见Marsden，“Solvents Guide，”2nd Ed.，Interscience，New York，1950中所述。对悬浮浓缩物来说，溶解度低于0.1%较佳;溶液浓缩物在0℃最好是稳定的，即不发生相分离。“McCutcheon′s Detergents and Emulsifiers Annual”，MC Publishing Corp.，Ridgewood，New Jersey，以及Sisely and Wood，“Encyclopedia of Surface Active Agents”，Chemical Publishing Co.，Inc.，New York.1964中列出了一些表面活性剂及推荐的使用。所有配方都可含少量添加剂来降低起泡、结块、腐蚀、微生物生长等等。
制造这类组合物的方法是公知的。溶液可通过简单地混合各成分制备。细散固体组合物通过掺合并通常在锤式或流能磨机中研磨制备。悬浮液通过湿磨制备(见，如Litter U.S.Patent 3，060，084)。粒剂或片剂可通过向预成形的粒剂载体喷洒活性物质或采用附聚技术制备，见J.E.Browning，“Agglome-ration”，Chemical Engineering，December 4，1967，pp.147ff.和“Perry′s Chemical Engineer′s Handbook”，5th Ed.，McGraw-Hill，New York，1963，pp.8-57ff。
关于配制技术的进一步说明见下例H.M.Loux的美国专利3，235，361，1966年2月15日，第6栏16行到第7栏19行以及实施例10-41;
R.W.Luckenbaugh的美国专利3，309，192，1967年3月14日，第5栏43行到第7栏62行以及实施例8、12、15、39、41、52、53、58、132、138-140、162-164、166、167和169-182;
H.Gysin和E.Knusli的美国专利2，891，855，1959年6月23日，第3栏66行到第5栏17行以及实施例1-4;
G.C.Klingman的“Weed Control as a Science”，John Wiley and Sons，Inc.，New York，1961，pp81-96;和J.D.Fryer和S.A.Evans的“Weed Control Handbook”，5th Ed.，Blackwell ScientificPublications，Oxford，1968，pp101-103。
在下面实施例中，除另有说明，所有分数以重量计。
实施例A高强浓缩物2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 99%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺三甲基壬基聚乙二醇醚 1%在掺和机中将表面活性剂喷涂在活性组分上并在包装前使混合物通过U.S.S.No.40筛(0.42mm筛孔)筛分。为了实用，可进一步配制该浓缩物。
实施例B可湿性粉剂2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 65%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺十二烷基苯基聚乙二醇醚 2%木素磺酸钠 4%硅铝酸钠 6%蒙脱石(煅烧过) 23%将这些组分全部掺合。在掺和机中将液体表面活性剂通过喷洒到固体组分上而加入。在锤磨机中研磨后产出基本上均低于100μm的颗粒，将这些物料再掺合并通过U.S.S.No.50筛(0.3mm筛孔)筛分，而后包装。
实施例C水悬浮液2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 50.0%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺聚丙烯酸增稠剂 0.3%十二烷基苯基聚乙二醇醚 0.5%磷酸二钠 1%磷酸一钠 0.5%聚乙烯醇 1.0%水 56.7%在砂磨机中将各组分，一起掺合并研磨，产出尺寸基本均小于5μm的颗粒。
实施例D油悬浮液2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 35%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺聚醇羧酸酯和油溶性石油磺酸盐的掺合物 6%二甲苯 59%在砂磨机中将上述组分一起混合并研磨以产生基本上均小于3μm的颗粒。该产物可直接使用，也可用油掺合后或在水中乳化后使用。
实施例E油悬浮液
2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 25%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺聚氧乙烯山梨醇六油酸盐 5%高脂族烃油 70%在砂磨机中将上述组分一起研磨直至该固体颗粒细至5μm以下，所得的稠悬浮液可直接使用，但优选是用油掺合后或在水中乳化后使用。
实施例F水悬浮液2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 25%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺水合硅镁土 3%粗级木素磺酸钙 10%磷酸二氢钠 0.5%水 61.5%在球磨机或辊磨机中将上述组分一起研磨，直至固体颗粒磨细到其直径小于10微米。
实施例G可湿性粉剂2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 40.0%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺二辛基磺基琥珀酸钠 1.5%木素磺酸钠 3%低粘性甲基纤维素 1.5%硅镁土 54%将上述组分充分掺合并经空气研磨机研磨以使其平均颗粒尺寸小于15微米，再次掺合，在包装以前用U.S.S.No.50的筛子(0.3mm孔)过筛。
本发明的所有化合物均可以此方式配制。
实施例H粒剂实施例G的可湿性粉剂 15%石膏 69%硫酸钾 16%在旋转混合器中掺合上述组分，并用水喷洒以完成造粒过程。当大部分原料的粒度达到所要求的1.0至0.42cm范围(U.S.S.＃18至40筛)时，将粒剂取出、干燥并过筛。将超尺寸原料粉碎以得到所要求范围内的更多的原料。这些粒剂含有%活性组分。
实施例I可湿性粉剂2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 50%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺烷基萘磺酸钠 2%低粘性甲基纤维素 2%
硅藻土 46%将这些组分掺合，粗略锤磨并气磨以产生直径基本均低于10μm的活性颗粒。将产品再掺合而后包装。
实施例J挤压片剂2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 25%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺无水硫酸钠 10%粗级木素磺酸钙 5%烷基萘磺酸钠 1%钙/镁膨润土 59%将这些组分掺合、锤磨并随后用约12%的水润湿。将此混合物挤塑成约3mm直径的圆条，切分该圆条以制成约3mm长的片剂。这些片剂可在干燥后直接使用，或将干燥的片剂粉碎通过U.S.S.No.20筛(0.84mm筛孔)后使用。于U.S.S.No.40筛(0.42mm筛孔)之上的颗粒可包装使用，而细碎者则再循环使用。
实施例K可湿性粉剂2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 80%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺烷基萘磺酸钠 2%
木素磺酸钠 2%合成的非晶形二氧化硅 3%高岭石 13%将上述组分在锤磨机中掺合并研磨以得到具有平均颗粒直径小于25μm的颗粒。在包装之前将该原料再次掺合并用U.S.S.No.50的筛子(0.3mm孔)过筛。
实施例L高强浓缩物2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 98.5%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺硅补强剂 0.5%合成的非晶形细二氧化硅 1.0%在锤磨机中将上述组分掺合并研磨以得到基本上均能通过U.S.S.No.50筛(0.3mm孔)的高强浓缩物。该物料以后可以多种方式进行配制。
实施例M溶液2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 5%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺，钠盐水 95%伴随搅拌将该盐直接加入水中以得到溶液，其随后可包装而使用。
用途本发明的化合物为高活性除草剂，可用于对阔叶草和青草(通常蔓延于大豆和棉花地里)萌发前和/或萌发后控制。因为本发明的化合物所需使用率低，其活性范围宽(尤其是对以阔叶杂草为主的)，和/或其良好的土壤分散率，因而是有价值的。本发明化合物的特别价值在于含有至少一种对乙酰乳酸合酶表现抗性的基因的大豆和棉花植物对其有选择的耐受性。该化合物也可类似地用于那些为了产生作物耐药性而经过“基因变异”的其它作物，例如，公开于EP-A-154204中的那些作物，特别是玉米(Zea mays L.)。
试验说明将以下品种的种子种于砂壤土中并用溶于无植物毒性溶剂中的试验化学药品(表1的化合物)进行萌发前处理，这些植物品种是基因变异大豆(Glycine max)的W20和W4-4系、基因变异棉花(Gossypium birsutum)的B6D-4a、19-51a和20-10系、Pioneer3377EX玉米(Zea mays L.)、苍耳(Xanthium pensylvanicum)、牵牛花(Ipomoea hederacea)、苘麻(Abutilon theophrasti)、稗(Echinochloa crus-galli)、约翰逊草(Sorghum halepense)和孤尾状植物(Setaria faberii)。经喷药后，该土壤表面用水喷淋以模拟下雨。该处理的植物和控制作用在温室中保持约4周，然后将所有物种与未经处理控制的相比较，并用眼睛来评定。上述物种也种于盆栽混合土中并在温室中生长两周至1-3叶阶段，然后在萌发后喷药。在喷药后，该植物在温室中保持约3周，而后用眼睛评定。该植物的反应级别总结于表A和表B中，这些级别基于0到10这一范围内，其中0表示无效果，10表示完全控制。一划(一)反应级别表示无试验结果。棉花20-10系的5个分别的植物的反应值在表B中记为(1)、(2)、(3)、(4)和(5)，这是因为该系是除草剂抗性的R1种群分离。基于这样一种假设，即那些显示无效的植物则带有表现抗性的基因而那些被杀伤的植物则带有很少或不带有表观抗性基因，将经各种处理级别的关于20-10系的植物反应从最低至最高排列。
表A萌发前处理用量 大豆 约翰 巨孤尾化合物 G/HA W20 苍耳 牵牛花 苘麻 稗 逊草 状植物1 4 - 7 9 8 10 10 51 16 0 9 10 10 10 10 91 32 - 10 10 10 10 10 101 64 3 - - - - - -1 125 5 - - - - - -2 4 - 8 2 0 9 10 62 16 0 9 9 8 10 10 62 32 - 9 10 9 10 10 102 64 0 - - - - - -2 125 3 - - - - - -3 31 0 9 8 9 - 10 63 62 0 9 9 10 - 10 103 125 0 10 9 10 - 10 103 250 0 10 10 10 - 10 10
