一种重组人弹性蛋白样多肽及制备方法和应用与流程

本发明属于生物，具体涉及一种重组人弹性蛋白样多肽及制备方法和应用。

背景技术：

1、化妆品粉体是彩妆、护肤粉类产品的核心基材，分为无机粉体（滑石粉、二氧化硅、云母、碳酸钙等）与有机粉体（纤维素微球、淀粉、尼龙微球、聚四氟乙烯微球等）两大类。化妆品行业中，碳水化合物类粉体、层状硅酸盐类粉体、强疏水有机聚合物粉体是三大核心基材。碳水化合物类粉体（纤维素粉、纤维素微球、淀粉、改性淀粉等）：天然可降解、温和无刺激，是护肤粉类、散粉的核心基材；层状硅酸盐类粉体（云母、滑石粉、高岭土、膨润土等）：具备优异的铺展性、柔焦性、珠光效果，是粉底、眼影、高光的核心基材；强疏水有机聚合物粉体（尼龙微球、聚乙烯微球、ptfe 微球、pmma 微球等）：具备优异的滑爽感、抗结块性、持妆性，是高端彩妆、妆前乳的核心基材。

2、将活性蛋白稳定负载于粉体表面，实现功能化修饰，是提升产品附加值的核心技术路径。然而现有技术始终无法同时满足结合强度、活性保留、生物安全、合规量产四大核心要求，存在难以突破的技术瓶颈。

3、现有粉体蛋白固定化技术的固有缺陷：

4、1. 化学交联固定法

5、该工艺是当前工业生产中应用最广泛的蛋白粉体负载手段，依托戊二醛、edc/nhs碳二亚胺活化体系、氨基硅烷偶联剂、环氧交联剂等化学试剂，在粉体表面官能团与活性蛋白氨基、羧基之间构建不可逆共价化学键，依靠共价键作用力实现蛋白锚定。但该路线存在多重不可调和的应用缺陷：其一，交联试剂及交联副产物极易残留在粉体体系中，戊二醛具备强细胞毒性与皮肤刺激性，硅烷、碳二亚胺类活化试剂残留会破坏皮肤屏障，不符合纯净美妆、无刺激医用敷料、外用给药制剂的安全准入标准；其二，交联反应无位点选择性，会随机修饰活性蛋白的抗原结合位点、催化活性中心、受体识别区域，直接造成蛋白空间构象破坏，实测绝大多数体系中蛋白活性保留率不足 30%，大幅削弱产品核心功效；其三，交联反应对 ph、温度、反应时长、试剂配比要求严苛，小试与放大生产批次差异极大，产品性能稳定性难以管控；其四，共价结合不可逆，粉体负载的蛋白无法根据皮肤环境、体内病灶微环境实现梯度可控释放，易出现局部蛋白过量堆积引发刺激，或是长效缓释需求完全无法满足。

6、2. 物理吸附与脂质 / 蜡质包裹法

7、该方法全程无化学试剂参与，依靠粉体与蛋白间的静电吸附、范德华力、疏水相互作用实现蛋白附着，或采用矿物油、合成硅油、植物蜡、磷脂脂质体将蛋白包裹后复合粉体，反应条件温和，不会直接破坏蛋白天然构象。但结合作用力先天薄弱，耐受环境极差：在化妆品乳化、均质、高温料体复配等高剪切、高温加工工序中，或是产品长期常温 / 高低温储存、人体汗液高盐环境、皮肤酸碱波动条件下，吸附、包裹结构极易解离，活性蛋白快速从粉体表面脱落，产生严重突释效应。不仅导致产品货架期内功效持续衰减，脱落游离的蛋白还易发生团聚、变性失活，既浪费活性原料，也会造成护肤、药用产品使用效果不稳定，完全无法实现长效、稳定的粉体载蛋白体系构建。

