专利名称：制备[1]苯并吡喃并[4，3-c]吡唑类化合物的方法
技术领域：
本发明涉及制备新的治疗剂，具体为〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑类化合物的方法，涉及这些化合物作为免疫调节剂的治疗作用。
本发明涉及制备新的式Ⅰ化合物或其可药用盐的方法，
式中，R1代表氢、氰基、C2-6链烷酰基、C2-6烷氧羰基、CONH2，或者R1代表C1-6烷基、或C2-6链烯基，并且两者均可由氰基、卤素、三氟甲基、羟基、苯甲酰基、C2-6链烷酰氧基、C3-8环烷氧基羰基、含有2个氧杂原子的5-7元非芳族杂环基、CONR9R9′、苯氧基或C1-6烷氧基取代，其中所述C1-6烷氧基可进一步被卤素、羟基、C1-6烷氧基或C2-6链烷酰氧基取代;R2代表氢或氯;R3代表氯或三氟甲基;或者R2与R3连接形成稠合的苯并环;R4代表氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤素;R9和R9′相同或不同，代表氢、C1-6烷基或苄基。
可以理解，含有3个或更多个碳原子链的基团可以是直链或支链的，例如，丙基包括正丙基和异丙基、丁基包括正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。术语“卤素”包括氟、氯或溴。
优选地，R1代表氢、氰基、氨甲酰基、C2-4链烷酰基(例如，乙酰基)，C2-4烷氧羰基(例如，甲氧羰基或乙氧羰基)，或-CH2R10，其中，R10代表氢、氰基、三氟甲基、卤素、羟基、C3-8环烷氧羰基(优选环丁氧羰基)、苯甲酰基、CONHR9(例如，氨甲酰基、甲基氨甲酰基、乙基氨甲酰基或丙基氨甲酰基)或含有2个氧杂原子的5-7元非芳族杂环基团(例如，1，3-二氧杂环戊烷-2-基或1，3-二氧杂环己烷-2-基);或者R10代表C1-4烷基(例如，甲基、乙基或丙基，比较优选甲基或乙基)或C2-4链烯基(例如乙烯基)，该烷基或链烯基都可任意地由下述基团取代羟基、氰基、三氟甲基、卤素(优选氯或溴)，C1-6烷氧基(优选甲氧基或乙氧基)、C1-6烷氧基(C1-6)烷氧基(优选2-甲氧基乙氧基)、C2-6链烷酰氧基(C1-6)烷氧基(优选乙酰氧基乙氧基)、羟基(C1-6烷氧基)(优选2-羟基乙氧基)、C2-6链烷酰氧基(优选乙酰氧基或丙酰氧基)、苯氧基、苯甲酰基、CONHR9(例如，氨甲酰基、甲基氨甲酰基、乙基氨甲酰基或丙基氨甲酰基)或含有2个氧杂原子的5-7元非芳族杂环基(例如，1，3-二氧杂环戊烷-2-基或1，3-二氧杂环己烷-2-基)。
在优选的化合物，R1代表(CH2)pJ，其中，J代表氢、C1-6烷氧基、氰基、卤素或氨甲酰基，p是0、1或2，R1具体为氢、甲基、氰基甲基、(CH2)2卤素、氨甲酰基甲基或C1-4烷氧基乙基。
优选的R1取代基是氢、甲基、乙基、丙基、丁基、烯丙基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、2-乙氧基丙基、2-(2-甲氧基乙氧基)乙基、2-(2-乙酰氧基乙氧基)乙基、2-(2-羟基乙氧基)乙基、环丁氧羰基甲基、氨甲酰基、甲基氨甲酰甲基、2-氨甲酰基乙基、3-氨甲酰基丙基、乙基氨甲酰基甲基、丙基氨甲酰基甲基、异丙基氨甲酰基甲基、苄基(甲基)氨甲酰基甲基、氨甲酰基甲基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、2-乙酰氧基乙基、氰基、氰基甲基、2-氰基乙基、2-苯氧基乙基、2-氯乙基、2-溴乙基、2，2，2-三氟乙基、2-丙酰氧基乙基、1，3-二氧杂环戊烷-2-基甲基、2-(1，3-二氧杂环己烷-2-基)乙基、2-(1，3-二氧杂环戊烷-2-基)乙基、乙酰基、苯甲酰基甲基、乙氧羰基。
在特别优选的化合物中，R1代表甲基或2-乙氧基乙基。
在优选的式Ⅰ化合物中，R2代表氢。
在优选的式Ⅰ化合物中，R3代表氯或三氟甲基，特别优选三氟甲基。
在优选的式Ⅰ化合物中，R4代表氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氟、氯、或溴。更加优选的R4是氢、甲基、甲氧基或乙氧基，最优选氢或甲氧基。
优选的R9是氢、甲基或乙基或苄基，特别优选氢或甲基。
优选的R9′代表氢或苄基。
具体的式Ⅰ化合物是表A列出的在本发明具体实施例中提供的那些化合物或其可药用盐。
式Ⅰ化合物可以含有一个或多个手性中心，可以不同的光学活性形式存在。当式Ⅰ化合物含有一个手性中心时，该化合物以两种对映异构的形式存在，本发明包括这两种对映异构体和该对映异构体的混合物。采用本领域普通技术人员公知的方法可以折分对映异构体，例如，形成可以分离的非对映异构的盐或配合物，然后采用诸如结晶法分离;形成可以分离的非对映异构体衍生物，然后采用诸如结晶法气-液或液相层析法分离;通过与某一对映异构体专一试剂反应，例如，进行酶催氧化或还原反应使其中一个对映异构体发生选择性衍生化作用;或者在手性环境中进行气-液或液相层析，例如，采用手性载体(例如带有键合的手性配位体的二氧化硅)，或采用手性溶剂进行层析。另外，通过采用光学活性试剂、底物、催化剂或溶剂的不对称合成法，或者通过不对称转化反应将一个对映体转化为另一个对映体，由此可以合成特定的对映异构体。
例如，下述化合物也可以以R-或S-对映异构体形式存在4-(4-氯苯基)-2-(2-乙氧基丙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮。
当式Ⅰ化合物含有一个以上手性中心时，这类化合物可以非对映异构体的形式存在。本发明包括每一个非对映异构体和各非对映异构体的混合物。采用本领域普通技术人员熟知的方法，例如，通过结晶法或液相层析可以分离非对映异构体。
某些式Ⅰ化合物可以以不同的互变异构形式或者以不同的几何异构体形式存在。
某些式Ⅰ化合物可能有不止一种晶形，本发明包括每一种晶形和它们的混合物。
某些式Ⅰ化合物也可以以溶剂化物，例如，以水合物的形式存在，本发明包括每一种溶剂化物和它们的混合物。
本发明还包括含有治疗有效量的式Ⅰ化合物和和可药用稀释剂或载体的药物组合物。
下文所采用的术语“活性化合物”代表式Ⅰ的〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑。在用于治疗时，可以口服、直肠给药、非经胃肠道给药或局部给药的途径服用活性化合物，其中优选口服或局部给药。因此，本发明的治疗用组合物可采用适用于口服、直肠、非胃肠道或局部给药的已知药物组合物的任何形式。适用于这类组合物的可药用载体是药学领域中众所周知的。本发明组合物可以含有0.1-90%(重量)的活性化合物。一般，将本发明组合物制成单位剂量形式。用于制备这些组合物的赋形剂是药学领域中已知的赋形剂。
在本发明的组合物中，根据需要，可以将活性化合物与其他可与之配伍的药理活性成分混合。
式Ⅰ化合物可用作免疫调节剂，一般是用作免疫抑制剂，但是，某些化合物在某些病例中可呈现免疫刺激活性。本发明化合物可用于治疗由于异常免疫反应而引起的疾病。因此，含有治疗有效量的式Ⅰ化合物的药物组合物可用于治疗与免疫有关的疾病，例如，组织排斥(如肾排斥);自身免疫疾病，例如，风湿性关节炎、全身性红斑狼疮;皮肤病，例如，接触性过敏症、湿疹和牛皮癣;肿瘤形成，例如，黑素瘤。
在这种治疗中，每天服用式Ⅰ化合物的量应收到治疗效果，一般为为0.1-2000mg，优选1-500mg。
因此，另一方面，本发明还包括治疗与免疫有关的疾病的方法，该方法包括服用治疗有效量的式Ⅰ化合物。
通过在一般试验室动物身上进行试验已证实了式Ⅰ化合物的治疗活性。这类试验包括例如给BALB/c小鼠口服以及非胃肠道给予所述化合物，因此，式Ⅰ化合物可用作免疫调节剂。尽管活性化合物的准确给药量取决于众多因素(例如，患者的年龄、疾病的严重程度以及以往的病史)，并且总是要取决于主治医生的正确判断，但是，适用于哺乳动物(包括人)口服的剂量一般为0.01-40mg/kg/天，更经常的是0.2-25mg/kg/天，通过一次或分成多次给药。就非经胃肠道给药而言，一次或分次给药或连续输液的适宜剂量一般为0.001-4.0mg/kg/天，更常用的是0.005-1mg/kg/天。用于局部给药的适宜制剂中一般含有0.01-20%(重量)，更经常的是0.05-5%(重量)的活性成分。优选口服给药。
现在描述制备式Ⅰ化合物的方法。这些方法构成了本发明的另一个方面。
式Ⅱ化合物或其互变异构体与式Ⅲ化合物反应，可以制得式Ⅰ化合物
式中，R14代表(OQ)2或(SQ)2，而R15代表OQ或SQ或NQ12;R14代表＝NH，而R15代表OQ或SQ;或者，R14代表＝O，而R15代表氢、卤素或1-咪唑基;Q和Q1代表C1-4烷基或苄基。
在适宜的溶剂(如乙醇)中，使式Ⅳ化合物或其互变异构体(其中R16代表氢时)与碱(如哌啶)反应，可以制得式Ⅰ化合物
式中，R16代表氢、COR18基团(式中，R18代表氢、C1-4烷基、苄基或R5基团)，R17代表COR5，其中R5代表Ⅲa
还可以通过下法制得式Ⅰ化合物，即在碱(如三乙胺)存在下，使式Ⅳ化合物(式中，R1和R16代表COR18，R17代表氢)与酰氯(如取代的苯甲酰氯)反应，然后，在碱(例如，哌啶)存在下加热。
将相应的式中R1代表氢的式Ⅰ化合物烷化，例如，在碱(如氢化钠)存在下使之与式R1X(式中X代表卤素)的化合物反应，可以制得式中R1代表如本文所述的取代烷基或链烯基的式Ⅰ化合物。
将相应的式中R1是氢的式Ⅰ化合物酰化，例如，使之与酰卤反应，可以制得式中R1代表C2-6链烷酰基的式Ⅰ化合物。
将相应的式中R1代表氢的式Ⅰ化合物氰基化，例如，在碱(如氢化钠)存在下使之与溴化氰反应，可以制得式中R1代表氰基的式Ⅰ化合物。
用C2-6烷氧羰基取代相应的式中R1代表氢的式Ⅰ化合物，例如，使该式Ⅰ化合物与(C2-6烷氧羰基)-A(式中A是离去基团，例如，氰基或卤素)反应，可以制得式中R1代表C2-6烷氧羰基的式Ⅰ化合物。
将相应的式中R1是氰基烷基(例如，氰基甲基)的式Ⅰ化合物水解，可以制得式中R1代表氨甲酰基烷基(例如，氨甲酰甲基)的式Ⅰ化合物。
使相应的式中R1代表氢的式Ⅰ化合物与式R30N＝C＝O异氰酸酯反应，可以制得式中R1代表CONHR30(R30代表易水解基团，例如，氯磺酰基)的式Ⅰ化合物。将相应的式中R1代表CONHR30的式Ⅰ化合物水解(例如，酸性水解)可以制得式中R1代表氨甲酰基的式Ⅰ化合物。
式中R1基团是由酰胺基团(CONR9R9′)取代的式Ⅰ化合物可由下述方法制得例如，在0-250℃，任意地在有机液体(优选是反应物的溶剂)中，任意地在催化剂存在下，使-COA(其中，A代表下述离去基团羟基、卤素、C1-6烷氧基、芳氧基、芳基甲氧基或C1-6酰氧基)取代的相应式Ⅰ化合物分别与C1-6烷醇或胺(HNR9R9′)反应。
式中R2代表由羟基取代的基团的式Ⅰ化合物可通过将相应的由C2-6链烷酰氧基(例如，乙酰氧基)取代的式Ⅰ化合物水解来制备。
式中R1由C2-6链烷酰氧基取代的式Ⅰ化合物可通过酰化相应的羟基取代的式Ⅰ化合物来制备。
由式Ⅴ化合物与式H2NNHR1肼反应，可以制得式Ⅱ化合物
采用下述方法可以制得式中R14代表(OQ)2，R15代表OQ的式Ⅲ化合物;例如，a)使式中X是卤素的式R5CX3化合物与式中Q是C1-4烷基或苄基的式NaOQ醇钠反应，或者b)在无水酸(例如，氯化氢)存在下，使式R5CN化合物与式QOH醇反应，得到式R5C(＝NH)OQ化合物的酸加成盐，例如，盐酸盐，然后再使其与式QOH醇反应。
式中R16代表COR18、R17代表COR5的式Ⅳ化合物可如下制备将式中R16代表COR18、R17代表氢的式Ⅳ化合物酰化，例如，在相应酸的盐(例如，钠盐)存在下与式(R5CO)2O的酸酐反应或在碱(例如三乙胺)存在下与例如式R5COCl的酰卤反应。
将式Ⅱ化合物酰化，例如，在式R18COOH酸的盐(例如，钠盐)存在下，使式Ⅱ化合物与式(R18CO)2O酸酐反应，可以制得式中R16代表COR18、R17代表氢的式Ⅳ化合物。
在适宜的溶剂(例如，乙醇)中，使式中R16代表COR18，R17代表COR5的式Ⅳ化合物与碱(例如，哌啶)反应，可以制得式中R17代表COR5、R16代表氢的式Ⅳ化合物或其互变异构体。
在式R18COOH酸的盐(例如，钠盐)存在下，由式中R1代表氢的式Ⅱ化合物与式(R18CO)2O酸酐反应，可以制得式中R1和R16代表COR18(R18如前文限定)、R17代表氢的式Ⅳ化合物。
在酰氯(如磷酰氯)和路易斯酸(如氯化锌)存在下，使式中R23代表氢的式Ⅵ化合物与丙二酸反应，可以制得式Ⅴ化合物
由式中R23代表乙酰基的式Ⅵ化合物与碱(例如，氢化钠)和式(QO)2CO碳酸二烷酯(式中Q为C1-4烷基或苄基)，例如，碳酸二甲酯反应，可以制得式Ⅴ化合物。
由式中R4代表卤素(如氟)、R23代表乙酰基的式Ⅵ化合物与碱(例如，氢化钠)和式中Q代表C1-4烷基或苄基的式(QO)2CO碳酸二烷酯(例如，碳酸二甲酯)反应，可以制得式中R4为C1-6烷氧基的式Ⅴ化合物。
相信，一些式Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ中间体化合物是新化合物。作为本发明的一个方面，本文所有的新化合物均要求保护。
下述非限定性实施例用于解释本发明。在实施例中，份数和百分比均按重量计，混合溶剂的组成按体积计。通过元素分析和一种或多种下述光谱技术进行鉴定核磁共振、红外光谱和质谱。
实施例1a)在氮气氛、煮沸回流和搅拌下，用30分钟将2′-氟-6′-羟基苯乙酮(30g)滴加到氢化钠(17.1g，60%矿物油分散体)在无水甲苯(400ml)中的混悬液中。再煮沸20分钟后，在不中断加热的情况下用10分钟时间滴加碳酸二乙酯(50.8g)。搅拌所得混合物，加热回流20小时，将该反应混合物冷却至常温、滴加水(150ml)。分离后，用乙醚洗涤水相，然后用浓盐酸酸化，过滤收集沉淀，用水洗涤，干燥、并用乙酸乙酯重结晶后，得到5-乙氧基-4-羟基香豆素，m.p.110-111℃。
实施例2.