萌发后处理用量 大豆 约翰 巨孤尾化合物 G/HA W20 苍耳 牵牛花 苘麻 稗 逊草 状植物1 1 0 7 6 6 6 6 -1 2 2 10 10 8 7 9 -1 4 4 10 10 10 10 10 -1 8 5 10 7 6 - 10 51 16 7 10 10 10 - 10 81 31 9 10 10 10 - 10 102 1 0 9 5 3 0 5 -2 2 0 10 6 7 5 7 -2 4 0 10 7 10 6 10 -2 8 2 10 10 10 7 10 -3 16 1 10 5 6 - 10 53 31 2 10 5 9 - 10 63 62 7 10 8 10 - 10 73 125 7 10 9 10 - 10 10
除草剂抗性植物大豆特别适用于本发明方法的植物包括大豆和棉花植物，它们含有至少一种对乙酰乳酸合酶抑制剂表现抗性的基因。这类植物中所包括的有以Budapest Treaty名义寄存于American Type Culture Collection，Rockville，MD中并且寄存号分别为40467和40650的大豆W20和W4-4系。另外，大豆W20系的制备已有Sebastian等人描述〔(1989)Crop Sci.29∶1403-1408〕。这两个系都含有Als1基因。
通过用常规的育种方法可将该Als1等位基因由大豆W20系转移到其它系。由于Als1是单一半显性等位基因〔Sebastian etal(1959)Crop Sci 29∶1403-1408〕，抗性分离是非常易于预测的。例如，当用对磺酰脲类除草剂敏感的大豆系杂交W20时，F2后代则分离产生约1/4纯合抗性型1/2杂合中间型1/4纯合敏感型。可用Sebastian等人所述的溶液培养方法〔(1986)Crop Sci.29∶1403-1408〕或用下面的方法之一将这三种分离类型区分开。下面这些方法是浸种筛选-该方法理想地是用于温室筛选，但也可用于田间种植。将种子(如，F2种群)置于用1mg/l chlorsulfuron(2-氯-N-〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基羰基〕苯磺酰胺)水溶液浸湿的发芽纸上。使种子吸收该除草剂溶液过夜(至少12至16小时)。然后将种子从发芽纸上移开并用水短时喷淋以去除外露的除草剂。没有完全吸涨的种子必需弃除，因为硬种子将成为“漏验的种子(escape)”，这是由于它们没有吸收除草剂。然后将吸涨的种子种植于温室或田地并浇水以防止晒干。一周内，存活的种子将出苗。然而，对于敏感的籽苗除了子叶的长大外没有任何的发育。纯合抗性的籽苗生长正常。杂合型会有褶皱的具一小叶的叶子但最终将复原并正常生长。在种植后的14到21天，任何一种不需要的分离子(如果需要包括杂合体)都可被弃除。为了种子纯化的目的，较合适的是将所有不想要的植物弃除，有时，某些敏感植物也会有微弱复原并结出少量的种子。如果可能，使用纯合抗性植物以继续下一步的回交循环。如果推断纯合子将被结合以形成不分离种系则进行后代测验是较合适的。
小范围的萌发后筛选-该方法理想地是用于筛选已经发芽的植物。该方法可用于温室和小块试验田。所推荐的除草剂用量已给出。然而，给定的基因型损伤可有某些变化，这取决于植物喷药的持续程度。
籽苗生长直至第一个具三小叶完全长开。制备含有0.2ml/lX-77
(或类似的润湿剂)的5mg/l chlorsulfu-ron溶液，并用手持喷雾器喷药直至药液在植物叶子上流溢。在10-14天内，敏感的大豆植物将被严重损伤并濒于死。损伤出现的形式是顶芽死亡且叶脉变红随后叶子枯死。纯合抗性植物将不受到影响或仅仅是轻微矮化。杂合植物根据其中间性反应可以区分出来。处理14天后，可将死亡的或濒于死亡的植物弃除。选择长相最好的植物，该植物通常确认为纯合抗性体。不过，为了确认，应进行后代测验。
为了筛选那些仅出现杂合抗性和纯合敏感性植物的回交后代，在萌发后筛选中应使用较低用量的chlorsulfuron(如2mg/l)。较低用量的chlorsulfuron也将杀死敏感植物而将杂合体以较好状态保留下来以用于杂交或繁殖。
萌发后大田筛选-该方法理想地用于大田条件下的大量种群的筛选。该筛选是有效的，但可能会产生某些“漏验种”，这取决于种植的密度并取决于喷药覆盖度的大小。除非可允许少量的“漏验种”，否则不推荐使用这种筛选方法。
以不超过每呎6-8粒种子种殖大豆，由于遮光，较近的间距增加“漏验种”的可能性。在第二个具三小叶阶段，用8g/ha的chlorsulfuron给大田喷药。将润湿剂例如X-77 以2.5ml/l喷药液的量加入。喷药量为187l/ha。为了有良好的覆盖度，使用Spraying Systems，Inc.的8002平扇喷嘴，使用喷嘴时要在40psi下，根据制造商为了达到良好的除草剂覆盖度而做的推荐(约19-21呎的间隔)设置间距。处理后的14-21天，敏感性植物将受到严重损伤或死亡。杂合植物也在某种程度上损伤，但仍能复原。所有不合需要的分离子应被弃除以保证它们将不复原。最低程度损伤的植物极大可能地是抗性纯合体。
Als1基因可从W4-4系中转移到其它大豆系中。当源于杂交W4-4X A3205(一种敏感品种)的F2种群用100mg/l chlorsulfuron进行溶液培养筛选时〔如Sebastian等人(1989)于Crop Sci.29∶1403-1408中所描述的〕，164个F2植物中的10个(约1/16的F2)是完全敏感于chlorsulfuron的。这表明该W4-4具有两种对磺酰脲有耐受性的基因。该试验(伴随附加试验)表明W4-4对于Als1和另一个半显基因(Als2)两者都是纯合的，其中半显基因(Als2)的分离与Als1无关。Als2影响乙酰乳酸合酶对磺酰脲除草剂(例如chlorsulfuron)的抗性，但仍处于与Als1无关的第二位。
基于此二基因遗传模式的知识，使得本技术领域普通技术人员可以预测抗性育种。可通过用敏感大豆系杂交W4-4然后筛选抗性的分离种群(例如F2)来完成两个抗性基因从W4-4向其他大豆系的转移。源自敏感杂交W4-4X的F2植物分离出1/16纯合敏感性14/16中间性(各种杂合体的混合)1/16纯合抗性。当筛选这种F2种群时，需要选择一个能鉴别对Als1和Als2都纯合的植物的杂交处理。这可通过以下方法来完成将种群(例如F2种群)放在一个可浸的网袋中。将该袋浸没在2mg/l 2-〔〔〔〔(4，6-二甲氧基-2-嘧啶基)氨基-羰基〕氨基〕磺酰基〕-3-吡啶羧酸甲酯(EP-A-314，302)的水溶液中并浸泡16小时。通过使用由标准水池式泵供气的“通气石”(air-stone)”而将该溶液保持在连续通气状态。在该浸泡期间内，该种子吸收水和溶解的除草剂。浸泡期之后，将种子浸于自来水中2分钟以去除外露的除草剂溶液。然后通过将泥炭基土壤混合物填充温室用的板台而制作一个种植床。通过用平板刮过该混合物表面而将该土壤混合物铺成7cm厚的平面。种植之前，通过用自来水喷洒其上表面而将该7cm厚的土壤混合物湿润透。过量的水可排走。然后将杂交处理的种子以约每平方米12，000粒种子的密度单一水平层地移植于水平种植床上。然后用2.5cm厚的一层粗蛭石覆盖在种子上。通过定期地用自来水在种植介质上表面喷淋而使所述的种植介质保持湿润。种植后约8天，存活的种子就发芽、出苗并生长子叶。然而，只有与Als1和Als2都纯合的植物才能长出正常的叶子。敏感植物将会根本不长叶子或长出皱折的、变形的叶子。
棉花下面是用于制备转基因棉花系(例如19-51a、B6D-4a、20-10、25-2和25-5系)的步骤，在其中本文权利要求的化合物和方法特别有用。对选择用来引发编码序列表达的原始启动子并不严格要求，只要它具有充分的转录活性，以完成在棉花中乙酰乳酸合酶的磺酰脲抗性形式的表达。优选的用于表达的启动子(除了天然烟草乙酰乳酸合酶启动子外)包括在Cauliflower Mosaic Virus〔Odell et al.(1985)Nature 313∶810-812;Hull et al(1987)Virology 86∶482-493〕中，在1，5-双磷酸核酮糖羧基酶的小亚基〔Morelli et al.(1985)Nature 315∶200;Broglie et al.(1984)Science 224∶838;Hererra-Estrella et al.(1984)Nature 310∶115;Coruzzi et al.(1984)EMBO J.3∶1671;Faciotti et al.(1985)Bio/Technology 3∶241〕中和在叶绿素a/b结合蛋白质〔Lampa et al.(1986)Nature 316∶750-752〕中引导19S和35S转录本的那些启动子。编码乙酰乳酸合酶的突变体形式(对磺酰脲除草剂为抗性)并因此而用于这些转换中的基因公开在EP-A-257，993中。特别指出的是SURB-S4、SURA-C3和SURB-Hra基因。另外，Lee等人(EMBO J.1988，7∶1241-1248)也描述了源自烟草(Nicotiana tabacum)的SURB-Hra和SURA-C3乙酸乳酸合酶基因的克隆，描述了对决定着磺酰脲耐受性的核苷酸变化的鉴别方法以及载有这些基因的Agrobacterium菌株的构建。带有其天然烟草启动子的SURB-Hra基因可用于棉花B6D-4a系的制备过程，棉花B6D-4a系可采用本发明的化合物和方法。Hartnett等人(ACS Symposium Series No.421，M.B.Green，W.K.Moberg and H.LeBaron，Eds.1990。American Chemical Society，PP459-473)描述了编码乙酰乳酸合酶(对除草剂为抗性)的嵌合烟草基因的构建，该基因抑制酶的正常形成。
由Hartnett等人所指出的嵌合的Hra ALS基因连同其天然烟草启动子被用于棉花系19-51a、19-58b、19-58c、19-94、19-114a、19-114b的制备过程，这些棉花系可采用本发明的化合物和方法。Odell等人(Plant Physiol。1990，94∶1647-1654)描述了该Cauliflower Mosaic Virus 35S启动子调节乙酰乳酸合酶基因在转基因植物中表达的用途。由Hartnett等人所指出的该嵌合烟草Hra ALS基因的天然烟草启动子已被Cauliflower Mosaic Virus 35S启动子所代替，并且这种构建被用于棉花系20-10和20-32的制备过程，这些棉花系可采用本发明的化合物和方法。
通过结合源自SURA和SURB基因(EP-A-257，993)的DNA片段而构建该嵌合C3基因。另外，用部份Cauliflower Mosaic Virus 35S启动子来代替该天然烟草启动子以形成35H基因。该SURA基因(仅具有5′未编码DNA所包括的4个碱基对)被亚克隆到PUC119中，然后将0.42kb Cauliflower Mosaic Virus 35S启动子片段连接在正好在乙酰乳酸合酶起始编码上游的限制性位点上。通过位点定向诱变而将类似于C3突变(EP-A-257，993)的突变引入到SURB基因中。最后，源于这种变异基因的限制性片段被亚克隆到35S-SURA基因中。将该突变引入这种基因中产生了在氨基酸191位置的脯氨酸向谷氨酰胺的替换。该35H嵌合基因被用于棉花系25-1、25-2和25-5的制备过程，对这些棉花系可采用本发明的化合物和方法。
胚轴转化A.Agrobacterium生长。Agrobacterium的培养物在带有适宜的可选择性抗生素的Minimal A Medium(见下面)中生长过夜并由单菌落(从新鲜划线)开始。转化的早晨，将该培养物稀释到3×108细菌/ml。(稀释之前，细菌仍应处于对数期)。使该细菌生长到6×108细菌/ml(刚到下午)。
Minimal A Medium(1L)K2HPO410.5gKH2PO44.5g(NH4)2SO41.0g柠檬酸钠(2水合) 0.5g以990ml高压灭菌，然后加入无菌的
MgSO4OH2O(1M) 1.0ml葡萄糖(20%) 10.0ml为固化该培养基将在各为500ml体积中的琼脂(15g/l，Difco Bacto)高压灭菌，然后在配药前将盐和琼脂混合。
B.外植体原料.生长于Magenta箱(Magenta Corp.，4189W.Montrose Ave.，Chicago，IL68641)中的棉花籽苗用作外植体原料。将种子在70%乙醇中做短时清洗，在30%Clorox