8、3. 微生物源天然结合结构域介导的特异性固定

9、碳水化合物结合模块（cbm）、金黄色葡萄球菌蛋白 a / 蛋白 g、几丁质结合域等微生物来源天然结构域，可依靠氢键、疏水作用、特异性识别位点与对应粉体基材形成非共价可逆结合，规避化学交联剂毒性问题。但该类序列产业化应用限制显著：第一，全部来源于细菌、真菌等异源微生物，属于非人源外源蛋白序列，用于化妆品存在致敏、皮肤免疫刺激风险，用于皮肤外用、体内缓释药物时免疫原性过高，易诱发局部炎症反应，国内外化妆品新原料、医用生物材料合规申报难度极大，体内给药场景直接禁用；第二，结构域以刚性β- 折叠空间构象为主，融合至目标活性蛋白两端后会产生巨大空间位阻，干扰活性蛋白正确折叠，显著降低重组融合蛋白原核 / 真核表达产量，同时进一步损耗蛋白本身生物活性；第三，结合特性存在固有矛盾，若结构域与粉体结合力强，则需要强解离试剂（强酸、强变性剂、高浓度表面活性剂）才能洗脱蛋白，不适用于温和皮肤、生理环境释放；若弱化结合强度适配可控释放，又会出现蛋白易脱落流失的问题，二者无法平衡。

10、4. 噬菌体展示筛选人工固体结合短肽

11、通过噬菌体体外多肽库筛选获得的人工短肽，可针对性识别云母、二氧化钛等单一粉体基材，无需依赖微生物大分子结构域。但其产业化短板突出：一方面，短肽属于人工非天然外源序列，长期皮肤接触、体内作用的毒理、致敏、安全评价数据严重缺失，化妆品领域需单独开展全套新原料毒理申报，周期长达数年，申报成本高昂；另一方面，该类结合肽仅能通过固相化学合成制备，合成规模上限低，难以实现公斤级、吨级工业化量产，原料成本居高不下，仅能满足实验室小样本机制研究，完全不适配日化、生物医药大批量生产需求。同时单一短肽基材识别谱窄，仅能结合一种粉体，无法适配彩妆、制剂多粉体复配体系。

12、弹性蛋白样多肽（elp）是以哺乳动物天然弹性蛋白疏水重复单元为模板人工设计的重组多肽，经典核心重复单元为 vpgxg 五肽序列，具备独特可逆温敏相变特性、极低生物免疫原性、优异人体生物相容性，现阶段行业内对 elp 的开发仅局限于重组蛋白逆相变循环（itc）分离纯化工艺，仅利用其温敏沉淀特性简化蛋白提纯步骤，功能开发维度单一，几乎未挖掘 elp 自身对无机、有机粉体基材的界面结合潜力，现有针对 elp 的功能化修饰改造方案均存在明显技术短板：

13、弹性蛋白样多肽是基于哺乳动物天然弹性蛋白疏水结构域设计的重组多肽，核心重复单元为五肽序列 vpgxg（x 为除脯氨酸外的任意氨基酸），具有天然的温敏相变特性、优异的生物相容性，已被用于重组蛋白纯化。核心特性为低临界溶解温度（lcst）可逆相变行为：温度低于相变温度（tt）时水溶性良好，温度高于 tt 时发生可逆疏水聚集。现有技术中，elp 主要用于重组蛋白的逆相变循环（itc）纯化，功能单一，仅利用其温敏相变特性，未挖掘其底物结合功能的开发潜力。

14、检索到的相关专利文献：

15、公开国别中国，公开号cn118389566a，公开日期2024年7月26日，该文献公开了一种重组人源弹性蛋白肽重组质粒的构建方法，其特征在于，所述重组质粒根据毕赤酵母的密码子偏好性优化合成弹性蛋白片段rgd-elp的密码子，通过pcr克隆获取连接片段，将克隆得到的弹性蛋白片段rgd-elp和表达载体ppic9k片段混合，利用gibson assembly无缝连接技术进行连接，得到所述重组质粒，命名为ppic9k-rgd-elp。