将4-羟基香豆素(10.0g)乙肼草酸盐(14.25g)、三乙胺(24.0ml)在无水甲苯(50ml)中的混合物搅拌下加热回流3小时，同时除去反应中形成的水。将过滤收集的固体在水与二氯甲烷之间分配，干燥有机层，蒸发，得到一固体，经丁醇重结晶后，得到1-乙基-3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮，m.p.147-150℃。
实施例3.
用0.25小时，将肼(32.3g)滴加到搅拌着的4-羟基香豆素(50.0g)在无水乙醇(1.2升)中的溶液中，搅拌下，将该反应混合物加热回流20小时。将该溶液冷却，用冰乙酸(154ml)酸化，减压下蒸除乙醇，剩下一油状物，然后倒入水(1.5升)中。滤出产生固体，用水洗涤，干燥，并用异丙醇重结晶，得到3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮，m.p.205-207℃。
实施例4-6.
以类似于实施例3所述方法，按下文表A所归纳的条件(其中，给出了取代基R4和R1的定义)，由式Ⅴ化合物与式H2NNHR1的肼反应，制得了式Ⅱ化合物。
实施例4-6中制得的是下述式Ⅱ化合物实施例4.
3-(2-羟基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮实施例5.
3-(2-羟基-6-甲氧基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮实施例6.
3-(2-羟基-6-甲基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮实施例7.
将4-三氟甲基苄腈(25g)在无水乙醚(120ml)和无水甲醇(6ml)中的溶液冷却至0-5℃，并用氯化氢气体饱和。将该反应混合物在熔融冰浴中放置过夜，过滤收集沉淀出的亚氨盐，用乙醚洗涤，在干燥器中干燥，搅拌下将该固体加到分析纯甲醇(78.3ml)中，并将该混合物在常温下搅拌5天。将该反应混合物过滤，将滤液减压蒸发，得到原(4-三氟甲基苯甲酸)三甲酯，油状物，不经进一步纯化即可使用。
实施例8.
a)将4-羟基-5-甲氧基香豆素(4.0g)和水合肼(3.0ml)的混合物在工业用甲醇变性酒精(84ml)中煮沸回流4.75小时。冷却后，加入冰乙酸(13.3ml)，减压下除去醇。将残留物加到水中，分离出胶状物，加入少量的二氯甲烷后固化。过滤收集固体，得到3-(2-羟基-6-甲氧基苯基)-2-吡唑啉-5-酮，m.p.208-210℃。
b)在氮气氛下，将3-(2-羟基-6-甲氧基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(2.06g)和1-(4-三氟甲基苯甲酰基)咪唑(5.04)在无水二甲苯(50ml)中的混合物搅拌下加热回流0.5小时，然后冷却至常温。过滤收集形成的固体，然后将其溶解在煮沸的工业用甲醇变性酒精/二氯甲烷(1∶2)中。蒸除二氯甲烷，直到析出固体为止。将该混合物冷却至常温，过滤，得到9-甲氧基-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.＞280℃(分解)。
c)将氢化钠(0.114g，60%矿物油分散体)加到9-甲氧基-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3-(2H)-酮(0.94g)在无水N，N-二甲基甲酰胺(55ml)中的混悬液中。将该混合物在常温下搅拌10分钟，然后滴加2-溴乙基乙基醚(0.36ml，90%)，继之，在常温下搅拌16小时。将该混合物加到含有少量石油醚(b.p.62-68℃)的水中，用2M盐酸将该混合物酸化，过滤，得到2-(2-乙氧基乙基)-9-甲氧基-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.164-168℃。
实施例9.
a)将5-乙氧基-4-羟基香豆素(5.0g)(实施例1)和甲基肼(2.2g)在工业用甲醇变性酒精(60ml)中的混合物加热回流20小时。冷却后，减压下蒸除溶剂，得到粗产物，向该粗产物中加入甲醇(50ml)和浓盐酸(20ml)，将所得溶液加热回流2小时。减压下蒸除溶剂后，用水研制残留物，过滤收集所得固体，干燥，得到3-(2-羟基-6-乙氧基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮。
b)将前述(a)所得固体(3.2g)和原(4-氯苯甲酸)三甲酯(9.0g)一起，在130-140℃加热45分钟。将该混合物冷却至常温，加入己烷(50ml)，倾出上清液，在残留的油中加入乙醚(80ml)，沉淀出固体。过滤收集固体，用乙醚洗涤，干燥，然后用异丙醇重结晶，得到4-(4-氯苯基)-9-乙氧基-2-甲基〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.197-199℃。
实施例10.
a)将4-羟基香豆素(3.6g)和70% 2，2，2-三氟乙基肼水溶液(5.0g)在甲苯(27ml)中的混合物加热回流4小时，同时除去水。用热二氯甲烷提取经冷却后过滤收集的固体，过滤，蒸发滤液。将固体产物先用甲苯、再用二氯甲烷重结晶，得到3-(2-羟基苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-2-吡唑啉-5-酮，m.p.163-165℃。
b)将前述(a)中所得固体(1.2g)和原(4-氯苯甲酸)三甲酯(3.0g)一起在125℃加热10分钟。将该混合物冷却，用乙醚(10ml)稀释，所得固体用N，N-甲基甲酰胺和甲醇的混合物重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-(2，2，2-三氟乙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.214-215℃(分解)。
实施例11.
a)将3-(2-羟基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮(3.8g)(按实施例4制备)、无水乙酸钠(1.64g)和乙酸酐(30ml)的混合物在常温下搅拌1.5小时。将该反应混合物加到10倍体积的水中，用乙酸乙酯提取。合并有机提取液，用水洗涤，干燥、蒸发。用石油醚(b.p.60-80℃)研半结晶状残留物，过滤收集固体，干燥，得到3-(2-羟基苯基)-1-甲基-5-吡唑基乙酸酯，m.p.113-116℃。
b)在0-5℃，用10分钟将3，4-二氯苯甲酰氯(4.4g)的四氢呋喃(80ml)溶液，加到搅拌着的3-(2-羟基苯基)-1-甲基-5-吡唑基乙酸酯(4.5g)的四氢呋喃(100ml)和三乙胺(3ml)中的溶液中。将该混合物在常温下搅拌18小时，然后追加3，4-二氯苯甲酰氯(4.4g)在四氢呋喃(80ml)和三乙胺(3ml)中的溶液。再搅拌24小时后，将该反应混合物倒入水(1升)中，并用乙酸乙酯提取。合并有机提取液，干燥，然后浓缩，直到出现沉淀为止。过滤除去3，4-二氯苯甲酸后，减压下蒸发滤液，残留物用乙酸乙酯结晶，得到3，4-二氯苯甲酸2-(5-乙酰氧基-1-甲基-3-吡唑基)苯基酯，m.p.123℃。
c)将3，4-二氯苯甲酸2-(5-乙酰氧基-1-甲基-3-吡唑基)苯基酯(1.0g)和哌啶(0.27ml)在乙醇(10ml)中加热回流2小时。将该反应混合物冷却至0℃。过滤收集产物，用乙醇进行重结晶，得到4-(3，4-二氯苯基)-2-甲基〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.193-194℃。
实施例12.
a)在0-5℃，依次用三乙胺(1.5ml)和在无水四氢呋喃(10ml)中的2-萘甲酰氯(2.1g)处理3-(2-羟基苯基)-1-甲基-5-吡唑基乙酸酯(2.32g)(按实施例11a制得)的无水四氢呋喃(50ml)溶液。将该混合物在常温下搅拌20小时，然后追加三乙胺(0.75ml)和2-萘甲酰氯(1.05g)，将该混合物再搅拌20小时。将该反应混合物倒入水(10倍体积)中，并用乙酸乙酯提取。合并有机提取液，依次用饱和碳酸钠水溶液和水洗涤，然后干燥。减压下蒸发后，用乙醚研制残留物，过滤收集形成的固体。
b)将部分步骤(a)所得固体粗产物(2.43g)和哌啶(0.63ml)在无水乙醇(19ml)中煮沸回流30分钟。冷却后，将该混合物过滤，得到2-(1-甲基-5-氧代-4，5-二氢-3-吡唑基)苯基2-萘甲酸酯，m.p.207-210℃。
c)将滤液再煮沸回流1小时。将该混合物浓缩，然后冷却。过滤收集形成的固体，得到2-甲基-4-(2-萘基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.159-161℃。
实施例13.
将3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(2.32g)和原(4-氯苯甲酸)三乙酯(10.2g)的混合物在搅拌下，于130-135℃加热1小时。将该混合物冷却至常温，用乙醚稀释，滤出所得固体，洗涤，干燥。固体用工业用甲醇变性酒精重结晶(采用活性炭)，得到4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.255-257℃。
实施例14-18.
以类似于实施例13所述的方法，按下文表B中归纳的条件(表中给出了式Ⅱ化合物中R4和R1取代基的含义)，由式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物反应，制得了式Ⅰ化合物。所采用的式Ⅲ化合物是式R5C(OQ)3类化合物，其中，R2代表氢、R3和Q的含义如表B中所示。
实施例19.
将3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(16g)和1-(4-氯苯甲酰基)咪唑(37.5g)在二甲苯(200ml)中的混合物搅拌下加热回流3小时。使该混合物冷至70℃，然后过滤，得到4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.255-257℃。
实施例20.
将原(4-三氟甲基苯甲酸)三甲酯(5.5g)(按实施例7所述方法制得)和3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(1.94g)的混合物在135-140℃加热4小时。将该混合物冷却至0℃，滤出形成的固体，用乙醚洗涤。用热水研制固体，过滤，得到4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.271-273℃。
实施例21.
在氮气氛和搅拌下，将3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(30.2g)、1-(4-三氟甲基苯甲酰基)咪唑(86.5g)和二甲苯(800ml)的混合物煮沸回流4小时。使该反应混合物冷却至40℃，过滤，得到4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.270-272℃。
实施例22.
a)将3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(3.52g)和乙酸钠(1.64g)在乙酸酐(30ml)中的混合物于常温下搅拌3小时。将该混合物倒入水和石油醚(b.p.62-68℃，10∶1)中，过滤收集固体，得到1-乙酰基-3-(2-羟基苯基)-5-吡唑基乙酸酯的粗品，m.p.62-64℃。
b)在0-5℃搅拌1-乙酰基-3-(2-羟基苯基)-5-吡唑基乙酸酯粗品(1.53g)，三乙胺(2.1ml)和无水四氢呋喃(25ml)的混合物，同时滴加4-三氟甲基苯甲酰氯(3.21g)。将所得混合物在常温下搅拌64小时，然后倒入水中。用乙酸乙酯提取产物，合并提取液，先用水，再用饱和碳酸氢钠溶液，最后再用水洗涤。经干燥后，减压下蒸除溶剂。用热异丙醇溶解残留物，然后冷却，过滤，蒸发滤液，得到油状4-三氟甲基苯甲酸2-(5-乙酰氧基-1-乙酰基-3-吡唑基)苯基酯粗品。
c)将步骤(b)所得油状物和哌啶(0.7ml)在无水乙醇(22ml)中煮沸回流1小时。将该混合物冷却至0-5℃，然后过滤，得粗产物，采用制备型硅胶薄层层析，用二氯甲烷/甲醇(9∶1)作流动相，纯化该粗产物，得到4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.268-272℃。
实施例23.
搅拌3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(2.9g)和碳酸钾(3.2g)在无水二甲苯(30ml)中的混合物，并加热回流，同时，用15分钟滴加4-三氟甲基苯甲酰氯(6.9g)。将该混合物煮沸，搅拌2小时，然后趁热过滤。收集固体，依次用甲苯、水和乙醚洗涤，得到4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.259-263℃。
实施例24.
将3-(2-羟基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮(实施例4)(1.90g)溶解在温热的甲苯(100ml)中，然后冷却至常温，再用5.25小时将该溶液加到搅拌并煮沸着的4-氯苯甲醛(1.4g)的含哌啶(1ml)无水甲苯(50ml)溶液中，同时除去反应中形成的水。将该反应混合物减压蒸发，用乙醚研制残留物，用异丙醇重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-甲基〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.204-205℃。
实施例25.