中摇动30分钟，再用无菌蒸馏水清洗三次。加入含有500mg/l cefotaxime的水将种子浸没，并将该没过的种子置于30℃的恒温箱中直至日末。将该水/cefotaxime溶液更换一次，然后将种子在恒温箱中保持过夜。去除种皮，并将2-4粒种子置于Magenta箱中的用0.8%琼脂固化的Murashige和Skoog培养基 500mg/l cefotaxime上。
C.转化.将胚轴(7-10天籽苗的)的上部切成1cm长的段，并沿其长度方向自中心劈开。将Agrobacterium悬浮液滴到该外植体上，再将该外植体置于协调细胞培养基上〔T培养基(见下面) 100μM乙酰丁香酮〕于24℃培养2-3天。然后用500mg/l羧苄青霉素或cefotaxime将该胚轴在液体T培养基中彻底洗涤。典型地，将该胚轴置于摇动器中一整天，更换培养基4-6次。然后将该胚轴置于T培养基 500mg/l羧苄青霉素 50mg/l chlorsulfuron中。
该外植体在6周中，每1-2周就被转移到新鲜培养基中。3周内将出现转变的愈合组织。6周后，小心地将该愈合组织去除(不应碰到外植体原料)并置于T培养基上。
将愈合组织保持在T培养基上，在28℃的生长室中，在低到中等光线下进行16小时/8小时日夜循环。每1-2个月将培养体转移到新鲜培养基上。胚胎发生需6个月或更长时间。
所形成的任何胚胎都可放在EW培养基上。当那些将成熟成植物的胚胎在EW上形成之后，应将其置于EWZ培养基上。
T培养基(1L)Murashige和Skoog盐 4.31g(Sigma＃M5524)100X Gamborg B5维生素 1ml原料(Sigma＃G1019)葡萄糖 30g2，4-D原料(1mg/ml) 100μl激动素原料(1mg/ml) 100μlMgCl2·6H2O 0.75gPH至5-8时，加入1.6g Gelrite(Merck & Co.)，高压灭菌。
EW培养基(1L)Murashige和Skoog盐 4.31g蔗糖 20g100X Gamborg B5维生素 10mlKNO31.9gMES缓冲剂 1.9gPH到5.8时，加入2g Gelrite，高压灭菌。
EWZ培养基(1L)除了用4g代替2g的Gelrite外，其他同上面的EW。仅在该培养基已经高压灭菌并冷至55℃后加入过滤灭菌的chlorsulfuron原料。
转化胚胎培养体的成熟在由中等至强光线条件(1500～3000lux)下，以16h/8h昼/夜为循环、在28℃下，将由胚轴转变而得到的胚胎保持在EWZ培养基上。为保持转化的胚发生培养，将200μg/l Chlrosulfuron经高压灭菌后加到该培养基中。
如果已加入chlorsulfuron，则培养体每两周就转移一次。除了明显异常的之外，选择大多数的成熟胚胎。某些小胚胎也同样要转移。
成熟胚胎向植物的转变当胚胎约2cm长时可将它们从EWZ上转移到含有SH培养基的Magenta箱中。具有子叶和根系的“正常”胚胎最可能转变成植物。
SH培养基(1L)120X SH大量营养物原料 50ml100X SH维生素原料 1ml100X SH微量营养物原料 10ml蔗糖 20gPH至5.8时，加入2g Gelrite，高压灭菌，倒在无菌箱中。
1见Stewart等人的Planta，1977，137∶113-117。
将胚胎置于Magenta箱中并于28℃生长室中在强光(约3000lux)、16h/8h昼/夜循环的条件下培养。不需要转移。大多数胚胎将不会转变成植物，2-3个月后如果明显异常则将之弃掉。
将植物转移到温室表示植物已适于温室的特征包括已形成的根系、已形成的茎轴系、以正常互生形状产生的叶子、以及至少有2吋高的植物。采用适当高湿度的环境来使植物得到锻练，即为移入温室作准备。一但将植物移入温室，则监测其是否异常。形态不正常的植物倾向于不育。具有正常花粉脱出的植物已被全部证明是能育的。所有能育植物都是自花传粉的。雄性无菌植物可用非转化植物杂交。然而，杂交的成功与否取决于雄性无菌植物的异常的严重程度。
测验在棉花中磺酰脲耐受性的遗传对于每个测验系，将20粒去绒种子种于含有Metro-Mix350的10吋球形容器中并浸透水分。没有被去绒的种子应早3天种殖。(直至籽苗长出之前不施肥)。包括野生型控制，经处理和未经处理两种。光照期应是16h/8h日/夜，温度定在白天28℃和夜间24℃。
如果需要，给该容器浇水。一但长出籽苗，则其需要用营养液例如Miracle-Gro(1/2茶匙/8l去离子水)浇洒。
除去未处理的野生型控制外，当长出籽苗且子叶长开后，将200ml的100μg/l chlrosulfuron/Miracle-Gro溶液加到每个容器中。该除草剂溶液沿每个籽苗排而灌入，细心地润湿每颗籽苗。将容器保持在具有吸收衬套的栽培箱中以防止除草剂渗漏。两天后，如上述加入除草剂。再过两天，如上述再次加入除草剂。
在最后处理后7-10天，耐药性和敏感性籽苗间的差别即可明显。抗性籽苗发育正常，其叶形成并富有活力的生长。敏感性籽苗表现为短小的胚轴、变色的子叶、且几乎没有或根本没有真叶的形成。如果出现真叶，也是很小，且为黄绿色，并且不能完全展开。
用于将变异的乙酰乳酸合酶基因从转基因棉花系中转移到非转基因品种中的育种方法公开在Breeding Field Crops中(Poehlman，J.M.3rd Ed.，Avi Publishing Company，Inc.，Westport，Connecticut，1987)。
本申请人相信，上述所公开的，连同本文中所引用的参考文献已足以教导本技术领域普通技术人员来生产除草剂抗性植物，对其可采用本发明的化合物和方法。
权利要求
1.一种选自下列物组的化合物2-氯-6-(1-氟乙基)-N-[[(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基]羰基]苯磺酰胺。3-氯-2-[[[[(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基]-羰基]氨基]磺酰基]苯甲酸1-甲基乙酯，以及其适于农用的盐。
2.根据权利要求1的化合物，它是2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
3.一种用于控制不需要的植物生长的适于农用的组合物，该组合物包括有效量的权利要求1的化合物和至少一种下面的物质表面活性剂、固体或液体稀释剂。
4.一种用于控制不需要的植物生长的适于农用的组合物，该组合物包括有效量的权利要求2的化合物和至少一种下面的物质表面活性剂、固体或液体稀释剂。
5.一种用于控制不需要的植物生长的方法，该方法包括将有效量的选自下列物组的化合物施于含有至少一种对乙酰乳酸合酶抑制剂表现抗性的基因的棉花或大豆植物上，该化合物组为2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺，3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯，和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
6.根据权利要求5的方法，其中的化合物选自物组2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺和2-〔〔〔〔(4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
7.根据权利要求5的方法，其中的化合物是2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
8.根据权利要求5的方法，其中的化合物是2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕-苯甲酸甲酯。
9.根据权利要求5、6、7或8的任一种方法，其中的植物是大豆。
10.根据权利要求5、6、7或8中任一种方法，其中的植物是棉花。
11.一种用于控制不需要的植物生长的方法，该方法包括将有效量的选自下列物组的化合物施于含有至少一种选自Als1和Als2的对乙酰乳酸合酶抑制剂表观抗性的基因的W20或W4-4大豆植物或其衍生物上，该化合物组为2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺;3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯;和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
12.根据权利要求11的方法，其中的化合物是选自物组2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺;和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
13.根据权利要求11的方法，其中的化合物是2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
14.根据权利要求11的方法，其中的化合物是2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
15.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的基因是Als1。
16.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的基因是Als2。
17.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的大豆是W20。
18.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的大豆是W4-4。
19.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的大豆植物是由包含系W20的杂交而衍生的。
20.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的大豆是由包含系W4-4的杂交而衍生的。
21.一种用于控制不需要的植物生长的方法，该方法包括将有效量的选自下列物组的化合物施于选自19-51a、19-58b、19-58c、19-94、19-114a、19-114b、B6D-4a、20-10、20-32、25-1、25-2、25-5和其衍生物的棉花植物上，该化合物组为2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺;3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯，和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
22.根据权利要求21的方法，其中的化合物选自物组2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺，和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
23.根据权利要求21的方法，其中的化合物是2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
24.根据权利要求21的方法，其中的化合物是2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
25.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是19-51a。
26.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是B6D-4a。
27.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是20-10。
