K64型肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及其应用的制作方法

本技术属于医药，特别是涉及一种k64型肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术：

1、肺炎克雷伯菌（klebsiella pneumoniae）是一种具有荚膜包被的革兰氏阴性菌（g-）。肺炎克雷伯菌主要定植于消化道、呼吸道，当机体抵抗力降低时可引起肺部感染、泌尿道感染、甚至血流感染，也是导致呼吸道感染最常见的细菌之一。

2、肺炎克雷伯菌引发的感染目前已成为全球严重的公共卫生问题之一。据统计，肺炎克雷伯菌感染的病死率极高，肺炎克雷伯菌引起的血流感染的病死率为20%至30%，而肺炎克雷伯菌血症合并肺炎的病死率可达50%以上。肺炎克雷伯菌的治疗主要依靠抗生素，但近年来由于各种抗菌药物的广泛使用，产超广谱β-内酰胺酶以及碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌对几乎所有可用的β-内酰胺类（包括碳青霉烯类）药物都具有抗性。在过去10年中，耐碳青霉烯的肺炎克雷伯氏菌（crkp）比率在世界范围内急剧增加。荚膜多糖是肺炎克雷伯菌的主要毒力因子，是治疗或预防肺炎克雷伯菌感染的重要保护性抗原。根据荚膜多糖结构的不同，肺炎克雷伯氏菌可以分成至少77个血清型，荚膜多糖也被称为k抗原或k型。不同的k型表现出不同的耐药性谱，在地理上和临床背景中存在分布差异，可能在医院感染中有不同的流行模式，因此直接影响着临床治疗方案的选择。其中，k64型肺炎克雷伯菌，尽管报道较少，但仍可能导致严重感染，尤其是在免疫功能低下的个体中。与其他血清型相比，k64型可能在某些情况下表现出独特的致病特性。k64型与其他型别相比，可能具有不同的抗生素耐药性谱，也可能对某些特殊环境或人群有特别的致病性表现，然而，k64型肺炎克雷伯菌在临床中相关研究较少。

3、因此，本领域需要开发一种特异性高、亲和力好、结合力强的k64型肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体，从而有利于对耐药性肺炎克雷伯菌的防控及临床应用。

技术实现思路

1、为解决以上技术问题，本技术提供了一种肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体，所述肺炎克雷伯菌为k64型肺炎克雷伯菌，所述肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体的序列包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq no:1所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的氨基酸序列如seq no:2所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

2、具体地，所述轻链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:3、seq id:4和seq id:5所示，或与seq id:3、seq id:4和seq id:5中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:6、seq id:7和seq id:8所示，或与seq id:6、seq id:7和seq id:8中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

3、第二方面，本技术提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株命名为k64-1，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：cctcc no：c2023365，所述杂交瘤细胞株用于制备如第一方面所述的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体。

4、第三方面，本技术提供了一种肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体，所述肺炎克雷伯菌为k64型肺炎克雷伯菌，所述肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体的序列包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq no:9所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的氨基酸序列如seq no:10所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

5、具体地，所述轻链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:11、seq id:12和seq id:13所示，或与seq id:11、seq id:12和seq id:13中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:14、seqid:15和seq id:16所示，或与seq id:14、seq id:15和seq id:16中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

6、第四方面，本技术提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株命名为k64-23，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：cctcc no：c2023366，所述杂交瘤细胞株用于制备如第三方面所述的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体。

7、第五方面，本技术提供了一种肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体，所述肺炎克雷伯菌为k64型肺炎克雷伯菌，所述肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体的序列包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq no:17所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的氨基酸序列如seq no:18所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

8、具体地，所述轻链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:19、seq id:20和seq id:21所示，或与seq id:19、seq id:20和seq id:21中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:22、seqid:23和seq id:24所示，或与seq id:22、seq id:23和seq id:24中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

9、第六方面，本技术提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株命名为k64-24，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：cctcc no：c2023367，所述杂交瘤细胞株用于制备如第五方面所述的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体。

10、第七方面，本技术提供了一种肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体，所述肺炎克雷伯菌为k64型肺炎克雷伯菌，所述肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体的序列包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq no:25所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的氨基酸序列如seq no:26所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

11、具体地，所述轻链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:27、seq id:28和seq id:29所示，或与seq id:27、seq id:28和seq id:29中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:30、seqid:31和seq id:32所示，或与seq id:30、seq id:31和seq id:32中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