将乙酸2-(2-氯乙氧基)乙基酯(16.7g)、溴化钠(103g)，N，N-二甲基甲酰胺(200ml)和二溴甲烷(100ml)的混合物在100℃搅拌加热48小时。将该混合物倒入乙醚(300ml)和水(200ml)中，分离有机层，用水洗涤，干燥，蒸发，得到一油状物。经减压蒸馏，得到乙酸2-(2-溴乙氧基)乙基酯，b.p.100-103℃(7mmHg)。
实施例26.
在氮气氛下，将氢化钠(0.6g，50%矿物油分散体)加到搅拌着的4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(3.70g)(按实施例13所述方法制备)在无水DMF(145ml)中的溶液中。将该混合物在常温下搅拌5分钟，然后，滴加乙酸2-溴乙基酯(1.38ml)。将该反应混合物在常温下搅拌16小时，然后倒入水和汽油(b.p.60-80℃约10∶1V/V)。将该混合物在冰浴中冷却，滤出沉淀的固体，洗涤，得到2-〔4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙基乙酸酯，m.p.126-129℃。
实施例27-41.
以类似于实施例26的方法，由4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(A)(实施例13)与式中X是卤素的式R1X化合物，按下文表C归纳的条件进行反应。制得了式Ⅰ化合物。〔表C见23、24页〕表C注释(1)将反应混合物加入水(2升)中，用浓盐酸酸化，用乙酸乙酯提取。合并提取液，用水洗涤，干燥，浓缩至出现结晶。冷却，过滤得到产物。
(2)将所得固体溶解在二氯甲烷/乙醇的混合物中，浓缩至出现结晶，过滤收集产物。
(3)用乙酸乙酯提取骤冷的混合物，合并提取液，用水洗涤，干燥，浓缩至出现结晶，过滤收集产物。
(4)将该反应混合物加到10倍体积的水中，用2M盐酸酸化。过滤收集生成的固体，干燥，然后溶解于煮沸的工业用甲醇变性酒精/二氯甲烷(1∶2)中。除去二氯甲烷，并在冰浴中将溶液冷却。过滤收集生成的固体。
(5)将该反应混合物加到水(500ml)中，用乙酸乙酯提取，合并提取液，用水洗涤，干燥，蒸发。所得固体在异丙醇中重结晶。
(6)将该反应混合物加到水中，过滤收集生成的固体，干燥。用丙酮研制该固体，过滤，用煮沸的工业用甲醇变性酒精研制残留物，然后过滤，将残留物溶于温热的二氯甲烷中，用活性炭处理，过滤，蒸发滤液，用汽油研制残留物，过滤，得到产物。
(7)将该反应混合物倒入含有2M盐酸(5ml)的水(300ml)中使其聚冷，然后用二氯甲烷提取。合并提取液，干燥，蒸发。残留物在乙醚和水之间分配，然后分离。用乙醚提取水层，合并醚提取液，干
燥，浓缩(至10ml)。过滤收集生成的固体，用石油醚(b.p.40-60℃)洗涤，干燥。经乙醇重结晶后，将产物在硅胶上进行闪式层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(98∶2)作流动相。洗脱物经乙醇重结晶，得到产物。
(8)该反应混合物在5M盐酸(600ml)和乙醚(300ml)之间分配，分离出水层，用乙醚洗涤，合并醚提取液，用水充分洗涤，干燥、蒸发。残留物经硅胶闪式层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(97∶3)作流动相。所得固体经乙醚和乙酸乙酯的混合物两次重结晶，得到产物。
(10)将该反应混合物倒入水中，用5M盐酸酸化，过滤收集固体，并用DMF重结晶。
(11)将该反应混合物倒入水中，过滤收集所得固体，并用异丙醇重结晶。
(12)采用氢化钠于矿物油中的60%分散体。
(13)将该反应混合物加到水(500ml)中，用乙醚提取，合并提取液，用水洗涤，干燥、蒸发。所得固体经乙醇重结晶。
(14)将该反应混合物加到水(2升)中，用5M盐酸酸化，用乙酸乙酯提取。合并提取液，用水洗涤，干燥，蒸发。所得的油状物用乙醚结晶。
实施例42.
以类似于实施例26的方法，将氢化钠(0.74g，60%矿物油分散体)，无水DMF(180ml)，4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(实施例13)(5.0g)和2-溴甲基-1，3-二氧杂环戊烷(1.97ml)的混合物在常温下搅拌16小时。分次追加氢化钠(0.74g)，然后追加2-溴甲基-1，3-二氧杂环戊烷(1.97ml)。将该混合物在常温下搅拌24小时，然后在70-80℃温热1小时。将该混合物冷却至常温，然后加到水中。过滤收集形成的固体。干燥，用乙醇/二氯甲烷重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-(1，3-二氮杂环戊烷-2-基甲基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.230-231℃。
实施例43.
以类似于实施例26的方法，将氢化钠(0.44g，60%矿物油分散体)、无水DMF(100ml)，4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(3.0g)(实施例13)和1-溴-2-乙氧基丙烷(2.9g)的混合物在常温下搅拌16小时。将该混合物在60℃左右温热1.5小时，然后冷却至常温。将该混合物加到水中，用乙醚提取产物。合并醚提取液，干燥、蒸发。残留物经硅胶闪式层析分离，用乙酸乙酯/石油醚(b.p.80-100℃1∶3)作流动相，得到-红色固体，经乙醇重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-(2-乙氧基丙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.118-119℃。
实施例44.
以类似于实施例26的方法，将氢化钠(1.82g，60%矿物油分散体)，无水DMF(450ml)，4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(15.0g)(实施例20)和乙酸2-溴乙基酯(7.62g)的混合物于常温下搅拌48小时。将该混合物加到水中，滤出生成的固体，并将其溶解在乙酸乙酯中，用水洗涤。减压下除去乙酸乙酯后，所得残留物经异丙醇重结晶，得到2-(3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙基乙酸酯，m.p.134-136℃。
实施例45.
以类似于实施例26的方法，将氢化钠(0.74g，60%矿物油分散体)，无水DMF(150ml)，4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(5.0g)和2-(2-溴乙基)-1，3-二氧杂环己烷(2.52ml)的混合物在常温下搅拌42小时。将该反应混合物倒入水中，用乙醚提取产物，用水洗涤提取液。蒸掉乙醚，留下固体残留物，用乙醇重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-〔2-(1，3-二噁烷-2-基)乙基〕〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.157-163℃。
实施例46.
搅拌下，将2-〔3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙基乙酸酯(17.93g)(实施例44)，2M盐酸(22ml)和工业用甲醇变性酒精(750ml)的混合物煮沸回流18小时。将该混合物冷却至0℃，过滤收集形成的固体，得到2-(2-羟基乙基)-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.199-201℃。
实施例47.
常温和搅拌下，向2-〔4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙基乙酸酯(1.53g)，(按实施例26的方法制备)在工业用甲醇变性酒精(80ml)中的悬浮液中加入稀盐酸(2ml)。将该混合物加热回流6.5小时。使该溶液冷却，并在常温下放置16小时。滤出所得晶体，用工业用甲醇变性酒精洗涤，得到4-(4-氯苯基)-2-(2-羟基乙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.179-183℃。
实施例48.
将3-〔4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕丙基乙酸酯(1.5g)(实施例41)，2M盐酸(1.9ml)和工业用甲醇变性酒精(75ml)的混合物煮沸回流5小时。将该混合物冷却至室温，过滤收集生成的固体，得到4-(4-氯苯基)-2-(3-羟基丙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.166-168℃。
实施例49.
搅拌下，将2-｛2-〔4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙氧基｝乙基乙酸酯(11g)(实施例39)，5M盐酸(100ml)和水(100ml)的混合物煮沸回流24小时。将该混合物蒸发，所得固体经异丙醇重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-〔2-(2-羟基乙氧基)乙基〕〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.110°-112℃。
实施例50.
将4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙腈(0.68g)(按实施例28的方法制得)和浓硫酸(6ml)的混合物在120℃加热0.5小时。将该反应混合物倒在冰(10倍体积)中，收集固体产物，洗涤，干燥，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.279-283℃。
实施例51.
以类似于实施例50的方法，将4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丙腈(1.0g)(按实施例32的方法制备)和浓硫酸(10ml)的混合物在120-125℃加热15分钟。经用工业用甲醇变性酒精重结晶后，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丙酰胺，m.p.264-266℃。
实施例52.
a)将4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酸(2.16g)(按实施例31的方法制备)在二氯甲烷(50ml)中的悬浮液搅拌下依次用无水DMF(0.24ml)和亚硫酰氯(1.51ml)处理。将该混合物在常温下搅拌16小时，然后减压蒸发。用无水乙醚研制残留物。过滤收集固体，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰氯。
b)将上述酰氯的一部分(1.08g)置于无水四氢呋喃(100ml)中，滴加乙胺水溶液(0.43ml，70%W/W)处理之。在0-5℃，将该混合物搅拌1.5小时，然后过滤。用乙醚(100ml)稀释滤液，在冰浴中冷却3小时，滤出固体。放置数天后，得到第二批固体。合并两批产物，先用水，再用石油醚(b.p.60-80℃)洗涤，得到4-(4-氯苯基)-N-乙基-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.238-239℃。
实施例53.
按类似于实施例52(a)的方法，将4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酸(1.87g)转化为酰氯(1.89g)，然后在0-5℃下混悬于无水四氢呋喃(172ml)中。滴加甲胺水溶液(0.69ml，25/30%W/V)，然后在熔融冰浴中将混合物搅拌2.5小时。滤出固体，先用水，再用乙醚洗涤，得到4-(4-氯苯基)-N-甲基-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.244-250℃。
实施例54.
在0-5℃和搅拌下，将丙胺(0.2ml)的无水四氢呋喃(10ml)溶液滴加到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰氯(1.07g)(实施例52a)在无水四氢呋喃(95ml)中的混合物中。将该混合物在0-5℃搅拌50分钟，然后追加丙胺(0.1ml)的无水四氢呋喃(5ml)溶液。将该混合物在0-5℃搅拌2.3小时，然后用无水乙醚(95ml)稀释、并在0-5℃搅拌1小时。将该混合物过滤，用水洗涤滤液，干燥，减压下蒸发。在Florisil
柱上分离残留物，先采用二氯甲烷，再用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流动相。用乙醚研制所得的固体，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-N-丙基-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.218-223℃。
实施例55.
于常温、搅拌下，用异氰酸氯磺酰(0.53g)处理4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(实施例13)(1.0g)在甲苯(20ml)中的混合物。将该混合物加热至70℃，并在该温度下搅拌15分钟。冷却至0℃，将该混合物过滤，用乙醚洗涤残留物，然后悬浮于冰乙酸(6ml)和水(3ml)中。将该混合物在60℃加热15分钟，然后过滤。用水洗涤残留物，干燥，经二氯甲烷/甲醇(4∶1)重结晶，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-甲酰胺，m.p.215-216℃。
实施例56.
在常温下，将乙酰氯(0.86ml)滴加到搅拌着的4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(实施例13)(3.0g)和碳酸钾(2.79g)在分析纯丙酮(20ml)中的混合物中。将该混合物在常温下搅拌42小时，追加碳酸钾(6.98g)，然后追加乙酰氯(3.6)的丙酮(分析纯、15ml)溶液。将该混合物在常温下搅拌下18小时，追加碳酸钾(2.79g)和乙酰氯(1.44ml)。并将该混合物在常温下搅拌2.25小时，然后，将该混合物煮沸回流1小时，冷却至常温，然后加到水中。过滤收集形成的固体，干燥，然后用乙腈重结晶，得到2-乙酰基-4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.224-226℃。
实施例57.
搅拌下，将4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(实施例13)(20g)和氯甲酸乙酯(200ml)的混合物煮沸回流5小时。追加氯甲酸乙酯(50ml)，搅拌该混合物，煮沸回流4小时。将该反应混合物冷却至常温，过滤收集固体，用乙腈重结晶。所得粗产物在硅胶柱上经闪式柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(9∶1)作为流动相。蒸发掉洗脱剂，得到一固体，后者经乙酸乙酯重结晶，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-羧酸乙酯，m.p.187-188℃。
实施例58.
搅拌下，将4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(实施例13)(5g)和氰基甲酸乙酯(50ml)的混合物煮沸回流3.5小时。经该反应混合物冷却至常温，用石油醚(30ml)稀释，过滤，干燥，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-羧酸乙酯，m.p.187-189℃。
实施例59.
搅拌下，将4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰氯(0.97g)(按实施例52a制备)在无水四氢呋喃(76ml)中的悬浮液先用环丁醇(0.7g)的无水四氢呋喃(10ml)溶液，然后用三乙胺(0.35ml)处理。将所得混合物在常温下搅拌2.67小时，然后过滤。用乙醚稀释滤液，用水洗涤，干燥，然后减压下蒸发。残留物在硅胶上进行制备型薄层层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(9∶1)作流动相。用乙酸乙酯提取展开快的色带，减压蒸发，得到一胶状物，用乙醚/石油醚(b.p.62-68℃，1∶1〕研制，过滤后，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酸环丁基酯，m.p.135-138℃。
实施例60.
在氮气氛下，将氢化钠(0.48g，60%矿物油分散体)加到搅拌着的4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(3.3g)(按实施例20的方法制备)在无水DMF(60ml)中的溶液中。将该混合物在常温下搅拌18小时，然后加到冰水中。用乙酸乙酯提取该混合物，合并提取液，用水洗涤，干燥，蒸发，得到一固体，经丙醇重结晶，得到3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙腈，m.p.215-217℃。
实施例61.
以类似于实施例60的方法，将4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(1.35g)，氢化钠(0.21g，50%矿物油分散体)、2-溴乙基乙基醚(0.77g)和无水DMF(50ml)混合，并于常温下搅拌42小时，所得粗产物在硅胶柱上进闪式层析纯化(用乙酸乙酯作为流动相)，经异丙醇重结晶后，得到2-(2-乙氧基乙基)-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.126-128℃。
实施例62.