28.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是25-2。
29.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是25-5。
30.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是由19-51a衍生的。
31.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是由B6D-4a衍生的。
32.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是由20-10衍生的。
33.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是由25-2衍生的。
34.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是由25-5衍生的。
全文摘要
本发明涉及一种磺酰脲类除草剂，其适于农用的组合物以及它们的使用方法，该除草剂可控制不需要的植物生长，并且对于含有至少一种对乙酰乳酸合酶抑制剂表现抗性的基因的棉花和大豆植物是安全的。
文档编号C07D239/52GK1066845SQ9210248
公开日1992年12月9日 申请日期1992年3月17日 优先权日1991年4月12日
发明者D·R·福尼, S·K·吉, J·D·朗, M·F·施莱希特 申请人:纳幕尔杜邦公司
技术领域：
本发明涉及磺酰脲类除草剂，其适于农用的组合物以及它们的使用方法，该磺酰脲类除草剂控制不需要植物的生长并且对棉花或大豆这种含有至少一种对乙酰乳酸合酶抑制剂表现抗性的基因的植物是无害的。
有效控制不需要植物生长的新型化合物成为一种长久的需要，这不仅因为其控制所有植物的生长，还因为其在控制该植物生长的同时不伤害有用的作物。
“磺酰脲类”除草剂为在过去几年内发现的一种极有效的除草剂，其通常由一个磺酰脲桥-SO2NHCONH-连接两个芳环或芳香杂环构成。
US.4，723，990中公开了化学式如下的化合物
其中L选自Cl、F、Br;
R为H、F、Cl、Br、NO2、CF3、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基;
R1为H、F、Cl或C1-C4烷基;
R2为H或CH3;
R3为H、CH3或OCH3;
A选自
W为O或S;
X为H、Cl、Br、CH3、CH2CH3、C1-C3烷氧基、CF3、SCH3或CH2OCH3;
Y为CH3或OCH3;及Z为N、CH、CCl、CBr、CCN、CCH3、CCH2CH3、CCH2CH2Cl或CCH2CH＝CH2;
以及其适于农用的盐;条件是(1)R1为Cl时，则L为Cl或Br，而R2为H;
(2)R3为OCH3时，则R4为CH3;
(3)W为S时，则R3为H;及(4)L为F时，则R1为H、F或C1-C4烷基。
SA84/2255公开了化学式如下的化合物
其中A为C1-C6卤代烷基;
R1为氢、卤素、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚硫酰基、C1-C4烷基磺酰基、-CO-R6、-NR7R8、-CO-NR9R10或-SO2-NR11R12;
R2为氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基亚硫酰基、C1-C4磺酰基;
R3和R4彼此不相关，各为氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C2-C4卤代烷氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4卤代烷硫基、C2-C4烷氧基烷基、C1-C4烷氧基或-NR12R13;
R5为氢、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基;
R6为C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4烷硫基、C2-C6烷氧基烷氧基、氢、C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基;
R7、R8、R9、R10、R11、R12和R13彼此不相关。各为氢或C1-C4烷基;
E为氮或次甲基桥;且Z为氧或硫;
并且该发明还涉及这些化合物的盐，条件是A不是三氟甲基或-CRaRbRc基团，其中Ra为氢、氯或C1-C4烷基、Rb为氢或甲基且Rc为氯或溴。
US.4，394，506及US.4，592，978公开了化学式如下的化合物
其中Q为O;
R为C1-C12烷基;
R2为H、Cl、Br、F、C1-C3烷基、-NO2、-SO2CH3、-OCH3、-SCH3、-CF3、-N(CH3)2、-NH2或-CN;且
R3为H、Cl、Br、F或CH3。
US.4，478，635公开了化学式如下的化合物
其中R18为氢、烷基或烷氧基;
X为一未取代或取代的苯基或萘基基团;
Y为C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、C1-C3烷硫基、C2-C3烷氧基烷基、卤素或未取代氨基;且Z为氧或硫。
本发明的化合物均未在上述参考文献中专门描述，该参考文献也未讲述这些化合物于抗除草剂作物上的潜在用途。不过，本发明的化合物在上述专利权利要求通指的范围以内。
EP-A-154，204记载了对除草剂(包括磺酰脲类)有抗性的植物、植物组织和植物种子，特别是玉米(Zea mays L.)，该除草剂通常会抑制这些植物、植物组织和植物种子的生长和发育。
Sebastian等人(Crop Science 1989，291403-1408)讲述了对磺酰脲类除草剂有抗性的大豆突变种的选择，特征及应用。对系W20做了特别讲述。
EP-A-257，993记载了有效用于产生转基因植物的核酸片段，本发明的化合物及方法可施用于该植物上。
本发明涉及选自下列化合物组的化合物2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺，3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯，及其宜于农用的盐。
为了易于合成，提高除草活性，提高作物安全性或最佳土壤吸收特性，尤其优选的化合物为2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
本发明还涉及用来控制不需要植物生长的宜于农用的组合物，该组合物含有一种本发明的化合物。
本发明还涉及一种控制不需要植物生长的方法，该方法包括，将选自下面化合物组的一种化合物施用到棉花或大豆植物上的步骤，该植物含至少一种对乙酰乳酸合酶抑制剂表现抗性的基因2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺，3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯，和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
本发明的优选方法为
1.如上面概括的方法，其中该化合物选自2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
2.按照优选1的方法，其中该化合物为2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
3.按照优选1的方法，其中的化合物为2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
4.按照上述任一方法，其中的植物是大豆。
5.按照上述任一方法，其中的植物是棉花。
6.按照优选4的方法，其中的大豆植物含有AlsI基因。
7.按照优选6的方法，其中的大豆植物选自W20和W4-4系或其衍生物。
8.按照优选7的方法，其中的大豆为W20。
9.按照优选7的方法，其中的大豆为W4-4。
10.按照优选7的方法，其中的衍生物为衍生于含有W20系作为亲本杂交的大豆植物。
11.按照优选7的方法，其中的衍生物为衍生于含有W4-4系作为亲本杂交的大豆植物。
12.按照优选5的方法，其中的棉花植物选自19-51A、19-58b、19-58c、19-94、19-114a、19-114b、20-10、25-2、25-5、20-32、25-1、B6D4a系及其衍生物。
13.按照优选12的方法，其中的棉花为19-51a。
14.按照优选12的方法，其中的棉花为B6D-4a。
15.按照优选12的方法，其中的棉花为20-10。
16.按照优选12的方法，其中的棉花为25-2。
17.按照优选12的方法，其中的棉花为25-5。
18.按照优选12的方法，其中的棉花衍生于19-51a。
19.按照优选12的方法，其中的棉花衍生于B6D-4a。
20.按照优选12的方法，其中的棉花衍生于20-10。
21.按照优选12的方法，其中的棉花衍生于25-2。
22.按照优选12的方法，其中的棉花衍生于25-5。
合成根据以下给出的具体的合成实例，本领域普通技术人员便可制备本发明的化合物。
用于本发明的嘧啶氨基甲酸酯的制备如EP-A-44，807、EP-A-72，347、EP-A-173，498、US.4，666，506中所述，结合入本文。
2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯(化合物3)的制备如US.4，478，635所讲述，结合入本文。
本发明化合物(化合物1-3)的适于农用的盐也可作为有效的除草剂并可以本领域公知的数种方式制备。例如，通过将本发明的化合物(化合物1-3)与具有足够碱性阴离子(如氢氧化物、醇盐、碳酸盐或氢化物)的碱金属或碱土金属盐的溶液相接触，便可制成金属盐。采用类似的技术可制备季铵盐。
本发明化合物(化合物1-3)的盐还可通过互换阳离子而制备。通过将本发明化合物(化合物1-3)的盐(如碱金属盐或季铵盐)的水溶液与一含待交换的阳离子的溶液直接接触便可有效地进行阳离子交换。当含有交换阳离子的所要求的盐不溶于水并可过滤分离时，这一方法最为有效。
将本发明化合物(化合物1-3)的盐(如碱金属盐或季铵盐)的水溶液流经一装填了阳离子交换树脂(含有欲与原始盐交换的阳离子)的交换柱也可有效进行离子交换，所需要的产物从交换柱中洗脱。当所要求的盐为水溶性(如，钾、钠或钙盐)时，这一方法尤其有效。
将本发明的化合物(化合物1-3)与适宜的酸(如对甲苯磺酸、三氯乙酸等等)反应便可获得有效用于本发明的酸式盐。
温度以摄氏度计录。核磁共振(NMR)的缩写表示为s-单峰、d-双峰、t-三重峰、m-多重峰、brs-宽单峰、NMR峰的位置是由内标的四甲基硅烷低场以百万分数来表达。红外(IR)峰的位置以厘米的倒数(cm-1)给出。
表1
化合物 R1R2R3R4E1 Cl CHFCH3CH3OCH3N2 Cl C(O)OCH(CH3)2CH3CH3CH3 H C(O)OCH3OCF2H OCF2H CH化合物1的合成2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺(A)3-氯-2-苯基甲基苯甲硫醛在室温下向170ml二甲基甲酰胺(DMF)中的叔丁氧钾(32g)悬浮体加入苄硫醇(34ml)，同时维持温度在20℃。将反应混合物再搅拌1小时，然后分批加入2，3-二氯苯甲醛(50g)。使反应在室温下搅拌过夜，然后倒入过量的水/冰中。收集固体并在空气中干燥，获得40g标题化合物，熔点68-70°。
90MHz NMR(CDCl3)δ4.00(S，2H，CH2);
6.80-7.40(m，6H，芳族);
7.70(d，2H，芳族);和10.25(S，1H，醛)。
(B)3-氯-α-甲基-2-苯基甲基硫代苯甲醇在0°下向670ml四氢呋喃(THF)中含3-氯-2-苯基甲基苯甲硫醛(53g)的溶液中一滴滴地加入78.7ml2.7M的溴化甲基镁溶液。使反应在室温下进行并搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机相经硫酸镁干燥、过滤并浓缩从而获得适用于下一步反应的55g油。
