穗状弯孢霉、用于检测穗状弯孢霉引起的本氏针茅根腐病的特异性引物、快速检测方法及其应用

本技术涉及微生物鉴定或检测，尤其涉及穗状弯孢霉、用于检测穗状弯孢霉引起的本氏针茅根腐病的特异性引物、快速检测方法及其应用。

背景技术：

1、本氏针茅（

stipa bungeana trin.）隶属于禾本科（poaceae）针茅属（

stipa），为多年生丛生型草本植物，是我国温性草原、山地草原及高寒草地生态系统中的重要优势种或伴生种之一。该植物具有较强的耐寒、耐旱和耐瘠薄能力，在青藏高原及其毗邻高海拔地区广泛分布，在维持草地群落结构稳定、保障牧草供给、保持水土及维系区域生态功能等方面具有重要作用。近年来，受气候波动、草地退化、放牧压力增加及人工草地管理措施不完善等因素影响，本氏针茅草地病害问题逐渐受到关注。

2、目前报道的本氏针茅病害有锈病（

uredo sp.、白粉病（

erysiphe graminis）、黑粉病（

ustilagosp.）、叶斑病（

septoria sp.）和根腐病（

fusarium sp.、

rhizoctonia sp.、

pythium sp.）等。

3、穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）为弯孢霉属真菌，可侵染多种经济作物，引起叶斑病，造成产量损失。

4、目前没有发现穗状弯孢霉引起本氏针茅根腐病的相关报道。

技术实现思路

1、有鉴于此，本技术的目的在于提供穗状弯孢霉、用于检测穗状弯孢霉引起的本氏针茅根腐病的特异性引物、快速检测方法及其应用，用以解决目前没有发现穗状弯孢霉引起本氏针茅根腐病的相关报道的问题。

2、而本技术为解决上述技术问题所采用的技术方案为：

3、第一方面，本发明的实施例提供了穗状弯孢霉（curvularia spicifera），其所述穗状弯孢霉的菌株编号为jz5-1，保藏编号为cgmcc no . 42800。

4、在一些实施例中，所述穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）来自本氏针茅根腐病病株的根部。

5、第二方面，上述第一方面的穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）作为对照品在用于鉴定本氏针茅根腐病病害方面的应用。

6、在一些实施例中，穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）作为对照品，该菌种的孢子悬浮液浓度为1 × 107个/ml。

7、第三方面，用于检测或辅助检测上述第一方面所述的穗状弯孢霉（

curvularia

spicifera）的特异性引物对，所述特异性引物对包括引物cs-f和引物cs-r，所述引物cs-f的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述引物cs-r的核苷酸序列如seq id no.2所示。

8、在一些实施例中，所述特异性引物对是在感染穗状弯孢霉（

curvularia

spicifera）的本氏针茅根腐病的本氏针茅中特异性地扩增出352bp的特异性片段，所述352bp的特异性片段的核苷酸序列如seq id no.3所示。

9、第四方面，seq id no:3所示分子在鉴定或辅助鉴定穗状弯孢霉（

curvularia

spicifera）或者制备用于鉴定或辅助鉴定穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）产品中的应用。

10、第五方面，试剂盒，包括上述第三方面所述的特异性引物对。

11、第六方面，上述第三方面所述的特异性引物对或上述第五方面所述的试剂盒在检测或辅助检测穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）中的应用；和/或

12、上述第三方面所述的特异性引物对在制备用于检测或辅助检测穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）的产品中的应用；和/或

13、上述第三方面所述的特异性引物对或上述第五方面所述的试剂盒在检测或辅助检测待测菌是否为穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）中的应用；和/或

14、上述第三方面所述的特异性引物对在制备用于检测或辅助检测待测菌是否为穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）的产品中的应用；和/或

15、上述第三方面所述的特异性引物对或上述第五方面所述的试剂盒在检测或辅助检测待测生物样品中是否含有穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）中的应用；和/或

16、上述第三方面所述的特异性引物对在制备用于检测或辅助检测待测生物样品中是否含有穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）的产品中的应用；和/或

17、上述第三方面所述的特异性引物对或上述第五方面所述的试剂盒在检测或辅助检测待测生物样品中穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）含量中的应用；和/或

18、上述第三方面所述的特异性引物对在制备用于检测或辅助检测待测生物样品中穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）含量的产品中的应用。

19、第七方面，检测或辅助检测穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）的方法，包括如下步骤：以待测生物样品的基因组dna为模板，用上述第三方面所述的特异性引物对进行pcr扩增得到扩增产物，检测所述扩增产物的大小，如果所述扩增产物含有352bp的dna片段，则所述待测生物样品为或候选为穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）或者含有或候选含有穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）；如果所述扩增产物不含有352bp的dna片段，则所述待测生物样品不为或候选不为穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）或者不含有或候选不含有穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）。

20、有益效果：

21、本技术从本氏针茅根部分离出一种真菌—穗状弯孢霉，通过形态学与分子生物学联合鉴定为穗状弯孢霉（

curvularia spicifera），菌株编号为jz5-1，保藏编号为cgmcc no. 42800，并通过病原菌回接实验—柯赫氏法则验证了该穗状弯孢霉（

curvularia

spicifera）jz5-1是本氏针茅根腐病致病菌的属性。

22、本技术的菌株（穗状弯孢霉（

curvularia spicifera）jz5-1）作为对照品应用于本氏针茅根腐病鉴定中，最终为解决本氏针茅根腐病致病菌鉴定不清、诊断方法匮乏、防治缺乏基础支撑的问题提供关键技术方案，填补该领域研究空白，为本氏针茅根腐病的科学诊断与有效防治奠定核心基础。

23、本技术精准选取穗状弯孢霉its序列中种内保守、种间特异的区段，成功设计并合成了一对特异性pcr引物cs-f/cs-r。利用该引物对建立的pcr检测方法能够从感染穗状弯孢霉的本氏针茅组织及其纯培养物中特异性地扩增出大小为352 bp的目标dna片段，而对其他参试真菌及健康植物样品均无特异扩增片段，展现出良好的种级特异性。