16、现有 elp 的功能化改造，采用elp 骨架末端融合外源亲和标签的方案，如末端融合碳水化合物结合模块（cbm）、his 标签、gst 标签等，未将亲和结合功能直接嵌入 elp 的核心重复单元中。或在40个重复五肽的“x”位点引入赖氨酸（lys）、缬氨酸（val）和苯丙氨酸（phe），赋予elp形成二氧化硅的能力，得到阳离子型类弹性蛋白多肽 elps [kv8f-40]、elps [k5v4f-40]。

17、检索到的相关非专利文献：

18、期刊名称或书名《international journal of biological macromolecules》，文献名称《programmable stimuli-responsive polypeptides for biomimetic synthesisof silica nanocomposites and enzyme self-immobilization》，卷号134，公开日期2019年，该文献公开了利用刺激响应性弹性蛋白样多肽（elp），开发了一种新型、简便且低成本的生物硅合成方法。通过对赖氨酸残基进行编程，elp 被精准改造为具有硅矿化能力的多肽。所得阳离子型 elp[kv8f-40] 采用基于热响应特性的无色谱等温滴定微量热法（itc）纯化技术，以超高产率实现了纯化。此外，该方法实现了 elp 的高效牢固固定，固定产率超过 98%，泄漏率低于 2%。这表明阳离子型 elp 可作为融合蛋白的双功能标签（兼具纯化与固定化功能）。

19、期刊名称或书名《microbial cell factories》，文献名称《a novel all-in-onestrategy for purification and immobilization of β-1,3-xylanase directly fromcell lysate as active and recyclable nanobiocatalyst》，卷号20，公开日期2021年，该文献公开了一种新型elps[k5v4f-40]（其中k5v4f代表k:v:f的比例为5:4:1，命名为k5），其等电点（pi）为9.64。随后，将该elp与spycatcher融合（命名为k5-c）。k5-c仍具备在二氧化硅纳米颗粒表面通过spycatcher制备仿生二氧化硅纳米颗粒的能力。k5-c 可快速催化tmos 形成二氧化硅纳米颗粒，无需传统载体繁琐的表面活化步骤。细胞裂解液直接固定化：表面展示的 spycatcher 可与细胞裂解液中 spytag 融合的 β-1,3 - 木聚糖酶自发形成异肽键，实现特异性固定化。高固定化效率：实现90% 以上的酶固定化效率和85% 以上的活性回收率。稳定性增强：通过共价固定化提高酶的热稳定性、储存稳定性和 ph 耐受性，延长酶的使用寿命。

20、前述文献代表的现有技术至少存在以下未解决的技术问题或缺陷：

21、无一类多肽可同时实现对化妆品三大类核心粉体的通用超强结合，无法解决多粉体复合配方的统一功能化修饰需求；大部分的固体结合肽不符合化妆品合规要求：大部分的固体结合肽，属于外源微生物来源肽段，未收录于《已使用化妆品原料目录（2021 版）》，且微生物来源序列存在潜在免疫原性、致敏性风险；现有 elp 序列未针对化妆品粉体的结构共性优化，无法平衡超强结合能力与可溶性表达、活性蛋白融合兼容性；现有制备体系无法同时满足化妆品原料高安全性、低成本、规模化制备的工业化需求。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供：

2、一种重组人弹性蛋白样多肽及制备方法和应用，及其相关技术，以解决现有多肽无法广谱结合化妆品多类粉体、化学交联易造成蛋白失活且产生安全残留、外源结合序列合规性差且免疫原性高、高疏水结合序列无法同时满足结合能力、可溶性表达及融合蛋白活性等技术问题或其组合。

3、术语说明：

4、除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利发明、公开材料通过引用方式整体并入本文。如果本文对术语有多个定义，以本章的定义为准。