90MHz NMR(CDCl3)δ1.20(d，3H，CH3);
1.50(brs，1H，OH);
4.00(s，2H，苄基);
1.12(q，1H);和6.85-7.55(m，8H，芳族)。
(C)3-氯-2-苯基甲硫基-(1-氟乙基)苯在-78°下向80ml二氯甲烷中含三氟化二乙氨基硫(10.3ml)的溶液中一滴滴地加入溶于最少量二氯甲烷中的3-氯-α-甲基-2-苯基甲硫基苯甲醇(23g)溶液。使反应慢慢升到室温然后倒到冰上。用过量的二氯甲烷萃取水相并将复合的有机相经硫酸镁干燥、过滤并浓缩以获得橙色油。在硅胶(用2%乙酸乙酯/己烷洗脱)上用柱色谱法产生16.41g呈浅黄色油状的标题化合物。
90MHz NMR(CDCl3)δ1.50(dd，3H，CH3);
4.15(s，2H，苄基);
6.05(dd，1H，苄基-H);和7.13-7.75(m，8H，芳族)。
(D)2-氯-6-(1-氟乙基)苯磺酰胺在-10°下向在45ml丙酸和1.5ml水的混合体中含8.0g3-氯-2-苯基甲硫基-(1-氟乙基)苯的溶液中加入5.2ml液态氯。再将反应搅拌30分钟然后倒入冰/水混合物。将水相用正丁基氯萃取并将复合有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩以得到油。将粗磺酰氯溶解在100mlTHF中，冷至-78°并用1.6ml液态无水氨处理。使反应慢慢升至室温并搅拌过夜。经过滤除去固体然后浓缩得到粗氨磺酰。自乙醇/水中再结晶产出2.7g呈白色固体状的标题化合物，熔点151-153°200MHz NMR(CDCl3)δ1.55(dd，3H，CH3);
6.40-6.55(m，2.5H，NH2和CHF);
6.76(q，0.5H，CHF);
7.40(d，2H，芳族);和7.58(t，1H，芳族)。
(E)2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺在室温下向5.0ml乙腈中含0.24g2-氯-6-(1-氟乙基)苯磺酰胺和0.26gO-苯基-N-(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基甲酸酯的溶液中加入1，8-二氮杂二环〔5.4.0〕十一-7-烯(0.15ml)。室温下再搅拌反应1小时，然后用水(5.0ml)稀释并用1N盐酸酸化至PH为4。过滤收集所得沉淀物，用水洗涤并干燥便获得0.23g呈白色固体的标题化合物，熔点181-183°。
200MHz NMR(CDCl3)δ1.68(dd，3H，CH3);
2.45(s，3H，CH3);
3.96(s，3H，OCH3);
6.76(dd，1H，CHF);和7.6-7.82(m，3H，芳族)。
化合物2的合成3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯(1)2-丙基-3-氯-2-硝基苯甲酸酯向在300ml2-丙醇中含10.582g(52.5mmol)商品3-氯-2-硝基苯甲酸的溶液中装入45ml浓缩H2SO4，并将所得混合物回流加热3.75天。该反应容器装配有一蒸馏头，且大约有150ml2-丙醇自该反应混合物中馏出。将剩余的反应混合物慢慢倒入300ml饱和NaHCO3(水溶液)中。伴随着约5gNaOH(使含水层保持碱性)和一些用来降温的冰加入二氯甲烷(100ml)。
各层分离，并用3×80ml二氯甲烷萃取水液层。将复合的有机体用150ml水和150ml盐水萃取，并干燥(MgSO4)和浓缩以获得9.28g(73%)的呈浅橙色液体的标题化合物。
NMR δ1.33(d，6H，J＝7.5Hz);
5.19(七重峰，1H，J＝7.5Hz);
7.5-7.77(m，2H);和7.95(dd，1H，J＝2.0，7.5H)(2)2-苯基甲硫基-3-氯苯甲酸二丙酯向500ml配备有温度计，氮气入口隔膜和磁性搅拌棒的三颈圆底烧瓶中装入含在矿物油(13.1mmol，1.6当量)中的1.505g35%氢化钾悬浮液，并将其溶解于30ml无水THF中。将所得混合物冷至-20°，然后用注射管加入1.25ml苄硫醇(10.7mmol，1.3当量)。使所得混合物回升至10°，搅拌1小时，然后冷至-12°。通过滴液漏斗向所得的白色浆体中加入含在总量9.5ml THF中的2.000g3-氯-2-硝基苯甲酸2-丙酯(8.21mmol)溶液，便获得褐色浆体。将该浆体回升至室温并搅拌20小时。
将反应混合物倒入100ml6N NaOH(水溶液)和盐水1∶1的混合体中，并用乙酸乙酯萃取三次。用盐水萃取该复合有机相，干燥(MgSO4)并浓缩获得5.04g透明的浅褐色液体。
将粗产物在二氧化硅(20%丙酮/己烷)上色谱分析，获得两种馏分馏分1122mg橙色固体，由1H-NMR表明没有2-丙酯，未进一步研究。
馏分22.07g(79%)呈橙色油状的标题化合物NMR δ1.38(d，6H，J＝7.5Hz);
4.10(s，2H);
5.20(m，1H);
7.25(s，5H);和7.1-7.7(m，3H)。
(3)3-氯-1-(2-丙氧基羰基)苯基-2-磺酰氯向配有机械搅拌器、滴液漏斗、温度计和塞子的1-L四颈圆底烧瓶中装入8.857g含在总量200ml二氯甲烷中的2-苯基甲硫基-3-氯苯甲酸2-丙酯(27.6mmol)、55ml水和8ml浓缩盐酸，并将所得混合物在冰/水/NaCl浴中冷却至约0°。持续45分钟向此混合物中慢慢加入130ml商品Clorox 漂白剂(91mmol，3.3当量)，同时保持温度在0-5°。添加完毕后于0°接着再搅拌1.5小时。
各层分离，将水液层用2×50ml二氯甲烷萃取，将该复合有机物用150ml盐水萃取，干燥(MgSO4)并浓缩获得11.81g金色液体。
将粗产物在300g二氧化硅(10%丙酮/石油醚，提高到15%、20%、33%)上色谱分析，获得7.824g(95%)的呈黄色透明液体的标题化合物NMR δ1.39(d，6H，J＝7.5Hz);
5.28(七重峰，1H，J＝7.5Hz);
7.4-7.65(m，1H);和7.65-7.82(m，2H)。
(4)3-氯-1-(2-丙氧基羰基)苯基-2-氨磺酰将在60ml乙腈中含2.100g3-氯-1-(2-丙氧基羰基)苯基-2-磺酰氯(7.07mmol)的溶液在冷水浴中冷却并通过玻璃吸移管向该溶液的表面上充以气态NH3的缓气流。用薄层色谱法(TLC)监测反应进程，且当判定反应完全时，真空过滤所得悬浮液，并将滤饼用另外的乙腈漂洗。浓缩该乙腈溶液，产出1.912g(97%)的呈浅米色固体的标题化合物，熔点155-158°NMR δ1.33(d，6H，J＝7.5Hz);
5.19(七重峰，1H，J＝7.5Hz);
6.90(brs，2H);
7.35-7.55(m，1H);和7.65-7.8(m，2H)。
(5)3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)-氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯将在30ml无水乙腈中含602mg3-氯-1-(2-丙氧基羰基)苯基-2-氨磺酰(2.17mmol)和539mg N-(苯氧基羰基)-2-氨基-4，6-二甲基嘧啶(2.22mmol，1.02当量)的溶液在冷水浴中冷却并用注射管注入340μl1，8-二氮杂二环〔5.4.0〕癸-7-烯(2.27mmol，2.27当量)，将所得溶液在室温下搅拌3小时，在该时间，TLC指示缺少起始物质。
将反应混合物一滴滴地加到250ml水和一些冰的充分搅拌的混合体中。添加完毕时，使急冷的混合物在冰/水浴中冷却并用1N HCl(水溶液)处理至PH2-3，获得沉淀。将此悬浮体真空过滤并将所得固体在真空中干燥，得到898mg呈白色固体的粗级磺酰脲。
将450mg部分此产物在30g二氧化硅上以20%提高到30%和40%的丙酮/石油醚作色谱分析，产出209mg呈非常粘的清油状标题化合物。
NMR δ1.34(d，6H，J＝7.5Hz);
1.83(brs，1H);
2.46(s，6H);
5.20(七重峰，1H，J＝7.5Hz);
6.96(s，1H);
7.4-7.7(m，3H);和9.48(brs，1H)。
将此产物溶于2ml乙腈并一滴滴地加到20ml冷却的0.1N HCl(水溶液)中。将所得悬浮液过滤，并将固体于真空中干燥，产出173mg标题化合物，熔点158-160°。
如上所述，将剩余285mg粗级磺酰脲色谱分析并再度沉淀，产出252mg呈白色固体的标题化合物，熔点155-156°。〔共产出425mg(46%)〕。
配方本发明化合物的有效配方可用常规方式来制备。其包括粉剂、粒剂、片剂、溶液、悬浮液、乳剂、可湿性粉剂、可乳化浓缩物等等。其中许多可以直接使用。可将可喷洒的配方掺合在适宜的介质中并以每公顷数升到数百升的喷洒量使用。高强组合物主要用作下一步配制的中间体。广意地讲，配方含有约0.1%-99%(重量)的活性成分以及至少一种(a)约0.1%-20%的表面活性剂和(b)约1%-99.9%的固体或液体惰性稀释剂。具体讲，其含有的这些成分占以下近似比例重量百分比＊活性成分 稀释剂 表面活性剂可湿性粉剂 20-90 0-74 1-10油悬浮液、乳剂、溶液 3-50 40-95 0-15(包括可乳化浓缩物)水悬浮液 10-50 40-84 1-20粉剂 1-25 70-99 0-5
重量百分比活性成分 稀释剂 表面活性剂粒剂或片剂 0.1-95 5-99.9 0-15高强组合物 90-99 0-10 0-2＊活性成分加至少一种表面活性剂或稀释剂等于100%(重量)。
当然，根据使用需求及化合物的物理性能，活性成分的含量可以较低或较高。有时希望表面活性剂/活性成分的比率较高，这可通过向配方中掺混或罐混来实现。
典型的固体稀释剂见Watkins等人于“Handbook of Insecticide Dust Diluents and Carriers”，2nd Ed.，Dorland Books，Caldwell，New Jersey中所述，但其它固体，开采的或加工的均可使用。对可湿性粉剂较佳为吸收性更好的稀释剂，而对粉剂较佳为更致密的稀释剂。典型的液体稀释剂和溶剂见Marsden，“Solvents Guide，”2nd Ed.，Interscience，New York，1950中所述。对悬浮浓缩物来说，溶解度低于0.1%较佳;溶液浓缩物在0℃最好是稳定的，即不发生相分离。“McCutcheon′s Detergents and Emulsifiers Annual”，MC Publishing Corp.，Ridgewood，New Jersey，以及Sisely and Wood，“Encyclopedia of Surface Active Agents”，Chemical Publishing Co.，Inc.，New York.1964中列出了一些表面活性剂及推荐的使用。所有配方都可含少量添加剂来降低起泡、结块、腐蚀、微生物生长等等。
制造这类组合物的方法是公知的。溶液可通过简单地混合各成分制备。细散固体组合物通过掺合并通常在锤式或流能磨机中研磨制备。悬浮液通过湿磨制备(见，如Litter U.S.Patent 3，060，084)。粒剂或片剂可通过向预成形的粒剂载体喷洒活性物质或采用附聚技术制备，见J.E.Browning，“Agglome-ration”，Chemical Engineering，December 4，1967，pp.147ff.和“Perry′s Chemical Engineer′s Handbook”，5th Ed.，McGraw-Hill，New York，1963，pp.8-57ff。
关于配制技术的进一步说明见下例H.M.Loux的美国专利3，235，361，1966年2月15日，第6栏16行到第7栏19行以及实施例10-41;
R.W.Luckenbaugh的美国专利3，309，192，1967年3月14日，第5栏43行到第7栏62行以及实施例8、12、15、39、41、52、53、58、132、138-140、162-164、166、167和169-182;
