一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片

本技术涉及一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片。

背景技术：

1、传统方法中，霉菌检测一般采用培养法。如采用马铃薯葡萄糖琼脂培养5-7天，随后计数菌落总数以分析霉菌污染情况。采用培养法准确度较高，但耗时太长，难以实时监控环境中的霉菌污染情况。且约70%的真菌无法培养，导致培养法会出现严重的漏检错误。此外，也可采用直接镜检法，该方法虽然耗时较短，但检测灵敏度低，且严重依赖操作者的主观经验，检测误差可达35%，容易出现错检、漏检等情况。

技术实现思路

1、本实用新型的主要目的，在于提供一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片。

2、本实用新型解决其技术问题的所采用的技术方案是：

3、一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片，其包括一上层和一下层，以及位于上下层之间的pdms海绵；所述上层具有上层进口、所述上层进口通过一分为二，二分为四的方式逐级放大出口的数量，每个出口连接一上层腔室；所述下层具有下层出口、所述下层出口通过一分为二，二分为四的方式逐级放大入口的数量，每个入口连接一下层腔室；每个上层腔室和一下层腔室对应，上下层腔室之间设有用于截留霉菌孢子的薄膜。

4、进一步地，所述的芯片中，上层具有上层进口，所述上层进口和上层一级流道的一端连通。所述上层一级流道的另一端连接上层二级流道的中间部分。上层二级流道的两端分别连接两个上层三级流道的中间部分。其中一个上层三级流道的两端分别连接上层第一腔室和上层第二腔室，另一个上层三级流道的两端分别连接上层第三腔室和上层第四腔室。两个上层三级流道同行排列，上层三级流道和上层一级流道、上层二级流道平行排列。

5、下层具有下层出口，所述下层出口和下层一级流道的一端连通。所述下层一级流道的另一端连接下层二级流道的中间部分。下层二级流道的两端分别连接两个下层三级流道的中间部分。其中一个下层三级流道的两端分别连接下层第一腔室和下层第二腔室，另一个下层三级流道的两端分别连接下层第三腔室和下层第四腔室。两个下层三级流道同行排列，下层三级流道和下层一级流道、上层二级流道平行排列。

6、其中，上层和下层叠合之后，上层第一腔室和下层第一腔室位置上下对应，两者之间具有第一薄膜；上层第二腔室和下层第二腔室位置上下对应，两者之间具有第二薄膜；上层第三腔室和下层第三腔室位置上下对应，两者之间具有第三薄膜；上层第四腔室和下层第四腔室位置上下对应，两者之间具有第四薄膜。

7、进一步地，各腔室截面为圆形或方形或三角形或椭圆形。

8、进一步地，每个上层腔室分别预埋针对目标霉菌的引物；

9、进一步地，所述薄膜为商业薄膜。

10、进一步地，所述薄膜为pdms海绵薄膜。

11、进一步地，所述pdms滤膜为方形，上面设有四个pdms海绵切片，每个切片对应一腔室；所述pdms海绵切片形状和腔室的形状对应。

12、进一步地，所述薄膜厚度为0.05-1mm。

13、进一步地，所述薄膜孔径小于霉菌孢子直径。

14、本技术方案与背景技术相比，具有如下优点：

15、1.本实用新型芯片上下层的腔室结构的设计能实现封闭情况下，采用pdms海绵等薄膜截留真菌孢子，更安全；另一方面，多靶标协同检测入口的流道，本实用新型采用一分为二，二分为四的方式保证样品能均匀地分布于4个反应腔室。

16、2.本实用新型采用富集、检测一体化微流控芯片，可以实现至少4种霉菌的同步富集、裂解和检测。芯片通过4腔室并联设计，单次进样即可同步完成四种霉菌的检测任务，在提高检测效率的同时，降低了检测结果的批次间差异，提高检测结果的可靠性。富集的孢子，可采用几丁质酶协同40℃热处理的化学-热裂解方案破壁，15分钟即可释放完整核酸，且无需后续纯化，有利于简化操作流程，为自动化操作奠定基础。随后采用lamp方法扩展4种霉菌的特异性靶基因。芯片的每个腔室相对独立，通过每个腔室预埋1种霉菌的特异性lamp引物，保证检测靶标的高特异性。同时可采用hnb染料比色法，指示lamp反应结果，通过拍照后分析每个反应腔室种色斑的rgb灰度值，实现多种霉菌的同步、快速、定量检测。

1.一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片，其特征在于，包括一上层和一下层，以及位于上下层之间的薄膜；所述上层具有上层进口、所述上层进口通过一分为二，二分为四的方式逐级放大出口的数量，每个出口连接一上层腔室；所述下层具有下层出口、所述下层出口通过一分为二，二分为四的方式逐级放大入口的数量，每个入口连接一下层腔室；每个上层腔室和一下层腔室对应，上下层腔室之间设有用于截留霉菌孢子的薄膜。

2.根据权利要求1所述的一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片，其特征在于，上层具有上层进口，所述上层进口和上层一级流道的一端连通；所述上层一级流道的另一端连接上层二级流道的中间部分；上层二级流道的两端分别连接两个上层三级流道的中间部分；其中一个上层三级流道的两端分别连接上层第一腔室和上层第二腔室，另一个上层三级流道的两端分别连接上层第三腔室和上层第四腔室；两个上层三级流道同行排列，上层三级流道和上层一级流道、上层二级流道平行排列；

3.根据权利要求1所述的一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片，其特征在于，每个上层腔室分别预埋针对目标霉菌的引物。

4.根据权利要求1所述的一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片，其特征在于，各腔室截面为圆形或方形或三角形或椭圆形。

5.根据权利要求1或2所述的一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片，其特征在于，所述薄膜为商业薄膜。

6.根据权利要求1或2所述的一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片，其特征在于，所述薄膜为pdms滤膜。

7.根据权利要求6所述的一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片，其特征在于，所述pdms滤膜为方形，上面设有四个pdms海绵切片，每个切片对应一腔室；所述pdms海绵切片形状和腔室的形状对应。

8.根据权利要求1或2所述的一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片，其特征在于，所述薄膜厚度为0.3-1mm。

9.根据权利要求1或2所述的一种用于多靶标霉菌同时快速检测的芯片，其特征在于，所述薄膜孔径小于霉菌孢子直径。