5、应理解，上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释，而不对本发明的主题作任何限制。在本发明中，除非另有具体说明，否则使用单数时也包括复数。还应注意，除非另有说明，否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外，所用术语“包括”以及其它形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。

6、可在参考文献《活性多肽研究开发与应用》，科学出版社，2021年5月，第1版；《peptide synthesis: methods and protocols》：humana press；2025 年 6 月（第二版）；中找到对标准化学术语的定义。

7、除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如转化、诱导等方法。

8、除非提出具体定义，本文中使用的各类市售产品的使用，均采用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来进行实施。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。

9、本文所用的术语“化妆品核心粉体”，包括碳水化合物类粉体、层状硅酸盐类粉体、强疏水有机聚合物粉体。其中，碳水化合物类粉体包含化妆品常用粉体为纤维素粉、纤维素微球、微晶纤维素、淀粉、改性淀粉、木粉，疏水结合界面来源于吡喃葡萄糖环的连续 c-h疏水平面，氢键结合位点来源于糖环上高密度的 c2/c3/c6 位羟基。层状硅酸盐类粉体包含化妆品常用粉体为云母、绢云母、滑石粉、高岭土、膨润土，疏水结合界面来源于硅氧烷四面体形成的连续 sp2 杂化疏水平面，氢键结合位点来源于层间、表面的硅羟基、铝羟基。强疏水有机聚合物粉体包含化妆品常用粉体为尼龙微球、聚乙烯微球、聚四氟乙烯（ptfe）微球、聚甲基丙烯酸酯（pmma）微球，疏水结合界面来源于碳链 / 碳氟链形成的连续疏水界面，氢键结合位点来源于酰胺基、酯基上的极性氢键供体 / 受体。本发明靶向的三大类化妆品核心粉体，具备统一的双结合位点结构特征，是实现通用超强结合的基础。

10、本文所用的术语“肽”，是由两个或更多氨基酸通过肽键连接形成的化合物，是介于氨基酸和蛋白质之间的物质，其分子量较小，通常由 2-100 个氨基酸组成。肽广泛存在于生物体内，参与多种生理活动，例如信号传递、免疫调节等。

11、本文所用的术语“氨基酸”，是构成蛋白质的基本单位，由氨基（-nh2）和羧基（-cooh）组成，通过侧链结构差异形成 20 种常见类型。它们参与生命活动的几乎所有环节，如构建组织、调节代谢，并分为必需氨基酸（需从食物中获取）和非必需氨基酸（人体可合成）。

12、本文所用的术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文可互换使用，指氨基酸残基的聚合物，这些术语适用于这样的氨基酸聚合物，其中有一个或多个氨基酸残基是经修饰的残基或者非天然存在的残基，例如相应的天然存在的氨基酸的人工化学模拟物；这些术语也适用于天然存在的氨基酸聚合物。

13、本文所用的术语“弹性蛋白样多肽”，源自人弹性蛋白保守序列、以(vpgxg)n为核心重复单元的人工重组多肽，可通过 x 位点改造实现广谱粉体结合与活性蛋白融合表达。

14、本文所用的术语“连接肽”，指：用于连接 elp 与活性蛋白的短肽，避免空间位阻干扰，常用为(ggggs) n，保证两端结构与活性独立。

15、第一方面，本发明提供了：一种重组人弹性蛋白样多肽，所述弹性蛋白样多肽由 n个重复的 vpgxg 五肽单元串联组成；

16、n为≥5 的整数；每个所述五肽单元中的 x 为独立选自的天然 l 型氨基酸，且所有 x 位点满足以下条件中的一种或多种：

17、（1）疏水锚定氨基酸的总摩尔占比为 50-100%，所述疏水锚定氨基酸为色氨酸 w、酪氨酸 y、苯丙氨酸 f 中的一种或多种；

18、（2）辅助功能氨基酸的总摩尔占比为 0%-50%。

19、其中，包含技术特征：n、天然 l 型氨基酸、疏水锚定氨基酸的总摩尔占比、疏水锚定氨基酸、辅助功能氨基酸的总摩尔占比、辅助功能氨基酸等。

20、其中，技术特征n选自20-100 的整数。

21、其中，技术特征n可选自20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、60、70、80、90、100。