H.Gysin和E.Knusli的美国专利2，891，855，1959年6月23日，第3栏66行到第5栏17行以及实施例1-4;
G.C.Klingman的“Weed Control as a Science”，John Wiley and Sons，Inc.，New York，1961，pp81-96;和J.D.Fryer和S.A.Evans的“Weed Control Handbook”，5th Ed.，Blackwell ScientificPublications，Oxford，1968，pp101-103。
在下面实施例中，除另有说明，所有分数以重量计。
实施例A高强浓缩物2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 99%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺三甲基壬基聚乙二醇醚 1%在掺和机中将表面活性剂喷涂在活性组分上并在包装前使混合物通过U.S.S.No.40筛(0.42mm筛孔)筛分。为了实用，可进一步配制该浓缩物。
实施例B可湿性粉剂2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 65%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺十二烷基苯基聚乙二醇醚 2%木素磺酸钠 4%硅铝酸钠 6%蒙脱石(煅烧过) 23%将这些组分全部掺合。在掺和机中将液体表面活性剂通过喷洒到固体组分上而加入。在锤磨机中研磨后产出基本上均低于100μm的颗粒，将这些物料再掺合并通过U.S.S.No.50筛(0.3mm筛孔)筛分，而后包装。
实施例C水悬浮液2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 50.0%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺聚丙烯酸增稠剂 0.3%十二烷基苯基聚乙二醇醚 0.5%磷酸二钠 1%磷酸一钠 0.5%聚乙烯醇 1.0%水 56.7%在砂磨机中将各组分，一起掺合并研磨，产出尺寸基本均小于5μm的颗粒。
实施例D油悬浮液2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 35%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺聚醇羧酸酯和油溶性石油磺酸盐的掺合物 6%二甲苯 59%在砂磨机中将上述组分一起混合并研磨以产生基本上均小于3μm的颗粒。该产物可直接使用，也可用油掺合后或在水中乳化后使用。
实施例E油悬浮液
2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 25%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺聚氧乙烯山梨醇六油酸盐 5%高脂族烃油 70%在砂磨机中将上述组分一起研磨直至该固体颗粒细至5μm以下，所得的稠悬浮液可直接使用，但优选是用油掺合后或在水中乳化后使用。
实施例F水悬浮液2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 25%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺水合硅镁土 3%粗级木素磺酸钙 10%磷酸二氢钠 0.5%水 61.5%在球磨机或辊磨机中将上述组分一起研磨，直至固体颗粒磨细到其直径小于10微米。
实施例G可湿性粉剂2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 40.0%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺二辛基磺基琥珀酸钠 1.5%木素磺酸钠 3%低粘性甲基纤维素 1.5%硅镁土 54%将上述组分充分掺合并经空气研磨机研磨以使其平均颗粒尺寸小于15微米，再次掺合，在包装以前用U.S.S.No.50的筛子(0.3mm孔)过筛。
本发明的所有化合物均可以此方式配制。
实施例H粒剂实施例G的可湿性粉剂 15%石膏 69%硫酸钾 16%在旋转混合器中掺合上述组分，并用水喷洒以完成造粒过程。当大部分原料的粒度达到所要求的1.0至0.42cm范围(U.S.S.＃18至40筛)时，将粒剂取出、干燥并过筛。将超尺寸原料粉碎以得到所要求范围内的更多的原料。这些粒剂含有%活性组分。
实施例I可湿性粉剂2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 50%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺烷基萘磺酸钠 2%低粘性甲基纤维素 2%
硅藻土 46%将这些组分掺合，粗略锤磨并气磨以产生直径基本均低于10μm的活性颗粒。将产品再掺合而后包装。
实施例J挤压片剂2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 25%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺无水硫酸钠 10%粗级木素磺酸钙 5%烷基萘磺酸钠 1%钙/镁膨润土 59%将这些组分掺合、锤磨并随后用约12%的水润湿。将此混合物挤塑成约3mm直径的圆条，切分该圆条以制成约3mm长的片剂。这些片剂可在干燥后直接使用，或将干燥的片剂粉碎通过U.S.S.No.20筛(0.84mm筛孔)后使用。于U.S.S.No.40筛(0.42mm筛孔)之上的颗粒可包装使用，而细碎者则再循环使用。
实施例K可湿性粉剂2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 80%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺烷基萘磺酸钠 2%
木素磺酸钠 2%合成的非晶形二氧化硅 3%高岭石 13%将上述组分在锤磨机中掺合并研磨以得到具有平均颗粒直径小于25μm的颗粒。在包装之前将该原料再次掺合并用U.S.S.No.50的筛子(0.3mm孔)过筛。
实施例L高强浓缩物2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 98.5%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺硅补强剂 0.5%合成的非晶形细二氧化硅 1.0%在锤磨机中将上述组分掺合并研磨以得到基本上均能通过U.S.S.No.50筛(0.3mm孔)的高强浓缩物。该物料以后可以多种方式进行配制。
实施例M溶液2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4- 5%甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺，钠盐水 95%伴随搅拌将该盐直接加入水中以得到溶液，其随后可包装而使用。
用途本发明的化合物为高活性除草剂，可用于对阔叶草和青草(通常蔓延于大豆和棉花地里)萌发前和/或萌发后控制。因为本发明的化合物所需使用率低，其活性范围宽(尤其是对以阔叶杂草为主的)，和/或其良好的土壤分散率，因而是有价值的。本发明化合物的特别价值在于含有至少一种对乙酰乳酸合酶表现抗性的基因的大豆和棉花植物对其有选择的耐受性。该化合物也可类似地用于那些为了产生作物耐药性而经过“基因变异”的其它作物，例如，公开于EP-A-154204中的那些作物，特别是玉米(Zea mays L.)。
试验说明将以下品种的种子种于砂壤土中并用溶于无植物毒性溶剂中的试验化学药品(表1的化合物)进行萌发前处理，这些植物品种是基因变异大豆(Glycine max)的W20和W4-4系、基因变异棉花(Gossypium birsutum)的B6D-4a、19-51a和20-10系、Pioneer3377EX玉米(Zea mays L.)、苍耳(Xanthium pensylvanicum)、牵牛花(Ipomoea hederacea)、苘麻(Abutilon theophrasti)、稗(Echinochloa crus-galli)、约翰逊草(Sorghum halepense)和孤尾状植物(Setaria faberii)。经喷药后，该土壤表面用水喷淋以模拟下雨。该处理的植物和控制作用在温室中保持约4周，然后将所有物种与未经处理控制的相比较，并用眼睛来评定。上述物种也种于盆栽混合土中并在温室中生长两周至1-3叶阶段，然后在萌发后喷药。在喷药后，该植物在温室中保持约3周，而后用眼睛评定。该植物的反应级别总结于表A和表B中，这些级别基于0到10这一范围内，其中0表示无效果，10表示完全控制。一划(一)反应级别表示无试验结果。棉花20-10系的5个分别的植物的反应值在表B中记为(1)、(2)、(3)、(4)和(5)，这是因为该系是除草剂抗性的R1种群分离。基于这样一种假设，即那些显示无效的植物则带有表现抗性的基因而那些被杀伤的植物则带有很少或不带有表观抗性基因，将经各种处理级别的关于20-10系的植物反应从最低至最高排列。
表A萌发前处理用量 大豆 约翰 巨孤尾化合物 G/HA W20 苍耳 牵牛花 苘麻 稗 逊草 状植物1 4 - 7 9 8 10 10 51 16 0 9 10 10 10 10 91 32 - 10 10 10 10 10 101 64 3 - - - - - -1 125 5 - - - - - -2 4 - 8 2 0 9 10 62 16 0 9 9 8 10 10 62 32 - 9 10 9 10 10 102 64 0 - - - - - -2 125 3 - - - - - -3 31 0 9 8 9 - 10 63 62 0 9 9 10 - 10 103 125 0 10 9 10 - 10 103 250 0 10 10 10 - 10 10
萌发后处理用量 大豆 约翰 巨孤尾化合物 G/HA W20 苍耳 牵牛花 苘麻 稗 逊草 状植物1 1 0 7 6 6 6 6 -1 2 2 10 10 8 7 9 -1 4 4 10 10 10 10 10 -1 8 5 10 7 6 - 10 51 16 7 10 10 10 - 10 81 31 9 10 10 10 - 10 102 1 0 9 5 3 0 5 -2 2 0 10 6 7 5 7 -2 4 0 10 7 10 6 10 -2 8 2 10 10 10 7 10 -3 16 1 10 5 6 - 10 53 31 2 10 5 9 - 10 63 62 7 10 8 10 - 10 73 125 7 10 9 10 - 10 10
除草剂抗性植物大豆特别适用于本发明方法的植物包括大豆和棉花植物，它们含有至少一种对乙酰乳酸合酶抑制剂表现抗性的基因。这类植物中所包括的有以Budapest Treaty名义寄存于American Type Culture Collection，Rockville，MD中并且寄存号分别为40467和40650的大豆W20和W4-4系。另外，大豆W20系的制备已有Sebastian等人描述〔(1989)Crop Sci.29∶1403-1408〕。这两个系都含有Als1基因。
