一种用于cccDNA选择性扩增的梯度PCR管的制作方法

本技术涉及共价闭合环状dna检测，尤其涉及一种用于cccdna选择性扩增的梯度pcr管。

背景技术：

1、cccdna即共价闭合环状dna，在cccdna检测领域(如乙肝病毒cccdna定量、epstein-barr病毒cccdna分型)，梯度pcr(聚合酶链式反应)是实现选择性扩增的关键技术手段，由于cccdna的环状结构使其特异性引物结合效率对退火温度高度敏感，因此需通过梯度温度筛选最优退火条件，确保扩增结果的准确性；

2、但现有梯度pcr技术在cccdna应用中存在明显局限，一方面，常规pcr管无专用控温与隔离结构，即使通过设备实现梯度，管内局部温度偏差仍达±2℃，易导致同一温度梯度内出现部分扩增特异性不足的问题，尤其对eb病毒cccdna等分型检测，非特异性扩增会直接干扰分型结果判读，此外，cccdna扩增需严格避免引物二聚体累积模板交叉污染，常规pcr管的单一腔室结构易导致未结合的引物与模板持续反应生成二聚体，而二聚体在后续电泳或荧光检测中会掩盖cccdna扩增产物信号，进一步降低检测灵敏度。

3、为此提出一种用于cccdna选择性扩增的梯度pcr管来解决上述问题。

技术实现思路

1、为了弥补以上不足，本实用新型提供了一种用于cccdna选择性扩增的梯度pcr管，旨在改善了现有技术中常规pcr管无专用控温与隔离结构，导致管内局部温度偏差达以及易造成引物二聚体累积与模板交叉污染而降低检测灵敏度的问题。

2、为了实现上述目的，本实用新型采用了如下技术方案：

3、包括管体，还包括

4、梯度控温组件，所述梯度控温组件沿管体轴向分布，用于在管体腔室中形成五十五摄氏度到六十五摄氏度的梯度温度；

5、其中，梯度控温组件包括导热分区壁及温度调节层；所述导热分区壁为十字形薄壁结构固定连接在管体内部，将管体内部分隔为至少三个独立的腔室；

6、扩增隔离组件，所述扩增隔离组件设置于梯度控温组件的目标温度区间对应的腔室内；

7、所述管体为顶部开口的中空柱状结构。

8、作为上述技术方案的进一步描述：

9、所述温度调节层贴合于每个腔室对应的管体外侧，所述温度调节层为四层，依次对应不同的相变温度区间为五十五摄氏度、五十九摄氏度、六十三摄氏度和六十五摄氏度，从下至上依次分布。

10、作为上述技术方案的进一步描述：

11、所述扩增隔离组件包括隔膜及两个容纳槽，所述隔膜水平固定于腔室中部，将腔室分隔为上腔和下腔；两个所述容纳槽分别为下方预封装容纳槽和上方临时容纳槽。

12、作为上述技术方案的进一步描述：

13、所述隔膜为聚醚砜半透膜，所述隔膜通过医用ab胶与腔室的内壁固定。

14、作为上述技术方案的进一步描述：

15、所述管体的内壁喷涂有氟碳疏水涂层，所述涂层厚度为5μm。

16、本实用新型具有如下有益效果：

17、1、本实用新型中，通过梯度控温组件，对管体内温度进行调控，实现了单管内55-65℃连续且稳定的轴向温度梯度，通过十字形的导热分区壁将管体分隔为多个独立轴向腔室，其高导热性可快速传递外侧peg系列相变材料涂层的稳定温度，使每个腔室局部温度偏差从现有技术的±2℃降至≤±0.5℃，有效解决了cccdna扩增因温度偏差导致的非特异性结合问题，尤其对eb病毒cccdna分型检测，可将分型错误率从30％以上降至5％以下，显著提升扩增特异性与结果准确性。

18、2、本实用新型中，在扩增隔离组件的隔膜、下方预封装容纳槽与上方临时容纳槽的相互配合下，可对cccdna扩增过程中的引物与模板进行精准隔离与可控混合，以解决现有常规pcr管因单一腔室结构导致的引物二聚体累积及模板交叉污染问题，聚醚砜半透膜将腔室分隔为上下两部分，下方预封装容纳槽预存引物与酶，上方临时容纳槽添加cccdna样本，隔膜可阻挡游离引物与杂菌模板通过，仅允许扩增产物扩散，从根源减少引物二聚体生成；同时，两个容纳槽与隔膜紧密贴合无间隙，确保试剂仅在目标温度区间内混合反应，避免模板交叉污染。

1.一种用于cccdna选择性扩增的梯度pcr管，包括管体(1)，其特征在于：还包括

2.根据权利要求1所述的一种用于cccdna选择性扩增的梯度pcr管，其特征在于：所述温度调节层(22)贴合于每个腔室对应的管体(1)外侧，所述温度调节层(22)为四层，依次对应不同的相变温度区间为五十五摄氏度、五十九摄氏度、六十三摄氏度和六十五摄氏度，从下至上依次分布。

3.根据权利要求1所述的一种用于cccdna选择性扩增的梯度pcr管，其特征在于：所述扩增隔离组件(3)包括隔膜(31)及两个容纳槽，所述隔膜(31)水平固定于腔室中部，将腔室分隔为上腔和下腔；两个所述容纳槽分别为下方预封装容纳槽(32)和上方临时容纳槽(33)。

4.根据权利要求3所述的一种用于cccdna选择性扩增的梯度pcr管，其特征在于：所述隔膜(31)为聚醚砜半透膜，所述隔膜(31)通过医用ab胶与腔室的内壁固定。

5.根据权利要求1所述的一种用于cccdna选择性扩增的梯度pcr管，其特征在于：所述管体(1)的内壁喷涂有氟碳疏水涂层，所述涂层厚度为5μm。