22、其中，技术特征n优选为30-60 的整数。

23、其中，技术特征n可选自30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、60，及其中间的任意整数或两整数之间的范围值。

24、其中，技术特征n进一步优选为36-40。

25、其中，技术特征n再进一步优选为36。

26、其中，技术特征天然 l 型氨基酸选自l - 丙氨酸、l - 缬氨酸、l - 亮氨酸、l -异亮氨酸、l - 脯氨酸、l - 苯丙氨酸、l - 甲硫氨酸、l - 色氨酸、l - 丝氨酸、l - 苏氨酸、l - 半胱氨酸、l - 酪氨酸、l - 天冬酰胺、l - 谷氨酰胺、l - 天冬氨酸、l - 谷氨酸、l - 赖氨酸、l - 精氨酸、l - 组氨酸、甘氨酸。

27、其中，技术特征疏水锚定氨基酸的总摩尔占比选自50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%，及中间的任意点值或任意两点之间的范围值可选择。

28、其中，技术特征疏水锚定氨基酸的总摩尔占比优选为60-100%。

29、其中，技术特征疏水锚定氨基酸可单独选自色氨酸 w，单独选自酪氨酸 y，单独选自苯丙氨酸 f，组合选自色氨酸 w和酪氨酸 y，或组合选自色氨酸 w和苯丙氨酸 f，或组合选自酪氨酸 y和苯丙氨酸 f，或组合选自色氨酸 w、酪氨酸 y和苯丙氨酸 f。

30、优选地，技术特征疏水锚定氨基酸选自色氨酸 w、酪氨酸 y和苯丙氨酸 f组合；或色氨酸 w、酪氨酸 y组合。

31、其中，苯丙氨酸 f占所有 x 位点摩尔比的 0%-100%，酪氨酸 y占所有 x 位点摩尔比的0%-100%，色氨酸 w占所有 x 位点摩尔比的占0%-100%。

32、进一步地，当疏水锚定氨基酸选自色氨酸 w、酪氨酸 y和苯丙氨酸 f组合时，色氨酸 w、酪氨酸 y和苯丙氨酸 f的摩尔比各占1/3，无辅助氨基酸。

33、进一步地，当疏水锚定氨基酸选自色氨酸 w、酪氨酸 y组合时，色氨酸 w 摩尔比占1/3，酪氨酸 y摩尔比占2/3，无辅助氨基酸。

34、进一步地，当疏水锚定氨基酸选自色氨酸 w、酪氨酸 y组合时，色氨酸 w 摩尔比占40%，酪氨酸 y摩尔比占20%，辅助氨基酸占比40%。

35、其中，技术特征辅助功能氨基酸的总摩尔占比选自0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%，及中间的任意点值或任意两点之间的范围值可选择。

36、优选地，技术特征辅助功能氨基酸的总摩尔占比选自0%-40%。

37、进一步地，技术特征辅助功能氨基酸的总摩尔占比选自0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%，及中间的任意点值或任意两点之间的范围值可选择。

38、其中，技术特征辅助功能氨基酸选自氢键协同氨基酸、水溶性调控氨基酸、静电调控氨基酸、ph 响应调控氨基酸中的一种或多种。

39、其中，技术特征氢键协同氨基酸可单独选自谷氨酰胺 q，单独选自天冬酰胺 n，或选自谷氨酰胺 q和天冬酰胺 n组合。

40、其中，技术特征氢键协同氨基酸优选为谷氨酰胺 q。

41、其中，氢键协同氨基酸在所有 x 位点中的总摩尔占比为 0%-30%。

42、具体地，所述的氢键协同氨基酸在所有 x 位点中的总摩尔占比可以为0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%，及中间的任意点值或任意两点之间的范围值可选择。