通过用常规的育种方法可将该Als1等位基因由大豆W20系转移到其它系。由于Als1是单一半显性等位基因〔Sebastian etal(1959)Crop Sci 29∶1403-1408〕，抗性分离是非常易于预测的。例如，当用对磺酰脲类除草剂敏感的大豆系杂交W20时，F2后代则分离产生约1/4纯合抗性型1/2杂合中间型1/4纯合敏感型。可用Sebastian等人所述的溶液培养方法〔(1986)Crop Sci.29∶1403-1408〕或用下面的方法之一将这三种分离类型区分开。下面这些方法是浸种筛选-该方法理想地是用于温室筛选，但也可用于田间种植。将种子(如，F2种群)置于用1mg/l chlorsulfuron(2-氯-N-〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基羰基〕苯磺酰胺)水溶液浸湿的发芽纸上。使种子吸收该除草剂溶液过夜(至少12至16小时)。然后将种子从发芽纸上移开并用水短时喷淋以去除外露的除草剂。没有完全吸涨的种子必需弃除，因为硬种子将成为“漏验的种子(escape)”，这是由于它们没有吸收除草剂。然后将吸涨的种子种植于温室或田地并浇水以防止晒干。一周内，存活的种子将出苗。然而，对于敏感的籽苗除了子叶的长大外没有任何的发育。纯合抗性的籽苗生长正常。杂合型会有褶皱的具一小叶的叶子但最终将复原并正常生长。在种植后的14到21天，任何一种不需要的分离子(如果需要包括杂合体)都可被弃除。为了种子纯化的目的，较合适的是将所有不想要的植物弃除，有时，某些敏感植物也会有微弱复原并结出少量的种子。如果可能，使用纯合抗性植物以继续下一步的回交循环。如果推断纯合子将被结合以形成不分离种系则进行后代测验是较合适的。
小范围的萌发后筛选-该方法理想地是用于筛选已经发芽的植物。该方法可用于温室和小块试验田。所推荐的除草剂用量已给出。然而，给定的基因型损伤可有某些变化，这取决于植物喷药的持续程度。
籽苗生长直至第一个具三小叶完全长开。制备含有0.2ml/lX-77
(或类似的润湿剂)的5mg/l chlorsulfu-ron溶液，并用手持喷雾器喷药直至药液在植物叶子上流溢。在10-14天内，敏感的大豆植物将被严重损伤并濒于死。损伤出现的形式是顶芽死亡且叶脉变红随后叶子枯死。纯合抗性植物将不受到影响或仅仅是轻微矮化。杂合植物根据其中间性反应可以区分出来。处理14天后，可将死亡的或濒于死亡的植物弃除。选择长相最好的植物，该植物通常确认为纯合抗性体。不过，为了确认，应进行后代测验。
为了筛选那些仅出现杂合抗性和纯合敏感性植物的回交后代，在萌发后筛选中应使用较低用量的chlorsulfuron(如2mg/l)。较低用量的chlorsulfuron也将杀死敏感植物而将杂合体以较好状态保留下来以用于杂交或繁殖。
萌发后大田筛选-该方法理想地用于大田条件下的大量种群的筛选。该筛选是有效的，但可能会产生某些“漏验种”，这取决于种植的密度并取决于喷药覆盖度的大小。除非可允许少量的“漏验种”，否则不推荐使用这种筛选方法。
以不超过每呎6-8粒种子种殖大豆，由于遮光，较近的间距增加“漏验种”的可能性。在第二个具三小叶阶段，用8g/ha的chlorsulfuron给大田喷药。将润湿剂例如X-77 以2.5ml/l喷药液的量加入。喷药量为187l/ha。为了有良好的覆盖度，使用Spraying Systems，Inc.的8002平扇喷嘴，使用喷嘴时要在40psi下，根据制造商为了达到良好的除草剂覆盖度而做的推荐(约19-21呎的间隔)设置间距。处理后的14-21天，敏感性植物将受到严重损伤或死亡。杂合植物也在某种程度上损伤，但仍能复原。所有不合需要的分离子应被弃除以保证它们将不复原。最低程度损伤的植物极大可能地是抗性纯合体。
Als1基因可从W4-4系中转移到其它大豆系中。当源于杂交W4-4X A3205(一种敏感品种)的F2种群用100mg/l chlorsulfuron进行溶液培养筛选时〔如Sebastian等人(1989)于Crop Sci.29∶1403-1408中所描述的〕，164个F2植物中的10个(约1/16的F2)是完全敏感于chlorsulfuron的。这表明该W4-4具有两种对磺酰脲有耐受性的基因。该试验(伴随附加试验)表明W4-4对于Als1和另一个半显基因(Als2)两者都是纯合的，其中半显基因(Als2)的分离与Als1无关。Als2影响乙酰乳酸合酶对磺酰脲除草剂(例如chlorsulfuron)的抗性，但仍处于与Als1无关的第二位。
基于此二基因遗传模式的知识，使得本技术领域普通技术人员可以预测抗性育种。可通过用敏感大豆系杂交W4-4然后筛选抗性的分离种群(例如F2)来完成两个抗性基因从W4-4向其他大豆系的转移。源自敏感杂交W4-4X的F2植物分离出1/16纯合敏感性14/16中间性(各种杂合体的混合)1/16纯合抗性。当筛选这种F2种群时，需要选择一个能鉴别对Als1和Als2都纯合的植物的杂交处理。这可通过以下方法来完成将种群(例如F2种群)放在一个可浸的网袋中。将该袋浸没在2mg/l 2-〔〔〔〔(4，6-二甲氧基-2-嘧啶基)氨基-羰基〕氨基〕磺酰基〕-3-吡啶羧酸甲酯(EP-A-314，302)的水溶液中并浸泡16小时。通过使用由标准水池式泵供气的“通气石”(air-stone)”而将该溶液保持在连续通气状态。在该浸泡期间内，该种子吸收水和溶解的除草剂。浸泡期之后，将种子浸于自来水中2分钟以去除外露的除草剂溶液。然后通过将泥炭基土壤混合物填充温室用的板台而制作一个种植床。通过用平板刮过该混合物表面而将该土壤混合物铺成7cm厚的平面。种植之前，通过用自来水喷洒其上表面而将该7cm厚的土壤混合物湿润透。过量的水可排走。然后将杂交处理的种子以约每平方米12，000粒种子的密度单一水平层地移植于水平种植床上。然后用2.5cm厚的一层粗蛭石覆盖在种子上。通过定期地用自来水在种植介质上表面喷淋而使所述的种植介质保持湿润。种植后约8天，存活的种子就发芽、出苗并生长子叶。然而，只有与Als1和Als2都纯合的植物才能长出正常的叶子。敏感植物将会根本不长叶子或长出皱折的、变形的叶子。
棉花下面是用于制备转基因棉花系(例如19-51a、B6D-4a、20-10、25-2和25-5系)的步骤，在其中本文权利要求的化合物和方法特别有用。对选择用来引发编码序列表达的原始启动子并不严格要求，只要它具有充分的转录活性，以完成在棉花中乙酰乳酸合酶的磺酰脲抗性形式的表达。优选的用于表达的启动子(除了天然烟草乙酰乳酸合酶启动子外)包括在Cauliflower Mosaic Virus〔Odell et al.(1985)Nature 313∶810-812;Hull et al(1987)Virology 86∶482-493〕中，在1，5-双磷酸核酮糖羧基酶的小亚基〔Morelli et al.(1985)Nature 315∶200;Broglie et al.(1984)Science 224∶838;Hererra-Estrella et al.(1984)Nature 310∶115;Coruzzi et al.(1984)EMBO J.3∶1671;Faciotti et al.(1985)Bio/Technology 3∶241〕中和在叶绿素a/b结合蛋白质〔Lampa et al.(1986)Nature 316∶750-752〕中引导19S和35S转录本的那些启动子。编码乙酰乳酸合酶的突变体形式(对磺酰脲除草剂为抗性)并因此而用于这些转换中的基因公开在EP-A-257，993中。特别指出的是SURB-S4、SURA-C3和SURB-Hra基因。另外，Lee等人(EMBO J.1988，7∶1241-1248)也描述了源自烟草(Nicotiana tabacum)的SURB-Hra和SURA-C3乙酸乳酸合酶基因的克隆，描述了对决定着磺酰脲耐受性的核苷酸变化的鉴别方法以及载有这些基因的Agrobacterium菌株的构建。带有其天然烟草启动子的SURB-Hra基因可用于棉花B6D-4a系的制备过程，棉花B6D-4a系可采用本发明的化合物和方法。Hartnett等人(ACS Symposium Series No.421，M.B.Green，W.K.Moberg and H.LeBaron，Eds.1990。American Chemical Society，PP459-473)描述了编码乙酰乳酸合酶(对除草剂为抗性)的嵌合烟草基因的构建，该基因抑制酶的正常形成。
由Hartnett等人所指出的嵌合的Hra ALS基因连同其天然烟草启动子被用于棉花系19-51a、19-58b、19-58c、19-94、19-114a、19-114b的制备过程，这些棉花系可采用本发明的化合物和方法。Odell等人(Plant Physiol。1990，94∶1647-1654)描述了该Cauliflower Mosaic Virus 35S启动子调节乙酰乳酸合酶基因在转基因植物中表达的用途。由Hartnett等人所指出的该嵌合烟草Hra ALS基因的天然烟草启动子已被Cauliflower Mosaic Virus 35S启动子所代替，并且这种构建被用于棉花系20-10和20-32的制备过程，这些棉花系可采用本发明的化合物和方法。
通过结合源自SURA和SURB基因(EP-A-257，993)的DNA片段而构建该嵌合C3基因。另外，用部份Cauliflower Mosaic Virus 35S启动子来代替该天然烟草启动子以形成35H基因。该SURA基因(仅具有5′未编码DNA所包括的4个碱基对)被亚克隆到PUC119中，然后将0.42kb Cauliflower Mosaic Virus 35S启动子片段连接在正好在乙酰乳酸合酶起始编码上游的限制性位点上。通过位点定向诱变而将类似于C3突变(EP-A-257，993)的突变引入到SURB基因中。最后，源于这种变异基因的限制性片段被亚克隆到35S-SURA基因中。将该突变引入这种基因中产生了在氨基酸191位置的脯氨酸向谷氨酰胺的替换。该35H嵌合基因被用于棉花系25-1、25-2和25-5的制备过程，对这些棉花系可采用本发明的化合物和方法。
胚轴转化A.Agrobacterium生长。Agrobacterium的培养物在带有适宜的可选择性抗生素的Minimal A Medium(见下面)中生长过夜并由单菌落(从新鲜划线)开始。转化的早晨，将该培养物稀释到3×108细菌/ml。(稀释之前，细菌仍应处于对数期)。使该细菌生长到6×108细菌/ml(刚到下午)。
Minimal A Medium(1L)K2HPO410.5gKH2PO44.5g(NH4)2SO41.0g柠檬酸钠(2水合) 0.5g以990ml高压灭菌，然后加入无菌的
MgSO4OH2O(1M) 1.0ml葡萄糖(20%) 10.0ml为固化该培养基将在各为500ml体积中的琼脂(15g/l，Difco Bacto)高压灭菌，然后在配药前将盐和琼脂混合。
B.外植体原料.生长于Magenta箱(Magenta Corp.，4189W.Montrose Ave.，Chicago，IL68641)中的棉花籽苗用作外植体原料。将种子在70%乙醇中做短时清洗，在30%Clorox
中摇动30分钟，再用无菌蒸馏水清洗三次。加入含有500mg/l cefotaxime的水将种子浸没，并将该没过的种子置于30℃的恒温箱中直至日末。将该水/cefotaxime溶液更换一次，然后将种子在恒温箱中保持过夜。去除种皮，并将2-4粒种子置于Magenta箱中的用0.8%琼脂固化的Murashige和Skoog培养基 500mg/l cefotaxime上。
C.转化.将胚轴(7-10天籽苗的)的上部切成1cm长的段，并沿其长度方向自中心劈开。将Agrobacterium悬浮液滴到该外植体上，再将该外植体置于协调细胞培养基上〔T培养基(见下面) 100μM乙酰丁香酮〕于24℃培养2-3天。然后用500mg/l羧苄青霉素或cefotaxime将该胚轴在液体T培养基中彻底洗涤。典型地，将该胚轴置于摇动器中一整天，更换培养基4-6次。然后将该胚轴置于T培养基 500mg/l羧苄青霉素 50mg/l chlorsulfuron中。
该外植体在6周中，每1-2周就被转移到新鲜培养基中。3周内将出现转变的愈合组织。6周后，小心地将该愈合组织去除(不应碰到外植体原料)并置于T培养基上。
将愈合组织保持在T培养基上，在28℃的生长室中，在低到中等光线下进行16小时/8小时日夜循环。每1-2个月将培养体转移到新鲜培养基上。胚胎发生需6个月或更长时间。
所形成的任何胚胎都可放在EW培养基上。当那些将成熟成植物的胚胎在EW上形成之后，应将其置于EWZ培养基上。
T培养基(1L)Murashige和Skoog盐 4.31g(Sigma＃M5524)100X Gamborg B5维生素 1ml原料(Sigma＃G1019)葡萄糖 30g2，4-D原料(1mg/ml) 100μl激动素原料(1mg/ml) 100μlMgCl2·6H2O 0.75gPH至5-8时，加入1.6g Gelrite(Merck & Co.)，高压灭菌。