搅拌下，将2-(2-羟基乙基)-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(8.22g)(按实施例46制备)和48%氢溴酸(500ml)加热回流28小时。将该反应混合物冷却至0℃，过滤收集固体，用水洗涤，然后干燥、用乙腈重结晶，得到2-(2-溴乙基)-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.145-147℃。
实施例63.
a)以类似于实施例60的方法，将4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(5g)，氢化钠(0.7g，60%矿物油分散体)、4-溴丁酸乙酯(2.4ml)和无水DMF(230ml)混合，于常温下搅拌24小时。将该反应混合物加到水(2.3升)和汽油(b.p.60-80℃中，用5M盐酸酸化，过滤收集形成的产物，干燥，得到3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酸乙酯，m.p.112-115℃。
b)将3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酸乙酯(3.0g)和5M盐酸(30ml)的混合物在96-105℃搅拌加热5小时。使该反应混合物冷却，并在常温下放置24小时。过滤收集所得固体，先用水，再用乙醚洗涤，干燥，得到3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酸，m.p.197-200℃，从189℃开始收缩。
c)在搅拌下，将3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酸(1.8g)在二氯甲烷(37ml)中的悬浮液先用DMF(0.2ml)，再用亚硫酰氯(1.2ml)处理。将该混合物在常温下搅拌24小时，然后减压蒸发，得到3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酰氯。
d)在0-5℃，搅拌由步骤(c)所得酰氯的无水四氢呋喃(88ml)溶液，并用浓氨水溶液(0.6ml)处理。将该反应混合物在0-5℃下搅拌1小时。追加浓氨水(0.2ml)，并将该混合物在0-5℃搅拌0.75小时。过滤收集生成的固体，用四氢呋喃和水洗涤，干燥，得到3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酰胺，m.p.218-221℃。
实施例64.
将4-(4-氯苯基)-2-(2-羟基乙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(28g)(按实施例47的方法制备)和亚硫酰氯(300ml)在搅拌下煮沸回流3.5小时。减压下蒸除过量的亚硫酰氯，残留物与乙腈一起搅拌。将该混合物过滤，收集到的固体用二氯甲烷重结晶，得到2-(2-氯乙基)-4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮。m.p.169-170℃。
实施例65.
在胶囊剂的制备中，将10份(重量)活性化合物和240份(重量)乳糖粉碎并充分混合。将该混合物填充到硬明胶胶囊，每粒含有10mg活性化合物。
实施例66.
在胶囊剂的制备中，将50份(重量)活性化合物、300份(重量)乳糖、和3份(重量)硬脂酸镁粉碎，并充分混合。将该混合物填充到硬明胶胶囊，每粒含有50mg活性成分。
实施例67.
由下述成分制备片剂份数(重量)活性化合物 10乳糖 190玉米淀粉 22聚乙烯吡咯烷酮 10硬脂酸镁 3将活性化合物、乳糖和一部分淀粉粉碎并充分混合，用聚乙烯吡咯烷酮的乙醇溶液将所得混合物制粒。将该干燥的颗粒与硬脂酸镁及剩余的淀粉混合。然后用压片机将该混合物压片，得到分别含有a)10mg、b)100mg、c)500mg活性化合物的片剂。
实施例68.
按实施例67的方法制备片剂。以常规的方法，采用浓度为20%的乙酸邻苯二甲酸纤维素和3%邻苯二甲酸二乙酯在乙醇/二氯甲烷(1∶1)中的溶液给片剂肠溶包衣。
实施例69.
在栓剂的制备中，将100份(重量)活性化合物掺入1300份(重量)用作栓剂基质的半合成甘油酯中，并将该混合物制成每粒含有100mg活性成分的栓剂。
实施例70.
在软膏剂的制备中，通过匀化作用将活性化合物掺入基质中，直到药物分布均匀为止。将该软膏剂装入带有带衬的螺旋盖的10g琥珀色广口瓶中。
活性化合物 0.1g软白蜡 加至10g本发明化合物是免疫调节剂、特别是免疫抑制剂，并且，它们在200mg/kg或更低的剂量时呈现治疗活性。本发明中优选化合物在50mg/kg或更低的剂量时呈现活性。通过皮肤过敏试验(CH试验)证实了本发明优选化合物的治疗活性，在该试验中，将化合物通过非经胃肠道途径给予BALB/c小鼠。用下述方法实施该试验。
取体重为16-24g的雌性BALB/c小鼠，以八只为一组。将每只小鼠的腹部刮毛，并在刮掉毛的部位涂用20μl致敏剂溶液(5%W/V 4-乙氧基亚甲基-2-苯基-2-噁唑啉-5-酮(噁唑酮)的丙酮/乙醇(1∶1，体积比)溶液。致敏后，立即按下文给出的剂量之一腹膜内注射受试化合物的悬浮液〔受试化合物悬浮于1.5% V/V脱水山梨醇酯(商品名为吐温-80)的无菌水(100μl)溶液中〕。在以后7天中，每24小时以同样的方式注射100μl同样的悬浮液。所采用的剂量选用下述数值50、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03或0.01mg/kg。
每一试验同时采用至少为八只BALB/c小鼠的两组动物作为对照组，以类似于前文所述的方式处理，不同之处是每天的注射液中不含受试化合物。
致敏后第七天，将10μl 1%W/V 噁唑酮的丙酮/橄榄油(3∶1 V/V)溶液涂于每只受试鼠和对照鼠的一只耳朵(称之为受试耳)。(在少数情况下，要采用更大的试验剂量1.5% W/V噁唑酮的丙酮/橄榄油溶液)。24小时后，用技术人员用的螺纹规测微仪测量同一动物受试耳和非受试耳的厚度。每只动物两只耳朵厚度之间的差别为该动物对噁唑酮的反应的一种量度。将接受受试化合物小鼠的反应和接受对照剂小鼠的反应之间作一比较，即可说明受试化合物作为免疫调节剂的效力。如果在某一剂量下，三组CH试验中至少有两组(或者，在多于三组的CH试验中大部分试验)，其耳朵水肿减轻20%或更多(按照Dunnett检验，为统计学显著(p＜0.05)，则认为在该剂量下化合物是有效的(参见例如，Int.Aroh.Allergy，38，p 246-259(1970))。
除另有说明外(注释列于表后)，下文表A列出的所有式Ⅰ化合物在3组50mg/kg的试验中至少有2组在50mg/kg时为活性的。表A中给出了每一化合物的最小有效剂量。化合物旁边列出的实施例编号说明在该实施例中给出了该化合物的制备方法。
表A实施例化合物名称最小有效剂量(mg/kg)8b 9-甲氧基－4－(4－三氟甲基苯基)［1］苯≤3并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮8c 2-(2-乙氧基乙基)－9－甲氧基－4－(4－3
三氟甲基苯基)［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮94－(4－氯苯基)－9－乙氧基－2－甲基［1］50苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮104－(4－氯苯基)－2－(2，2，2－三氟乙基)50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮114－(3，4－二氯苯基)－2－甲基［1］苯并吡50喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮122－甲基－4－(2－萘基)［1］苯并吡喃并50［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮13，194－(4－氯苯基)［1］苯并吡喃并［4，33－c］吡唑－3(2H)－酮14，244－(4－氯苯基)－2－甲基［1］苯并吡10喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮154－(4－氯苯基)－2－乙基［1］苯并吡喃≤50并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮164－(4－氯苯基)－9－甲氧基－2－甲基50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮174－(4－氯苯基)－2，9－二甲基［1］苯50并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮182－甲基－4－(4－三氟甲基苯基)［1］苯3并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮23，204－(4－三氟甲基苯基)［1］苯并吡喃并321，22［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮
262－［4－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二50氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－基］乙基乙酸酯274－(4－氯苯基)－2－(2－甲氧基乙基)10［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮284－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢≤50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙腈294－(4－氯苯基)－2－(2－苯氧基乙基)50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮302－烯丙基－4－(4－氯苯基)［1］苯并吡50喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮324－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－丙腈334－(4－氯苯基)－2－丙基［1］苯并吡喃50并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮344－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢≤30(a)［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－甲腈354－(4－氯苯基)－2－(2－乙氧基乙基)1［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮362－丁基－4－(4－氯苯基)［1］苯并吡喃50并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮374－(4－氯苯基)－2－［2－(2－甲氧基乙50氧基)乙基］［1］苯并吡喃并［4，3－c］
吡唑－3(2H)－酮384－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酰基苯392－｛2－［4－(4－氯苯基)－3－氧代－2，350－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－基］乙氧基｝乙基乙酸酯404－(4－氯苯基)－2－［2－(1，3－二氧杂环50戊烷－2－基)乙基］［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮424－(4－氯苯基)－2－(1，3－二氧杂环戊烷50－2－基甲基)［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮434－(4－氯苯基)－2－(2－乙氧基丙基)50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮442－［3－氧代－4－(4－三氟甲基苯基)－2，503－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－基］乙基乙酸酯454－(4－氯苯基)－2－［2－(1，3－二噁烷－502－基)乙基］［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮462－(2－羟基乙基)－4－(4－三氟甲基苯基)50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮
474－(4－氯苯基)－2－(2－羟基乙基)［1］50苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮484－(4－氯苯基)－2－(3－羟基丙基)［1］50苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮494－(4－氯苯基)－2－［2－(2－羟基乙氧基)50乙基［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮504－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢3［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酰胺514－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－丙酰胺524－(4－氯苯基)－N－乙基－3－氧代－502，3－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酰胺534－(4－氯苯基)－N－甲基－3－氧代－502，3－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酰胺544－(4－氯苯基)－N－丙基－3－氧代－2，503－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酰胺554－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢≤50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－甲酰胺
562－乙酰基－4－(4－氯苯基)［1］苯并吡喃50并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮57，584－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－甲酸乙酯594－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酸环丁酯604－(4－三氟甲基苯基)－3－氧代－2，3≤3－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙腈612－(2－乙氧基乙基)－4－(4－三氟甲基3苯基)［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－33(2H)－酮622－(2－溴乙基)－4－(4－三氟甲基苯基)≤3［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮634－(4－三氟甲基苯基)－3－氧代－2，3≤50－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－丁酰胺642－(2－氯乙基)－4－(4－氯苯基)［1］≤50苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮按类似的方法制得了下述化合物，并且发现，在前述CH试验中，在50mg/kg的剂量时，它们也呈现活性。
2-〔4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙基丙酸酯，m.p.112-114℃，4-(4-氯苯基)-N-异丙基-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.238-241℃(分解)。
N-苄基-4-(4-氯苯基)-N-甲基-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.182-183℃。
注释(a)两次试验中均在30mg/kg时呈现活性。
本发明化合物在多种其他体内筛选中也呈现出活性，表明可将这些化合物用作免疫调节剂，特别是用于抑制免疫反应。可采用口服或非胃肠道途径服用本发明化合物。在测试受试化合物对体液免疫的影响的试验(具体方法是在前述噁唑酮诱导皮肤过敏试验(CH试验)结束时收集血清，测定血清中产生的抗噁唑酮抗体的量的变化，以此确定受试化合物对体液免疫的影响)和类似于Smith S.R.，T Terminelli C.，Kipilman C.T.和Smith Y.(J.Immunopharmacology，1981;3(2)，133-170)所采用的Graft Versus Host试验中，发现一些化合物是有活性的。
例如，在前述抗体试验中发现，以50mg/kg的剂量非经胃肠给药后，下文所述实施例制得的化合物是活性的。如果将某一化合物接50mg/kg剂量给药时，通过酶连接免疫吸收测定法(ELISA)测定血清抗噁唑酮抗体的相对浓度，按下述公式计算，降低0.5或更多的话，则认为该化合物活性的。所述公式为(O.D.(C1)-O.D.(T1))/(O.D.(C1)-O.D.(C2))其中，O.D.(C1)是按1/128稀释时，对照血清的光密度，O.D.(C2)是按1/256稀释时，对照血清的光密度，O.D.(T1)是按1/128稀释时，受试血清的光密度。
用含有0.05% V/V吐温20(商品名)的磷酸盐缓冲液(pH7.3)稀释对照血清和受试血清。
在上述试验中呈活性反应的化合物是实施例8b，8c，10-15，18，20，26，27，30，33，35，37，38，40，42，44-47，49，52，55-64.