43、优选地，氢键协同氨基酸在所有 x 位点中的总摩尔占比为20%。

44、更进一步地，所述的水溶性调控氨基酸选自丙氨酸a、甘氨酸g中的一种或多种。

45、其中，所述的水溶性调控氨基酸优选为丙氨酸a。

46、具体地，所述的水溶性调控氨基酸用于平衡序列整体疏水性，提升真核体系的可溶性表达量，避免粉体团聚。

47、进一步地，所述的水溶性调控氨基酸的总摩尔占比为0-20%。

48、具体地，所述的水溶性调控氨基酸的总摩尔占比可以为0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%，及中间的任意点值或任意两点之间的范围值可选择。

49、进一步地，所述的水溶性调控氨基酸的总摩尔占比优选为15%。

50、更进一步地，所述的静电调控氨基酸选自精氨酸r、赖氨酸k中的一种或多种。

51、其中，所述的静电调控氨基酸优选为精氨酸r。

52、具体地，所述的静电调控氨基酸用于匹配粉体表面的弱负电荷，进一步强化结合稳定性。

53、进一步地，所述的静电调控氨基酸的总摩尔占比可以为0-15%。

54、具体地，所述的静电调控氨基酸的总摩尔占比可以为0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%，及中间的任意点值或任意两点之间的范围值可选择。

55、其中，所述的静电调控氨基酸的总摩尔占比优选为10%。

56、更进一步地，所述的ph 响应调控氨基酸为组氨酸h。

57、具体地，所述的ph 响应调控氨基酸用于实现 ph 可控的结合 - 释放，适配活性蛋白的缓释需求。

58、进一步地，所述的ph 响应调控氨基酸的总摩尔占比为0-20%。

59、具体地，所述的ph 响应调控氨基酸的总摩尔占比可以为0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%，及中间的任意点值或任意两点之间的范围值可选择。

60、优选地，所述的ph 响应调控氨基酸的总摩尔占比为20%。

61、根据本发明的一些实施方式，所述的重组人弹性蛋白样多肽的氨基酸序列如seqid no:1-3任一项所示。

62、seq id no:1:

63、vpgfgvpgwgvpgygvpgfgvpgwgvpgygvpgfgvpgwgvpgygvpgfgvpgwgvpgygvpgfgvpgwgvpgygvpgfgvpgwgvpgygvpgfgvpgwgvpgygvpgfgvpgwgvpgygvpgfgvpgwgvpgygvpgfgvpgwgvpgygvpgfgvpgwgvpgygvpgfgvpgwgvpgyg。

64、seq id no:2:

65、vpgwgvpgygvpgygvpgwgvpgygvpgygvpgwgvpgygvpgygvpgwgvpgygvpgygvpgwgvpgygvpgygvpgwgvpgygvpgygvpgwgvpgygvpgygvpgwgvpgygvpgygvpgwgvpgygvpgygvpgwgvpgygvpgygvpgwgvpgygvpgygvpgwgvpgygvpgyg。

66、seq id no:3:

67、vpgwgvpgqgvpgwgvpgygvpghgvpgagvpgwgvpgqgvpgwgvpgygvpghgvpgagvpgwgvpgqgvpgwgvpgygvpghgvpgagvpgwgvpgqgvpgwgvpgygvpghgvpgagvpgwgvpgqgvpgwgvpgygvpghgvpgagvpgwgvpgqgvpgwgvpgygvpghgvpgwgvpgqgvpgwgvpgygvpghg。