EW培养基(1L)Murashige和Skoog盐 4.31g蔗糖 20g100X Gamborg B5维生素 10mlKNO31.9gMES缓冲剂 1.9gPH到5.8时，加入2g Gelrite，高压灭菌。
EWZ培养基(1L)除了用4g代替2g的Gelrite外，其他同上面的EW。仅在该培养基已经高压灭菌并冷至55℃后加入过滤灭菌的chlorsulfuron原料。
转化胚胎培养体的成熟在由中等至强光线条件(1500～3000lux)下，以16h/8h昼/夜为循环、在28℃下，将由胚轴转变而得到的胚胎保持在EWZ培养基上。为保持转化的胚发生培养，将200μg/l Chlrosulfuron经高压灭菌后加到该培养基中。
如果已加入chlorsulfuron，则培养体每两周就转移一次。除了明显异常的之外，选择大多数的成熟胚胎。某些小胚胎也同样要转移。
成熟胚胎向植物的转变当胚胎约2cm长时可将它们从EWZ上转移到含有SH培养基的Magenta箱中。具有子叶和根系的“正常”胚胎最可能转变成植物。
SH培养基(1L)120X SH大量营养物原料 50ml100X SH维生素原料 1ml100X SH微量营养物原料 10ml蔗糖 20gPH至5.8时，加入2g Gelrite，高压灭菌，倒在无菌箱中。
1见Stewart等人的Planta，1977，137∶113-117。
将胚胎置于Magenta箱中并于28℃生长室中在强光(约3000lux)、16h/8h昼/夜循环的条件下培养。不需要转移。大多数胚胎将不会转变成植物，2-3个月后如果明显异常则将之弃掉。
将植物转移到温室表示植物已适于温室的特征包括已形成的根系、已形成的茎轴系、以正常互生形状产生的叶子、以及至少有2吋高的植物。采用适当高湿度的环境来使植物得到锻练，即为移入温室作准备。一但将植物移入温室，则监测其是否异常。形态不正常的植物倾向于不育。具有正常花粉脱出的植物已被全部证明是能育的。所有能育植物都是自花传粉的。雄性无菌植物可用非转化植物杂交。然而，杂交的成功与否取决于雄性无菌植物的异常的严重程度。
测验在棉花中磺酰脲耐受性的遗传对于每个测验系，将20粒去绒种子种于含有Metro-Mix350的10吋球形容器中并浸透水分。没有被去绒的种子应早3天种殖。(直至籽苗长出之前不施肥)。包括野生型控制，经处理和未经处理两种。光照期应是16h/8h日/夜，温度定在白天28℃和夜间24℃。
如果需要，给该容器浇水。一但长出籽苗，则其需要用营养液例如Miracle-Gro(1/2茶匙/8l去离子水)浇洒。
除去未处理的野生型控制外，当长出籽苗且子叶长开后，将200ml的100μg/l chlrosulfuron/Miracle-Gro溶液加到每个容器中。该除草剂溶液沿每个籽苗排而灌入，细心地润湿每颗籽苗。将容器保持在具有吸收衬套的栽培箱中以防止除草剂渗漏。两天后，如上述加入除草剂。再过两天，如上述再次加入除草剂。
在最后处理后7-10天，耐药性和敏感性籽苗间的差别即可明显。抗性籽苗发育正常，其叶形成并富有活力的生长。敏感性籽苗表现为短小的胚轴、变色的子叶、且几乎没有或根本没有真叶的形成。如果出现真叶，也是很小，且为黄绿色，并且不能完全展开。
用于将变异的乙酰乳酸合酶基因从转基因棉花系中转移到非转基因品种中的育种方法公开在Breeding Field Crops中(Poehlman，J.M.3rd Ed.，Avi Publishing Company，Inc.，Westport，Connecticut，1987)。
本申请人相信，上述所公开的，连同本文中所引用的参考文献已足以教导本技术领域普通技术人员来生产除草剂抗性植物，对其可采用本发明的化合物和方法。
权利要求
1.一种选自下列物组的化合物2-氯-6-(1-氟乙基)-N-[[(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基]羰基]苯磺酰胺。3-氯-2-[[[[(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基]-羰基]氨基]磺酰基]苯甲酸1-甲基乙酯，以及其适于农用的盐。
2.根据权利要求1的化合物，它是2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)-氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
3.一种用于控制不需要的植物生长的适于农用的组合物，该组合物包括有效量的权利要求1的化合物和至少一种下面的物质表面活性剂、固体或液体稀释剂。
4.一种用于控制不需要的植物生长的适于农用的组合物，该组合物包括有效量的权利要求2的化合物和至少一种下面的物质表面活性剂、固体或液体稀释剂。
5.一种用于控制不需要的植物生长的方法，该方法包括将有效量的选自下列物组的化合物施于含有至少一种对乙酰乳酸合酶抑制剂表现抗性的基因的棉花或大豆植物上，该化合物组为2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺，3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯，和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
6.根据权利要求5的方法，其中的化合物选自物组2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺和2-〔〔〔〔(4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
7.根据权利要求5的方法，其中的化合物是2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
8.根据权利要求5的方法，其中的化合物是2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕-苯甲酸甲酯。
9.根据权利要求5、6、7或8的任一种方法，其中的植物是大豆。
10.根据权利要求5、6、7或8中任一种方法，其中的植物是棉花。
11.一种用于控制不需要的植物生长的方法，该方法包括将有效量的选自下列物组的化合物施于含有至少一种选自Als1和Als2的对乙酰乳酸合酶抑制剂表观抗性的基因的W20或W4-4大豆植物或其衍生物上，该化合物组为2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺;3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯;和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕-羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
12.根据权利要求11的方法，其中的化合物是选自物组2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺;和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
13.根据权利要求11的方法，其中的化合物是2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
14.根据权利要求11的方法，其中的化合物是2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
15.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的基因是Als1。
16.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的基因是Als2。
17.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的大豆是W20。
18.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的大豆是W4-4。
19.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的大豆植物是由包含系W20的杂交而衍生的。
20.根据权利要求11、12、13或14中任一种方法，其中的大豆是由包含系W4-4的杂交而衍生的。
21.一种用于控制不需要的植物生长的方法，该方法包括将有效量的选自下列物组的化合物施于选自19-51a、19-58b、19-58c、19-94、19-114a、19-114b、B6D-4a、20-10、20-32、25-1、25-2、25-5和其衍生物的棉花植物上，该化合物组为2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺;3-氯-2-〔〔〔〔(4，6-二甲基-2-嘧啶基)氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸1-甲基乙酯，和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
22.根据权利要求21的方法，其中的化合物选自物组2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺，和2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
23.根据权利要求21的方法，其中的化合物是2-氯-6-(1-氟乙基)-N-〔〔(4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基〕羰基〕苯磺酰胺。
24.根据权利要求21的方法，其中的化合物是2-〔〔〔〔〔4，6-双(二氟甲氧基)-2-嘧啶基〕氨基〕羰基〕氨基〕磺酰基〕苯甲酸甲酯。
25.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是19-51a。
26.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是B6D-4a。
27.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是20-10。
28.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是25-2。
29.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是25-5。
30.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是由19-51a衍生的。
31.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是由B6D-4a衍生的。
32.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是由20-10衍生的。
33.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是由25-2衍生的。
34.根据权利要求21、22、23或24中任一种方法，其中的棉花是由25-5衍生的。
全文摘要
本发明涉及一种磺酰脲类除草剂，其适于农用的组合物以及它们的使用方法，该除草剂可控制不需要的植物生长，并且对于含有至少一种对乙酰乳酸合酶抑制剂表现抗性的基因的棉花和大豆植物是安全的。
文档编号C07D239/52GK1066845SQ9210248
公开日1992年12月9日 申请日期1992年3月17日 优先权日1991年4月12日
发明者D·R·福尼, S·K·吉, J·D·朗, M·F·施莱希特 申请人:纳幕尔杜邦公司
再多了解一些
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