权利要求
1.制备式Ⅰ化合物的方法，
式中R1代表氢、氰基、C2-6链烷酰基、C2-6烷氧羰基、CONH2或者R1代表C1-6烷基或C2-6链烯基，并且该烷基或链烯基均可由下述基团取代氰基、卤素、三氟甲基、羟基、苯甲酰基、C2-6链烷酰氧基、C3-8环烷氧羰基、含有2个氧杂原子的5-7元非芳香杂环基，CONR9R9′、苯氧基或C1-6烷氧基、其中，C1-6烷氧基可进一步被卤素、羟基、C1-6烷氧基或C2-6链烷酰氧基取代；R2代表氢或氯；R3代表氯或三氟甲基；或者R2和R3连接形成稠合苯并环；R4代表氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤素；R9和R9′彼此相同或不同，代表氢、C1-6烷基或苄基；所述方法a)包括式Ⅱ化合物或其互变异构体与式Ⅲ化合物反应，
式中R14代表(OQ)2或(SQ)2，而R15代表OQ或SQ或NQ′2；R14代表=NH，而R15代表OQ或SQ；或者R14代表=0，而R15代表氢、卤素或1-咪唑基；以及Q和Q′代表C1-4烷基或苄基；b)包括式Ⅳ化合物或其互变异构体(R16代表氢时)与碱反应，
式中，R16代表氢或COR18，其中R18代表氢、C1-4烷基、苄基或R5，R17代表COR5。
2.根据权利要求1的化合物制备方法，其中，R2代表氢;R3代表氯或三氟甲基;R1代表(CH2)pJ，J代表氢、C1-6烷氧基、氨甲酰基、氰基或卤素;R4代表氢或C1-5烷氧基，p是0、1或2。
3.根据权利要求2的化合物制备方法，其中，R1代表氢、甲基、氰基甲基、(CH2)2卤素、氨甲酰甲基或C1-4烷氧基乙基。
全文摘要
制备用作免疫调节剂的上式I化合物的方法，式中，R
文档编号C07D491/04GK1069271SQ9110526
公开日1993年2月24日 申请日期1991年8月2日 优先权日1988年8月9日
发明者R·B·蒂特曼, M·H·霍克利 申请人:布茨公司
技术领域：
本发明涉及制备新的治疗剂，具体为〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑类化合物的方法，涉及这些化合物作为免疫调节剂的治疗作用。
本发明涉及制备新的式Ⅰ化合物或其可药用盐的方法，
式中，R1代表氢、氰基、C2-6链烷酰基、C2-6烷氧羰基、CONH2，或者R1代表C1-6烷基、或C2-6链烯基，并且两者均可由氰基、卤素、三氟甲基、羟基、苯甲酰基、C2-6链烷酰氧基、C3-8环烷氧基羰基、含有2个氧杂原子的5-7元非芳族杂环基、CONR9R9′、苯氧基或C1-6烷氧基取代，其中所述C1-6烷氧基可进一步被卤素、羟基、C1-6烷氧基或C2-6链烷酰氧基取代;R2代表氢或氯;R3代表氯或三氟甲基;或者R2与R3连接形成稠合的苯并环;R4代表氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤素;R9和R9′相同或不同，代表氢、C1-6烷基或苄基。
可以理解，含有3个或更多个碳原子链的基团可以是直链或支链的，例如，丙基包括正丙基和异丙基、丁基包括正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。术语“卤素”包括氟、氯或溴。
优选地，R1代表氢、氰基、氨甲酰基、C2-4链烷酰基(例如，乙酰基)，C2-4烷氧羰基(例如，甲氧羰基或乙氧羰基)，或-CH2R10，其中，R10代表氢、氰基、三氟甲基、卤素、羟基、C3-8环烷氧羰基(优选环丁氧羰基)、苯甲酰基、CONHR9(例如，氨甲酰基、甲基氨甲酰基、乙基氨甲酰基或丙基氨甲酰基)或含有2个氧杂原子的5-7元非芳族杂环基团(例如，1，3-二氧杂环戊烷-2-基或1，3-二氧杂环己烷-2-基);或者R10代表C1-4烷基(例如，甲基、乙基或丙基，比较优选甲基或乙基)或C2-4链烯基(例如乙烯基)，该烷基或链烯基都可任意地由下述基团取代羟基、氰基、三氟甲基、卤素(优选氯或溴)，C1-6烷氧基(优选甲氧基或乙氧基)、C1-6烷氧基(C1-6)烷氧基(优选2-甲氧基乙氧基)、C2-6链烷酰氧基(C1-6)烷氧基(优选乙酰氧基乙氧基)、羟基(C1-6烷氧基)(优选2-羟基乙氧基)、C2-6链烷酰氧基(优选乙酰氧基或丙酰氧基)、苯氧基、苯甲酰基、CONHR9(例如，氨甲酰基、甲基氨甲酰基、乙基氨甲酰基或丙基氨甲酰基)或含有2个氧杂原子的5-7元非芳族杂环基(例如，1，3-二氧杂环戊烷-2-基或1，3-二氧杂环己烷-2-基)。
在优选的化合物，R1代表(CH2)pJ，其中，J代表氢、C1-6烷氧基、氰基、卤素或氨甲酰基，p是0、1或2，R1具体为氢、甲基、氰基甲基、(CH2)2卤素、氨甲酰基甲基或C1-4烷氧基乙基。
优选的R1取代基是氢、甲基、乙基、丙基、丁基、烯丙基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、2-乙氧基丙基、2-(2-甲氧基乙氧基)乙基、2-(2-乙酰氧基乙氧基)乙基、2-(2-羟基乙氧基)乙基、环丁氧羰基甲基、氨甲酰基、甲基氨甲酰甲基、2-氨甲酰基乙基、3-氨甲酰基丙基、乙基氨甲酰基甲基、丙基氨甲酰基甲基、异丙基氨甲酰基甲基、苄基(甲基)氨甲酰基甲基、氨甲酰基甲基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、2-乙酰氧基乙基、氰基、氰基甲基、2-氰基乙基、2-苯氧基乙基、2-氯乙基、2-溴乙基、2，2，2-三氟乙基、2-丙酰氧基乙基、1，3-二氧杂环戊烷-2-基甲基、2-(1，3-二氧杂环己烷-2-基)乙基、2-(1，3-二氧杂环戊烷-2-基)乙基、乙酰基、苯甲酰基甲基、乙氧羰基。
在特别优选的化合物中，R1代表甲基或2-乙氧基乙基。
在优选的式Ⅰ化合物中，R2代表氢。
在优选的式Ⅰ化合物中，R3代表氯或三氟甲基，特别优选三氟甲基。
在优选的式Ⅰ化合物中，R4代表氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氟、氯、或溴。更加优选的R4是氢、甲基、甲氧基或乙氧基，最优选氢或甲氧基。
优选的R9是氢、甲基或乙基或苄基，特别优选氢或甲基。
优选的R9′代表氢或苄基。
具体的式Ⅰ化合物是表A列出的在本发明具体实施例中提供的那些化合物或其可药用盐。
式Ⅰ化合物可以含有一个或多个手性中心，可以不同的光学活性形式存在。当式Ⅰ化合物含有一个手性中心时，该化合物以两种对映异构的形式存在，本发明包括这两种对映异构体和该对映异构体的混合物。采用本领域普通技术人员公知的方法可以折分对映异构体，例如，形成可以分离的非对映异构的盐或配合物，然后采用诸如结晶法分离;形成可以分离的非对映异构体衍生物，然后采用诸如结晶法气-液或液相层析法分离;通过与某一对映异构体专一试剂反应，例如，进行酶催氧化或还原反应使其中一个对映异构体发生选择性衍生化作用;或者在手性环境中进行气-液或液相层析，例如，采用手性载体(例如带有键合的手性配位体的二氧化硅)，或采用手性溶剂进行层析。另外，通过采用光学活性试剂、底物、催化剂或溶剂的不对称合成法，或者通过不对称转化反应将一个对映体转化为另一个对映体，由此可以合成特定的对映异构体。
例如，下述化合物也可以以R-或S-对映异构体形式存在4-(4-氯苯基)-2-(2-乙氧基丙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮。
当式Ⅰ化合物含有一个以上手性中心时，这类化合物可以非对映异构体的形式存在。本发明包括每一个非对映异构体和各非对映异构体的混合物。采用本领域普通技术人员熟知的方法，例如，通过结晶法或液相层析可以分离非对映异构体。
某些式Ⅰ化合物可以以不同的互变异构形式或者以不同的几何异构体形式存在。
某些式Ⅰ化合物可能有不止一种晶形，本发明包括每一种晶形和它们的混合物。
某些式Ⅰ化合物也可以以溶剂化物，例如，以水合物的形式存在，本发明包括每一种溶剂化物和它们的混合物。
本发明还包括含有治疗有效量的式Ⅰ化合物和和可药用稀释剂或载体的药物组合物。
下文所采用的术语“活性化合物”代表式Ⅰ的〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑。在用于治疗时，可以口服、直肠给药、非经胃肠道给药或局部给药的途径服用活性化合物，其中优选口服或局部给药。因此，本发明的治疗用组合物可采用适用于口服、直肠、非胃肠道或局部给药的已知药物组合物的任何形式。适用于这类组合物的可药用载体是药学领域中众所周知的。本发明组合物可以含有0.1-90%(重量)的活性化合物。一般，将本发明组合物制成单位剂量形式。用于制备这些组合物的赋形剂是药学领域中已知的赋形剂。
在本发明的组合物中，根据需要，可以将活性化合物与其他可与之配伍的药理活性成分混合。
式Ⅰ化合物可用作免疫调节剂，一般是用作免疫抑制剂，但是，某些化合物在某些病例中可呈现免疫刺激活性。本发明化合物可用于治疗由于异常免疫反应而引起的疾病。因此，含有治疗有效量的式Ⅰ化合物的药物组合物可用于治疗与免疫有关的疾病，例如，组织排斥(如肾排斥);自身免疫疾病，例如，风湿性关节炎、全身性红斑狼疮;皮肤病，例如，接触性过敏症、湿疹和牛皮癣;肿瘤形成，例如，黑素瘤。
在这种治疗中，每天服用式Ⅰ化合物的量应收到治疗效果，一般为为0.1-2000mg，优选1-500mg。
因此，另一方面，本发明还包括治疗与免疫有关的疾病的方法，该方法包括服用治疗有效量的式Ⅰ化合物。
通过在一般试验室动物身上进行试验已证实了式Ⅰ化合物的治疗活性。这类试验包括例如给BALB/c小鼠口服以及非胃肠道给予所述化合物，因此，式Ⅰ化合物可用作免疫调节剂。尽管活性化合物的准确给药量取决于众多因素(例如，患者的年龄、疾病的严重程度以及以往的病史)，并且总是要取决于主治医生的正确判断，但是，适用于哺乳动物(包括人)口服的剂量一般为0.01-40mg/kg/天，更经常的是0.2-25mg/kg/天，通过一次或分成多次给药。就非经胃肠道给药而言，一次或分次给药或连续输液的适宜剂量一般为0.001-4.0mg/kg/天，更常用的是0.005-1mg/kg/天。用于局部给药的适宜制剂中一般含有0.01-20%(重量)，更经常的是0.05-5%(重量)的活性成分。优选口服给药。
现在描述制备式Ⅰ化合物的方法。这些方法构成了本发明的另一个方面。
式Ⅱ化合物或其互变异构体与式Ⅲ化合物反应，可以制得式Ⅰ化合物
式中，R14代表(OQ)2或(SQ)2，而R15代表OQ或SQ或NQ12;R14代表＝NH，而R15代表OQ或SQ;或者，R14代表＝O，而R15代表氢、卤素或1-咪唑基;Q和Q1代表C1-4烷基或苄基。
在适宜的溶剂(如乙醇)中，使式Ⅳ化合物或其互变异构体(其中R16代表氢时)与碱(如哌啶)反应，可以制得式Ⅰ化合物
式中，R16代表氢、COR18基团(式中，R18代表氢、C1-4烷基、苄基或R5基团)，R17代表COR5，其中R5代表Ⅲa
还可以通过下法制得式Ⅰ化合物，即在碱(如三乙胺)存在下，使式Ⅳ化合物(式中，R1和R16代表COR18，R17代表氢)与酰氯(如取代的苯甲酰氯)反应，然后，在碱(例如，哌啶)存在下加热。
将相应的式中R1代表氢的式Ⅰ化合物烷化，例如，在碱(如氢化钠)存在下使之与式R1X(式中X代表卤素)的化合物反应，可以制得式中R1代表如本文所述的取代烷基或链烯基的式Ⅰ化合物。
将相应的式中R1是氢的式Ⅰ化合物酰化，例如，使之与酰卤反应，可以制得式中R1代表C2-6链烷酰基的式Ⅰ化合物。
将相应的式中R1代表氢的式Ⅰ化合物氰基化，例如，在碱(如氢化钠)存在下使之与溴化氰反应，可以制得式中R1代表氰基的式Ⅰ化合物。
用C2-6烷氧羰基取代相应的式中R1代表氢的式Ⅰ化合物，例如，使该式Ⅰ化合物与(C2-6烷氧羰基)-A(式中A是离去基团，例如，氰基或卤素)反应，可以制得式中R1代表C2-6烷氧羰基的式Ⅰ化合物。
将相应的式中R1是氰基烷基(例如，氰基甲基)的式Ⅰ化合物水解，可以制得式中R1代表氨甲酰基烷基(例如，氨甲酰甲基)的式Ⅰ化合物。
使相应的式中R1代表氢的式Ⅰ化合物与式R30N＝C＝O异氰酸酯反应，可以制得式中R1代表CONHR30(R30代表易水解基团，例如，氯磺酰基)的式Ⅰ化合物。将相应的式中R1代表CONHR30的式Ⅰ化合物水解(例如，酸性水解)可以制得式中R1代表氨甲酰基的式Ⅰ化合物。
式中R1基团是由酰胺基团(CONR9R9′)取代的式Ⅰ化合物可由下述方法制得例如，在0-250℃，任意地在有机液体(优选是反应物的溶剂)中，任意地在催化剂存在下，使-COA(其中，A代表下述离去基团羟基、卤素、C1-6烷氧基、芳氧基、芳基甲氧基或C1-6酰氧基)取代的相应式Ⅰ化合物分别与C1-6烷醇或胺(HNR9R9′)反应。
式中R2代表由羟基取代的基团的式Ⅰ化合物可通过将相应的由C2-6链烷酰氧基(例如，乙酰氧基)取代的式Ⅰ化合物水解来制备。
式中R1由C2-6链烷酰氧基取代的式Ⅰ化合物可通过酰化相应的羟基取代的式Ⅰ化合物来制备。
由式Ⅴ化合物与式H2NNHR1肼反应，可以制得式Ⅱ化合物
采用下述方法可以制得式中R14代表(OQ)2，R15代表OQ的式Ⅲ化合物;例如，a)使式中X是卤素的式R5CX3化合物与式中Q是C1-4烷基或苄基的式NaOQ醇钠反应，或者b)在无水酸(例如，氯化氢)存在下，使式R5CN化合物与式QOH醇反应，得到式R5C(＝NH)OQ化合物的酸加成盐，例如，盐酸盐，然后再使其与式QOH醇反应。
式中R16代表COR18、R17代表COR5的式Ⅳ化合物可如下制备将式中R16代表COR18、R17代表氢的式Ⅳ化合物酰化，例如，在相应酸的盐(例如，钠盐)存在下与式(R5CO)2O的酸酐反应或在碱(例如三乙胺)存在下与例如式R5COCl的酰卤反应。
将式Ⅱ化合物酰化，例如，在式R18COOH酸的盐(例如，钠盐)存在下，使式Ⅱ化合物与式(R18CO)2O酸酐反应，可以制得式中R16代表COR18、R17代表氢的式Ⅳ化合物。
在适宜的溶剂(例如，乙醇)中，使式中R16代表COR18，R17代表COR5的式Ⅳ化合物与碱(例如，哌啶)反应，可以制得式中R17代表COR5、R16代表氢的式Ⅳ化合物或其互变异构体。
在式R18COOH酸的盐(例如，钠盐)存在下，由式中R1代表氢的式Ⅱ化合物与式(R18CO)2O酸酐反应，可以制得式中R1和R16代表COR18(R18如前文限定)、R17代表氢的式Ⅳ化合物。
在酰氯(如磷酰氯)和路易斯酸(如氯化锌)存在下，使式中R23代表氢的式Ⅵ化合物与丙二酸反应，可以制得式Ⅴ化合物
由式中R23代表乙酰基的式Ⅵ化合物与碱(例如，氢化钠)和式(QO)2CO碳酸二烷酯(式中Q为C1-4烷基或苄基)，例如，碳酸二甲酯反应，可以制得式Ⅴ化合物。
由式中R4代表卤素(如氟)、R23代表乙酰基的式Ⅵ化合物与碱(例如，氢化钠)和式中Q代表C1-4烷基或苄基的式(QO)2CO碳酸二烷酯(例如，碳酸二甲酯)反应，可以制得式中R4为C1-6烷氧基的式Ⅴ化合物。
相信，一些式Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ中间体化合物是新化合物。作为本发明的一个方面，本文所有的新化合物均要求保护。
下述非限定性实施例用于解释本发明。在实施例中，份数和百分比均按重量计，混合溶剂的组成按体积计。通过元素分析和一种或多种下述光谱技术进行鉴定核磁共振、红外光谱和质谱。
实施例1a)在氮气氛、煮沸回流和搅拌下，用30分钟将2′-氟-6′-羟基苯乙酮(30g)滴加到氢化钠(17.1g，60%矿物油分散体)在无水甲苯(400ml)中的混悬液中。再煮沸20分钟后，在不中断加热的情况下用10分钟时间滴加碳酸二乙酯(50.8g)。搅拌所得混合物，加热回流20小时，将该反应混合物冷却至常温、滴加水(150ml)。分离后，用乙醚洗涤水相，然后用浓盐酸酸化，过滤收集沉淀，用水洗涤，干燥、并用乙酸乙酯重结晶后，得到5-乙氧基-4-羟基香豆素，m.p.110-111℃。
实施例2.