12、第八方面，本技术提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株命名为k64-3，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：cctcc no：c2024340，所述杂交瘤细胞株用于制备如第七方面所述的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体。

13、第九方面，本技术提供了一种肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体，所述肺炎克雷伯菌为k64型肺炎克雷伯菌，所述肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体的序列包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq no:33所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的氨基酸序列如seq no:34所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

14、具体地，所述轻链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:35、seq id:36和seq id:37所示，或与seq id:35、seq id:36和seq id:37中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:38、seqid:39和seq id:40所示，或与seq id:38、seq id:39和seq id:40中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

15、第十方面，本技术提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株命名为k64-5，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：cctcc no：c2024341，所述杂交瘤细胞株用于制备如第九方面所述的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体。

16、第十一方面，本技术提供了一种肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体，所述肺炎克雷伯菌为k64型肺炎克雷伯菌，所述肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体的序列包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq no:41所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的氨基酸序列如seq no:42所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

17、具体地，所述轻链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:43、seq id:44和seq id:45所示，或与seq id:43、seq id:44和seq id:45中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:46、seqid:47和seq id:48所示，或与seq id:46、seq id:47和seq id:48中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

18、第十二方面，本技术提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株命名为k64-8，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：cctcc no：c2024342，所述杂交瘤细胞株用于制备如第十一方面所述的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体。

19、第十三方面，本技术提供了一种肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体，所述肺炎克雷伯菌为k64型肺炎克雷伯菌，所述肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体的序列包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq no:49所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的氨基酸序列如seq no:50所示或与其相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

20、具体地，所述轻链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:51、seq id:52和seq id:53所示，或与seq id:51、seq id:52和seq id:53中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，所述重链可变区的互补决定区包含三个序列，如seq id:54、seqid:55和seq id:56所示，或与seq id:54、seq id:55和seq id:56中任一序列相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。

21、第十四方面，本技术提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株命名为k64-27，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：cctcc no：c2024343，所述杂交瘤细胞株用于制备如第十五方面所述的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体。

22、第十五方面，本技术提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括前述中任一项所述的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体，所述的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体可以结合肺炎克雷伯菌荚膜多糖靶标抗原和非肺炎克雷伯菌荚膜多糖的靶标抗原，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的任意一种或多种的组合。

23、第十六方面，本技术提供了一种检测k64型肺炎克雷伯菌的试剂盒，所述检测k64型肺炎克雷伯菌的试剂盒包括前述中任一项所述的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体，所述检测k64型肺炎克雷伯菌的试剂盒还包括阳性对照品、阴性对照品、抗体稀释液、显色液、终止液、封闭液或洗涤液中的任意一种或多种的组合。

24、第十七方面，本技术提供了前述中任一项所述的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体在制备k64型肺炎克雷伯菌感染疾病治疗药物和/或检测产品中的应用，所述疾病包含由克雷伯（氏）菌属感染引起的一种或多种症状，包括肺炎、尿路感染、 败血症／菌血症／脓毒症、新生儿败血症i菌血症／脓毒症、腹泻、软组织感染、器官移植后感染、手术感染、伤口感染、肺部感染、化脓性肝脓肿、肺脓肿、蜂窝组织炎、坏死性肌膜炎、肌炎、眼内炎、腹膜炎、脑膜炎、坏死性脑膜炎或脊柱关节病。

25、荚膜多糖是肺炎克雷伯菌的重要的毒理因子，本技术采用荚膜多糖偶联载体蛋白后，提高免疫原性，以杂交瘤技术制备k64型肺炎克雷伯菌荚膜多糖特异性单克隆抗体，具有特异性好、亲和力高、与肺炎克雷伯菌荚膜多糖结合力高的特点。

26、本技术的有益效果为：

27、本技术提供的肺炎克雷伯菌荚膜多糖单克隆抗体，能与k64型克雷伯菌的荚膜多糖特异性结合，有利于临床中肺炎克雷伯菌的分型，在动物体内外试验中均能证明其在预防和治疗k64型肺炎克雷伯菌感染具有优秀的效果，提供了解决肺炎克雷伯菌感染及多重耐药性问题的途径，对预防、诊断和治疗肺炎克雷伯菌的感染有显著意义，对于新一代肺炎克雷伯菌的药物研制有重要价值。