用于在洗涤剂组合物中使用的具有蛋白酶活性的多肽的制作方法

在本发明中，提供了新的蛋白酶。更特定地，提供了经基因工程化的蛋白酶、包含这些酶的组合物以及制备和使用这些酶或包含这些酶的组合物的方法。

背景技术：

1、酶作为石油化学的可持续替代品越来越多地用于各种应用。酶是可生物降解的，并且已经可以在较低温度发挥催化活性，从而减少能量消耗。特定地，在洗涤剂工业中，在洗涤配制品中应用酶以改善清洁效率和/或减少洗涤步骤中的能量消耗。

2、蛋白酶是能够水解蛋白质的酶。因此，蛋白酶已被用于去除蛋白质污渍，并已出于该目的被添加至洗涤剂组合物中。在洗涤剂应用中，蛋白酶应在升高的温度和/或在洗涤剂和洗涤液的变性条件内稳定。

3、wo 2016/096711和wo 2016/096714描述了枯草杆菌酶变体和含有该变体的洗涤剂，与亲本枯草杆菌酶相比，该变体在液体洗涤剂中具有改善的稳定性和/或改善的洗涤性能。wo 2016/001450和wo 2020/002255披露了稳定性增加的枯草杆菌酶变体。wo 2010/056640也描述了枯草杆菌蛋白酶变体。us 6,376,450披露了多重取代的蛋白酶变体，其提供改善和增强的清洁能力。us 2020/172890 a1披露了性能增强且储存稳定的蛋白酶变体。wo 99/20770 a2、wo 03/062381 a2、wo 2011/140364 a1、wo 2011/072117 a1、wo 2011/072099 a2、wo 2012/151534 a1、wo 2015/144932 a1、wo 2017/207762 a1、wo 2017/192692a1、wo 2018/069158 a1和wo 2022/225696 a2也披露了蛋白酶变体。

4、然而，仍然需要新的蛋白酶，其在苛刻的洗涤剂组合物中稳定并且显示出良好的洗涤性能。

技术实现思路

1、本发明涉及一种具有蛋白酶活性的变体多肽或所述具有蛋白酶活性的多肽的片段，其中：

2、(i) 该多肽具有与seq id no: 1中所示的氨基酸序列具有至少65%但小于100%同一性的氨基酸序列，并且

3、(ii) 与seq id no: 3中所示的氨基酸序列相比并参考seq id no: 2的编号，该多肽或其片段包含在选自由9、18、38、59、212、261和271组成的组的三个或更多个氨基酸残基处的氨基酸取代，

4、其中该变体多肽的该片段包含该全长变体多肽的100至259个连续氨基酸。

5、本发明进一步涉及一种编码所述变体多肽的多核苷酸和一种包含所述变体多肽的组合物。

1.一种具有蛋白酶活性的变体多肽或所述具有蛋白酶活性的多肽的片段，其中：

2.如权利要求1所述的变体多肽，其中：

3.如权利要求1或2所述的变体多肽，其中与seq id no: 3中所示的氨基酸序列相比并参考seq id no: 2的编号，该多肽或其片段包含以下氨基酸取代的组合中的一个：

4.如前述权利要求中任一项所述的变体多肽，其中所述多肽另外包含在选自由21、43、78、160、183、194、204、210、218、228、259和260组成的组的氨基酸残基处的至少一个氨基酸取代。

5.如权利要求4所述的变体多肽，其中：

6.如前述权利要求中任一项所述的变体多肽，其中所述多肽另外包含在选自由24、25、103、109、144、182和248组成的组的氨基酸残基处的至少一个氨基酸取代。

7.如权利要求6所述的变体多肽，其中：

8.如前述权利要求中任一项所述的变体多肽，其中所述多肽与seq id no: 3中所示的氨基酸序列相比并参考seq id no: 2的编号，另外包含在选自由3、76和256组成的组的氨基酸残基处的至少一个氨基酸取代。

9.如权利要求8所述的变体多肽，其中：

10.如前述权利要求中任一项所述的变体多肽，其中参考seq id no: 2的编号，所述多肽在位置101处包含氨基酸残基d或e，优选地在位置101处包含e。

11.如前述权利要求中任一项所述的变体多肽，其中与根据seq id no: 3和/或seq idno: 4的蛋白酶相比，该多肽表现出一种或多种改善的特性，优选地其中这些改善的特性选自：

12.一种多核苷酸，该多核苷酸编码如前述权利要求中任一项所述的变体多肽。

13.一种组合物，该组合物包含如权利要求1至11中任一项所述的变体多肽和至少一种另外的组分，优选地其中该组合物包含酶稳定体系，其中该酶稳定体系优选地包含至少一种选自由以下组成的组的化合物：多元醇（优选地，1,3-丙二醇、乙二醇、甘油、1,2-丙二醇或山梨糖醇）、无机盐（优选地，cacl2、mgcl2或nacl）、短链（优选地，c1-c3）羧酸或其盐（优选地，甲酸、甲酸盐（优选地，甲酸钠）、乙酸、乙酸盐或乳酸盐）、硼酸盐、硼酸、硼酸（优选地，4-甲酰基苯基硼酸（4-fpba））、肽醛（优选地，z-val-h或z-gay-h）、肽缩醛和肽醛亚硫酸氢盐加合物，优选地肽醛（优选地，z-val-h或z-gay-h）。

14.如权利要求13所述的组合物，其中该组合物包含与如前述权利要求中任一项所述的变体多肽不同的一种或多种第二酶，优选地选自由以下组成的组的一种或多种另外的酶：淀粉酶、另外的蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、半纤维素酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、dna酶、分散蛋白、果胶酶、氧化还原酶和角质酶，优选地选自淀粉酶、甘露聚糖酶、纤维素酶和脂肪酶，最优选地淀粉酶。

15.如权利要求13或14中任一项所述的组合物，其中该组合物是洗涤剂组合物、优选地衣物洗涤剂组合物或硬表面清洁洗涤剂组合物、优选地可生物降解的洗涤剂组合物，优选地其中该组合物包含一种或多种表面活性剂和/或一种或多种助洗剂，优选地强螯合助洗剂。