将4-羟基香豆素(10.0g)乙肼草酸盐(14.25g)、三乙胺(24.0ml)在无水甲苯(50ml)中的混合物搅拌下加热回流3小时，同时除去反应中形成的水。将过滤收集的固体在水与二氯甲烷之间分配，干燥有机层，蒸发，得到一固体，经丁醇重结晶后，得到1-乙基-3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮，m.p.147-150℃。
实施例3.
用0.25小时，将肼(32.3g)滴加到搅拌着的4-羟基香豆素(50.0g)在无水乙醇(1.2升)中的溶液中，搅拌下，将该反应混合物加热回流20小时。将该溶液冷却，用冰乙酸(154ml)酸化，减压下蒸除乙醇，剩下一油状物，然后倒入水(1.5升)中。滤出产生固体，用水洗涤，干燥，并用异丙醇重结晶，得到3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮，m.p.205-207℃。
实施例4-6.
以类似于实施例3所述方法，按下文表A所归纳的条件(其中，给出了取代基R4和R1的定义)，由式Ⅴ化合物与式H2NNHR1的肼反应，制得了式Ⅱ化合物。
实施例4-6中制得的是下述式Ⅱ化合物实施例4.
3-(2-羟基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮实施例5.
3-(2-羟基-6-甲氧基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮实施例6.
3-(2-羟基-6-甲基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮实施例7.
将4-三氟甲基苄腈(25g)在无水乙醚(120ml)和无水甲醇(6ml)中的溶液冷却至0-5℃，并用氯化氢气体饱和。将该反应混合物在熔融冰浴中放置过夜，过滤收集沉淀出的亚氨盐，用乙醚洗涤，在干燥器中干燥，搅拌下将该固体加到分析纯甲醇(78.3ml)中，并将该混合物在常温下搅拌5天。将该反应混合物过滤，将滤液减压蒸发，得到原(4-三氟甲基苯甲酸)三甲酯，油状物，不经进一步纯化即可使用。
实施例8.
a)将4-羟基-5-甲氧基香豆素(4.0g)和水合肼(3.0ml)的混合物在工业用甲醇变性酒精(84ml)中煮沸回流4.75小时。冷却后，加入冰乙酸(13.3ml)，减压下除去醇。将残留物加到水中，分离出胶状物，加入少量的二氯甲烷后固化。过滤收集固体，得到3-(2-羟基-6-甲氧基苯基)-2-吡唑啉-5-酮，m.p.208-210℃。
b)在氮气氛下，将3-(2-羟基-6-甲氧基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(2.06g)和1-(4-三氟甲基苯甲酰基)咪唑(5.04)在无水二甲苯(50ml)中的混合物搅拌下加热回流0.5小时，然后冷却至常温。过滤收集形成的固体，然后将其溶解在煮沸的工业用甲醇变性酒精/二氯甲烷(1∶2)中。蒸除二氯甲烷，直到析出固体为止。将该混合物冷却至常温，过滤，得到9-甲氧基-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.＞280℃(分解)。
c)将氢化钠(0.114g，60%矿物油分散体)加到9-甲氧基-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3-(2H)-酮(0.94g)在无水N，N-二甲基甲酰胺(55ml)中的混悬液中。将该混合物在常温下搅拌10分钟，然后滴加2-溴乙基乙基醚(0.36ml，90%)，继之，在常温下搅拌16小时。将该混合物加到含有少量石油醚(b.p.62-68℃)的水中，用2M盐酸将该混合物酸化，过滤，得到2-(2-乙氧基乙基)-9-甲氧基-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.164-168℃。
实施例9.
a)将5-乙氧基-4-羟基香豆素(5.0g)(实施例1)和甲基肼(2.2g)在工业用甲醇变性酒精(60ml)中的混合物加热回流20小时。冷却后，减压下蒸除溶剂，得到粗产物，向该粗产物中加入甲醇(50ml)和浓盐酸(20ml)，将所得溶液加热回流2小时。减压下蒸除溶剂后，用水研制残留物，过滤收集所得固体，干燥，得到3-(2-羟基-6-乙氧基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮。
b)将前述(a)所得固体(3.2g)和原(4-氯苯甲酸)三甲酯(9.0g)一起，在130-140℃加热45分钟。将该混合物冷却至常温，加入己烷(50ml)，倾出上清液，在残留的油中加入乙醚(80ml)，沉淀出固体。过滤收集固体，用乙醚洗涤，干燥，然后用异丙醇重结晶，得到4-(4-氯苯基)-9-乙氧基-2-甲基〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.197-199℃。
实施例10.
a)将4-羟基香豆素(3.6g)和70% 2，2，2-三氟乙基肼水溶液(5.0g)在甲苯(27ml)中的混合物加热回流4小时，同时除去水。用热二氯甲烷提取经冷却后过滤收集的固体，过滤，蒸发滤液。将固体产物先用甲苯、再用二氯甲烷重结晶，得到3-(2-羟基苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-2-吡唑啉-5-酮，m.p.163-165℃。
b)将前述(a)中所得固体(1.2g)和原(4-氯苯甲酸)三甲酯(3.0g)一起在125℃加热10分钟。将该混合物冷却，用乙醚(10ml)稀释，所得固体用N，N-甲基甲酰胺和甲醇的混合物重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-(2，2，2-三氟乙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.214-215℃(分解)。
实施例11.
a)将3-(2-羟基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮(3.8g)(按实施例4制备)、无水乙酸钠(1.64g)和乙酸酐(30ml)的混合物在常温下搅拌1.5小时。将该反应混合物加到10倍体积的水中，用乙酸乙酯提取。合并有机提取液，用水洗涤，干燥、蒸发。用石油醚(b.p.60-80℃)研半结晶状残留物，过滤收集固体，干燥，得到3-(2-羟基苯基)-1-甲基-5-吡唑基乙酸酯，m.p.113-116℃。
b)在0-5℃，用10分钟将3，4-二氯苯甲酰氯(4.4g)的四氢呋喃(80ml)溶液，加到搅拌着的3-(2-羟基苯基)-1-甲基-5-吡唑基乙酸酯(4.5g)的四氢呋喃(100ml)和三乙胺(3ml)中的溶液中。将该混合物在常温下搅拌18小时，然后追加3，4-二氯苯甲酰氯(4.4g)在四氢呋喃(80ml)和三乙胺(3ml)中的溶液。再搅拌24小时后，将该反应混合物倒入水(1升)中，并用乙酸乙酯提取。合并有机提取液，干燥，然后浓缩，直到出现沉淀为止。过滤除去3，4-二氯苯甲酸后，减压下蒸发滤液，残留物用乙酸乙酯结晶，得到3，4-二氯苯甲酸2-(5-乙酰氧基-1-甲基-3-吡唑基)苯基酯，m.p.123℃。
c)将3，4-二氯苯甲酸2-(5-乙酰氧基-1-甲基-3-吡唑基)苯基酯(1.0g)和哌啶(0.27ml)在乙醇(10ml)中加热回流2小时。将该反应混合物冷却至0℃。过滤收集产物，用乙醇进行重结晶，得到4-(3，4-二氯苯基)-2-甲基〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.193-194℃。
实施例12.
a)在0-5℃，依次用三乙胺(1.5ml)和在无水四氢呋喃(10ml)中的2-萘甲酰氯(2.1g)处理3-(2-羟基苯基)-1-甲基-5-吡唑基乙酸酯(2.32g)(按实施例11a制得)的无水四氢呋喃(50ml)溶液。将该混合物在常温下搅拌20小时，然后追加三乙胺(0.75ml)和2-萘甲酰氯(1.05g)，将该混合物再搅拌20小时。将该反应混合物倒入水(10倍体积)中，并用乙酸乙酯提取。合并有机提取液，依次用饱和碳酸钠水溶液和水洗涤，然后干燥。减压下蒸发后，用乙醚研制残留物，过滤收集形成的固体。
b)将部分步骤(a)所得固体粗产物(2.43g)和哌啶(0.63ml)在无水乙醇(19ml)中煮沸回流30分钟。冷却后，将该混合物过滤，得到2-(1-甲基-5-氧代-4，5-二氢-3-吡唑基)苯基2-萘甲酸酯，m.p.207-210℃。
c)将滤液再煮沸回流1小时。将该混合物浓缩，然后冷却。过滤收集形成的固体，得到2-甲基-4-(2-萘基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.159-161℃。
实施例13.
将3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(2.32g)和原(4-氯苯甲酸)三乙酯(10.2g)的混合物在搅拌下，于130-135℃加热1小时。将该混合物冷却至常温，用乙醚稀释，滤出所得固体，洗涤，干燥。固体用工业用甲醇变性酒精重结晶(采用活性炭)，得到4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.255-257℃。
实施例14-18.
以类似于实施例13所述的方法，按下文表B中归纳的条件(表中给出了式Ⅱ化合物中R4和R1取代基的含义)，由式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物反应，制得了式Ⅰ化合物。所采用的式Ⅲ化合物是式R5C(OQ)3类化合物，其中，R2代表氢、R3和Q的含义如表B中所示。
实施例19.
将3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(16g)和1-(4-氯苯甲酰基)咪唑(37.5g)在二甲苯(200ml)中的混合物搅拌下加热回流3小时。使该混合物冷至70℃，然后过滤，得到4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.255-257℃。
实施例20.
将原(4-三氟甲基苯甲酸)三甲酯(5.5g)(按实施例7所述方法制得)和3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(1.94g)的混合物在135-140℃加热4小时。将该混合物冷却至0℃，滤出形成的固体，用乙醚洗涤。用热水研制固体，过滤，得到4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.271-273℃。
实施例21.
在氮气氛和搅拌下，将3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(30.2g)、1-(4-三氟甲基苯甲酰基)咪唑(86.5g)和二甲苯(800ml)的混合物煮沸回流4小时。使该反应混合物冷却至40℃，过滤，得到4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.270-272℃。
实施例22.
a)将3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(3.52g)和乙酸钠(1.64g)在乙酸酐(30ml)中的混合物于常温下搅拌3小时。将该混合物倒入水和石油醚(b.p.62-68℃，10∶1)中，过滤收集固体，得到1-乙酰基-3-(2-羟基苯基)-5-吡唑基乙酸酯的粗品，m.p.62-64℃。
b)在0-5℃搅拌1-乙酰基-3-(2-羟基苯基)-5-吡唑基乙酸酯粗品(1.53g)，三乙胺(2.1ml)和无水四氢呋喃(25ml)的混合物，同时滴加4-三氟甲基苯甲酰氯(3.21g)。将所得混合物在常温下搅拌64小时，然后倒入水中。用乙酸乙酯提取产物，合并提取液，先用水，再用饱和碳酸氢钠溶液，最后再用水洗涤。经干燥后，减压下蒸除溶剂。用热异丙醇溶解残留物，然后冷却，过滤，蒸发滤液，得到油状4-三氟甲基苯甲酸2-(5-乙酰氧基-1-乙酰基-3-吡唑基)苯基酯粗品。
c)将步骤(b)所得油状物和哌啶(0.7ml)在无水乙醇(22ml)中煮沸回流1小时。将该混合物冷却至0-5℃，然后过滤，得粗产物，采用制备型硅胶薄层层析，用二氯甲烷/甲醇(9∶1)作流动相，纯化该粗产物，得到4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.268-272℃。
实施例23.
搅拌3-(2-羟基苯基)-2-吡唑啉-5-酮(2.9g)和碳酸钾(3.2g)在无水二甲苯(30ml)中的混合物，并加热回流，同时，用15分钟滴加4-三氟甲基苯甲酰氯(6.9g)。将该混合物煮沸，搅拌2小时，然后趁热过滤。收集固体，依次用甲苯、水和乙醚洗涤，得到4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.259-263℃。
实施例24.
将3-(2-羟基苯基)-1-甲基-2-吡唑啉-5-酮(实施例4)(1.90g)溶解在温热的甲苯(100ml)中，然后冷却至常温，再用5.25小时将该溶液加到搅拌并煮沸着的4-氯苯甲醛(1.4g)的含哌啶(1ml)无水甲苯(50ml)溶液中，同时除去反应中形成的水。将该反应混合物减压蒸发，用乙醚研制残留物，用异丙醇重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-甲基〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.204-205℃。
实施例25.
将乙酸2-(2-氯乙氧基)乙基酯(16.7g)、溴化钠(103g)，N，N-二甲基甲酰胺(200ml)和二溴甲烷(100ml)的混合物在100℃搅拌加热48小时。将该混合物倒入乙醚(300ml)和水(200ml)中，分离有机层，用水洗涤，干燥，蒸发，得到一油状物。经减压蒸馏，得到乙酸2-(2-溴乙氧基)乙基酯，b.p.100-103℃(7mmHg)。
实施例26.
