一种野鸡尾金粉蕨酸性多糖及其制备方法和应用

本申请涉及生物活性物质分离纯化，具体涉及一种野鸡尾金粉蕨酸性多糖及其制备方法和应用。

背景技术：

1、野鸡尾金粉蕨（onychium japonicum）是中国蕨科金粉蕨属植物，具有解毒、止血等传统功效及抗炎、抗肿瘤等多种生物活性，是恩施地区常用的民间药材之一，具有一定的药用价值和开发潜力。

2、目前，关于野鸡尾金粉蕨的研究主要集中于黄酮、酚酸等小分子化学成分的提取分离及活性评价，而对于野鸡尾金粉蕨多糖组分的研究较少，缺乏对其提取、分离纯化、结构表征及生物活性评价的系统性报道。天然多糖，尤其是酸性多糖，因具有免疫调节、抗氧化、抗炎等多种生物活性而受到广泛关注，但是不同来源多糖在分子量、单糖组成、糖苷键连接方式及生物活性等方面存在较大差异，开发来源明确、理化性质清楚、具有良好生物活性的天然酸性多糖具有重要意义。然而，目前尚未见到关于野鸡尾金粉蕨酸性多糖系统性提取分离、纯化、结构特征分析及细胞抗炎活性评价的完整报道。

3、基于此，亟需开发野鸡尾金粉蕨酸性多糖的提取方法，并对其理化性质和生物活性进行研究，以满足相关研究及开发利用需求。

技术实现思路

1、本申请提供一种野鸡尾金粉蕨酸性多糖及其制备方法和应用，旨在解决现有野鸡尾金粉蕨酸性多糖组分不明确、无提取方法的技术问题。

2、为了达到上述目的，本申请采用以下技术方案予以实现。

3、本申请的第一方面，提供一种野鸡尾金粉蕨酸性多糖，其重均分子量为 10840da，其单糖组成及摩尔百分比为：甘露糖2.28%、葡萄糖胺0.75%、鼠李糖11.20%、葡萄糖醛酸5.20%、半乳糖醛酸48.34%、半乳糖胺0.75%、葡萄糖2.21%、半乳糖13.95%、木糖2.67%和阿拉伯糖13.40%；

4、所述野鸡尾金粉蕨酸性多糖的连接方式为1,4-galpa、1,3,4-galpa和1,2,4-rhap。

5、本申请的第二方面，提供上述野鸡尾金粉蕨酸性多糖的制备方法，包括以下步骤：

6、s1，将野鸡尾金粉蕨依次进行粉碎、脱脂脱色处理，得到野鸡尾金粉蕨粉渣；

7、s2，将所述野鸡尾金粉蕨粉渣经水提处理和醇沉处理，得到粗多糖；

8、s3，所述粗多糖经脱蛋白处理后，进行阴离子交换柱层析分离，得到酸性粗多糖组分；

9、s4，将所述酸性粗多糖组分经凝胶柱层析纯化，收集目标洗脱组分，经冷冻干燥，得到野鸡尾金粉蕨酸性多糖。

10、优选的，s1具体包括：

11、将野鸡尾金粉蕨清洗表面杂质，烘干后破碎为粉末；

12、将所述粉末用无水乙醇在60~100℃浸泡2~6h进行脱脂脱色，重复浸泡1~5次；收集滤渣于50~80℃干燥，得到野鸡尾金粉蕨粉渣。

13、优选的，所述水提处理具体为：

14、将野鸡尾金粉蕨粉渣与纯水按照1g:20~50ml的料液比混合，在80~150℃保温2~6h，收集滤液；重复操作1~5次，将滤液合并、浓缩，得到浓缩液。

15、优选的，所述醇沉处理具体为：将所述浓缩液加入无水乙醇进行醇沉，使乙醇的终体积百分比为50~90%，收集沉淀物，得到粗多糖。

16、优选的，所述脱蛋白处理具体为：

17、将粗多糖用纯水复溶，采用sevag法脱蛋白1~5次；每次离心后弃去两相交界处蛋白层及下层有机相，将水相浓缩后进行透析24~72 h，冷冻干燥。

18、优选的，所述阴离子交换柱层析分离采用deae-52纤维素柱，洗脱液为0.1~1 m 氯化钠溶液；

19、采用苯酚硫酸法检测洗脱液中糖含量并绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集酸性多糖洗脱部分浓缩，透析24~72 h；经冷冻干燥，得到粗多糖。

20、优选的，所述凝胶柱层析纯化采用sephacryl s-300凝胶柱层，洗脱液为纯水；

21、采用苯酚硫酸法检测洗脱液中糖含量并绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集洗脱峰，浓缩，冷冻干燥后得到野鸡尾金粉蕨酸性多糖。

22、本申请的第三方面，提供上述野鸡尾金粉蕨酸性多糖在制备具有抗炎、抗氧化或改善炎症相关氧化损伤作用的产品中的应用。

23、优选的，所述产品为抗炎或抗氧化应激的药品。

24、与现有技术相比，本申请的有益效果为：

25、1.本申请提供了一种新的酸性多糖组分，即野鸡尾金粉蕨酸性多糖。现有技术中尚未见针对该酸性多糖组分的分离纯化、结构解析及生物活性研究报道，本申请通过特定的提取、分离和纯化方法获得目标酸性多糖组分，为该来源天然产物的功能物质基础研究提供了新的技术方案。

26、2.本申请系统阐明了野鸡尾金粉蕨酸性多糖的结构特征，明确其理化性质、糖组成、主要糖苷键连接方式，提高了该类天然多糖结构信息的完整性和可靠性。

27、3.本申请的野鸡尾金粉蕨酸性多糖具有抗炎及抗氧化应激活性，其在安全浓度范围内能够降低细胞中no、tnf-α、il-6和ros等相关指标水平，具有抑制炎症反应和缓解氧化应激的潜在作用。

28、4.本申请拓展了野鸡尾金粉蕨活性多糖资源的利用方式，提高了野鸡尾金粉蕨的附加值。

1.一种野鸡尾金粉蕨酸性多糖，其特征在于，其重均分子量为 10840 da，

2.权利要求1所述的野鸡尾金粉蕨酸性多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，s1具体包括：

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述水提处理具体为：

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述醇沉处理具体为：将所述浓缩液加入无水乙醇进行醇沉，使乙醇的终体积百分比为50~90%，收集沉淀物，得到粗多糖。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述脱蛋白处理具体为：

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述阴离子交换柱层析分离采用deae-52纤维素柱，洗脱液为0.1~1 m 氯化钠溶液；

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述凝胶柱层析纯化采用sephacryls-300凝胶柱层，洗脱液为纯水；

9.权利要求1所述的野鸡尾金粉蕨酸性多糖在制备具有抗炎、抗氧化或改善炎症相关氧化损伤作用的产品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述产品为抗炎或抗氧化应激的药品。