68、第二方面，本发明提供了一种融合蛋白，所述的融合蛋白包括上述的弹性蛋白样多肽。

69、具体地，所述的融合蛋白中还包括活性蛋白或功能多肽。

70、进一步地，所述的活性蛋白或功能多肽与所述弹性蛋白样多肽的 n 端或 c 端通过肽键直接连接、或通过连接肽连接。

71、再进一步地，所述的活性蛋白或功能多肽为化妆品合规活性蛋白或功能多肽。

72、具体地，所述的活性蛋白或功能多肽选自重组乳铁蛋白、重组血清白蛋白、重组角蛋白、重组胶原蛋白、重组丝素蛋白、重组弹性蛋白、修护肽、抗氧化肽、美白肽、抗衰肽、抗菌肽、生长因子中的任意一种或多种。

73、第三方面，本发明提供了一种化妆品固体功能化复合物，所述的化妆品固体功能化复合物包括上述的弹性蛋白样多肽、上述的融合蛋白、化妆品固体。

74、具体地，所述的化妆品固体选自碳水化合物类粉体、层状硅酸盐类粉体、强疏水有机聚合物粉体中的任意一种或多种；

75、进一步地，所述碳水化合物类粉体选自纤维素粉、纤维素微球、微晶纤维素、纸浆、脱脂棉、纸中的任意一种或多种；

76、进一步地，所述层状硅酸盐类粉体选自云母、绢云母中的任意一种或多种；

77、进一步地，所述强疏水有机聚合物粉体选自尼龙微球、聚乙烯微球、聚四氟乙烯微球、聚甲基丙烯酸酯微球中的任意一种或多种。

78、第四方面，本发明提供了一种重组人弹性蛋白样多肽或融合蛋白的制备方法，为采用重组表达体系进行制备；所述重组表达体系选自植物表达体系、酵母表达体系、哺乳动物细胞表达体系、昆虫细胞表达体系中的任意一种。

79、具体地，所述植物表达体系为本氏烟草瞬时表达体系。

80、第五方面，本发明提供了上述的重组人弹性蛋白样多肽或上述的融合蛋白或上述的化妆品固体功能化复合物在制备化妆品中的应用。

81、第六方面，本发明提供了上述的重组人弹性蛋白样多肽或上述的融合蛋白或上述的化妆品固体功能化复合物在制备植入医疗器械涂层、组织工程支架、创面修复材料、药物递送载体中的应用。

82、本发明至少具有如下有益效果：

83、（1）本发明提供了一种重组人弹性蛋白样多肽，通过在vpgxg重复单元x位点引入芳香疏水锚定氨基酸，可同时稳定结合碳水化合物粉体（纤维素、纸浆、脱脂棉等）、层状硅酸盐粉体（云母、绢云母）、强疏水有机聚合物粉体（pmma、pe、ptfe微球），适配彩妆、护肤多粉体复配体系，突破传统结合肽仅识别单一粉体的局限。

84、（2）现有化学交联方案存在交联试剂残留刺激皮肤、无选择性破坏蛋白活性中心、生产批次差异大、蛋白不可控释放四大短板，本发明无化学交联剂，无刺激性残留，安全等级更高，本发明依靠多肽自身疏水、氢键、静电多重分子间作用力实现粉体与活性蛋白结合，全程不使用有毒活化交联试剂，可直接用于敏感肌化妆品、创面修复、植入器械等高标准安全场景。

85、（3）现有物理吸附、蜡质包裹仅依靠微弱范德华力，在乳化高温、高盐汗液、长期储存下极易解离，功效持续衰减，本发明形成稳定复合体系在elp核心vpgxg单元高密度引入疏水锚定残基，搭配辅助氨基酸，对化妆品粉体均具备强锚定效果。

86、（4）本发明多肽基础序列源自人体天然弹性蛋白保守片段，不属于细菌、真菌外源异源序列，皮肤外用无免疫刺激、局部炎症风险，体内植入、创面医用场景均可安全使用。

87、（5）人源弹性蛋白类原料无需像微生物外源结构域单独开展全套毒理、致敏评价，大幅缩短新原料申报周期、降低申报成本。