在氮气氛下，将氢化钠(0.6g，50%矿物油分散体)加到搅拌着的4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(3.70g)(按实施例13所述方法制备)在无水DMF(145ml)中的溶液中。将该混合物在常温下搅拌5分钟，然后，滴加乙酸2-溴乙基酯(1.38ml)。将该反应混合物在常温下搅拌16小时，然后倒入水和汽油(b.p.60-80℃约10∶1V/V)。将该混合物在冰浴中冷却，滤出沉淀的固体，洗涤，得到2-〔4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙基乙酸酯，m.p.126-129℃。
实施例27-41.
以类似于实施例26的方法，由4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(A)(实施例13)与式中X是卤素的式R1X化合物，按下文表C归纳的条件进行反应。制得了式Ⅰ化合物。〔表C见23、24页〕表C注释(1)将反应混合物加入水(2升)中，用浓盐酸酸化，用乙酸乙酯提取。合并提取液，用水洗涤，干燥，浓缩至出现结晶。冷却，过滤得到产物。
(2)将所得固体溶解在二氯甲烷/乙醇的混合物中，浓缩至出现结晶，过滤收集产物。
(3)用乙酸乙酯提取骤冷的混合物，合并提取液，用水洗涤，干燥，浓缩至出现结晶，过滤收集产物。
(4)将该反应混合物加到10倍体积的水中，用2M盐酸酸化。过滤收集生成的固体，干燥，然后溶解于煮沸的工业用甲醇变性酒精/二氯甲烷(1∶2)中。除去二氯甲烷，并在冰浴中将溶液冷却。过滤收集生成的固体。
(5)将该反应混合物加到水(500ml)中，用乙酸乙酯提取，合并提取液，用水洗涤，干燥，蒸发。所得固体在异丙醇中重结晶。
(6)将该反应混合物加到水中，过滤收集生成的固体，干燥。用丙酮研制该固体，过滤，用煮沸的工业用甲醇变性酒精研制残留物，然后过滤，将残留物溶于温热的二氯甲烷中，用活性炭处理，过滤，蒸发滤液，用汽油研制残留物，过滤，得到产物。
(7)将该反应混合物倒入含有2M盐酸(5ml)的水(300ml)中使其聚冷，然后用二氯甲烷提取。合并提取液，干燥，蒸发。残留物在乙醚和水之间分配，然后分离。用乙醚提取水层，合并醚提取液，干
燥，浓缩(至10ml)。过滤收集生成的固体，用石油醚(b.p.40-60℃)洗涤，干燥。经乙醇重结晶后，将产物在硅胶上进行闪式层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(98∶2)作流动相。洗脱物经乙醇重结晶，得到产物。
(8)该反应混合物在5M盐酸(600ml)和乙醚(300ml)之间分配，分离出水层，用乙醚洗涤，合并醚提取液，用水充分洗涤，干燥、蒸发。残留物经硅胶闪式层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(97∶3)作流动相。所得固体经乙醚和乙酸乙酯的混合物两次重结晶，得到产物。
(10)将该反应混合物倒入水中，用5M盐酸酸化，过滤收集固体，并用DMF重结晶。
(11)将该反应混合物倒入水中，过滤收集所得固体，并用异丙醇重结晶。
(12)采用氢化钠于矿物油中的60%分散体。
(13)将该反应混合物加到水(500ml)中，用乙醚提取，合并提取液，用水洗涤，干燥、蒸发。所得固体经乙醇重结晶。
(14)将该反应混合物加到水(2升)中，用5M盐酸酸化，用乙酸乙酯提取。合并提取液，用水洗涤，干燥，蒸发。所得的油状物用乙醚结晶。
实施例42.
以类似于实施例26的方法，将氢化钠(0.74g，60%矿物油分散体)，无水DMF(180ml)，4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(实施例13)(5.0g)和2-溴甲基-1，3-二氧杂环戊烷(1.97ml)的混合物在常温下搅拌16小时。分次追加氢化钠(0.74g)，然后追加2-溴甲基-1，3-二氧杂环戊烷(1.97ml)。将该混合物在常温下搅拌24小时，然后在70-80℃温热1小时。将该混合物冷却至常温，然后加到水中。过滤收集形成的固体。干燥，用乙醇/二氯甲烷重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-(1，3-二氮杂环戊烷-2-基甲基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.230-231℃。
实施例43.
以类似于实施例26的方法，将氢化钠(0.44g，60%矿物油分散体)、无水DMF(100ml)，4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(3.0g)(实施例13)和1-溴-2-乙氧基丙烷(2.9g)的混合物在常温下搅拌16小时。将该混合物在60℃左右温热1.5小时，然后冷却至常温。将该混合物加到水中，用乙醚提取产物。合并醚提取液，干燥、蒸发。残留物经硅胶闪式层析分离，用乙酸乙酯/石油醚(b.p.80-100℃1∶3)作流动相，得到-红色固体，经乙醇重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-(2-乙氧基丙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.118-119℃。
实施例44.
以类似于实施例26的方法，将氢化钠(1.82g，60%矿物油分散体)，无水DMF(450ml)，4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(15.0g)(实施例20)和乙酸2-溴乙基酯(7.62g)的混合物于常温下搅拌48小时。将该混合物加到水中，滤出生成的固体，并将其溶解在乙酸乙酯中，用水洗涤。减压下除去乙酸乙酯后，所得残留物经异丙醇重结晶，得到2-(3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙基乙酸酯，m.p.134-136℃。
实施例45.
以类似于实施例26的方法，将氢化钠(0.74g，60%矿物油分散体)，无水DMF(150ml)，4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(5.0g)和2-(2-溴乙基)-1，3-二氧杂环己烷(2.52ml)的混合物在常温下搅拌42小时。将该反应混合物倒入水中，用乙醚提取产物，用水洗涤提取液。蒸掉乙醚，留下固体残留物，用乙醇重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-〔2-(1，3-二噁烷-2-基)乙基〕〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.157-163℃。
实施例46.
搅拌下，将2-〔3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙基乙酸酯(17.93g)(实施例44)，2M盐酸(22ml)和工业用甲醇变性酒精(750ml)的混合物煮沸回流18小时。将该混合物冷却至0℃，过滤收集形成的固体，得到2-(2-羟基乙基)-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.199-201℃。
实施例47.
常温和搅拌下，向2-〔4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙基乙酸酯(1.53g)，(按实施例26的方法制备)在工业用甲醇变性酒精(80ml)中的悬浮液中加入稀盐酸(2ml)。将该混合物加热回流6.5小时。使该溶液冷却，并在常温下放置16小时。滤出所得晶体，用工业用甲醇变性酒精洗涤，得到4-(4-氯苯基)-2-(2-羟基乙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.179-183℃。
实施例48.
将3-〔4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕丙基乙酸酯(1.5g)(实施例41)，2M盐酸(1.9ml)和工业用甲醇变性酒精(75ml)的混合物煮沸回流5小时。将该混合物冷却至室温，过滤收集生成的固体，得到4-(4-氯苯基)-2-(3-羟基丙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.166-168℃。
实施例49.
搅拌下，将2-｛2-〔4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙氧基｝乙基乙酸酯(11g)(实施例39)，5M盐酸(100ml)和水(100ml)的混合物煮沸回流24小时。将该混合物蒸发，所得固体经异丙醇重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2-〔2-(2-羟基乙氧基)乙基〕〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.110°-112℃。
实施例50.
将4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙腈(0.68g)(按实施例28的方法制得)和浓硫酸(6ml)的混合物在120℃加热0.5小时。将该反应混合物倒在冰(10倍体积)中，收集固体产物，洗涤，干燥，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.279-283℃。
实施例51.
以类似于实施例50的方法，将4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丙腈(1.0g)(按实施例32的方法制备)和浓硫酸(10ml)的混合物在120-125℃加热15分钟。经用工业用甲醇变性酒精重结晶后，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丙酰胺，m.p.264-266℃。
实施例52.
a)将4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酸(2.16g)(按实施例31的方法制备)在二氯甲烷(50ml)中的悬浮液搅拌下依次用无水DMF(0.24ml)和亚硫酰氯(1.51ml)处理。将该混合物在常温下搅拌16小时，然后减压蒸发。用无水乙醚研制残留物。过滤收集固体，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰氯。
b)将上述酰氯的一部分(1.08g)置于无水四氢呋喃(100ml)中，滴加乙胺水溶液(0.43ml，70%W/W)处理之。在0-5℃，将该混合物搅拌1.5小时，然后过滤。用乙醚(100ml)稀释滤液，在冰浴中冷却3小时，滤出固体。放置数天后，得到第二批固体。合并两批产物，先用水，再用石油醚(b.p.60-80℃)洗涤，得到4-(4-氯苯基)-N-乙基-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.238-239℃。
实施例53.
按类似于实施例52(a)的方法，将4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酸(1.87g)转化为酰氯(1.89g)，然后在0-5℃下混悬于无水四氢呋喃(172ml)中。滴加甲胺水溶液(0.69ml，25/30%W/V)，然后在熔融冰浴中将混合物搅拌2.5小时。滤出固体，先用水，再用乙醚洗涤，得到4-(4-氯苯基)-N-甲基-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.244-250℃。
实施例54.
在0-5℃和搅拌下，将丙胺(0.2ml)的无水四氢呋喃(10ml)溶液滴加到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰氯(1.07g)(实施例52a)在无水四氢呋喃(95ml)中的混合物中。将该混合物在0-5℃搅拌50分钟，然后追加丙胺(0.1ml)的无水四氢呋喃(5ml)溶液。将该混合物在0-5℃搅拌2.3小时，然后用无水乙醚(95ml)稀释、并在0-5℃搅拌1小时。将该混合物过滤，用水洗涤滤液，干燥，减压下蒸发。在Florisil
柱上分离残留物，先采用二氯甲烷，再用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流动相。用乙醚研制所得的固体，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-N-丙基-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.218-223℃。
实施例55.
于常温、搅拌下，用异氰酸氯磺酰(0.53g)处理4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(实施例13)(1.0g)在甲苯(20ml)中的混合物。将该混合物加热至70℃，并在该温度下搅拌15分钟。冷却至0℃，将该混合物过滤，用乙醚洗涤残留物，然后悬浮于冰乙酸(6ml)和水(3ml)中。将该混合物在60℃加热15分钟，然后过滤。用水洗涤残留物，干燥，经二氯甲烷/甲醇(4∶1)重结晶，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-甲酰胺，m.p.215-216℃。
实施例56.
在常温下，将乙酰氯(0.86ml)滴加到搅拌着的4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(实施例13)(3.0g)和碳酸钾(2.79g)在分析纯丙酮(20ml)中的混合物中。将该混合物在常温下搅拌42小时，追加碳酸钾(6.98g)，然后追加乙酰氯(3.6)的丙酮(分析纯、15ml)溶液。将该混合物在常温下搅拌下18小时，追加碳酸钾(2.79g)和乙酰氯(1.44ml)。并将该混合物在常温下搅拌2.25小时，然后，将该混合物煮沸回流1小时，冷却至常温，然后加到水中。过滤收集形成的固体，干燥，然后用乙腈重结晶，得到2-乙酰基-4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.224-226℃。
实施例57.
搅拌下，将4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(实施例13)(20g)和氯甲酸乙酯(200ml)的混合物煮沸回流5小时。追加氯甲酸乙酯(50ml)，搅拌该混合物，煮沸回流4小时。将该反应混合物冷却至常温，过滤收集固体，用乙腈重结晶。所得粗产物在硅胶柱上经闪式柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(9∶1)作为流动相。蒸发掉洗脱剂，得到一固体，后者经乙酸乙酯重结晶，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-羧酸乙酯，m.p.187-188℃。
实施例58.
搅拌下，将4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(实施例13)(5g)和氰基甲酸乙酯(50ml)的混合物煮沸回流3.5小时。经该反应混合物冷却至常温，用石油醚(30ml)稀释，过滤，干燥，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-羧酸乙酯，m.p.187-189℃。
实施例59.
搅拌下，将4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰氯(0.97g)(按实施例52a制备)在无水四氢呋喃(76ml)中的悬浮液先用环丁醇(0.7g)的无水四氢呋喃(10ml)溶液，然后用三乙胺(0.35ml)处理。将所得混合物在常温下搅拌2.67小时，然后过滤。用乙醚稀释滤液，用水洗涤，干燥，然后减压下蒸发。残留物在硅胶上进行制备型薄层层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(9∶1)作流动相。用乙酸乙酯提取展开快的色带，减压蒸发，得到一胶状物，用乙醚/石油醚(b.p.62-68℃，1∶1〕研制，过滤后，得到4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酸环丁基酯，m.p.135-138℃。
实施例60.
在氮气氛下，将氢化钠(0.48g，60%矿物油分散体)加到搅拌着的4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(3.3g)(按实施例20的方法制备)在无水DMF(60ml)中的溶液中。将该混合物在常温下搅拌18小时，然后加到冰水中。用乙酸乙酯提取该混合物，合并提取液，用水洗涤，干燥，蒸发，得到一固体，经丙醇重结晶，得到3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙腈，m.p.215-217℃。
实施例61.
以类似于实施例60的方法，将4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(1.35g)，氢化钠(0.21g，50%矿物油分散体)、2-溴乙基乙基醚(0.77g)和无水DMF(50ml)混合，并于常温下搅拌42小时，所得粗产物在硅胶柱上进闪式层析纯化(用乙酸乙酯作为流动相)，经异丙醇重结晶后，得到2-(2-乙氧基乙基)-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.126-128℃。
实施例62.
