一种O/Cathay型口蹄疫病毒单克隆抗体4B1及应用

本发明属于生物，具体涉及一种o/cathay型口蹄疫病毒单克隆抗体4b1及应用。

背景技术：

1、口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，fmdv）是一种小型的二十面体非包膜单链rna病毒，病毒由一个线性、单链rna（single stranded rna，ssrna）基因组组成，该基因组正链，非分段，长度约为8.5 kb。临床上，该病表现为舌、口唇、牙龈、齿垫、蹄间和蹄冠形成水疱，继而破溃引发感染化脓，导致跛行或站立不稳，乳头病变还可能引起乳腺炎，猪群以严重跛行、蹄壳脱落为主要表现，牛群的主要感染特征则为口腔水疱大量流涎以及口腔糜烂。

2、在免疫学上，fmdv分为7种不同的血清型，分别为a型、o型、c型、亚洲1型（asia 1）、南非1型 （sat 1）、sat 2和sat 3，其中血清型o是全球流行最为严重的血清型，造成重大经济损失。在我国，血清型o已形成四个特征明显的流行谱系：o/sea/mya-98、o/me-sa/panasia、o/me-sa/ind-2001和o/cathay。与me-sa和sea拓扑型相比，cathay拓扑型的进化速率更高。同时，自2011年以来，fmdv cathay拓扑型的遗传多样性呈现显著上升趋势，而me-sa与sea拓扑型的遗传多样性则均出现下降，但现有疫苗对o/cathay谱系毒株的保护效力不足问题日益凸显。

3、中和抗体在fmdv保护性免疫中发挥核心作用，是评估疫苗免疫效果和治疗性抗体研发的重要工具。目前已有针对o型fmdv不同谱系的中和单克隆抗体陆续被报道，例如识别vp1 g-h环抗原位点的中和抗体，以及针对vp1 b-c/c-d环的中和抗体等。然而，现有抗体多针对o型病毒的通用抗原表位或针对mya98、panasia等其他谱系，能够特异性地中和cathay拓扑型病毒，特别是针对新cathay变异毒株具有高中和活性的单克隆抗体仍然匮乏。更重要的是，在已知的针对cathay毒株的单克隆抗体中，多数为特异性结合抗体，具备中和活性的抗体极少，这严重制约了cathay毒株的抗原结构解析、疫苗免疫效果评价以及新型诊断方法的建立。

4、因此，开发一种能够特异性识别o/cathay型口蹄疫病毒并具有高中和活性的单克隆抗体，明确其抗体可变区序列，对于cathay毒株的抗原变异研究、血清学鉴别诊断方法的建立，以及广谱疫苗的设计评价均具有重要的理论意义和应用价值。

技术实现思路

1、本发明的首要目的是提供一种o/cathay型口蹄疫病毒单克隆抗体4b1，所述单克隆抗体4b1包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区的cdr包括氨基酸序列如seq idno.1所示的cdr1、seq id no.2所示的cdr2和seq id no.3所示的cdr3；所述轻链可变区的cdr包括氨基酸序列如seq id no.4所示的cdr1、如seq id no.5所示的cdr3，cdr2的氨基酸序列如rvs所示。

2、优选的，所述的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.6所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示。

3、本发明的第二目的是提供一种编码所述单克隆抗体4b1的基因片段，编码所述重链可变区的核苷酸序列如seq id no.8所示，编码所述轻链可变区的核苷酸序列如seq idno.9所示。

4、本发明的第三目的是提供一种表达载体，包含所述的基因片段。

5、本发明的第四目的是提供所述的单克隆抗体4b1在制备预防和/或治疗o/cathay型的口蹄疫病毒感染引起的口蹄疫的药物中的应用。

6、本发明的第五目的是提供所述的单克隆抗体4b1在制备检测口蹄疫病毒中和抗体和/或评估口蹄疫病毒疫苗免疫效果的试剂/试剂盒中的应用。

7、优选的，所述口蹄疫病毒为o/cathay型。

8、本发明的第六目的是提供一种增强诱导产生中和抗体的疫苗，包括口蹄疫病毒、佐剂和所述单克隆抗体4b1。

9、优选的，所述的疫苗为口蹄疫灭活疫苗。

10、与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供了一种o/cathay型口蹄疫病毒单克隆抗体4b1，所述单克隆抗体4b1包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区的cdr包括氨基酸序列如seq id no.1所示的cdr1、seq id no.2所示的cdr2和seq id no.3所示的cdr3；所述轻链可变区的cdr包括氨基酸序列如seq id no.4所示的cdr1、如seq idno.5所示的cdr3，cdr2的氨基酸序列如rvs所示。所述的单克隆抗体4b1的效价大于1:128000，重链为igg1型，轻链为κ型。仅与o-gxcx-cha-2018-s型口蹄疫病毒灭活抗原反应，具有高特异性，且仅与vp1结构蛋白反应，中和效价达到1：512；还提供了在制备检测口蹄疫病毒中和抗体和/或评估口蹄疫病毒疫苗免疫效果的试剂/试剂盒中的应用，为口蹄疫的边境口岸检测及动物血清抗体筛查提供了便捷有效的技术储备。

1.一种o/cathay型口蹄疫病毒单克隆抗体4b1，其特征在于，所述单克隆抗体4b1包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区的cdr包括氨基酸序列如seq id no.1所示的cdr1、seq id no.2所示的cdr2和seq id no.3所示的cdr3；所述轻链可变区的cdr包括氨基酸序列如seq id no.4所示的cdr1、如seq id no.5所示的cdr3，cdr2的氨基酸序列如rvs所示。

2.如权利要求1所述的单克隆抗体4b1，其特征在于，所述的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.6所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示。

3.一种编码如权利要求2所述单克隆抗体4b1的基因片段，其特征在于，编码所述重链可变区的核苷酸序列如seq id no.8所示，编码所述轻链可变区的核苷酸序列如seq idno.9所示。

4.一种表达载体，其特征在于，包含权利要求3所述的基因片段。

5.如权利要求1所述的单克隆抗体4b1在制备预防和/或治疗o/cathay型的口蹄疫病毒感染引起的口蹄疫的药物中的应用。

6.如权利要求1所述的单克隆抗体4b1在制备检测口蹄疫病毒中和抗体和/或评估口蹄疫病毒疫苗免疫效果的试剂/试剂盒中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述口蹄疫病毒为o/cathay型。

8.一种增强诱导产生中和抗体的疫苗，其特征在于，包括口蹄疫病毒、佐剂和权利要求1所述单克隆抗体4b1。

9.如权利要求8所述的疫苗，其特征在于，所述的疫苗为口蹄疫灭活疫苗。