搅拌下，将2-(2-羟基乙基)-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(8.22g)(按实施例46制备)和48%氢溴酸(500ml)加热回流28小时。将该反应混合物冷却至0℃，过滤收集固体，用水洗涤，然后干燥、用乙腈重结晶，得到2-(2-溴乙基)-4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮，m.p.145-147℃。
实施例63.
a)以类似于实施例60的方法，将4-(4-三氟甲基苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(5g)，氢化钠(0.7g，60%矿物油分散体)、4-溴丁酸乙酯(2.4ml)和无水DMF(230ml)混合，于常温下搅拌24小时。将该反应混合物加到水(2.3升)和汽油(b.p.60-80℃中，用5M盐酸酸化，过滤收集形成的产物，干燥，得到3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酸乙酯，m.p.112-115℃。
b)将3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酸乙酯(3.0g)和5M盐酸(30ml)的混合物在96-105℃搅拌加热5小时。使该反应混合物冷却，并在常温下放置24小时。过滤收集所得固体，先用水，再用乙醚洗涤，干燥，得到3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酸，m.p.197-200℃，从189℃开始收缩。
c)在搅拌下，将3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酸(1.8g)在二氯甲烷(37ml)中的悬浮液先用DMF(0.2ml)，再用亚硫酰氯(1.2ml)处理。将该混合物在常温下搅拌24小时，然后减压蒸发，得到3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酰氯。
d)在0-5℃，搅拌由步骤(c)所得酰氯的无水四氢呋喃(88ml)溶液，并用浓氨水溶液(0.6ml)处理。将该反应混合物在0-5℃下搅拌1小时。追加浓氨水(0.2ml)，并将该混合物在0-5℃搅拌0.75小时。过滤收集生成的固体，用四氢呋喃和水洗涤，干燥，得到3-氧代-4-(4-三氟甲基苯基)-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-丁酰胺，m.p.218-221℃。
实施例64.
将4-(4-氯苯基)-2-(2-羟基乙基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮(28g)(按实施例47的方法制备)和亚硫酰氯(300ml)在搅拌下煮沸回流3.5小时。减压下蒸除过量的亚硫酰氯，残留物与乙腈一起搅拌。将该混合物过滤，收集到的固体用二氯甲烷重结晶，得到2-(2-氯乙基)-4-(4-氯苯基)〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-3(2H)-酮。m.p.169-170℃。
实施例65.
在胶囊剂的制备中，将10份(重量)活性化合物和240份(重量)乳糖粉碎并充分混合。将该混合物填充到硬明胶胶囊，每粒含有10mg活性化合物。
实施例66.
在胶囊剂的制备中，将50份(重量)活性化合物、300份(重量)乳糖、和3份(重量)硬脂酸镁粉碎，并充分混合。将该混合物填充到硬明胶胶囊，每粒含有50mg活性成分。
实施例67.
由下述成分制备片剂份数(重量)活性化合物 10乳糖 190玉米淀粉 22聚乙烯吡咯烷酮 10硬脂酸镁 3将活性化合物、乳糖和一部分淀粉粉碎并充分混合，用聚乙烯吡咯烷酮的乙醇溶液将所得混合物制粒。将该干燥的颗粒与硬脂酸镁及剩余的淀粉混合。然后用压片机将该混合物压片，得到分别含有a)10mg、b)100mg、c)500mg活性化合物的片剂。
实施例68.
按实施例67的方法制备片剂。以常规的方法，采用浓度为20%的乙酸邻苯二甲酸纤维素和3%邻苯二甲酸二乙酯在乙醇/二氯甲烷(1∶1)中的溶液给片剂肠溶包衣。
实施例69.
在栓剂的制备中，将100份(重量)活性化合物掺入1300份(重量)用作栓剂基质的半合成甘油酯中，并将该混合物制成每粒含有100mg活性成分的栓剂。
实施例70.
在软膏剂的制备中，通过匀化作用将活性化合物掺入基质中，直到药物分布均匀为止。将该软膏剂装入带有带衬的螺旋盖的10g琥珀色广口瓶中。
活性化合物 0.1g软白蜡 加至10g本发明化合物是免疫调节剂、特别是免疫抑制剂，并且，它们在200mg/kg或更低的剂量时呈现治疗活性。本发明中优选化合物在50mg/kg或更低的剂量时呈现活性。通过皮肤过敏试验(CH试验)证实了本发明优选化合物的治疗活性，在该试验中，将化合物通过非经胃肠道途径给予BALB/c小鼠。用下述方法实施该试验。
取体重为16-24g的雌性BALB/c小鼠，以八只为一组。将每只小鼠的腹部刮毛，并在刮掉毛的部位涂用20μl致敏剂溶液(5%W/V 4-乙氧基亚甲基-2-苯基-2-噁唑啉-5-酮(噁唑酮)的丙酮/乙醇(1∶1，体积比)溶液。致敏后，立即按下文给出的剂量之一腹膜内注射受试化合物的悬浮液〔受试化合物悬浮于1.5% V/V脱水山梨醇酯(商品名为吐温-80)的无菌水(100μl)溶液中〕。在以后7天中，每24小时以同样的方式注射100μl同样的悬浮液。所采用的剂量选用下述数值50、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03或0.01mg/kg。
每一试验同时采用至少为八只BALB/c小鼠的两组动物作为对照组，以类似于前文所述的方式处理，不同之处是每天的注射液中不含受试化合物。
致敏后第七天，将10μl 1%W/V 噁唑酮的丙酮/橄榄油(3∶1 V/V)溶液涂于每只受试鼠和对照鼠的一只耳朵(称之为受试耳)。(在少数情况下，要采用更大的试验剂量1.5% W/V噁唑酮的丙酮/橄榄油溶液)。24小时后，用技术人员用的螺纹规测微仪测量同一动物受试耳和非受试耳的厚度。每只动物两只耳朵厚度之间的差别为该动物对噁唑酮的反应的一种量度。将接受受试化合物小鼠的反应和接受对照剂小鼠的反应之间作一比较，即可说明受试化合物作为免疫调节剂的效力。如果在某一剂量下，三组CH试验中至少有两组(或者，在多于三组的CH试验中大部分试验)，其耳朵水肿减轻20%或更多(按照Dunnett检验，为统计学显著(p＜0.05)，则认为在该剂量下化合物是有效的(参见例如，Int.Aroh.Allergy，38，p 246-259(1970))。
除另有说明外(注释列于表后)，下文表A列出的所有式Ⅰ化合物在3组50mg/kg的试验中至少有2组在50mg/kg时为活性的。表A中给出了每一化合物的最小有效剂量。化合物旁边列出的实施例编号说明在该实施例中给出了该化合物的制备方法。
表A实施例化合物名称最小有效剂量(mg/kg)8b 9-甲氧基－4－(4－三氟甲基苯基)［1］苯≤3并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮8c 2-(2-乙氧基乙基)－9－甲氧基－4－(4－3
三氟甲基苯基)［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮94－(4－氯苯基)－9－乙氧基－2－甲基［1］50苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮104－(4－氯苯基)－2－(2，2，2－三氟乙基)50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮114－(3，4－二氯苯基)－2－甲基［1］苯并吡50喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮122－甲基－4－(2－萘基)［1］苯并吡喃并50［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮13，194－(4－氯苯基)［1］苯并吡喃并［4，33－c］吡唑－3(2H)－酮14，244－(4－氯苯基)－2－甲基［1］苯并吡10喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮154－(4－氯苯基)－2－乙基［1］苯并吡喃≤50并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮164－(4－氯苯基)－9－甲氧基－2－甲基50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮174－(4－氯苯基)－2，9－二甲基［1］苯50并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮182－甲基－4－(4－三氟甲基苯基)［1］苯3并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮23，204－(4－三氟甲基苯基)［1］苯并吡喃并321，22［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮
262－［4－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二50氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－基］乙基乙酸酯274－(4－氯苯基)－2－(2－甲氧基乙基)10［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮284－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢≤50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙腈294－(4－氯苯基)－2－(2－苯氧基乙基)50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮302－烯丙基－4－(4－氯苯基)［1］苯并吡50喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮324－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－丙腈334－(4－氯苯基)－2－丙基［1］苯并吡喃50并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮344－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢≤30(a)［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－甲腈354－(4－氯苯基)－2－(2－乙氧基乙基)1［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮362－丁基－4－(4－氯苯基)［1］苯并吡喃50并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮374－(4－氯苯基)－2－［2－(2－甲氧基乙50氧基)乙基］［1］苯并吡喃并［4，3－c］
吡唑－3(2H)－酮384－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酰基苯392－｛2－［4－(4－氯苯基)－3－氧代－2，350－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－基］乙氧基｝乙基乙酸酯404－(4－氯苯基)－2－［2－(1，3－二氧杂环50戊烷－2－基)乙基］［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮424－(4－氯苯基)－2－(1，3－二氧杂环戊烷50－2－基甲基)［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮434－(4－氯苯基)－2－(2－乙氧基丙基)50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮442－［3－氧代－4－(4－三氟甲基苯基)－2，503－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－基］乙基乙酸酯454－(4－氯苯基)－2－［2－(1，3－二噁烷－502－基)乙基］［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮462－(2－羟基乙基)－4－(4－三氟甲基苯基)50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮
474－(4－氯苯基)－2－(2－羟基乙基)［1］50苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮484－(4－氯苯基)－2－(3－羟基丙基)［1］50苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮494－(4－氯苯基)－2－［2－(2－羟基乙氧基)50乙基［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮504－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢3［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酰胺514－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－丙酰胺524－(4－氯苯基)－N－乙基－3－氧代－502，3－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酰胺534－(4－氯苯基)－N－甲基－3－氧代－502，3－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酰胺544－(4－氯苯基)－N－丙基－3－氧代－2，503－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酰胺554－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢≤50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－甲酰胺
562－乙酰基－4－(4－氯苯基)［1］苯并吡喃50并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮57，584－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－甲酸乙酯594－(4－氯苯基)－3－氧代－2，3－二氢50［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙酸环丁酯604－(4－三氟甲基苯基)－3－氧代－2，3≤3－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－乙腈612－(2－乙氧基乙基)－4－(4－三氟甲基3苯基)［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－33(2H)－酮622－(2－溴乙基)－4－(4－三氟甲基苯基)≤3［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮634－(4－三氟甲基苯基)－3－氧代－2，3≤50－二氢［1］苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－2－丁酰胺642－(2－氯乙基)－4－(4－氯苯基)［1］≤50苯并吡喃并［4，3－c］吡唑－3(2H)－酮按类似的方法制得了下述化合物，并且发现，在前述CH试验中，在50mg/kg的剂量时，它们也呈现活性。
2-〔4-(4-氯苯基)-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-基〕乙基丙酸酯，m.p.112-114℃，4-(4-氯苯基)-N-异丙基-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.238-241℃(分解)。
N-苄基-4-(4-氯苯基)-N-甲基-3-氧代-2，3-二氢〔1〕苯并吡喃并〔4，3-c〕吡唑-2-乙酰胺，m.p.182-183℃。
注释(a)两次试验中均在30mg/kg时呈现活性。
本发明化合物在多种其他体内筛选中也呈现出活性，表明可将这些化合物用作免疫调节剂，特别是用于抑制免疫反应。可采用口服或非胃肠道途径服用本发明化合物。在测试受试化合物对体液免疫的影响的试验(具体方法是在前述噁唑酮诱导皮肤过敏试验(CH试验)结束时收集血清，测定血清中产生的抗噁唑酮抗体的量的变化，以此确定受试化合物对体液免疫的影响)和类似于Smith S.R.，T Terminelli C.，Kipilman C.T.和Smith Y.(J.Immunopharmacology，1981;3(2)，133-170)所采用的Graft Versus Host试验中，发现一些化合物是有活性的。
例如，在前述抗体试验中发现，以50mg/kg的剂量非经胃肠给药后，下文所述实施例制得的化合物是活性的。如果将某一化合物接50mg/kg剂量给药时，通过酶连接免疫吸收测定法(ELISA)测定血清抗噁唑酮抗体的相对浓度，按下述公式计算，降低0.5或更多的话，则认为该化合物活性的。所述公式为(O.D.(C1)-O.D.(T1))/(O.D.(C1)-O.D.(C2))其中，O.D.(C1)是按1/128稀释时，对照血清的光密度，O.D.(C2)是按1/256稀释时，对照血清的光密度，O.D.(T1)是按1/128稀释时，受试血清的光密度。
用含有0.05% V/V吐温20(商品名)的磷酸盐缓冲液(pH7.3)稀释对照血清和受试血清。
在上述试验中呈活性反应的化合物是实施例8b，8c，10-15，18，20，26，27，30，33，35，37，38，40，42，44-47，49，52，55-64.
权利要求
1.制备式Ⅰ化合物的方法，
式中R1代表氢、氰基、C2-6链烷酰基、C2-6烷氧羰基、CONH2或者R1代表C1-6烷基或C2-6链烯基，并且该烷基或链烯基均可由下述基团取代氰基、卤素、三氟甲基、羟基、苯甲酰基、C2-6链烷酰氧基、C3-8环烷氧羰基、含有2个氧杂原子的5-7元非芳香杂环基，CONR9R9′、苯氧基或C1-6烷氧基、其中，C1-6烷氧基可进一步被卤素、羟基、C1-6烷氧基或C2-6链烷酰氧基取代；R2代表氢或氯；R3代表氯或三氟甲基；或者R2和R3连接形成稠合苯并环；R4代表氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤素；R9和R9′彼此相同或不同，代表氢、C1-6烷基或苄基；所述方法a)包括式Ⅱ化合物或其互变异构体与式Ⅲ化合物反应，
式中R14代表(OQ)2或(SQ)2，而R15代表OQ或SQ或NQ′2；R14代表=NH，而R15代表OQ或SQ；或者R14代表=0，而R15代表氢、卤素或1-咪唑基；以及Q和Q′代表C1-4烷基或苄基；b)包括式Ⅳ化合物或其互变异构体(R16代表氢时)与碱反应，
式中，R16代表氢或COR18，其中R18代表氢、C1-4烷基、苄基或R5，R17代表COR5。
2.根据权利要求1的化合物制备方法，其中，R2代表氢;R3代表氯或三氟甲基;R1代表(CH2)pJ，J代表氢、C1-6烷氧基、氨甲酰基、氰基或卤素;R4代表氢或C1-5烷氧基，p是0、1或2。
3.根据权利要求2的化合物制备方法，其中，R1代表氢、甲基、氰基甲基、(CH2)2卤素、氨甲酰甲基或C1-4烷氧基乙基。
全文摘要
制备用作免疫调节剂的上式I化合物的方法，式中，R
文档编号C07D491/04GK1069271SQ9110526
公开日1993年2月24日 申请日期1991年8月2日 优先权日1988年8月9日
发明者R·B·蒂特曼, M·H·霍克利 申请人:布茨公司
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